Nghiên cứu quy trình sản xuất chế phẩm kháng thể lòng đỏ chống mycoplasma gallisepticum và ứng dụng thử nghiệm

luận văn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI ---------  --------- NGUYỄN THỊ TỊNH NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT CHẾ PHẨM KHÁNG THỂ LÒNG ðỎ CHỐNG MYCOPLASMA GALLISEPTICUM VÀ ỨNG DỤNG THỬ NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60.62.50 Người hướng dẫn khoa học: TS. TRẦN THỊ LAN HƯƠNG Người giúp ñỡ khoa học : PGS.TS. TÔ LONG THÀNH HÀ NỘI - 2009 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun vn thc s khoa hc nụng nghip i Lời cam đoan Tôi xin cam đoan các số liệu, kết quả nghiên cứu trong luận văn này là trung thực và cha từng đợc ai công bố trong bất kì công trình nào khác. Tôi xin cam đoan rằng các thông tin, tài liệu trích dẫn trong luận văn đều đợc chỉ rõ nguồn gốc. Hà Nội, tháng 12 năm 2009 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Tịnh Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun vn thc s khoa hc nụng nghip ii Lời cảm ơn Tôi xin trân trọng cảm ơn TS.Trần Thị Lan Hơng, TS.Tô Long Thành ngời đã trực tiếp hớng dẫn và giúp đỡ tôi hoàn thành đề tài nghiên cứu này. Tôi xin cảm ơn các thầy giáo, cô giáo trờng Đại học Nông nghiệp Hà Nội đã tận tình giảng dạy, truyền đạt kiến thức cho lớp Cao học Khóa 16 chuyên ngành Thú y. Tôi xin cảm ơn Ban lãnh đạo Công ty RTD, cán bộ và nhân viên phòng Công nghệ RTD đã tạo điều kiện giúp đỡ tôi trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu tại Công ty. Cuối cùng, xin đợc dành tình cảm sâu sắc nhất tới gia đình, ngời thân và bạn bè đã động viên tôi trong suốt thời gian tham gia khoá học này. Hà Nội, tháng 12 năm 2009 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Tịnh Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… iii MỤC LỤC Lời cam ñoan…………………………………………………………………. i Lời cảm ơn………………………….……………………………………… ii Danh mục các bảng trong luận văn…………………………………….…… iii Danh mục các biểu ñồ trong luận văn………………………………………. iv Danh mục các ảnh trong luận văn……………….……………… …….…… v Bảng các chữ viết tắt trong luận văn…………………………… .…… … vi MỞ ðẦU 1 1. Tính cấp thiết của ñề tài 1 2. Mục tiêu của ñề tài 2 3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của ñề tài . 2 Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1. Tình hình nghiên cứu bệnh CRD ở gà trên thế giới và Việt Nam 3 1.2. Một số ñặc ñiểm cơ bản của mầm bệnh Mycoplasma gallisepticum .7 1.3. Bệnh CRD ở gà 11 1.4. Cơ sở khoa học của việc sản xuất chế phẩm kháng thể lòng ñỏ chống MG ñể phòng, trị bệnh CRD ở gà 25 Chương 2: NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1. Nội dung nghiên cứu 30 2.2. Nguyên liệu nghiên cứu .30 2.3. Phương pháp nghiên cứu .31 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 40 3.1. Nghiên cứu quy trình sản xuất chế phẩm kháng thể lòng ñỏ chống Mycoplasma gallisepticum (MG) .40 3.1.1. Quy trình gây tối miễn dịch cho gà ñẻ .40 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… iv 3.1.2. Xác ñịnh HGKTMG trong huyết thanh gà ñẻ sau mỗi lần tiêm miễn dịch 51 3.1.3. Xác ñịnh diễn biến HGKTMG trong huyết thanh gà ñẻ sau khi gây tối miễn dịch 53 3.1.4. Xác ñịnh HGKTMG trong lòng ñỏ trứng của gà ñẻ sau khi gây tối miễn dịch 55 3.1.5. Xác ñịnh mối tương quan giữa HGKTMG trong huyết thanh với HGKTMG trong lòng ñỏ trứng của gà ñẻ sau khi gây tối miễn dịch . 