- PHẦN 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP:
3.2.2Phương pháp xác định đường tổng
3.2 Phương pháp phân tích
3.2.2Phương pháp xác định đường tổng
Nguyên tắc: thực hiện phản ứng tạo màu giữa đường tổng trong mẫu nghiên cứu với thuốc thử phenol khi cĩ sự hiện diện của H2SO4. Cường độ màu được đo bằng máy quang phổ so màu ở bước sĩng 490nm. Dựa vào đồ thị chuẩn
của saccharose tinh khiết với thuốc thử, tính ra hàm lượng đường tổng của mẫu nghiên cứu.[16]
Thực hiện:
Chiết đường từ mẫu thí nghiệm: Nghiền nguyên liệu càn định lượng sau
đĩ cân 1g mẫu phân tích cho vào becher 100ml. Thêm vào 20ml cồn 960, đặt lên nồi cách thủy, đun sơi 3 lần, mỗi lần sơi lấy ra để nguội rồi để lại trên bếp. Khuấy đều, để nguội, lọc qua giấy lọc (khơng cho cặn đổ lên giấy lọc). Sau đĩ thêm 10 ml cồn 800 vào becher đựng mẫu, khuấy đều, đun 2 lần tới sơi trên nồi cách thủy, để nguội, lọc, tiếp tục làm như vậy khoảng 2-3 lần. Sau đĩ đưa cặn lên giấy lọc, tráng cốc 2-3 lần bằng cồn 800 nĩng (nước tráng cũng cho cả lên lọc). Dịch lọc cho bay hơi cồn ở nhiệt độ phịng hoặc đun nhẹ trên nồi cách thủy. Cặn khơ được hồ tan vào nước đến 50ml. Khi làm hiện màu cĩ thể pha lỗng nếu nồng độ đường quá cao.[13]
Xây dựng đường chuẩn
Lấy 7 bình định mức 100ml, cho vào đĩ theo thứ tự: 1,2,3,4,5,6 và 7ml dung dịch saccharose 0,1%, cho nước cất tới vạch mức. Từ mỗi bình hút ra 1ml, cho thêm 1ml dung dịch phenol 5%. Cẩn thận cho thêm 5ml H2SO4 đậm đặc. Để 10 phút rồi lắc đều, giữ tiếp 10-15 phút ở nhiệt độ phịng để xuất hiện màu. Trong mỗi ống nghiệm sẽ cĩ tương ứng 10, 20, 30, 40, 50, 60 và 70μg saccharose. Đem đo mật độ quang ở bước sĩng λ= 490 nm, vẽ đồ thị chuẩn.
Xác định đường trong mẫu: hút 1ml dung dịch đường cần xác định, tiến hành tương tự như bước xây dựng đường chuẩn saccharose.[13]
Tính kết quả:
Hàm lượng đường tổng số chứa trong 100g mẫu được tính theo cơng thức:
Trong đĩ: x: Hàm lượng đường tương ứng trên đường chuẩn (μg/ml). k: Hệ số pha lỗng.
x.10-6.k.V.100 v.m ĐT =
V: Thể tích dịch đường ban đầu (ml). v: Thể tích mẫu đem phân tích (ml). m: Trọng lượng mẫu (g).[13]