3. NỘI DUNG, NGUYấN LIỆU
3.3.2.1. Phương phỏp kiểm tra vi khuẩn cú trong nước sử dụng cho giết mổ
Sử dụng phương phỏp lấy mẫu và xột nghiệm vi khuẩn nguồn nước theo quy trỡnh của Viện Y học lao ủộng và vệ sinh mụi trường (2002) [47] và tiờu chuẩn Việt Nam 2680 (TCVN, 1978) [37].
* Phương phỏp lấy mẫu
- Lấy mẫu nước tại vũi nước mỏy: cần mở nước chảy hết cỡ trong vũi 2 - 3 phỳt. đúng vũi và khử khuẩn kỹ vũi nước bằng nhiệt ủộ, bụng cồn. Mở vũi cho nước chảy mạnh 1 Ờ 2 phỳt rồi ủiều chỉnh chảy vừa ủủủể lấy mẫu vào chai nỳt mài 500 ml ủó ủược hấp, sấy tiệt trựng. Thao tỏc lấy mẫu cần phải ủảm bảo vụ trựng, mẫu phải bảo quản lạnh sau ủú chuyển về phũng thớ nghiệm.
- Lấy mẫu tại bể chứa nước: khử trựng giỏ cõy Inox bằng cồn 700, sau ủú ủặt chai nỳt mài 500 ml (ủó ủược hấp, sấy tiệt trựng) cú buộc dõy ở nắp vào cõy giỏ treo. Thả chai lấy mẫu xuống ủộ sõu khoảng 0,3 Ờ 0,5 m, dật dõy
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ẦẦẦ45
nỳt mài ủể nước chảy vào ủầy chai thỡ kộo lờn, nghiờng cõy giỏ ủổ bớt phần nước trong chai mẫu, ủậy nỳt mài và ghi nhón lấy mẫu. Bao gúi, bảo quản lạnh và ủưa mẫu về phũng thớ nghiệm.
* Phương phỏp xỏc ủịnh vi khuẩn hiếu khớ
Sử dụng phương phỏp rút thạch ủể xỏc ủịnh vi khuẩn. Mẫu nước ủược pha loóng ở cỏc ủậm ủộ khỏc nhau: 10-1, 10-2, 10-3,Ầtuỳ theo ủộ sạch bẩn ủể quyết ủịnh mức ủộ pha loóng. Sử dụng pipet vụ trựng chuyển 1 ml nước mẫu pha loóng vào giữa ủĩa Petri, mỗi ủộ pha loóng cấy vào 2 ủĩa. Rút vào mỗi ủĩa pha loóng 12 Ờ 15 ml mụi trường thạch thường 450C, xoay trũn ủĩa theo chiều kim ủồng hồ, sau ủú xoay ngược lại ủể trộn ủều mụi trường với mẫu nước kiểm tra. đểủĩa thạch ủụng tự nhiờn, lật ỳp ủĩa Petri chuyển vào tủ ấm 370C trong 24 giờ.
đếm số khuẩn lạc mọc trờn bề mặt ủĩa thạch. để trỏnh nhầm lẫn cần ủưa ủĩa thạch lờn giỏ kớnh chia ụ ủể ủếm. Nếu vượt quỏ 300 khuẩn lạc /ủĩa Petri thỡ loại bỏ và mẫu cần ủược pha loóng tiếp.
đọc kết quả và tớnh theo cụng thức sau:
A + 10B + 100C + 1000D
N (vk/1 ml) =
n
Trong ủú: N: số lượng vi khuẩn trong 1 ml nước A: Số khuẩn lạc trong 1 ml nước ở ủộ pha loóng ủầu tiờn trong 3 ủộ pha loóng liờn tiếp cần ủếm.
B: Số khuẩn lạc trong 1 ml nước ởủộ pha loóng 10-1 C: Số khuẩn lạc trong 1 ml nước ởủộ pha loóng 10-2 D: Số khuẩn lạc trong 1 ml nước ở ủộ pha loóng 10-3 n: Sốủĩa ủược ủếm
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ẦẦẦ46
- Sử dụng phương phỏp lờn men nhiều ống và tớnh kết quả số lượng
E.coli bằng cỏch tra bảng tỡm số gần ủỳng MPN (Most Probable Number). - Mẫu pha loóng ở cỏc ủậm ủộ khỏc nhau: 10-1, 10-2, 10-3,Ầtuỳ theo ủộ sạch bẩn. Thụng thường một mẫu nuụi cấy ở 3 ủậm ủộ liờn tiếp.
- Mỗi ủộ pha loóng phải nuụi cấy 5 ống mụi trường canh thang CLP, ủể tủ ấm 420C trong 24 giờ. Sau ủú cỏc ống mụi trường chuyển màu từ hồng ủỏ sang màu vàng và sinh hơi trong ống Durham thỡ ria cấy chuyển sang thạch Endo ủể tủấm 420C trong 24 giờ.
Trờn mụi trường Endo khuẩn lạc xuất hiện màu ỏnh kim, ủú cú thể là khuẩn lạc E.coli cú nguồn gốc từ phõn. Làm phản ứng IMVIC ủểủịnh danh vi khuẩn.
Tớnh kết quả: ghi chộp số liệu cỏc ống dương tớnh, tra bảng MPN tớnh sốE.coli trong 1 lớt nước (coliindex).