a. Thu nhận tế bào đơn nhân tủy xương
Giết chuột bằng cách kéo dãn đốt sống cổ.
Sát trùng toàn bộ cơ thể chuột bằng cồn 700, đặt chuột lên khay mổ. Cắt một đường ngang thân chuột, lột bỏ da đùi để lộ 2 chi dưới.
Cắt lấy 2 chi dưới đã loại bỏ hết da, cắt bỏ bàn chân, ngâm vào cồn 700.
Tiếp tục xử lý chi dưới trong tủ cấy an toàn sinh học. Hai chi được rửa sạch bằng dung dịch PBS 10X kháng sinh, cắt bỏ cơ cho đến khi chỉ lộ xương, cắt ngang khớp đùi để thu bốn xương cẳng chân.
Rửa bốn xương cẳng chân bằng dung dịch PBS 10X kháng sinh hai lần.
Với mỗi xương cẳng chân, cắt bỏ hai đầu xương, dội rửa và thu nhận phần tủy xương bên trong bằng dung dịch PBS 1X kháng sinh.
Thu hết phần tủy xương và chuyển vào ống ly tâm 15ml, ly tâm 3000 vòng/phút trong năm phút, loại bỏ dịch nổi.
Thu cặn tế bào, huyền phù tế bào với 6ml môi trường RPMI 1640 và chuyển vào bình nuôi 25 cm2, mỗi bình 2ml dịch huyền phù tế bào.
b. Nuôi cấy và biệt hóa tế bào tua từ tế bào đơn nhân tủy xương
Trong 2 ngày, nuôi tế bào đơn nhân tủy xương trong môi trường RPMI 1640 có huyết thanh ở điều kiện 370C, 5% CO2 để tế bào đơn nhân bám xuống bề mặt nuôi cấy.
Thay môi trường RPMI bằng môi trường CM1 để cảm ứng tế bào đơn nhân biệt hóa thành tế bào tua. Loại bỏ môi trường RPMI, rửa tế bào 2 lần bằng dung dịch PBS và thu nhận tế bào trong dịch nổi. Nuôi tế bào bám và tế bào thu từ dịch nổi trong môi trường CM1 trong 5 ngày, thay môi trường 2 ngày/lần.
Thay môi trường CM1 bằng môi trường CM2 để cảm ứng tế bào tua trưởng thành. Loại bỏ môi trường CM1, rửa tế bào 2 lần bằng dung dịch PBS và thu nhận tế bào trong dịch nổi. Nuôi tế bào bám và tế bào thu từ dịch nổi trong môi trường CM2 trong 7 ngày, thay môi trường 3 ngày/lần.
Sau 14 ngày nuôi cấy tế bào đơn nhân trong 3 môi trường theo 3 giai đoạn trên, thu nhận được tế bào có hình thái giống tế bào tua.