Từ biểu đồ hình 3.9 có thể thấy tín hiệu của kháng thể mAb-β4-ALP ổn định hơn so với mAb-β2-ALP. Tương tự như mAb-β2-ALP, kháng thể mAb-β4-ALP cũng cho kết quả đo OD cao nhất ở hai nồng độ 2.000 và 4.000 ng/ml. Vì thế nên sử dụng mAb- β4-ALP ở nồng độ 2.000 ng/ml sẽ đảm bảo tính hiệu quả và tiết kiệm tài nguyên.
Tổng kết lại, Kháng thể mAb-β1-ALP phát tín hiệu đồng đều và ổn định hơn so với hai kháng thể còn lại. Ngồi ra, kháng thể mAb-β1-ALP cịn cho thấy sự hiệu quả hơn khi phát tín hiệu tốt ở những nồng độ hCG thấp. Điều này cũng phù hợp với các nghiên cứu trước đây cho thấy rằng, β1 đặc hiệu cho hCG và khơng liên kết chéo với hLH (một protein có cùng cấu trúc chuỗi α với hCG), trong khi β2 và β4 thì lại có tỉ lệ liên kết chéo với hLH[3].
Như vậy, Kháng thể mAb-β1-ALP vượt trội hơn hai kháng thể còn lại về cả độ nhạy lẫn độ ổn định. Điều này sẽ cung cấp một dữ liệu hữu ích cho việc thiết kế các cặp kháng thể khảo sát ở những thí nghiệm tiếp theo.
3.4 Khảo sát hiệu quả bắt cặp của kháng thể bắt giữ
Mục đích của thí nghiệm này nhằm xác định nồng độ tối ưu của các kháng thể phủ giếng trong phản ứng Sandwich ELISA.
Ba loại kháng thể mAb-β1, mAb-β2, mAb-β4 được phủ xuống giếng với các nồng độ là: 0, 100, 500, 1.000, 2.000, 4.000 và 5.000 (ng/mL). Kháng nguyên hCG sẽ được gắn vào với các nồng độ 0, 100, 250, 500, 1.000, 2500, 5.000, 10.000 (mIU/mL). Tương ứng với mỗi kháng thể phủ giếng, sẽ lựa chọn 1 kháng thể dán nhãn (kháng thể có gắn ALP) gồm 3 cặp β1- β2(ALP), β2 – β1(ALP) và β4 – β2(ALP) với nồng độ cố định ở 2.000 ng/mL dựa theo kết quả đã ghi nhận ở thí nghiệm 3 (mục 3.3). Thí nghiệm được lặp lại 3 lần.
Ở thí nghiệm này, các yếu tố thay đổi tập trung vào phần kháng thể gắn ở dưới giếng (hay kháng thể bắt giữ), vì vậy, cần phải đủ cả 3 loại kháng thể đang khảo sát là β1, β2 và β4. Thí nghiệm 3 đã cho thấy hiệu quả của β1 là tốt nhất trong 3 loại kháng thể nên việc ghép cặp kháng thể sẽ ưu tiên có mặt kháng thể β1, vì vậy trong thí nghiệm này sẽ có cặp β1- β2(ALP), β2 – β1(ALP). Thí nghiệm tiếp theo sẽ bố trí cặp β1- β4(ALP), β4 – β1(ALP). Cặp β4 – β2(ALP) được bổ sung vào nhằm tránh bỏ sót một trường hợp khảo sát.
Kết quả thí nghiệm cặp kháng thể β1- β2(ALP) được trình bày trong hình 3.10.