Điều kiện thiết bị:
Máy sắc ký: HPLC Shimazdu - DAD (M20A)
Mẫu: NAA, NAAm 10µg/mL trong hỗn hợp pha động Cột tách: Chiralpak IG 150x4,6mm; 5µm
Tốc độ dịng: 1,0mL/phút Thể tích tiêm: Theo bảng trên Thời gian phân tích: 30 phút
Bước sóng: điều kiện tối ưu Khảo sát thể tích tiêm mẫu
HVTH: Phạm Minh Tiến GVHD: TS. Lâm Văn Mân Pha động: điều kiện tối ưu
Tiêu chí đánh giá: Thơng qua hệ số phân giải, hệ số kéo đi.
Thí nghiệm 6: Xây dựng đường chuẩn NAA, NAAm trên HPLC-DAD
Mục đích: Xác định phương trình tuyến tính NAA và NAAm.
Bố trí thí nghiệm: Pha các điểm chuẩn có nồng độ như sau: 0,01; 0,02; 0,05; 0,1; 0,2; 1; 5; 10; 20µg/mL. Trước tiên tiêm lặp lại 10 lần 1 lọ chuẩn 1µg/mL để xem xét tính ổn định của hệ thống bằng cách tính độ lệch chuẫn tương đối theo diện tích pic (RSD <2). Sau đó tiến hành tiêm các dung dịch chuẩn vào thiết bị HPLC-DAD với các điều kiện tối ưu. Tính tốn diện tích píc của chuẩn và xây dựng đường chuẩn.
Chuẩn bị các dung dịch chuẩn:
Dung dịch chuẩn NAA gốc: Cân 50mg NAA chính xác đến 0,1mg sau đó hịa tan trong hỗn hợp ACN : H2O (3:7) thành 50,0mL, (nồng độ dung dịch gốc khoảng 1000µg/mL). Bảo quản ở nhiệt độ 2–8oC trong 3 tháng.
Dung dịch chuẩn NAAm gốc: Cân 50mg NAAm chính xác đến 0,1mg sau đó hịa tan trong hỗn hợp ACN : H2O (3:7) thành 50,0mL, (nồng độ dung dịch gốc khoảng 1000µg/mL) . Bảo quản ở nhiệt độ 2–8oC trong 3 tháng.
Dung dịch chuẩn hỗn hợp trung gian (100µg/mL): Pha lỗng 1,0mL dung dịch chuẩn NAA và NAAm gốc thành 10,0mL bằng pha động. Bảo quản ở nhiệt độ 2 – 8oC trong 1 tuần.
Dung dịch chuẩn hỗn hợp 20µg/mL: Pha lỗng 2,0mL dung dịch chuẩn hỗn hợp trung gian thành 100µg/mL thành 10,0mL bằng pha động. Sử dụng ngay sau khi pha.
Dung dịch chuẩn hỗn hợp 10µg/mL: Pha lỗng 1,0mL dung dịch chuẩn hỗn hợp trung gian thành 100µg/mL thành 10,0mL bằng pha động. Sử dụng ngay sau khi pha.
Dung dịch chuẩn hỗn hợp 5µg/mL: Pha lỗng 1,0mL dung dịch chuẩn hỗn hợp trung gian thành 100µg/mL thành 20,0mL bằng pha động. Sử dụng ngay sau khi pha.
HVTH: Phạm Minh Tiến GVHD: TS. Lâm Văn Mân Làm giàu mẫu
Mẫu táo đỏ đã sơ chế
Dung môi chiết
Kỹ thuật chiết
Thời gian chiết
Dung dịch chuẩn hỗn hợp 1µg/mL: Pha lỗng 1,0mL dung dịch chuẩn hỗn hợp trung gian thành 100µg/mL thành 100,0mL bằng pha động. Sử dụng ngay sau khi pha.
Dung dịch chuẩn hỗn hợp 0,5µg/mL: Pha loãng 1,0mL dung dịch chuẩn hỗn hợp 5µg/mL thành 10,0mL bằng pha động. Sử dụng ngay sau khi pha.
Dung dịch chuẩn hỗn hợp 0,1µg/mL: Pha lỗng 1,0mL dung dịch chuẩn hỗn hợp 5 µg/mL thành 50,0mL bằng pha động. Sử dụng ngay sau khi pha.
Dung dịch chuẩn hỗn hợp 0,05µg/mL: Pha lỗng 1,0mL dung dịch chuẩn hỗn hợp 5µg/mL thành 100,0mL bằng pha động. Sử dụng ngay sau khi pha.
Dung dịch chuẩn hỗn hợp 0,02 µg/mL: Pha lỗng 1,0mL dung dịch chuẩn hỗn hợp 1µg/mL thành 50,0mL bằng pha động. Sử dụng ngay sau khi pha.
Dung dịch chuẩn hỗn hợp 0,01µg/mL: Pha lỗng 2,0mL dung dịch chuẩn hỗn hợp 0,5µg/mL thành 100,0mL bằng pha động. Sử dụng ngay.
2.3.2. Xây dựng quy trình xử lý mẫu táo đỏ dùng phân tích NAA và NAAm
bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao ghép đầu dị DAD
Quy trình xử lý mẫu táo đỏ được khảo sát 4 yếu tố theo sơ đồ sau:
Sơ chế táo đỏ: Táo đỏ sau khi mua về được bỏ cuống, rửa sạch, sau đó rửa sạch bằng nước, cắt nhỏ, bỏ hạt. Mẫu cho vào cối xay, sử dụng máy xay mẫu tốc độ cao (hãng Philip, nấc số 2). Mẫu được tiến hành phân tích ngay hoặc bảo quản ở điều kiện -22oC đến khi được phân tích. Mẫu được rã đơng ở điều kiện nhiệt độ phòng (22 – 28oC) trong 3 giờ trước khi phân tích.