Nghiên cứu xây dựng phương pháp định tính, định lượng các hoạt chất chính trong dược liệu hà thủ ô đỏ fallopia multiflora (thunb ) haraldson

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - NGUYỄN THỊ HÀ LY NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƢỢNG CÁC HOẠT CHẤT CHÍNH TRONG DƢỢC LIỆU HÀ THỦ Ơ ĐỎ FALLOPIA MULTIFLORA (THUNB.) HARALDSON LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2013 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - NGUYỄN THỊ HÀ LY NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƢỢNG CÁC HOẠT CHẤT CHÍNH TRONG DƢỢC LIỆU HÀ THỦ Ơ ĐỎ FALLOPIA MULTIFLORA (THUNB.) HARALDSON Chun ngành: Hóa phân tích Mã số: 60440118 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: HDC: TS PHƢƠNG THIỆN THƢƠNG HDP: PGS.TS TẠ THỊ THẢO Hà Nội - 2013 LỜI CẢM ƠN Lời cho em gửi lời cảm ơn sâu sắc tới TS Phƣơng Thiện Thƣơng PGS.TS Tạ Thị Thảo tận tình hƣớng dẫn tạo điều kiện giúp đỡ em suốt trình thực đề tài viết luận văn Tôi xin đƣợc gửi lời cảm ơn chân thành tới ban lãnh đạo Viện Dƣợc liệu anh chị, bạn cơng tác khoa Hố phân tích – Tiêu chuẩn, Viện Dƣợc liệu tạo điều kiện thuận lợi cho đƣợc học tập nghiên cứu môi trƣờng đại Em xin bày tỏ lịng biết ơn tới thầy giáo giảng dạy khoa Hố, đặc biệt thầy mơn Hố Phân tích, cho em kiến thức quý giá trình học tập thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn anh chị, bạn bè tập thể lớp cao học hoá k22, đặc biệt ngƣời bạn nhóm hố phân tích k22 giúp đỡ, chia sẻ khó khăn suốt q trình tơi học tập thực đề tài Cuối xin gửi lời cảm ơn tới gia đình bạn bè ln động viên, chia sẻ khó khăn Hà Nội, tháng 12 năm 2013 Học viên Nguyễn Thị Hà Ly MỤC LỤC MỞ ĐẦU……………………………………………………………………… CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1.Tổng quan dƣợc liệu hà thủ ô đỏ……………………………………… 1.1.1 1.1.2 1.2 Tổng quan phƣơng pháp 1.2.1 1.2.2 1.2.3 1.3 Các phƣơng pháp xử lý mẫu dƣợc liệu…………………………………… 1.4 Các vấn đề cần giải quyết……… 1.5 Mục tiêu nghiên cứu…………… CHƢƠNG 2: THỰC NGHIỆM 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu………… 2.2 Chất chuẩn, hóa chất, thiết bị……………………………………………… 2.2.1 2.2.2 2.2.3 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu.…… 2.3.1 2.3.2 Phƣơng pháp xử lý mẫu 2.3.3 2.4 Nghiên cứu điều kiện tối ƣu 2.4.1 tích HPLC…………………… 2.4.2 2.4.3 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Nghiên cứu tối ƣu hóa điều kiện đo hệ thống sắc ký…………… 3.1.1 3.1.2 3.1.3 động……………………………………………………………………… 3.1.4 3.1.5 3.1.6 3.2 Đƣờng chuẩn, giới hạn phát giới hạn định lƣợng………………… 3.2.1 3.2.2 3.2.3 3.3 Khảo sát phƣơng pháp xử lý mẫu………………………………………… 3.3.1 3.3.2 3.3.3 