Xác định hàm lượng nitơ tổng số trong sữa ngô, dựa vào đó để tính hàm lượng protein làm cơ sở so sánh và lựa chọn các điều kiện trích ly tối ưu [10].
Nguyên tắc
Trước tiên mẫu được vô cơ hóa bằng H2SO4 đậm đặc ở nhiệt độ cao với chất xúc tác. Các phản ứng của quá trình vô cơ xảy ra như sau:
2H2SO4 + 2H2O 2SO2 + O2
Oxy tạo thành lại oxy hóa các nguyên tố khác: carbon tạo thành CO2, hydro tạo thành H2O, còn Nitơ giải phóng ra dưới dạng NH3 kết hợp với H2SO4 dư tạo thành (NH4)2SO4 tan trong dung dịch:
NH3 + H2SO4 (NH4)2SO4
Đuổi NH3 ra khỏi dung dịch bằng NaOH:
(NH4)2SO4 + NaOH = Na2SO4 + H2O + 2NH3
NH3 bay ra cùng với nước sang bình hứng, trong bình hứng chứa H2SO4 0.1N: NH4OH + H2SO4 = (NH4)2SO4 + H2O Định lượng H2SO4 dư bằng NaOH 0.1N 100 % 0 1 2 1 × − − = G G G G w
Tiến hành:
Vô cơ hóa nguyên liệu:
- Cho 1g mẫu, 5g chất xúc tác (K2SO4 và CuSO4) và 10ml H2SO4 đậm đặc vào bình Kjeldahl và đun trên bếp từ từ cho đến khi thu được dung dịch trong suốt không màu hoặc có màu xanh lơ của CuSO4 để nguội.
Chưng cất:
- Sau khi vô cơ hóa mẫu hoàn toàn, cho một ít nước cất vào bình Kjeldahl để
tráng rồi cho vào bình định mức 500ml, tráng rửa bình Kjeldahl và phễu vài lần rồi cho vào bình định mức và cho khoảng 10÷15ml NaOH 40% và vài giọt tasiro vào bình định mức, sau đó thêm nước cất vừa đủ 300ml.
- Tiến hành lắp hệ thống cất đạm, cho vào bình hứng 20ml H2SO4 0.1N và 3 giọt thuốc thử tasiro. Đặt bình hứng sao cho ngập đầu ống sinh hàn, bật công tắc cất
đạm, kiểm tra xem hơi ra từ đầu ống sinh hàn có làm xanh giấy quỳ không, nếu không thêm NaOH 40%.
- Sau khi cất đạm 20-25 phút để kiểm tra xem NH4OH còn được tạo ra không, dùng giấy qùy thử ở đầu ống sinh hàn. Nếu giấy qùy không đổi sang màu xanh là được, ngưng cất đạm đợi hệ thống nguội mới tháo hệ thống đem đi rửa.
- Chuẩn độ H2SO4 dư trong bình hứng bằng NaOH 0.1N cho đến khi mất màu tím hồng và chuyển sang màu xanh lá mạ, ghi nhận thể tích NaOH 0.1N sử dụng.
Tính kết quả
(V1-V2) * 1.42 * f * 100
N% = , mg%
a
Trong đó:
V1 là số ml dung dịch H2SO4 0.1N cho vào bình hứng. V2 là số ml dung dịch NaOH chuẩn độ.
f là hệ số điều chỉnh nồng độ H2SO4 ở bình hứng, f = 1 nếu nồng độ H2SO4 chính xác 0.1N.
a là số mg mẫu.
1.42 là hệ số: cứ 1ml H2SO4 0.1N dùng để trung hòa NH4OH thì tương
đương 1.42 mg Nitơ.
Hệ số này phụ thuộc vào hàm lượng nitơ trong protein và phụ thuộc nguồn gốc nguyên liệu.
(adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});