CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.2. Xây dựng công thức và quy trình bào chế phytosome quercetin
3.2.2. Nghiên cứu nâng quy mô bào chế phytosome quercetin lên 500 g/mẻ và dự kiến tiêu chuẩn chất lượng
3.2.2.1. Bào chế phytosome quercetin ở quy mô 500 g/mẻ
Với mong muốn nâng cấp quy mô bào chế nhằm tạo điều kiện thuận lợi trong việc đưa phytosome vào các dạng bào chế thích hợp, nghiên cứu tiến hành bào chế phytosome quercetin ở quy mô 500 g/mẻ. Do luận án định hướng ứng dụng phytosome quercetin vào dạng viên nang cứng, nên phytosome bào chế dưới dạng bột sẽ phù hợp hơn dạng hỗn dịch. Khi tiến hành nâng quy mô bào chế lên 500 g/mẻ, thiết bị bào chế được lựa chọn là hệ thống cất quay Rovapor R - 210 (Buchi - Đức) sử dụng bình cầu dung tích 20 lít.
Nhằm tạo điều kiện thuận lợi khi tiến hành nâng quy mô bào chế phytosome quercetin, ngoài các thông số kỹ thuật đã khảo sát trên, cần lựa chọn thể tích dung môi và thời gian bốc hơi dung môi phù hợp.
Lượng dung môi ethanol sử dụng phải đảm bảo phản ứng tạo phức xảy ra hoàn toàn đồng thời lượng ethanol không quá cao do thể tích bình cầu của thiết bị cất quay là có giới hạn. Kết quả khảo sát ảnh hưởng của thể tích ethanol đến tỷ lệ hoạt chất phytosome hóa cho thấy khi giảm thể tích ethanol từ 4 lít xuống 3 lít, không có sự khác biệt đáng kể về tỷ lệ quercetin được phytosome hóa (96,74 ± 0,89
% so với 96,38 ± 0,64 %). Như vậy, việc giảm thể tích ethanol xuống 3 lít vẫn đảm bảo phản ứng tạo phức đạt hiệu suất > 90 %.
Khi tiến hành bào chế phytosome quercetin ở quy mô 5 g/mẻ, giai đoạn bốc hơi dung môi loại ethanol được thực hiện trên máy cất quay trong thời gian 16 giờ, nhưng thời gian này chỉ phù hợp khi bào chế phytosome ở quy mô nhỏ. Nhằm tạo điều kiện thuận lợi cho quá trình nâng cấp quy mô, sau khi phản ứng kết thúc, tiến hành bốc hơi dung môi trong thời gian 3 giờ thu lấy phytosome dạng bột nhão. Sau đó, bột phytosome được tiếp tục sấy trong tủ sấy chân không trong thời gian 24 giờ.
Trong quá trình sấy, luôn duy trì nhiệt độ 40oC nhằm hạn chế phân hủy hoạt chất.
Đồng thời, bột phytosome cần được đảo trộn liên tục để đảm bảo khô hoàn toàn đặc biệt là khi thực hiện với lô mẻ lớn. Kết quả nghiên cứu cho thấy bột phytosome quercetin thu được có hàm ẩm đạt yêu cầu, không quá 5 % (2,64 ± 0,17 %).
Quy trình bào chế phytosome quercetin được đề xuất như sau: Hòa tan quercetin, HSPC, cholesterol (tỷ lệ mol 1:1:0,2) vào 3 lít ethanol tuyệt đối. Sau đó, đưa vào bình cầu dung tích 20 lít của hệ thống cất quay. Cất quay ở nhiệt độ 80oC với tốc độ quay 50 vòng/phút trong thời gian 6 giờ để tạo thành phytosome
81
quercetin. Kết thúc phản ứng, hút chân không, điều chỉnh áp suất để dung môi bay hơi từ từ. Sau 3 giờ hút chân không, dung môi bay hơi hết, thu lấy bột nhão phytosome quercetin. Tiếp tục sấy bột trong tủ sấy chân không trong 24 giờ để đảm bảo loại hết hoàn toàn dung môi hữu cơ và bột phytosome có hàm ẩm không quá 5 %. Phytosome sau khi tạo thành được lấy ra, rây qua rây 250 và được bảo quản trong túi nhôm kín tránh hút ẩm.