3.3.4 Phƣơng pháp xử lý mẫu dƣợc liệu hà thủ ô đỏ…………………… 3.4 Đánh giá phƣơng pháp phân tích………………………………………… 3.4.1 Đánh giá độ 3.4.1.1 Đánh 3.4.1.2 Đánh chuẩn……… 3.4.2 Đánh giá độ 3.4.2.1 Đánh 3.4.2.2 Đánh phƣơng pháp 3.5 Phân tích mẫu thực tế……………………………………………………… 3.5.1 Mẫu dƣợc li 3.5.2 Mẫu sản phẩ BÀN LUẬN…………………………………………………………………… 63 KẾT LUẬN…………………………………………………………………… TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 2.1: Thông tin mẫu phân tích………………………………………… Bảng 2.2: Chƣơng trình dung mơi rửa giải………………………………………… Bảng 3.1: Các gradient thử nghiệm với pha động MeOH – nƣớc………………… Bảng 3.2: Thời gian lƣu, độ phân giải hệ số đối xứng pic cấu tử ứng với chế độ gradient……………………………………………………………… Bảng 3.3: Các gradient thử nghiệm với pha động ACN – nƣớc…………………… Bảng 3.4: Thời gian lƣu, độ phân giải hệ số đối xứng pic cấu tử ứng với chế độ gradient……………………………………………………………… Bảng 3.5: Các gradient thử nghiệm với pha động ACN – nƣớc chứa 0,01% axit photphoric……………………………………………………………………… Bảng 3.6: Thời gian lƣu, độ phân giải hệ số đối xứng pic cấu tử ứng với chế độ gradient…………………………………………………… …… Bảng 3.7: Kết khảo sát ảnh hƣởng pH (axit axetic)……………………… Bảng 3.8: Kết khảo sát ảnh hƣởng pH (axit fomic)……………… Bảng 3.9: Kết khảo sát ảnh hƣởng pH (axit photphoric)………… Bảng 3.10: Kết khảo sát ảnh hƣởng thể tích mẫu tiêm vào cột…………… Bảng 3.11: Nồng độ diện tích pic trung bình chất……………………… Bảng 3.12: Phƣơng trình đƣờng chuẩn chất……………………………… Bảng 3.13: Giới hạn phát giới hạn định lƣợng chất……………… Bảng 3.14: Kết so sánh giá trị a với giá trị phƣơng trình đƣờng chuẩn THSG…………………………………………………………………… Bảng 3.15: Kết so sánh b b′ phƣơng trình đƣờng chuẩn THSG………………………………………………………………………… Bảng 3.16: Kết khảo sát ảnh hƣởng dung môi chiết……………………… Bảng 3.17: Kết khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ chiết siêu âm……………… Bảng 3.18: Kết khảo sát ảnh hƣởng thời gian chiết siêu âm……………… Bảng 3.19: Kết khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ chiết hồi lƣu……………… Bảng 3.20: Kết khảo sát ảnh hƣởng thời gian chiết số lần chiết……… Bảng 3.21: Kết đánh giá hiệu suất thu hồi phƣơng pháp phân tích THSG…………………………………………………………………… Bảng 3.22: Kết đánh giá hiệu suất thu hồi phƣơng pháp phân tích EM……………………………………………………………………… Bảng 3.23: Kết phân tích lặp lại mẫu dƣợc liệu hà thủ ô đỏ thêm chuẩn… Bảng 3.24: Các đại lƣợng thống kê………………………………………………… Bảng 3.25: Độ lặp lại thời gian lƣu diện tích pic chất………………… Bảng 3.26: Kết hàm lƣợng THSG EM tìm lại đƣợc phƣơng pháp thêm chuẩn kỹ thuật viên khác nhau………………………………………… Bảng 3.27: Các kiện thống kê đánh giá độ lặp lại phƣơng pháp phân tích tiến hành ba kỹ thuật viên khác nhau……………………………………… Bảng 3.28: Các kiện đánh giá độ tái lặp lại phƣơng pháp phân tích……… Bảng 3.29: Kết phân tích mẫu dƣợc liệu hà thủ đỏ………………………… Bảng 3.30: Kết phân tích mẫu sản phẩm hà thủ ô công ty Traphaco……… DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Hình ảnh hà thủ đỏ……………….