3.1. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU
Các chỉ tiêu vệ sinh thú y đối với cơ sở giết mổ lợn trên địa bàn quận Kiến An, thành Phố Hải Phòng: địa điểm cơ sở giết mổ, khu vực tiến hành hoạt động giết mổ. trang thiết bị, dụng cụ dùng trong giết mổ, không khí và nguồn nước sử dụng trong giết mổ, chất thải, thịt từ cơ sở giết mổ.
3.2. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU
3.2.1. Điều tra tình hình giết mổ lợn tại các phường trong địa bàn quận Kiến An, thành phố Hải Phòng An, thành phố Hải Phòng
3.2.2. Đánh giá thực trạng điều kiện trang thiết bị, công nghệ, vệ sinh thú y và ý thức người tham gia hoạt động giết mổ lợn tại một số cơ sở giết mổ quận Kiến An, thành phố Hải Phòng
3.2.3. Xác định mức độ ô nhiễm vi khuẩn trong không khí và nguồn nước sử dụng trong giết mổ dụng trong giết mổ
3.2.4. Xác định mức độ ô nhiễm vi khuẩn trong thịt lợn ở một số cơ sở giết mổ bao gồm các chỉ tiêu: tổng số vi khuẩn hiếu khí, E. Coli, Coliform, mổ bao gồm các chỉ tiêu: tổng số vi khuẩn hiếu khí, E. Coli, Coliform, Salmonella, Staphylococcus aureus, Clostridium perfringens
3.2.5. Đề xuất các giải pháp quy hoạch, quản lý, công nghệ đối với cơ sở theo hướng giết mổ tập trung hướng giết mổ tập trung
3.3. NGUYÊN LIỆU NGHIÊN CỨU 3.3.1. Mẫu xét nghiệm 3.3.1. Mẫu xét nghiệm
Mẫu thịt lợn, mẫu nước, không khí lấy tại một số cơ sở giết mổ tại một số phường trên địa bàn quận Kiến An.
3.3.2. Môi trường nuôi cấy vi khuẩn
Môi trường nuôi cấy phân lập vi khuẩn của hãng Oxoid (Anh), Merk (Đức), gồm các loại: dung dịch Pepton, CLP, LTS, Muller Kauffman và BHI, Thạch thường, Bair-Parker, PCA, EC, Endo, SS (Salmonella Shigella agar),Chapman, Macconkey, Winson blair.
3.3.3. Thiết bị mày móc, dụng cụ và hoá chất dùng trong thí nghiệm
- Thiết bị: tủ ấm, tủ lạnh, tủ mát, tủ hấp sấy, nồi cách thuỷ, cân, buồng cấy vô trùng, kính hiển vi.
- Máy đồng nhất mẫu Stomacher, máy định danh vi khuẩn Vitek
- Dụng cụ: Pipet, ống nghiệm, chai lọ các loại,....và hoá chất cần thiết cho phòng thí nghiệm vi sinh vật.
3.4. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.4.1. Phương pháp điều tra 3.4.1. Phương pháp điều tra
Lập bảng biểu thu thập số liệu về thực trạng hoạt động giết mổ; phỏng vấn những người liên quan đến nội dung nghiên cứu của đề tài. Sử dụng phương pháp thống kê chuyên môn để tính số liệu điều tra.
3.4.2. Phương pháp lấy mẫu kiểm tra đánh giá ô nhiễm vi khuẩn
Tại hiện trường: - Mẫu thịt được lấy theo Quy chuẩn QCVN 01 - 04: 2009/BNNPTNT và xử lý tại phòng thí nghiệm theo TCVN 4833-1:2002; TCVN 4833-2:2002. Kết quả được đánh giá theo TCVN 7046: 2009.
Mẫu nước được lấy và bảo quản mẫu theo tiêu chuẩn TCVN 6663/2011, kết quả được đánh giá theo quy chuẩn QCVN 01: 2009/BYT.
Không khí được lấy mẫu theo phương pháp lắng bụi Koch.
