CHƯƠNG 3 : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. Xây dựng phương pháp phân tích mẫu chuẩn NAA và NAAm trên thiết bị
3.1.1. Khảo sát bước sóng cực đại
Từ phổ hấp thu của 3 dung dịch chuẩn trong 2 loại dung môi trên thiết bị HPLC-DAD, bước sóng hấp thu cực đại của NAAm là 280nm và NAA là 279nm. Tuy nhiên để thuận lợi cho tính tốn và áp dụng trên các thiết bị sử dụng đầu dò UV (thiết bị này chỉ dùng bước sóng cố định mà khơng có chế độ quét bước sóng), nên cần thiết phải chọn 1 bước sóng hấp thu cực đại cho cả 2 chất phân tích. Vì vậy bước sóng 280nm là bước sóng được chọn cho việc tính tốn nồng độ các chất phân tích.
HVTH: Phạm Minh Tiến GVHD: TS. Lâm Văn Mân Trên sắc ký đồ, cịn có 1 bước sóng hấp thu cực đại khác là 221nm, bước sóng này thường khơng đặc trưng cho chất phân tích. Các tạp chất hoặc các dung mơi, acid thường có hấp thu mạnh tại vùng tử ngoại này.
Dựa vào sắc ký đồ, khi thay đổi dung môi pha mẫu giữa acid formic 0% và acid formic 0,2%, có thể nhận xét NAA và NAAm có bước sóng hấp thu cực đại không thay đổi giữa hai môi trường này. Như vậy hai môi trường này khơng làm thay đổi tính chất hóa học và quang học của NAA và NAAm. Vì vậy, trong quá trình xử lý mẫu, việc chỉnh pH là khơng quan trọng.
Trong sắc ký lỏng, mỗi loại cột phân tích khác nhau chỉ dùng để tách một số nhóm chất. Khi sử dụng các cột phân tích này cần phải tìm ra loại pha động tối ưu để tách các chất phân tích ra khỏi nhau và tách biệt khỏi các chất tạp nhiễm khác. Trong thí nghiệm này đã tìm ra được thành phần pha động tối ưu trong 6 loại pha động khảo sát.
Bảng 3.1: Bảng kết quả độ phân giải và hệ số kéo đuôi giữa các thành phần pha động pha động
STT Tên thành phần pha động Độ phân giải Hệ số kéo đuôi
NAA NAAm 1 ACN : H2O (30:70) 0 1,254 - 2 ACN : HCOOH 0,1% (30:70) 1,328 1,070 1,086 3 ACN : HCOOH 0,2% (30:70) 1,367 1,078 1,085 4 ACN : HCOOH 0,4% (30:70) 1,363 1,078 1,098 5 ACN : HCOOH 0,6% (30:70) 1,355 1,080 1,091 6 ACN : HCOOH 0,8% (30:70) 1,344 1,084 1,098
Khi sử dụng pha động không chứa acid formic, hai pic của NAA và NAAm không tách khỏi nhau làm tăng diện tích pic lên gần gấp hai lần. Như vậy pha động không chứa acid không thích hợp cho phân tích hai chất này hoặc với pha động này thì cột sắc ký này khơng phù hợp để phân tích.
Sử dụng pha động có tính acid sẽ làm ổn định pH của pha động trong quá trình phân tích mẫu, điều này càng có ý nghĩa khi một chất có tính acid và 1 chất cịn lại có tính baz. Khi tăng nồng đồ acid formic hệ số phân giải của hai