……………………………… 03 Hình 1.2: Hình ảnh dƣợc liệu phiến dƣợc liệu hà thủ đỏ…………………… 04 Hình 1.3: Cơng thức cấu tạo số thành phần hóa học dƣợc liệu hà thủ đỏ…………………………………………………………………………………… 05 Hình 2.1: Hình ảnh dƣợc liệu hà thủ ô đỏ sản phẩm từ hà thủ đỏ…………… Hình 3.1: Phổ UV-VIS chất……………………………………………… Hình 3.2: Sắc ký đồ HPLC chế độ gradient thử nghiệm với hệ dung môi MeOH – nƣớc……………………………………………………… Hình 3.3: Sắc ký đồ HPLC chế độ gradient thử nghiệm với hệ dung mơi ACN – nƣớc………………………………………………………… Hình 3.4: Sắc ký đồ HPLC chế độ gradient thử nghiệm với hệ dung môi ACN – nƣớc chứa 0,01% axit photphoric………………………… Hình 3.5: Sắc ký đồ định tính THSG, RV, EM mẫu hà thủ đỏ…………… Hình 3.6: Khoảng tuyến tính……………………………………………………… Hình 3.7: Đƣờng chuẩn chất………………………………………………… Hình 3.8: Sắc ký đồ HPLC phân tích định lƣợng THSG (A) EM (B) mẫu dƣợc liệu hà thủ ô đỏ………………………………………………………… 60 Hình 3.9: Sắc ký đồ HPLC phân tích định lƣợng THSG (A) EM (B) mẫu thuốc T-TPC……………………………………………………………………… 62 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Tên viết tắt AC ACN Abs AS BuOH DĐVN DĐTQ EM EtOH GC HPLC HPLC-ESI-MS/MS HPLC-DAD/FLD HPLC-DADAPCI/MSn LOD LOQ MeOH PDA ppm ppb ppt R RS A B Hình 3.8: Sắc ký đồ HPLC phân tích định lƣợng THSG (A) EM (B) mẫu dƣợc liệu hà thủ ô đỏ 70 Kết cho thấy, hàm lƣợng THSG mẫu dƣợc liệu hà thủ ô đỏ cao, tƣơng đối ổn định, nằm khoảng từ 2,24% đến 3,54% (tính theo khối lƣợng dƣợc liệu khơ tuyệt đối) Trong đó, mẫu hà thủ đỏ thu hái Hà Giang có hàm lƣợng THSG cao Hàm lƣợng EM mẫu hà thủ ô đỏ nằm khoảng từ 0,045% đến 0,161% (tính theo khối lƣợng khơ dƣợc liệu tuyệt đối) Trong mẫu thu hái Hà Giang có hàm lƣợng EM cao mẫu hà thủ ô đỏ thị trƣờng khơng có mặt thành phần EM 3.5.2 Mẫu sản phẩm từ hà thủ ô đỏ Bên cạnh mẫu dƣợc liệu hà thủ ô đỏ, tiến hành phân tích hàm lƣợng THSG EM sản phẩm đƣợc chế biến từ hà thủ ô đỏ Đối tƣợng đƣợc lựa chọn sản phẩm hà thủ ô Cơng ty Cổ phần Dƣợc phẩm TRAPHACO, kí hiệu T-TPC (Xem hình 2.1) Mẫu đƣợc xử lý theo phƣơng pháp (mục 2.3.2) phân tích phƣơng pháp HPLC Kết đƣợc trình bày bảng 3.30 hình 3.9 Bảng 3.30: Kết phân tích mẫu sản phẩm hà thủ ô công ty TRAPHACO Khối lƣợng Mẫu trung bình viên (mg) TTPC *: Hàm lượng chất tính theo khối lượng trung bình viên thuốc 575,0 71 A B Hình 