Phần 3 Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
s. Aureus có trong thịt lợn bày bán tại một số chợ trên địa bàn tỉnh
3.6. Phương pháp nghiên cứu
3.6.3. Phương pháp phát hiện và tính số lượng s Aureus
Theo TCVN 5156-1990 ngoài ra còn tham khảo phương pháp ISO 6579- 1993. - Lấy mẫu theo tiêu chuẩn quốc tế ISO 3100 - 1: 1991 (E).
- Cách tiến hành:
+ Chuẩn bị mẫu, đồng nhất và pha loãng mẫu
Cân 10 gram (thịt không mỡ), nghiền nhuyễn trong cối sứ vô trùng, cho vào bình tam giác, bổ sung thêm 90 ml môi trường BHI (Brain Heart Infusion broth) trộn đều ở tốc độ 1500 - 2000 vòng/ phút, trong 2 phút ta thu được huyễn dịch có độ pha loãng ban đầu 10-1. Tiếp tục pha loãng thành các đậm độ 10-2, 10-3, 10-4,... đến khi không còn dương tính.
+ Nuôi cấy, phân lập và giám định tính chất sinh hoá của S. aureus. Mỗi mẫu cấy ít nhất ở 3 đậm độ liên tục, mỗi đậm độ cấy vào 2 đĩa thạch. Lấy 0,1 ml
dung dịch pha loãng ở mỗi đậm độ khác nhau cho và giữ đĩa thạch, dùng que gạt thuỷ tinh láng đều trên mặt thạch. Lật úp đĩa thạch, để tủ ấm 370C/ 24h đọc kết quả. Khuẩn lạc S. aureustròn, lồi, bờ đều, bóng, có vòng tròn suốt ở xung quanh, có màu vàng thẫm.
+ Môi trường thạch Sapman: đây là môi trường đặc biệt để nuôi cấy và phân lập tụ cầu khuẩn. Thành phần môi trường gồm: Thạch thường 1.000ml, NaCl 75g, Mannit 10g, Dung dịch Phenol đỏ 4%: 3-4ml.
Khi cấy tụ cầu khuẩn vào môi trường thạch Sapman, nếu là tụ cầu khuẩn gây bệnh sẽ lên men đường manit làm pH thay đổi (pH = 6,8), môi trường Sapman lúc này trở nên vàng. Nếu tụ cầu khuẩn không gây bệnh sẽ không lên men đường manit, pH = 8,4 môi trường thạch Sapman có màu đỏ.
Giám định lại kết quả bằng cách thực hiện bằng các phép thử để kiểm tra đặc tính làm đông huyết tương của vi khuẩn S. aureus. Thực hiện lấy khuẩn lạc nghi ngờ là S. aureus tăng sinh trong môi trường BHI để tụ ấm 370C/24h. Lấy canh trùng cho vào huyết tương thỏ theo tỷ lệ 1:4 (0,1ml canh trùng với 0,4ml huyết tương thỏ) để tủ ấm 370C trong vòng 4h-24h đọc kết quả.