Nghiên cứu quy trình sản xuất vacxin nhị giá phòng bệnh dịch tả vịt và viêm gan do virus ở vịt

luận văn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI ------------------ NGUYỄN TIẾN HỒNG NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT VACXIN NHỊ GIÁ PHÒNG BỆNH DỊCH TẢ VỊT VÀ VIÊM GAN DO VIRUS Ở VỊT LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành : THÚ Y Mã số : 60.62.50 Người hướng dẫn khoa học: TS. NGUYỄN BÁ HIÊN HÀ NỘI - 2010 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan toàn bộ kết quả nghiên cứu trong luận văn này là hoàn toàn trung thực cũng như chưa ñược sử dụng ñể bảo vệ bất kỳ một học vị nào. Các số liệu, thông tin trích dẫn ñều ñược ghi rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày 10 tháng 11 năm 2009 Tác giả Nguyễn Tiến Hồng Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . ii LỜI CẢM ƠN Trong suốt quá trình thực tập và hoàn thành luận văn tôi ñã nhận ñược sự giúp ñỡ, hướng dẫn tận tình của nhiều cá nhân và tập thể. Cho phép tôi ñược bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới: - TS. Nguyễn Bá Hiên – Giảng viên bộ môn Vi sinh vật – Truyền nhiễm, Khoa Thú y, Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội Nhân ñây tôi cũng xin gửi lời cảm ơn tới những người thân và bạn bè ñã giúp ñỡ tôi trong thời gian thực hiện ñề tài này. Hà Nội, ngày 10 tháng 11 năm 2010 Học viên Nguyễn Tiến Hồng Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . iii MỤC LỤC Lời cam ñoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt v Danh mục các bảng vi Danh mục các ảnh viii 1 MỞ ðẦU i 1.1 ðặt vấn ñề 1 1.2 Mục ñích nghiên cứu ñề tài 2 1.3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của ñề tài 2 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 2.1 Giới thiệu chung về bệnh dịch tả vịt (Pestis Anatum –Duckplagne) 3 2.2 Giới thiệu chung về bệnh viêm gan vịt (Duck Virus Hepatitis-DVH). 19 3 ðỐI TƯỢNG - NỘI DUNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 36 3.1 ðịa ñiểm nghiên cứu 36 3.2 ðối tượng nghiên cứu 36 3.3 Nội dung nghiên cứu 36 3.4 Nguyên liệu 37 3.5 Phương pháp nghiên cứu 38 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 47 4.1 Kết quả khảo sát một số ñặc tính sinh học của hai giống gốc virus nhược ñộc viêm gan vịt DH-EG-2000 và dịch tả vịt DP-EG-2000 47 4.1.1 Kết quả kiểm tra khả năng thích ứng của 2 chủng virus nhược ñộc viêm gan vịt DH-EG-2000 và dịch tả vịt DP-EG-2000 trên phôi gà 47 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . iv 4.1.2 Kết quả xác ñịnh chỉ số ELD 50 , EID 50 của hai chủng virus viêm gan vịt và dịch tả vịt. 52 4.2 Nghiên cứu quy trình sản xuất vacxin dhp từ 2 chủng virus vacxin nhược ñộc viêm gan vịt DH-EG-2000, virus nhược ñộc dịch tà vịt DP-EG-2000 59 4.2.1 Quy trình sản xuất vacxin ñơn giá dịch tả vịt và viêm gan vịt 59 4.2.2 Kiểm tra chỉ tiêu vô trùng của hai loại vacxin nhược ñộc dịch tả vịt và viêm gan vịt. 59 4.2.3 Kiểm nghiệm các chỉ tiêu của vacxin DHP 62 4.3 Ứng dụng thực tế của vacxin nhị giá dịch tả vịt và viêm gan 71 4.3.1 Kết quả ứng dụng vacxin trong phòng bệnh 71 4.3.2 Kết quả ứng dụng tiêm vacxin DHP cho vịt bố mẹ ñể tạo miễn dịch thụ ñông cho con 73 5 KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 75 5.1 Kết luận 75 5.2 ðề nghị 75 TÀI LIỆU THAM KHẢO 76 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Cs : Cộng sự DNA : Dezoxy ribonucleic acid DHP : Duck Hepatitis Pestitis DTV : Dịch tả vịt VGV : Viêm gan vịt DVE : Duck virus enteritis ðHNN HN : ðại học Nông nghiệp Hà Nội ðVTH : ðơn vị trung hòa ELD 50 : Embryo Lethal Dose 50 percent EID 50 : Embryo Infective Dose 50 percent LD 50 : Lethal Dose 50 percent OIE : Office International des Epizooies PBS : Phosphate Buffered Saline p.p : Paper Tr : Trang VSV – TN : Vi sinh vật - Truyền nhiễm Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . vi DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Trang 4.1 Kết quả cấy truyền chủng virus vacxin nhược ñộc viêm gan vịt DH - EG – 2000 trên phôi gà 47 4.2 Kết quả kiểm tra bệnh tích ñại thể trên phôi sau khi gây nhiễm virus nhược ñộc viêm gan vịt DH - EG - 2000 48 4.3 Kết quả cấy truyền chủng virus vacxin nhược ñộc dịch tả vịt DP- EG-2000 trên phôi gà 49 4.4 Kết quả kiểm tra bệnh tích ñại thể trên phôi sau khi gây nhiễm virus nhược ñộc dịch tả vịt DP-EG-2000 50 4.5 Kết quả xác ñịnh chỉ số ELD 50 của chủng virus vacxin nhược ñộc dịch tả vịt DP-EG-2000 52 4.6 Kết quả xác ñịnh chỉ số ELD50 của chủng virus vacxin nhược ñộc viêm gan vịt DH-EG-2000. 