57 3.2. Quy trình sản xuất chế phẩm KTLðMG………………… 60 3.2.1. Thu hoạch trứng 60 3.2.2. Các giai ñoạn trong quá trình sản xuất chế phẩm KTLðMG 60 3.2.3. Sản xuất chế phẩm KTLðMG . 62 3.3. Xác ñịnh HGKTMG có trong chế phẩm KTLð……………………… .63 3.4. Kiểm tra chỉ tiêu vô trùng của chế phẩm KTLðMG……………………65 3.5. Kiểm tra chỉ tiêu an toàn của chế phẩm KTLðMG khi tiêm thử nghiệm trên gà……………………………………………………………………… 67 3.6. Kiểm tra chỉ tiêu hiệu lực của chế phẩm KTLðMG……………………69 3.7. Xác ñịnh thời gian bảo quản chế phẩm KTLðMG…………………… 71 3.8. Ứng dụng thử nghiệm chế phẩm KTLðMG trong phòng, trị bệnh CRD cho gà ở nước ta…………………………………………………………… 73 KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ…………… …………………………… .76 1. KẾT LUẬN……………………………………………………………….76 2. ðỀ NGHỊ………………………………………………………… .76 TÀI LIỆU THAM KHẢO…………….…………………………… … 77 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… v DANH MỤC CÁC BẢNG TRONG LUẬN VĂN Bảng 3.1. Quy trình gây tối miễn dịch MG cho gà ñẻ 50 Bảng 3.2. Kết quả kiểm tra HGKTMG trong huyết thanh gà ñẻ sau mỗi lần tiêm miễn dịch……………………………………………………………….51 Bảng 3.3. Kết quả xác ñịnh HGKTMG trong huyết thanh gà ñẻ sau khi gây tối miễn dịch…………………………………………………………………….54 Bảng 3.4. Kết quả xác ñịnh HGKTMG trong lòng ñỏ trứng của gà ñẻ sau khi gây tối miễn dịch…………………………………………………………….56 Bảng 3.5. Tương quan giữa HGKTMG trong huyết thanh gà ñẻ với HGKTMG trong lòng ñỏ trứng…………………………………………… .58 Bảng 3.6. Một số chỉ tiêu, thông số kỹ thuật trong quá trình sản xuất chế phẩm KTLðMG…………………………………………………………… 61 Bảng 3.7. Kết quả sản xuất chế phẩm KTLðMG sau 4 tháng thí nghiệm… 62 Bảng 3.8. Kết quả xác ñịnh HGKTMG trong chế phẩm KTLð……………… .64 Bảng 3.9. Kết quả kiểm tra vô trùng của chế phẩm KTLðMG…………… 66 Bảng 3.10. Kết quả thử an toàn trên gà của chế phẩm KTLðMG………… 68 Bảng 3.11. Kết quả xác ñịnh hiệu lực của chế phẩm KTLðMG……………70 Bảng 3.12. Kết quả xác ñịnh thời gian bảo quản chế phẩm KTLðMG ở nhiệt ñộ 4 - 8 0 C…………………………………………………………………….72 Bảng 3.13. Kết quả ñiều trị bệnh CRD ở gà bằng chế phẩm KTLðMG… . 74 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… vi DANH MỤC CÁC BIỂU ðỒ TRONG LUẬN VĂN Biểu ñồ 3.1. Biểu diễn HGKTMG trong huyết thanh của gà ñẻ ở 3 quy trình thí nghiệm 53 Biểu ñồ 3.2. Biến ñộng HGKTMG trong huyết thanh gà ñẻ sau khi gây tối miễn dịch…………………………………………………………………….55 Biểu ñồ 3.3. So sánh HGKTMG trong huyết thanh với HGKTMG trong lòng ñỏ trứng của gà ñẻ sau khi gây tối miễn dịch……………………………… 59 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… vii DANH MỤC CÁC ẢNH TRONG LUẬN