Hình 3.13. Sơ đồ quy trình bào chế phytosome quercetin quy mô 500 g/mẻ 3.2.2.2. Đánh giá một số đặc tính của phytosome quercetin bào chế ở quy mô 500 g/mẻ
Từ những kết quả nghiên cứu trên, tiến hành bào chế 3 lô phytosome quercetin theo quy trình như hình 3.13 với công thức bào chế thể hiện trong bảng 3.28.
Bảng 3.28. Thành phần công thức bào chế phytosome quercetin
STT Thành phần Khối lƣợng (g)
1 Quercetin 149 g
2 HSPC 351 g
3 Cholesterol 34 g
4 Ethanol tuyệt đối 3 lít
Sấy khô phytosome + Quercetin, HSPC,
cholesterol (tỷ lệ 1:1:0,2) Hòa tan trong 3 lít ethanol
Tạo phytosome quercetin
+ Nhiệt độ: 80oC
+ Tốc độ quay: 50 v/ph + Thời gian: 6 giờ + Áp suất thường Bốc hơi dung môi
Đóng gói, bảo quản
+ Nhiệt độ: 40oC + Thời gian: 3 giờ + Áp suất: 100 mbar
+ Nhiệt độ: 40oC + Thời gian: 24 giờ + Áp suất: - 0,07 mmHg Rây bột phytosome
quercetin
+ Rây 250
+ Túi nhôm kín
82
Quercetin Phytosome quercetin
Tiến hành đánh giá một số chỉ tiêu chất lượng của phytosome bào chế:
Kích thước tiểu phân và thế Zeta của hỗn dịch phytosome quercetin
Tiến hành hydrat hóa 0,25 g bột phytosome quercetin theo các thông số kỹ thuật sau: Môi trường hydrat hóa: 40 ml nước cất; nhiệt độ hydrat hóa: 60oC; thời gian hydrat hóa: 1 giờ. Hỗn dịch phytosome thô sau bào chế được làm nhỏ kích thước tiểu phân bằng phương pháp siêu âm trong thời gian 5 phút và được đóng trong lọ thủy tinh, đậy kín, bảo quản ở nhiệt độ 5 ± 3oC. Kết quả đánh giá KTTP, phân bố KTTP và thế Zeta được trình bày trong bảng 3.29.
Bảng 3.29. Một số đặc tính của hỗn dịch phytosome quercetin (n = 3)
Lô KTTP (nm) PDI Zeta (mV)
1 470,6 ± 4,1 0,364 ± 0,044 -21,6 ± 0,8 2 465,5 ± 3,2 0,361 ± 0,051 -21,5 ± 0,9 3 464,5 ± 2,3 0,367 ± 0,013 -21,9 ± 1,3 Kết quả thu được cho thấy:
- Về hình thức: Hỗn dịch phytosome quercetin đồng nhất, không có sự lắng cặn các tiểu phân sau thời gian bảo quản.
- Cả 3 mẻ phytosome bào chế đều có kích thước tiểu phân trung bình dao động trong khoảng từ 450 - 500 nm, giá trị PDI < 0,4 cho phân bố KTTP tương đối đồng đều.
Hình thái của tiểu phân phytosome quercetin
Hình ảnh của tiểu phân phytosome quercetin được đánh giá bằng kính hiển vi điện tử FESEM Hitachi S - 4800 theo phương pháp trình bày ở mục 2.2.3.3.a.
Kết quả được thể hiện ở hình 3.14.
Hình 3.14. Hình ảnh chụp SEM của quercetin và phytosome quercetin
83
Về mặt hình thái học, tiểu phân quercetin tự do tồn tại ở dạng tinh thể hình đa giác với các cạnh sắc và rõ. Nhưng sau khi tạo phức với phospholipid, không thấy có sự xuất hiện của tinh thể như mẫu nguyên liệu ban đầu, phytosome quercetin bào chế có dạng tiểu phân hình cầu, với kích thước tiểu phân trung bình khoảng 350 - 400 nm, phân bố kích thước trong một khoảng hẹp, phù hợp với kết quả về KTTP trung bình và PDI đo được bằng phương pháp phổ tán xạ ánh sáng.
