CHƢƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. Phƣơng pháp
2.3.8. Khảo sát tác dụng của các chế phẩm Trichoderma konilangbra KS14
đối với cây khổ sâm
Tạo chế phẩm
- Chủng Trichoderma konilangbra KS14 đƣợc nuôi 3 tuần trên môi trƣờng khoai tây dịch thể. Sau đó tách riêng phần dịch và phần khuẩn ty có chứa bào tử nấm.
- Phần khuẩn ty có chứa bào tử đƣợc nghiền nhỏ, phối trộn với một số chất mang và cơ chất dinh dƣỡng để tạo thành chế phẩm dạng bột.
- Phần dịch thể đƣợc sử dụng trực tiếp nhƣ chế phẩm dạng lỏng.
Đối tượng thử nghiệm chế phẩm
Các chế phẩm đƣợc thử nghiệm trên 60 cành chiết từ cây khổ sâm trồng ở Vƣờn Thuốc Cổ Nhuế.
Thử nghiệm chế phẩm
- 60 cành chiết đƣợc chia làm 3 lơ thí nghiệm, trong đó có 1 lô không sử dụng chế phẩm (lơ đối chứng), kí hiệu C; 1 lơ bổ sung chế phẩm dạng lỏng vào bầu đất quanh cành chiết, kí hiệu T1, và 1 lơ bổ sung chế phẩm dạng bột vào bầu đất, kí hiệu T2. Tất cả các bầu chiết đƣợc chăm sóc và theo dõi sự phát triển trong cùng điều kiện.
- Mẫu cây đƣợc lấy về phân tích hàm lƣợng nhóm chất ent-kauran sau 3 tháng theo dõi.
Xác định hàm lượng nhóm chất ent-kauran từ các mẫu cành chiết
Các mẫu cành chiết đƣợc thu hoạch sau 3 tháng theo dõi. Các mẫu này đƣợc rửa sạch, cắt nhỏ, sau đó đƣợc sấy khơ ở 30-400C, đƣợc xay nhỏ, sau đó đƣợc chiết bằng metanol, thu đƣợc các cặn chiết metanol tổng.
Các cặn chiết metanol này đƣợc chạy máy LC-MS (sắc kí lỏng ghép nối khối phổ) với các điều kiện chuẩn (dựa vào phƣơng pháp xây dựng đƣờng chuẩn các ent- kauran): cột phân tích Zorbax SB-C18, RP (3,0 x 150 mm), hệ dung môi CH3OH: H2O (gradient 10:90), tốc độ dòng 0,4 ml/phút, thời gian ghi 30 phút.
Phân tích các dữ liệu thu đƣợc và so sánh với dữ liệu về cấu trúc, thời gian lƣu mẫu và đặc tính lí học của các crotokin để xác định hàm lƣợng nhóm chất ent- kauran của các mẫu phân tích [117].