Phần 3 Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
s. Aureus có trong thịt lợn bày bán tại một số chợ trên địa bàn tỉnh
3.6. Phương pháp nghiên cứu
3.6.2. Phương pháp xác định tổng số vi khuẩn kỹ thuật đếm khuẩn lạc
3.6.2.1. Nuôi cấy, đếm khuẩn lạc từ huyễn dịch pha loãng
Thực hiện theo tiêu chuẩn ISO 3100 - 2: 1991 có cải tiến.
Mỗi mẫu kiểm nghiệm nuôi cấy ít nhất hai đậm độ liên tiếp, mỗi đậm độ dùng hai đĩa thạch đặc đã kiểm tra vô trùng. Lấy 0,1ml dung dịch pha loãng ở những đậm độ cần kiểm nghiệm khác nhau cho vào từng đĩa Petri. Láng đều trên mặt thạch, hoặc dùng đũa thuỷ tinh gấp khúc gạt nhẹ trên mặt thạch đã nhỏ huyễn dịch, để vào tủ ấm 1-2h sau đó lật sấp các đĩa Petri tiếp tục bồi dưỡng ở 370C/24 ± 2h.
10-1 Dung dịch mẫu ban đầu
(chứa 10g thịt+90ml peptone)
9ml 9ml 9ml 9ml
10-2 10-3 10-4 10-5
3.6.2.2. Tính kết quả
Cách tiến hành: Lấy 1ml dung dịch nuôi cấy vi khuẩn trong môi trường lỏng BHI 370C trong 24h cho vào ống thí nghiệm có chứa 9ml nước sinh lý vô trùng ta có nồng độ pha loãng 10-1 trộn đều bằng máy lắc Vortex.
Dùng Pipét vô trùng hút 0,1ml huyễn dịch từ 10-1 trộn vào 0,9ml nước muối sinh lý để tiếp tục pha loãng ở các nồng độ pha loãng tiếp theo từ: 10-1, 10-
2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6, 10-7, 10-8.
Lấy 0,1ml từ các nồng độ pha loãng trên cấy vào môi trường Maconkey hoặc môi trường XLD (mỗi độ pha loãng cấy vào hai đĩa môi trường) dùng que gạt thuỷ tinh vô trùng dàn đều huyễn dịch trên khắp bề mặt đĩa thạch, bồi dưỡng ở 370C trong 24h, chọn các đĩa thạch đạt yêu cầu để đếm số và lượng vi sinh vật (N) trong 1ml được tính theo công thức sau:
1 2 C N d n . 1 n . 0 , 1
Trong đó: C là số khuẩn lạc đếm được ở các đĩa có nồng độ pha loãng liền nhau chọn để đếm, với điều kiện là số khuẩn lạc nằm trên mối đĩa đạt từ 15 -200.
Ví dụ ta chọn 2 độ pha loãng là 10-7, 10-8
n1: số đĩa của nồng độ pha loãng ban đầu 10-7 (2 đĩa) n2: số đĩa của nồng độ pha loãng ban đầu 10-8 (2 đĩa) d: độ pha loãng ban đầu (nhân với nghịch đảo) 107