VĂN Ảnh 3.1. ðàn gà ñẻ ñược gây tối miễn dịch với MG……… ………………59 Ảnh 3.2. Trứng từ gà ñược tối miễn dịch với MG………………………… 60 Ảnh 3.3. Lọ 100 ml kháng thể MYCO …………………………………… .63 Ảnh 3.4. Kiểm tra HGKTMG trong chế phẩm KTLð bằng phản ứng HI… 55 Ảnh 3.5. Bệnh tích gà bị bệnh do Mycoplasma gallisepticum gây ra……….75 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… viii BẢNG CÁC CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN CRD Chronic Respiratory Disease HA Hemagglutination HGKT Hiệu giá kháng thể HI Haemagglutination Inhibition KHKT Khoa học kỹ thuật KHNN Khoa học Nông nghiệp KN Kháng nguyên KNCð Kháng nguyên cường ñộc KT Kháng thể KT MYCO Kháng thể Mycoplasma gallisepticum KTLðMG Kháng thể lòng ñỏ Mycoplasma gallisepticum MG Mycoplasma gallisepticum RPA Rapid plate agglutination Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… 1 MỞ ðẦU 1. Tính cấp thiết của ñề tài CRD (Chronic Respiratory Disease) còn gọi là bệnh viêm ñường hô hấp mạn tính của nhiều loại gia cầm nhưng phổ biến nhất là ở gà và gà tây. CRD là một trong những bệnh truyền nhiễm nguy hiểm ñối với gà, nhất là gà ñược nuôi theo phương thức công nghiệp. Bệnh làm giảm sức ñề kháng của gà, giảm chất lượng thịt của ñàn gà thịt. Mầm bệnh truyền lây qua trứng làm giảm tỷ lệ ñẻ, tăng tỷ lệ chết phôi trong quá trình ấp nở, làm giảm khả năng sinh trưởng và tiêu tốn nhiều thức ăn trên ñàn gà con. Bệnh thường ở dạng ẩn tính, tạo cơ hội cho các bệnh khác phát triển (ðào Thị Hảo, 2008 [7]. Bệnh có thể làm giảm tỷ lệ ñẻ của gà ñến 30%, giảm tỷ lệ ấp nở 14% và giảm tăng trọng ñến 16% (Phạm Văn ðông, 2002) [5]. Ở Việt Nam do ñiều kiện khí hậu nóng ẩm về mùa hè, mưa phùn gió bắc về mùa ñông, sự chênh lệch về nhiệt ñộ trong ngày khá cao dẫn ñến trạng thái cân bằng của cơ thể dễ bị phá vỡ, sức ñề kháng của con vật giảm lúc này mầm bệnh tồn tại trong cơ thể gặp ñiều kiện thuận lợi trỗi dậy, phát triển và gây bệnh. Trong những năm gần ñây ñã có nhiều công trình nghiên cứu về CRD như: ðiều tra tình hình nhiễm bệnh (ðào Thị Hảo, 1996) [6]; Sử dụng các loại kháng sinh ñể phòng trị bệnh (Nguyễn Hữu Vũ, 1996) [24]; Dùng vaccine phòng bệnh (Vũ Quang Hợp, 1997) [8]… Các công trình trên chỉ dừng lại ở từng khía cạnh, trong phạm vi một trại hoặc trong ñiều kiện còn hạn chế về thuốc và vaccine nên chưa mang tính toàn diện và ñồng bộ. Mặt khác, mỗi vùng ñịa lý khác nhau mang ñặc ñiểm dịch tễ ñặc thù riêng, do ñó biện pháp phòng trị bệnh cũng khác nhau. Hiện nay chưa có thuốc ñặc hiệu ñể ñiều trị CRD ở gà, dùng kháng sinh và Sunfamit chỉ có tác dụng chữa triệu chứng và phòng trị những bệnh nhiễm trùng kế phát. Hiệu quả ñiều trị của kháng sinh . tôi tiến hành nghiên cứu ñề tài: Nghiên cứu quy trình sản xuất chế phẩm kháng thể lòng ñỏ chống Mycoplasma gallisepticum và ứng dụng thử nghiệm . 2. Mục. ñược quy trình gây tối miễn dịch cho ñàn gà ñẻ trứng với Mycoplasma gallisepticum. 2.2. ðưa ra ñược quy trình sản xuất chế phẩm kháng thể lòng ñỏ Mycoplasma