Định lượng nồng độ homocystein huyết thanh [48]

- Chống đông: bằng Heparin liên tục bằng đường toàn thân Liều khởi đầu

2.2.3.4.Định lượng nồng độ homocystein huyết thanh [48]

Bệnh nhân nhịn đói ít nhất 12 giờ lấy máu buổi sáng, xét nghiệm trên hệ thống Bayer ADVIA Centaur tại khoa sinh hóa Trung tâm chẩn đoán y khoa MEDIC.

Định lượng homocystein trên hệ thống ADVIA Centaur là một xét nghiệm miễn dịch cạnh tranh được sử dụng trực tiếp kỹ thuật hóa phát quang. Các dạng khác nhau của homocystein trong mẫu bệnh phẩm được khử thành dạng homocystein tự do bởi thuốc thử biến đổi. Homocystein tự do được chuyển đổi thành S- adenosylhomocysteine (SAH) bởi thuốc thử men.

Hình 2.4. Hệ thống máy Bayer ADVIA Centaur

Các bước tiến hành:

- Hút 20 L mẫu bệnh phẩm vào ống nghiệm.

- Hút tiếp 50 L Reducing Reagent và ủ 3 phút ở nhiệt độ 370

C. - Hút tiếp 50 L Enzyme Reagent và ủ 2,5 phút ở nhiệt độ 370

C. - Hút tiếp 250 L Solid Phase và ủ 2,5 phút ở nhiệt độ 370

C. - Hút tiếp 100 L Lite Reagent và ủ 2,5 phút ở nhiệt độ 370

C. - Phân lập, ly trích và rửa ống nghiệm với dung dịch nước reagent. - Hút tiếp mỗi 300 L Acid Reagent và Base Reagent để phản ứng hóa phát quang.

Ngưỡng phát hiện  0,5 mol/L – 65 mol/L.

Giá trị trung bình 8,2mol/L (5,0 – 13,9mol/L) được xem là bình thường. - Pha loãng:

Các mẫu xét nghiệm có nồng độ homocystein > 65mol/L, máy sẽ tự động pha loãng và định lượng lại để có kết quả chính xác.

Khi nồng độ homocystein vượt quá khả năng pha loãng tự động của máy, thì mẫu sẽ được pha loãng bằng tay với homocystein Diluent rồi vận chuyển mẫu pha loãng trên giá mẫu, sản phẩm thay thế máu vẫn nguyên chất.

So sánh kết quả với các phương pháp định lượng khác theo công thức: - Phương pháp miễn dịch huỳnh quang phân cực (FPIA):

ADVIA Centaur Hcy = 0,98 (FPIA Hcy) + 0,74mol/L, (r = 0,994) - Phương pháp sắc ký lỏng cột cao (HPLC):

ADVIA Centaur Hcy = 0,97 (HPLC Hcy) + 0,11mol/L, (r = 0,97)