Phần 3 Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
s. Aureus có trong thịt lợn bày bán tại một số chợ trên địa bàn tỉnh
3.6. Phương pháp nghiên cứu
3.6.4. Phương pháp xác định vi khuẩn salmonella
Kỹ thuật phát hiện Salmonella trong thực phẩm được dựa trên quy trình ISO 6579: 1993 (E) và được thể hiện qua sơ đồ 3.2.
3.6.4.1. Chuẩn bị mẫu, đồng nhất mẫu
Các mẫu thịt được xay và cắt nhỏ, rồi giã, nghiền trong cối sứ vô trùng. Sau đó cân 25 gram mẫu cho vào bình có chứa 225ml nước (Buffered pepton water), lắc đều trong vòng 1 - 2 phút, để tủ ấm 370C /24 ± 2h.
3.6.4.2. Tăng sinh chọn lọc
- Dùng Pipet vô trùng hút 1ml dung dịch tăng sinh trên cho vào ống nghiệm 1 chứa 9 ml rappapost vassiliadis (RV) nuôi cấy ở nhiệt độ 41,5 0C trong vòng 24h ± 2h. Sau đó dùng pipet vô trùng hút 0,1ml dung dịch tăng sinh trên cho vào ống nghiệm 2 chứa 10ml rappapost vassiliadis (RV) nuôi cấy ở nhiệt độ 41,50C/24h ± 2h.
3.6.4.3. Phân lập trên các đĩa thạch chọn lọc
Dùng que cấy vô trùng, ria cấy canh trùng ở ống nghiệm thứ nhất lên 2 đĩa thạch MacConkey và XLD và tương tự đối với ống nghiệm thứ 2 ở mục (3.6.4.2), rồi để tủ ấm 370C trong vòng 24h ± 2h.
- Trên môi trường MacConkey khuẩn lạc nghi ngờ là không mầu, tròn, trong, nhẵn bóng; Trên môi trường XLD khuẩn lạc nghi ngờ đó là: có mầu đen, tròn, bóng, rìa gọn lồi trên mặt thạch.
Ta chọn những khuẩn lạc điển hình trên 2 môi trường XLD và MacConkey để ria cấy trên môi trường thạch thường đã làm khô lớp mặt sao cho chúng phát triển thành những khuẩn lạc riêng biệt để dễ chọn lọc.
Sơ đồ 3.2. Xác định vi khuẩn Salmonella trên thịt lợn
3.6.5. Phương pháp xác định tổng số E .coli
- Từ những ống BGB dương tính đối với vi khuẩn E. coli cấy ra thạch MacConkey.
Cách làm: Dùng que nhựa vô trùng, lấy một vòng đầy canh trùng ria cấy trên thạch MacConkey. Nuôi cấy tủ ấm 370C trong vòng 24h ± 2h.
Đọc kết quả: Khuẩn lạc nghi E. coli trên môi trường MacConkey có màu đỏ cánh sen, có vòng mờ xung quanh, tròn, lồi.
- Từ những khuẩn lạc nghi ngờ là E. coli tương ứng với từng nồng độ, dùng que cấy vô trùng cấy vào môi trường nước thịt 5 ml. Nuôi cấy ở tủ ấm 410C trong vòng 24h ± 2h. Sau đó thử phản ứng sinh indol bằng cách.
Nhỏ 1- 2 giọt dung dịch Kovacs vào môi trường nước thịt trên, nếu xuất hiện vòng đỏ trên bề mặt môi trường đó là phản ứng sinh Indol dương tính (+). Tổng hợp kết quả và tra bảng MPN ta sẽ tính được tổng số vi khuẩn E. coli trên 1gram thịt lợn.
Tổng hợp các bước tiến hành xác định vi khuẩn tổng số và định type các chủng vi khuẩn phân lập được. Trình bày ở sơ đồ 3.4.
Sơ đồ 3.3. Sơ đồ xác định tổng số vi khuẩn E. coli
Sơ đồ 3.4. Phương pháp đếm tổng số S. aureus