3.4.3. Phương pháp xét nghiệm vi khuẩn
3.4.3.1. Xác định tổng số vi khuẩn Coliform, E. Coli giả định trong nước theo TCVN 6187-2: 1996
3.4.3.2. Xác định tổng số vi sinh vật hiếu khí trong không khí theo phương pháp lắng bụi Koch
3.4.3.3. Xác định tổng số vi sinh vật hiếu khí trong thịt theo TCVN 4884: 2005 3.4.3.4. Xác định E. coli trong thịt theo TCVN 7924-2: 2008
3.4.3.5. Định tính vi khuẩn Salmonella trong thịt theo TCVN 4829: 2005 3.4.3.6. Xác định tổng số Staphylococcus aureus trong thịt theo TCVN 4830-1: 2005
3.4.3.7. Xác định tổng số vi khuẩn Clostridium perfringens trong thịt theo TCVN 4991:2005
3.4.3.8. Xác định Coliforms tổng số trong thịt theo TCVN 6848:2007
3.4.3.9. Phương pháp định danh vi khuẩn bằng máy định danh Vitek2 compact
Máy định danh và làm kháng sinh đồ tự động Vitek2 compact hoạt động dựa trên nguyên lý theo dõi liên tục sự phát triển của vi khuẩn trong thẻ định danh (card). Phương pháp đinh danh vi sinh vật dùng phương pháp đo màu để nhận biết các tính chất sinh vật hóa học của vi sinh vật thông qua sự thay đổi màu của các giếng môi trường có sẵn trong thẻ. Phương pháp đo màu thực hiện theo nguyên lý sự suy giảm cường độ sáng: Hệ thống quang học sử dụng ánh sáng nhìn thấy để theo dõi trực tiếp sự phát triển của vi sinh vật thông qua việc đo cường độ ánh sáng bị chặn lại (hay sự suy giảm cường độ ánh sáng khi ánh sáng đi qua giếng. Hệ thống sử dụng các bước sóng 660n, 568nm, 428nm.
Card định danh gồm 64 giếng để kiểm tra các đặc tính sinh hóa của vi sinh vật.
Quy trình định danh. Chuẩn bị dụng cụ. Phiếu xét nghiệm.
Các loại thẻ định danh vi khuẩn gram dương (GP), gram âm (GN) bảo quản ở 2 - 8°C, các thẻ để ở nhiệt độ phòng 30 phút trước khi làm xét nghiệm.
Máy đo độ đục chuẩn, kit chuẩn.
Ống nghiệm vô trùng kích cỡ 12mm x 75mm để pha huyễn dịch vi khuẩn. Dung dịch nước muối NaCl 0,45% vô trùng.
Dispenser, que cấy, đèn cồn, găng tay sạch, bút viết. Chuẩn bị mẫu.
Các khuẩn lạc gram âm, gram dương được cấy thuần trên đúng các loại môi trường, đúng điều kiện ủ, tuổi khuẩn lạc.
Thực hiện.
Lấy ống nghiệm vô trùng đặt lên khay cassette.
Hút nước muối: Dùng dispenser hút 3ml nước muối 0,45% vào ống nghiệm. Pha huyễn dịch: Lấy khuẩn lạc thuần đưa vào ống nghiệm, trộn đều và đưa vào máy đo độ đục: đạt khoảng 0,5 - 0,63 McFarland (vi khuẩn gram dương, và vi khuẩn gram âm).
Lấy thẻ định danh và đặt vào khay cassette, đưa vào máy định danh. Máy sẽ tự động định danh và trả lời kết quả.
3.5. PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ VÀ XỬ LÝ SỐ LIỆU
- Đánh giá thực trạng điều kiện trang thiết bị, công nghệ, vệ sinh thú y và ý thức người tham gia hoạt động giết mổ tại một số cơ sở giết mổ quận Kiến An theo Thông tư số 09/2016/TT-BNNPTNT, Thông tư số 45/2014/TT-BNNPTNT.
- Đánh giá mức độ ô nhiễm không khí theo Quy định tạm thời về vệ sinh Thú y cơ sở giết mổ của Cục Thú y (2001).
- Đánh giá quy định chỉ tiêu vi sinh vật trong thịt theo TCVN 7046:2009. - Đánh giá mức độ ô nhiễm vi sinh vật nước sử dụng trong giết mổ theo Theo Thông tư số 09/2016/TT-BNNPTNT, Thông tư số 45/2014/TT-BNNPTNT. Kết quả điều tra và phân tích ô nhiễm vi khuẩn được tập hợp xử lý thống kê toán học bằng phần mềm chương trình Data Analysis trong Excel, Minitab 16.