Độ tan
Quercetin nguyên liệu rất ít tan trong nước, đặc biệt ở pH 1,2, điều này lý giải tại sao khả năng hấp thu hoạt chất vào cơ thể bị hạn chế. pH tăng, độ tan của quercetin có xu hướng tăng lên. Do trong cấu trúc của quercetin có nhóm 7-hydroxy nên trong môi trường kiềm tạo ra dạng muối phenolat, làm tăng độ tan của hoạt chất. Tuy nhiên, trong môi trường có pH quá cao > 10, hoạt chất sẽ bị phân hủy một phần. Sự biến đổi này phụ thuộc vào pH, nhiệt độ và thời gian (hình PL 2.1, hình PL 2.2). Vì vậy, nhằm đảm bảo độ chính xác của kết quả nghiên cứu, luận án không tiến hành đánh giá độ tan của quercetin trong các môi trường có pH > 10.
Tiến hành đánh giá độ tan của quercetin sau khi tạo phức với PL ở nhiệt độ 25 ± 2oC trong các môi trường có pH khác nhau theo mục 2.2.3.3.
Kết quả độ tan của quercetin trong phytosome ở các môi trường khác nhau được thể hiện ở bảng 3.30.
Bảng 3.30. Độ tan trung bỡnh (àg/ml) của quercetin nguyờn liệu và quercetin trong phytosome ở các môi trường khác nhau (n = 3) Môi trường
Mẫu Nước Dung dịch
HCl pH 1,2
Đệm phosphat pH 4,5
Đệm phosphat pH 6,8 Quercetin 0,85 ± 0,12 0,44 ± 0,09 1,48 ± 0,19 1,91 ± 0,15 Phytosome quercetin 9,21 ± 0,51 4,26 ± 0,29 9,33 ± 0,36 10,38 ± 0,44
Hình 3.15. Độ tan của quercetin dihydrat và phytosome quercetin trong các môi trường có pH khác nhau (n = 3)
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
HCl pH 1,2 Đệm phosphat pH 4,5 Đệm phosphat pH 6,8 Nước
Độ tan (àg/ml)
Môi trường
Quercetin
Phytosome quercetin
84
Phytosome làm tăng độ tan của quercetin trong nước ở pH khác nhau (trong môi trường nước, độ tan của phytosome quercetin tăng đến 10,5 lần so với quercetin dihydrat). Do đó, đây là giải pháp triển vọng tăng sinh khả dụng của quercetin do cải thiện độ tan của hoạt chất.
Hệ số phân bố dầu nước
Tiến hành đánh giá hệ số phân bố dầu nước của quercetin và phytosome quercetin theo phương pháp trình bày ở mục 2.2.3.3. Kết quả được thể hiện trong bảng 3.31.
Bảng 3.31. Hệ số phân bố log D của quercetin và phytosome quercetin (n = 3)
Mẫu pH pha nước Log D
Quercetin
1,2 3,80 ± 0,42
4,5 3,32 ± 0,38
6,8 3,21 ± 0,57
Phytosome quercetin
1,2 3,02 ± 0,22
4,5 2,64 ± 0,15
6,8 2,59 ± 0,44
Tại các pH khác nhau, hệ số phân bố log D của quercetin > 3. Kết quả này cho thấy, quercetin mất cân bằng về tính thân dầu và thân nước, điều này cũng thể hiện trong độ tan của quercetin trong dung môi thân dầu n-octanol cao hơn rất nhiều trong môi trường nước.
Sau khi tạo phức với phospholipid, hệ số phân bố log D của quercetin có sự thay đổi ở các pH thử nghiệm. Cụ thể là, tại pH 1,2 log D giảm từ 3,80 trong quercetin xuống 3,02 trong phytosome quercetin; tại pH 4,5 log D giảm từ 3,32 trong quercetin xuống 2,64 trong phytosome quercetin. Như vậy, so với nguyên liệu, quercetin dạng phytosome đạt được sự cân bằng dầu - nước tốt hơn. Điều này cũng được chứng minh với độ tan trong nước của quercetin tăng lên khi tạo phức với phospholipid (9,21 ± 0,51 àg/ml). Giỏ trị log D thay đổi là cơ sở để dự đoỏn sự tăng sinh khả dụng của phytosome quercetin so với dạng hoạt chất tự do.
