CHƯƠNG 1 : TỔNG QUAN
1.3. Các yếu tố ảnh hưởng đến q trình phân tích mẫu trên thiết bị sắc ký lỏng
lỏng ghép đầu dò DAD
Sắc ký là một loại phương pháp thường dùng để định danh và định lượng chất cần phân tích. Sắc ký khí dùng phân tích các chất dễ bay hơi và bền nhiệt như các dung môi hữu cơ. Các chất không bay hơi như peptit và carbohydrat cũng có thể phân tích bằng sắc ký khí, tuy nhiên cần chất phân tích cần được tạo dẫn xuất bởi tác chất phù hợp (Harvey, 2000). Trong sắc ký lỏng, chất phân tích dạng lỏng hoặc rắn được hịa trong dung môi phù hợp, được vận chuyển qua cột bằng pha động thích hợp. Các yếu tố ảnh hưởng trong q trình phân tích được trình bày bên dưới.
1.3.1. Dung mơi hịa tan
Như đã nói ở trên, các chất phân tích bằng sắc ký lỏng thì chất phân tích cần được hịa tan trong dung mơi thích hợp trước khi tiêm vào hệ thống sắc ký. Vì vậy, cần phải khảo sát loại dung mơi thích hợp để hòa tan NAA và NAAm. NAA và NAAm là hai chất tương đối phân cực vì vậy chất hịa tan thích hợp là dung mơi phân cực như nước hoặc ACN, methanol. Tuy nhiên, loại dung mơi hịa tan thường sử dụng là dung môi thân thiện với mơi trường hoặc dung mơi có thành phần giống với pha động. Vì vậy, trong đề tài này khảo sát hai dung môi là nước và ACN.
1.3.2. Cột sắc ký lỏng
Cột sắc ký lỏng được xem là trái tim của thiết bị sắc ký lỏng, cột sắc ký lỏng gồm cột phân tích và cột bảo vệ, cột bảo vệ được gắn phía trước cột phân tích để loại bỏ các chất tạp nhiễm.
Cột phân tích gồm ống thép bảo vệ bên ngồi, ngày nay cịn có thêm loại cột nhựa, chất nền và pha tĩnh. Chất nền là nơi gắn pha tĩnh, chất nền kết nối với ống thép, thành phần chất nền là silica gel. Pha tĩnh sắc ký lỏng chia làm 2 loại chính là pha thuận và pha đảo. Pha đảo có thành phần là C8 và C18, pha thuận gồm các loại
HVTH: Phạm Minh Tiến GVHD: TS. Lâm Văn Mân như: amin, silica, cyano, diol, các loại cation, anion. Dựa vào tính chất của chất cần phân tích để chọn cột phân tích cho phù hợp. NAA và NAAm là hai chất có tính phân cực vì vậy cần chọn cột pha thuận để phân tích. Cột chiral pak IG cũng là loại cột pha thuận nên có thể xem xét để phân tích hai chất này.
1.3.3. Pha động sắc ký lỏng
Thứ tự rửa giải trong sắc ký lỏng phụ thuộc vào loại độ phân cực của chất phân tích. Trong sắc ký pha thuận, chất càng ít phân cực thời gian rửa giải càng ngắn. Thời gian rửa giải phụ thuộc vào pha động, pha động càng ít phân cực thời gian rửa giải chất phân tích càng dài. Đối với pha đảo, thứ tự rửa giải bị đảo ngược (Harvey, 2000).
Khi nhiệt độ phân tích càng cao, liên kết giữa pha tĩnh và chất phân tích yếu đi, làm cho chất phân tích rửa giải nhanh hơn. Vì vậy, khi xây dựng phương pháp sắc ký lỏng, cần phải khảo sát tỷ lệ pha động và thành phần pha động để tối ưu phương pháp phân tích.
1.3.4. Bộ phận tiêm mẫu
Ngày nay các thiết bị sắc ký lỏng đều trang bị bộ phận tiêm mẫu tử động để đảm bảo tính ổn định cho q trình phân tích, bộ phận tiêm mẫu gồm kim tiêm và vòng chứa mẫu (sample loop), thể tích vịng loop có thể tích từ 20L – 2mL, thực tế vòng loop dùng để định lượng có thể tích dưới 200L do khả năng của cột phân tích có giới hạn. Thể tích tiêm thay đổi từ 0,5L đến lượng thể tích của vịng loop. Nếu thể tích tiêm mẫu càng lớn thì độ nhạy của phương pháp tăng lên, tuy nhiên nếu lượng mẫu vào quá khả năng của cột phân tích làm cho pic của chất phân tích bị kéo dãn làm cho tín hiệu pic trên nhiễu thấp, như vậy cũng giảm giới hạn phát hiện của phương pháp. Từ đó cần phải khảo sát thể tích tiêm mẫu, trong sắc ký lỏng, lượng mẫu tiêm thường thay đổi từ 10L - 50L.
1.3.5. Nhiệt độ buồng cột
Nhiệt độ cột phân tích ảnh hưởng đến độ nhớt của dung mơi qua cột, qua đó làm thay đổi thời gian lưu của chất phân tích.
HVTH: Phạm Minh Tiến GVHD: TS. Lâm Văn Mân Nhiệt độ cột phân tích thấp nhất được khảo sát là 30oC, giá trị này được chọn vì bộ điều nhiệt của cột phân tích chỉ điều chỉnh đúng ở mức nhiệt độ phịng cộng thêm khoảng 5oC, nhiệt độ phòng trong điều kiện khí hậu Việt Nam được yêu cầu nằm trong khoảng 22 – 28oC . Nhiệt độ giới hạn trên được lựa chọn là 50oC, bởi vì nhiệt độ của cột có giới hạn nhỏ hơn 60oC.