3. KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
3.1.2. Hiệu quả nuôi cấy sơ cấp
Mảnh mô được nuôi trong môi trường M171 bắt đầu có tế bào mọc ra từ rìa mảnh mô sau năm ngày nuôi cấy. Trong quá trình nuôi cấy sơ cấp, có những mẫu khối u nuôi cấy trên 40 ngày mà không có tế bào nào phát triển sẽ bị loại bỏ. Mẫu khối u hầu như không bị nhiễm chỉ có 2/51 mẫu bị nhiễm ở ngày thứ 5 và 10. Hiệu quả nuôi cấy không nhiễm đạt 96,1% cho thấy phương pháp xử lý rửa mẫu bằng dung dịch PBS 10X kháng sinh cho hiệu quả cao, nên tiếp tục áp dụng cho những nghiên cứu phân lập dòng tế bào ung thư vú người Việt Nam từ nuôi cấy sơ cấp.
Nhóm nghiên cứu bắt đầu thu nhận mẫu khối u vú từ tháng 10/2011 đến tháng
12/2011 và thu được 51 mẫu. Đến thời điểm hiện nay (tháng 02/2012), trong 51 mẫu thu nhận có 39 mẫu có tế bào phát triển từ mảnh mô đạt hiệu quả nuôi cấy thành công 76,5%; có 21 mẫu duy trì hơn 40 ngày nhưng không có tế bào phát triển từ rìa mảnh mô bị loại bỏ vì quá hao phí môi trường nếu tiếp tục duy trì nữa. Các
mẫu không có tế bào phát triển đa phần là: mẫu nuôi cấy ban đầu khi khối u được xử lý thành những khối dày, to hoặc nuôi với mật độ dày quá (14-18 mảnh/bình nuôi); mẫu khối u có kích thước quá nhỏ; mẫu khối u có nhiều mỡ, sau khi xử lý sơ bộ vẫn còn mỡ lơ lửng trong bình nuôi gây cản trở sợ tăng sinh tế bào. Một số bệnh nhân khi phẫu thuật nhiều mô mỡ tại khối u, hoặc nhiều dịch nhầy, nhiều mạch máu nên mẫu khối u sau xử lý nhỏ và khó chọn vùng có khả năng tế bào tăng sinh tốt.
Bảng 3. 1. Thống kê hiệu quả nuôi cấy thành công
Số mẫu đã tiến hành Số mẫu có tế bào mọc Số mẫu không có tế bào mọc
51 39 12
Hiệu quả nuôi cấy (%) 76.47 23.53%
Đa phần các khối u có tế bào mọc lan trong giai đoạn 5-10 ngày (15 mẫu/39 mẫu chiếm tỷ lệ 38,5%) và gia đoạn 11-19 ngày (16 mẫu/39 mẫu chiếm tỷ lệ 41%). Phần lớn các mẫu này, tế bào phát triển tốt, mọc dày, lan rộng và có hình thái tương đối đồng nhất.
Hình 3. 8. Biểu đồ thống kê mẫu khối u có tế bào phát triển theo thời gian
Phần lớn các mẫu khối u được nuôi cấy có tế bào phát triển được thu từ bệnh nhân có độ tuổi còn trẻ (58% bệnh nhân dưới 50 tuổi). Mẫu khối u thu từ bệnh nhân lớn tuổi (78% bệnh nhân trên 50 tuổi) thường khó nuôi cấy hoặc không có tế bào phát triển sau hơn 40 ngày.
Hình 3. 9. Biểu đồ phân bốđộ tuổi của bệnh nhân cho mẫu khối u vú
Tất cả các mẫu ung thư phải được thu từ bệnh nhân ung thư từ giai đoạn II trở
lên, trong đó đa số là mẫu ở giai đoạn IIB. Hầu như không thấy sự tương quan rõ rệt giữa khả năng nuôi cấy thành công mẫu với giai đoạn ung thư. Tuy nhiên, những mẫu khối u có tế bào phát triển sớm thường là những mẫu ở giai đoạn IIB trở lên (88% ở giai đoạn IIB trở đi và chỉ 12% ở giai đoạn IIA), đặc biệt mẫu của bệnh nhân di căn ở giai đoạn IV chỉ sau 6 ngày nuôi cấy đã có tế bào mọc lan từ rìa mảnh mô và các tế bào này phát triển mạnh, có xu hướng hình thành cụm. Mẫu khối u không có tế bào phát triển thường ở giai đoạn sớm (33% ở giai đoạn IIA và chỉ 44% ở giai đoạn IIB).