Khả năng giải phóng hoạt chất từ phytosome quercetin
Hai môi trường giải phóng sử dụng trong nghiên cứu này là HCl pH 1,2 (mô phỏng môi trường dạ dày) và đệm phosphat pH 6,8 (mô phỏng môi trường ruột).
Tiến hành đánh giá khả năng giải phóng qua màng celulose acetat của quercetin dạng phytosome và quercetin dạng tự do theo phương pháp trình bày ở mục 2.2.3.3.i. Kết quả được thể hiện ở bảng 3.32.
85
Bảng 3.32. Khả năng giải phóng qua màng của phytosome quercetin và quercetin dihydrat (àg/cm2) (n = 3)
Lụ Lƣợng quercetin giải phúng (àg/cm2)
2 giờ 4 giờ 6 giờ 12 giờ 16 giờ 20 giờ
Phytosome quercetin
1 2,15
± 0,17
7,02
± 1,03
12,05
± 1,77
45,88
± 2,71
63,62
± 3,28
69,88
± 3,02 2 1,96
± 0,20
7,10
± 1,02
10,44
± 1,69
44,30
± 2,22
66,67
± 3,02
69,01
± 2,99 3 2,26
± 0,27
7,29
± 0,82
12,71
± 1,84
45,62
± 2,74
65,43
± 3,01
70,44
± 2,02 Quercetin
dihydrat
1,95
± 0,22
3,86
± 0,97
6,79
± 2,01
11,46
± 1,74
14,90
± 1,16
17,02
± 1,76 Chỉ số f2 giữa lô 1 và lô 2, lô 1 và lô 3, lô 2 với lô 3 có giá trị lần lượt là 86,19; 89,91 và 84,97 (nằm trong khoảng 50 - 100). Như vậy, bước đầu có thể nhận định phytosome quercetin có các đặc tính ổn định và đồng nhất về khả năng giải phóng hoạt chất qua màng celulose acetat.
Hình 3.16. Đồ thị biểu diễn khả năng giải phóng qua màng của phytosome quercetin và quercetin dihydrat (n = 3)
Từ hình 3.16 nhận thấy ở các thời điểm đầu tiên, lượng quercetin giải phóng từ phytosome quercetin và quercetin dihydrat tương đương nhau và khá thấp. Tuy nhiên, tại các thời điểm sau, lượng hoạt chất giải phóng từ phytosome quercetin nhiều hơn hẳn so với nguyên liệu quercetin, đặc biệt thấy rõ sự khác biệt từ thời điểm 12 giờ đến 20 giờ.
0 10 20 30 40 50 60 70 80
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22
Lƣợng quercetin giải phúng (àg/cm2)
Thời gian (giờ)
Quercetin dihydrat Phytosome quercetin
86
Tiến hành đánh giá độ hòa tan của phytosome quercetin và quercetin dihydrat theo phương pháp trình bày ở mục 2.2.3.3.h. Kết quả được thể hiện ở bảng 3.33.
Bảng 3.33. Độ hòa tan của phytosome quercetin và quercetin dihydrat (àg/ml) (n = 3)
Lụ Lƣợng quercetin giải phúng (àg/ml)
5 phút 30 phút 1 giờ 2 giờ 3 giờ 4 giờ
Phytosome quercetin
1 4,51
± 0,19
10,67
± 0,85
12,09
± 0,92
12,25
± 1,24
12,42
± 0,94
12,50
± 0,79 2 4,35
± 0,18
11,06
± 1,02
12,33
± 0,89
12,52
± 0,96
12,70
± 0,96
12,77
± 0,87 3 4,77
± 0,25
10,58
± 1,00
12,31
± 0,68
12,56
± 1,06
12,73
± 0,88
12,78
± 1,03 Quercetin
dihydrat
1,36
± 0,35
5,20
± 0,71
6,35
± 0,63
6,58
± 0,89
6,73
± 0,21
6,74
± 0,98 Tương tự kết quả ở trên, chỉ số f2 giữa các mẫu cho thấy đặc tính ổn định và đồng nhất về độ hòa tan của phytosome quercetin.
