.6 Indirect ELISA

Một phần của tài liệu Đánh giá khả năng liên kết β HCG (β subunit of human chorionic gonadotropin) và một số kháng thể thương mại đặc hiệu (Trang 44 - 46)

Đầu tiên, kháng nguyên cần xác định sẽ được gắn cố định trên pha rắn (thành giếng của đĩa ELISA). Tiếp theo sẽ được khóa các vị trí cịn trống bằng các protein như ở Direct ELISA. Một kháng thể thứ nhất sẽ được thêm vào tạo liên kết với lớp kháng nguyên vừa gắn lên thành giếng. Một kháng thể thứ hai cộng hợp enzyme sẽ được gắn vào kháng thể thứ nhất. Cơ chất của enzyme sẽ được thêm vào để tạo màu cho phản ứng. Dựa vào cường độ tín hiệu màu sẽ tính tốn ra được nồng độ kháng nguyên. Kháng thể thứ nhất thường là các huyết thanh miễn dịch (antisera), có thể đánh giá sự hiện diện của các kháng thể trong antisera. Vì vậy, Indirect ELISA thường được dùng định lượng các đại phân tử, chẩn đoán các bệnh nội tiết [20].

1.5.2.3 Sandwich ELISA

Sandwich ELISA cũng được phát triển bởi Kanefusa Kato và các cộng sự vào năm 1977 [17], cũng giống như phương pháp Indirect ELISA, Sandwich ELISA được phát triển từ phương pháp ELISA truyền thống. Phương pháp này có tên là Sandwich ELISA là bởi vì kháng nguyên cần phát hiện sẽ được kẹp giữa 2 kháng thể tạo thành cấu trúc giống một bánh Sandwich với phần vỏ là 2 kháng thể kẹp giữa phần nhân là kháng nguyên cần phát hiện. Bởi vì sử dụng hai kháng thể bắt đồng thời vào kháng nguyên quan tâm, điều này có nghĩa là cần lựa chọn 2 kháng thể thích hợp để bắt vào 2 vị trí epitope khác nhau trên kháng nguyên, cho nên phương pháp ELISA cho độ nhạy và độ chính xác cao hơn các phương pháp ELISA khác. Phương pháp này có nhược điểm là chi phí cho 2 kháng thể rất cao và thời gian thực hiện dài hơn nhiều so với các phương pháp ELISA khác.

Đầu tiên, các giếng ELISA sẽ được phủ một lớp kháng thể phía dưới. Blocking các vị trí mà kháng thể khơng cố định vào. Kháng ngun cần phát hiện sẽ được thêm vào, chúng sẽ bắt đặc hiệu với lớp kháng thể đã phủ xuống trước đó. Kháng thể thứ hai cộng hợp enzyme sẽ được thêm vào cuối cùng, bắt đặc hiệu với kháng nguyên tạo thành

1 lớp trên cùng. Sau đó, cơ chất của enzyme sẽ được thêm vào để phát tín hiệu màu. Dựa vào cường độ tín hiệu màu sẽ xác định được nồng độ kháng nguyên cần quan tâm.

Một phần của tài liệu Đánh giá khả năng liên kết β HCG (β subunit of human chorionic gonadotropin) và một số kháng thể thương mại đặc hiệu (Trang 44 - 46)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(137 trang)