53 4.7 Kết quả xác ñịnh chỉ số EID 50 của chủng virus vacxin nhược ñộc dịch tả vịt DP-EG-2000 54 4.8 Kết quả xác ñịnh chỉ số EID 50 của chủng virus vacxin viêm gan vịt DH- EG-2000 55 4.9 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu vô trùng của vacxin nhược ñộc dịch tả vịt DP-EG-2000 60 4.10 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu vô trùng của vacxin nhược ñộc viêm gan vịt DH-EG-2000 61 4.11 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu vô trùng của vacxin DHP 63 4.12 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn của vacxin DHP. 65 4.13 Kết quả xác ñịnh hiệu lực của vacxin DHP bằng phương pháp công cường ñộc với virus viêm gan vịt cường ñộc 68 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . vii 4.14 Kết quả xác ñịnh hiệu lực của vacxin DHP bằng phương pháp công cường ñộc với virus dịch tả vịt cường ñộc 70 4.15 Kết quả sử dụng vacxin DHP vào thực tế phòng bệnh cho vịt 72 4.16 Kết quả ứng dụng tiêm vacxin DHP cho vịt bố mẹ tạo miễn dịch thụ ñộng cho vịt 74 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . viii DANH MỤC CÁC ẢNH STT Tên ảnh Trang 4.1 Phôi gà nhiễm VR VGV-phôi xuất huyết, còi cọc; gan sưng, xuất huyết 49 4.2 Phôi gà ñối chứng 51 4.3 Phôi gà xuất huyết, còi cọc, gan phôi gà sưng, xuất huyết 51 4.4 Tín hiệu huỳnh quang của chủng virus nhược ñộc DP-EG-2000 và ñối chứng dương 57 4.5 ðường cong nóng chảy của chủng virus nhược ñộc DP-EG-2000 và ñối chứng dương 57 4.6 Kết quả chạy ñiện di sản phẩm RT-PCR của mấu VxXT và VxAC trên thạch agarose 1%. 58 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . 1 1. MỞ ðẦU 1.1. ðặt vấn ñề Chăn nuôi gia cầm nói chung và chăn nuôi vịt nói riêng hiện nay là một trong những ngành quan trọng, có ñóng góp ñáng kể trong nền kinh tế của các quốc gia. Trên thế giới hàng năm có khoảng 550 ñến 600 triệu vịt ñược chăn nuôi, trong ñó ở châu Á chiếm tới 80 - 86% tổng ñàn vịt. ðặc biệt ở Việt Nam, ngành chăn nuôi gia cầm ñã và ñang ñược chú trọng phát triển với hàng ngàn trang trại ñủ các quy mô và hàng trăm triệu con gia cầm, thủy cầm các loại. ðây là ngành phục vụ tiêu dùng có thế mạnh ở nước ta, ñem lại lợi nhuận cao cho ngành chăn nuôi. Ngành cung cấp một số lượng lớn các sản phẩm thịt, trứng phục vụ cho nhu cầu thực phẩm của nhân dân, hàng năm ñàn vịt sản xuất khoảng 30.000 ñến 40.000 tấn thịt hơi; 0,8 ñến 1 tỷ quả trứng và khoảng 1000 ñến 1500 tấn lông (Trịnh Quang Khuê, 2003) [19]. Theo số liệu thống kê của FAO, 2003 [36] tổng số vịt của Việt Nam là 60 triệu con, ñứng thứ 2 thế giới, sau Trung Quốc. Chủ trương ở ñây là phát triển ngành chăn nuôi gia cầm với ưu ñiểm là thời gian thu hồi vốn nhanh, hiệu quả kinh tế cao góp phần ñẩy nhanh công nghệ ñổi mới ñất nước trong thời kỳ hiện nay. Cùng với sự phát triển của ñàn vịt qua từng năm thì tình hình dịch bệnh trên ñàn vịt cũng diễn biến ngày càng phức tạp và gây thiệt hại lớn cho người chăn nuôi. Trong ñó gây thiệt hại nặng nề nhất cho ngành chăn nuôi vịt là bệnh Dịch tả vịt (DTV) và Viêm gan vịt (VGV). Theo quyết ñịnh số 64/2005/Qð-BNN [2] ngày 13 tháng 10 của Bộ trưởng Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn ban hành thì bệnh DTV là những bệnh nguy hiểm của ñàn vịt, phải áp dụng các biện pháp phòng bệnh bắt buộc và yêu cầu tỷ lệ tiêm phòng phải ñạt 100%. Bên cạnh ñó, ngành chăn nuôi vịt ở nước ta vẫn còn mang tính chất nhỏ, lẻ, hộ gia ñình, không tập trung gây nhiều khó khăn cho công tác phòng, . nuôi vịt ở nước ta chúng tôi tiến hành thực hiện ñề tài: Nghiên cứu quy trình sản xuất vacxin nhị giá phòng bệnh Dịch tả vịt và Viêm gan do virus ở vịt .. số công trình nghiên cứu sản xuất vacxin nhị giá phòng bệnh Dịch tả vịt và viêm gan vịt ñã làm giảm chi phí trong công tác phòng, chống dịch bệnh và mang