Hình 3.17. Đồ thị biểu diễn độ hòa tan của phytosome quercetin và quercetin dihydrat (n = 3)
So với quercetin dihydrat, lượng hoạt chất hòa tan từ phytosome quercetin nhiều hơn với tốc độ giải phóng nhanh hơn.
Thông qua kết quả đánh giá khả năng giải phóng hoạt chất từ phytosome quercetin bào chế trong sự so sánh đối chiếu với nguyên liệu quercetin nhận thấy lượng hoạt chất hòa tan từ phytosome cao hơn hẳn so với quercetin. Đây là tiền đề để tăng khả năng hấp thu cũng như nâng cao sinh khả dụng của hoạt chất khi dùng qua đường tiêu hóa.
0 2 4 6 8 10 12 14 16
0 30 60 90 120 150 180 210 240
Lƣợng quercetin giải phúng (àg/ml)
Thời gian (phút)
Quercetin dihydrat Phytosome quercetin
87
Tương tác giữa quercetin và HSPC trong phytosome
Tiến hành quét phổ IR, NMR, DSC, X-Ray để xác định tương tác giữa quercetin và PL trong phytosome.
Nhiễu xạ tia X (X-Ray diffraction)
Để theo dõi sự thay đổi về trạng thái tinh thể của quercetin tự do so với quercetin trong phytosome, tiến hành quét phổ nhiễu xạ tia X của 4 mẫu: HSPC, quercetin dihydrat, hỗn hợp vật lý và phytosome quercetin. Kết quả được thể hiện ở hình 3.18, hình PL 7.6, hình PL 7.7, hình PL 7.8 và hình PL 7.9.
Hình 3.18. Giản đồ nhiễu xạ tia X của HSPC, quercetin dihydrat, hỗn hợp vật lý và phytosome quercetin
88
Phổ nhiễu xạ tia X của quercetin nguyên liệu cho thấy một số đỉnh riêng biệt trong khoảng góc nhiễu xạ 2θ từ 5o - 30o tại 10,76o;12,41o; 13,70o; 14,30o; 15,83o; 17,60o; 24,53o; 27,38o và 29,24o, chứng tỏ bản chất tinh thể của quercetin. Nguyên liệu HSPC thể hiện ba đỉnh nhiễu xạ đặc trưng tại 5,72o; 8,60o; 21,17o.
Phổ đồ X-Ray của phytosome quercetin không thể hiện bất kỳ một đỉnh nhiễu xạ nào, các đỉnh nhiễu xạ của quercetin và HSPC đã biến mất. Trong khi đó, trên phổ đồ của hỗn hợp vật lý tương ứng vẫn xuất hiện đỉnh nhiễu xạ của HSPC (5,72o; 21,17o) và đỉnh nhiễu xạ của quercetin (10,76o;12,41o; 15,83o; 24,53o; 27,38o). Điều này chứng tỏ quercetin tồn tại ở trạng thái vô định hình trong tiểu phân phytosome.
Kỹ thuật quét nhiệt vi sai (DSC)
Tiến hành quét nhiệt vi sai của các mẫu sau: Quercetin dihydrat, HSPC, cholesterol, hỗn hợp vật lý và phytosome quercetin bào chế. Kết quả được thể hiện ở hình 3.19 và bảng 3.34.
Hình 3.19. Giản đồ nhiệt quét vi sai của phytosome quercetin, hỗn hợp vật lý, quercetin dihydrat, cholesterol và HSPC Exo
89
Bảng 3.34. Kết quả phân tích phổ DSC của các mẫu nghiên cứu Mẫu Khối lƣợng
(mg) Tbđ (oC) Tđỉnh (oC) Tkt (oC) ΔH phản ứng (J/g)
Quercetin 2,99 107,37 119,94 127,18 251,36
HSPC 5,70
65,56 70,44 73,87 32,93
118,00 120,91 127,67 25,28
147,50 147,95 38,47 8,53
Cholesterol 5,23 44,40 52,79 57,87 16,96
125,38 133,23 135,44 33,77
Phytosome 4,76 50,30 55,24 59,31 48,80
Hỗn hợp vật lý 5,89 52,57 72,00 85,88 49,12
103,47 113,13 132,00 2,89
- Giản đồ nhiệt quét vi sai (hình 3.19) cho thấy pic thu nhiệt (điểm nóng chảy) của quercetin dihydrat ở 119,94oC với nhiệt lượng chuyển pha tương đối cao 251,36 J/g. Nhiệt độ chuyển từ pha gel sang trạng thái tinh thể lỏng của HSPC là 70,44oC.
