Chất cảm ứng IPTG nếu được sử dụng ở nồng độ thích hợp sẽ có khả năng cảm ứng sự biểu hiện của protein mục tiêu mà không làm ảnh hưởng đáng kể đến sự tăng trưởng của chủng chủ. Trong quá trình khảo sát nhằm tối ưu hóa nồng độ chất cảm ứng IPTG, chúng tôi dựa trên hai tiêu chí: sự tăng trưởng của chúng và lượng protein tái tổ hợp được biểu hiện trong tế bào chất của chúng. Trong đó, sự tăng trưởng của chủng được đánh giá thông qua việc đo OD600 của dịch vi khuẩn sau cảm ứng. Kết quả đo OD600 của dịch vi khuẩn ứng với các nồng độ IPTG cảm ứng khác nhau được trình bày trong Bảng 3.2.
Kết quả cho thấy các giá trị OD600 không chênh lệch nhiều ở các nồng độ IPTG khác nhau. Điều này cho thấy sự thay đổi nồng độ chất cảm ứng IPTG không làm ảnh hưởng đáng kể đến sự tăng trưởng của chủng. Do đó, chúng tôi tiến hành đánh giá nồng độ IPTG tối ưu dựa trên hiệu quả cảm ứng biểu hiện protein tái tổ hợp trong chủng E. coli BL21(DE3)/pVFT-GST-fljB-hab ứng với các nồng độ IPTG đã khảo sát.
Bảng 3.2. Mật độ tế bào (OD600) sau 4 giờ cảm ứng với các nồng độ IPTG khác nhau
Nồng độ IPTG OD600 0,1 mM 1,513 ± 0,140 0,3 mM 1,552 ± 0,137 0,5 mM 1,641 ± 0,145 0,7 mM 1,625 ± 0,114 0,9 mM 1,613 ± 0,106
Luận văn thạc sĩ Kết quả - Biện luận
Trang 62
Nhằm so sánh sự biểu hiện của protein mục tiêu ở các nồng độ IPTG khác nhau, chúng tôi tiến hành điện di SDS-PAGE và định lượng bằng phần mềm Quantity One các mẫu protein ứng với các nồng độ cảm ứng của IPTG. Kết quả thể hiện trên
Hình 3.10.
Hình 3.10. Kết quả định lượng Quantity One các mẫu protein cảm ứng ở các nồng độ IPTG khác nhau
1,E. coli BL21(DE3)/pVFT-fljB-hab, IPTG 0,1mM; 2, E. coli
BL21(DE3)/pVFT-fljB-hab, IPTG 0,3mM; 3, E. coli BL21(DE3)/pVFT-fljB-hab, IPTG 0,5mM; 4, E. coli BL21(DE3)/pVFT-fljB-hab, IPTG 0,7mM; 5, E. coli
BL21(DE3)/pVFT-fljB-hab, IPTG 0,9mM
Kết quả sau khi định lượng được trình bày trong Bảng 3.3.
Bảng 3.3. Kết quả định lượng bằng phần mềm Quantity One tỉ lệ GST-:1,2- HAeB theo các nồng độ IPTG cảm ứng
Nồng độ IPTG Tỉ lệ GST-H:1,2-HAeB (%) 0,1 mM 12,7 0,3 mM 11,6 0,5 mM 16,0 0,7 mM 12,6 0,9 mM 11,0
Kết quả cho thấy tỉ lệ protein GST-H:1,2-HAeB ứng với nồng độ IPTG 0,5mM là cao nhất. Các nồng độ IPTG lớn hơn có thể ức chế sự biểu hiện của chủng E. coli
BL21(DE3)/pVFT-fljB-hab. Do đó, chúng tôi lựa chọn nồng độ tối ưu nhất với lượng 1 2 3 4 5
Luận văn thạc sĩ Kết quả - Biện luận
Trang 63
protein tái tổ hợp thu được cao nhất để cảm ứng cho sự biểu hiện protein GST-H:1,2- HAeB trong chủng chủ E. coli BL21(DE3)/pVFT-fljB-hab là 0,5mM.