Bên cạnh hiệu ứng thu nhiệt chính, còn có hai pic nhỏ tại 120,91oC và 147,95oC , được xem là liên quan tới sự di chuyển của đầu phân cực của phospholipid.
- Phân tích nhiệt bằng phổ DSC ở hình 3.19 cho thấy pic thu nhiệt của quercetin và HSPC không còn xuất hiện trên giản đồ nhiệt của phytosome quercetin, mặc dù vẫn quan sát được trên giản đồ của hỗn hợp vật lý tương ứng.
Điều này cho thấy sự bao gói của quercetin vào trong tiểu phân phytosome hay sự thay đổi trạng thái kết tinh của quercetin khi bào chế dưới dạng phytosome, góp phần củng cố thêm cho kết quả phân tích phổ nhiễu xạ tia X ở trên. Bên cạnh đó, sự xuất hiện của nhiệt chuyển pha của phytosome (55,24oC) chứng tỏ mạch hydrocarbon trong phytosome có thể xoay chuyển từ cấu hình trans (trạng thái gel) sang cấu hình gauche (trạng thái tinh thể lỏng). Điều này phù hợp với dự đoán cấu trúc của phytosome là có màng phospholipid kép. So với quercetin nguyên liệu, nhiệt chuyển pha giảm. Nguyên nhân có thể là do sự hình thành liên kết giữa hoạt chất với phospholipid khiến mạch carbon trở nên linh động hơn và cuộn quanh phần phytosome thân nước, kết quả làm giảm tính liên tục của chuỗi carbon và giảm nhiệt độ chuyển pha. Đồng thời, enthalpy nóng chảy của phytosome quercetin (48,80 J/g) giảm xuống so với nguyên liệu ban đầu (251,36 J/g), qua đó có thể thấy quercetin dạng tự do bền vững với nhiệt hơn quercetin dạng phytosome.
- Sự xuất hiện một đỉnh endotherm rộng ở 113,13oC trên phổ DSC của hỗn hợp vật lý có thể là do sự chồng lấp của đỉnh endotherm của quercetin và HSPC.
90
Ngoài ra, trên phổ đồ của hỗn hợp vật lý còn có một pic tại 55,57oC (gần với pic thu nhiệt của phytosome). Nguyên nhân có thể là do khi tăng nhiệt độ, phospholipid bị nóng chảy nên một lượng nhất định hoạt chất quercetin được hòa tan vào phospholipid và hình thành phytosome.
- Kết quả phân tích nhiệt quét vi sai còn cho thấy có sự chuyển dịch của đỉnh endotherm ứng với nhiệt chuyển pha của cholesterol (133,23oC) trên phổ DSC của cholesterol nguyên liệu so với đỉnh trên phổ của phytosome. Có thể là do cholesterol xen kẽ vào lớp phospholipid kép làm mất trật sự sắp xếp chặt chẽ ban đầu của cholesterol.
Tóm lại, sự biến mất các đỉnh nhiễu xạ của quercetin trên phổ nhiễu xạ tia X của phytosome quercetin cùng hình ảnh phổ phân tích nhiệt quét vi sai của phytosome có sự biến mất pic thu nhiệt của quercetin tự do ở 119,94oC chứng minh rằng quercetin đã mất cấu trúc tinh thể khi liên kết với HSPC. Việc giảm mức độ kết tinh cũng chính là nguyên nhân giúp cải thiện độ tan của quercetin trong nước.
Phổ hấp thụ hồng ngoại (FTIR)
Để chứng minh trong phytosome hoạt chất và HSPC có tương tác hóa học với nhau, tiến hành quét phổ hấp thụ hồng ngoại IR với 5 mẫu: quercetin, HSPC, cholesterol, hỗn hợp vật lý và phytosome quercetin. Kết quả được thể hiện ở hình 3.20.
91
Bước sóng (cm-1)
Phytosome Hỗn hợp vật lý Quercetin Cholesterol HSPC Hình 3.20. Phổ IR của phytosome quercetin, hỗn hợp vật lý,
quercetin dihydrat, cholesterol và HSPC
Khả năng tương tác giữa quercetin và phospholipid có thể được đánh giá thông qua phân tích phổ IR. Dựa trên bảng băng sóng hấp thụ IR đặc trưng của từng nhóm chức [97], xác định số sóng các nhóm chức đặc trưng của nguyên liệu, hỗn hợp vật lý và phytosome quercetin (phụ lục 7):
Phytosome
HSPC Quercetin
Cholesterol HHVL
1261,2
1380,8
1174,4
1241,9 1092,5
1069,3
1092,4 1241,9 1170,6
1378,9
2874,3 1711,5
1668,1
% T
92
Bảng 3.35. Số sóng gốc -OH trong phân tử quercetin, gốc N+(CH3)3, (RO)2PO2- trong phân tử HSPC của các mẫu
Mẫu
Số sóng v (cm-1) Nhóm -OH của
quercetin
Nhóm (RO)2PO2- của HSPC
Nhóm N+(CH3)3 của HSPC
V1 V2 V1 V2
HSPC ______ ______ 1092,5 1241,9 1174,4
Quercetin 1261,2 1380,8 ______ ______ ______
- Dao động biến dạng của nhóm -O-H của hợp chất polyphenol quercetin được quan sát thấy trong vùng từ 1380,8 đến 1261,2 cm-1, trong khi đó dao động hóa trị của nhóm C-O- trong phenol nằm trong vùng 1130,1 - 1094,4 cm-1. Ngoài ra, phổ hồng ngoại của quercetin còn chỉ ra các pic đặc trưng ứng với dao động hóa trị (co giãn) của nhóm ceton liên hợp tại 1662,3 cm-1 và dao động của khung vòng thơm (bao gồm dao động hóa trị của C=C và dao động biến dạng của =C-H) tại 1520,6 cm-1.
- Phân tích phổ IR của phân tử HSPC nhận thấy nhóm P-O- và -P=O có cường độ hấp thu mạnh tại số sóng lần lượt 1241,9 cm-1 và 1092,5 cm-1, đồng thời dao động hóa trị của nhóm -N+(CH3)3 (liên kết C-N) xuất hiện với cường độ yếu tại 1174,4 cm-1. Ngoài ra, phổ hồng ngoại của HSPC còn chỉ ra các pic đặc trưng ứng với dao động hóa trị đối xứng và bất đối xứng (co giãn) của liên kết C-H trong các nhóm chức -CH3 và -CH2- của đuôi hydrocarbon no tại 2918,7 cm-1; 2851,2 cm-1 và dao động hóa trị (co giãn) của nhóm C=O ester tại 1736,6 cm-1. Các pic này đều có cường độ mạnh.
- Hình 3.20 cho thấy phổ hấp thụ hồng ngoại của phytosome quercetin khác biệt so với phổ của hỗn hợp vật lý tương ứng. Trong phổ của hỗn hợp vật lý, dao động hóa trị của liên kết C-H của đuôi hydrocarbon no trong khoảng 2918,7 - 2851,2 cm-1 ; dao động hóa trị của nhóm C=O nằm trong vùng 1734,7-1664,3 cm-1; dao động hóa trị của liên kết C=C trong vòng thơm ở giữa 1610,3 và 1464,7 cm-1. Dao động biến dạng của nhóm -O-H của quercetin được quan sát thấy trong vùng từ 1378,9 đến 1316,1 cm-1. Pic ở 1241,9 cm-1; 1170,6 cm-1 và 1092,4 cm-1 tương ứng với dao động của nhóm P-O-, nhóm -N+(CH3)3 và nhóm -P=O. Như vậy, phổ của hỗn hợp vật lý có các pic tương tự như các pic trên phổ hồng ngoại của quercetin và HSPC, chứng tỏ không xảy ra tương tác giữa hoạt chất và các thành phần trong công thức.