3.9: Sắc ký đồ HPLC phân tích định lƣợng THSG (A) EM (B) mẫu thuốc T-TPC Nhƣ biết, giới hạn phát (LOD) hệ thống HPLC đạt cỡ ppb, mặt khác, giới hạn phát phƣơng pháp (MDL) phân tích THSG EM lần lƣợt 0,32 ppm 0,43 ppm Với kết chứng tỏ sản phẩm thuốc kí hiệu T-TPC Cơng ty cổ phần dƣợc phẩm Traphaco khơng thấy có thành phần EM, hàm lƣợng EM mẫu thấp MDL phƣơng pháp (< 0,43 ppm) Hàm lƣợng (%) THSG tính theo khối lƣợng trung bình viên thuốc 20,4 ± 0,5 mg, tức viên thuốc (có khối lƣợng trung bình 575,0 mg) có khoảng 20,4 mg THSG 72 BÀN LUẬN Với kết đạt đƣợc, chúng tơi có số bàn luận nhƣ sau: Đã tối ƣu hóa đƣợc điều kiện phân tích định tính, định lƣợng hoạt chất (THSG, RV, EM) dƣợc liệu hà thủ ô đỏ phƣơng pháp HPLC Trong Dƣợc Điển Việt Nam (I, II, III, IV) chƣa quy định tính đến nay, chƣa có cơng trình cơng bố Việt Nam Vì vậy, nghiên cứu đƣợc coi cơng trình nghiên cứu phƣơng pháp phân tích dƣợc liệu hà thủ đỏ Việt Nam Đã xây dựng đƣợc quy trình định lƣợng đồng thời chất (THSG EM) mẫu dƣợc liệu hà thủ đỏ với tổng thời gian phân tích 45 phút Trong đó: - DĐTQ có sử dụng định lƣợng đồng thời thành phần nhƣng quy trình khác Điều gây khó khăn, tốn cho việc thực - DĐHK có đƣa phƣơng pháp định lƣợng thành phần THSG EM quy trình nhƣng tổng thời gian phân tích 70 phút/mẫu - Quy trình xây dựng đƣợc đạt đƣợc nhiều ƣu điểm hẳn nhƣ: nhanh hơn, định lƣợng đƣợc đồng thời, dẫn đến tiết kiệm thời gian kinh phí Đã lựa chọn đƣợc phƣơng pháp xử lý mẫu dƣợc liệu hà thủ ô đỏ phù hợp nhất, là: Chiết hồi lƣu 0,5 g mẫu với 50 ml EtOH 50% 70 C 1h Trong đó: DĐTQ sử dụng EtOH 100% làm dung môi chiết Chúng khảo sát thu đƣợc kết EtOH 50% chiết đƣợc chất kiệt EtOH 100% Vì lựa chọn EtOH 50% làm dung môi chiết - DĐHKsử dụng phƣơng pháp chiết siêu âm aceton 60 phút Sau khảo sát, thu đƣợc kết phƣơng pháp chiết hồi lƣu cho hiệu suất chiết cao hẳn phƣơng pháp chiết siêu âm Vì vậy, việc sử dụng phƣơng pháp chiết siêu âm điều kiện Việt Nam không khả thi Chúng lựa chọn phƣơng pháp chiết mẫu chiết hồi lƣu - Kết phù hợp với số cơng trình nghiên cứu gần quy trình phân tích mẫu dƣợc liệu hà thủ ô đỏ 73 KẾT LUẬN Với mục tiêu nghiên cứu đặt ra, thu đƣợc kết nhƣ sau: Đã tối ƣu hóa đƣợc điều kiện phân tích 03 chất (2,3,5,4′-tetrahydroxystilben-2O-β-D-glucosid, resveratrol emodin) phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao Các điều kiện tối ƣu bao gồm: -Cột tách: Ascentis C18 (250 mm x 4,6 mm; µm) cột bảo vệ - Detector UV-VIS: bƣớc sóng 320 nm 254 nm - Chọn đƣợc hệ dung môi phù hợp cho hiệu tách tốt 03 hợp chất lựa chọn hệ sắc ký lỏng hiệu cao, detector UV-VIS Khảo sát ba hệ MeOH – nƣớc, ACN – nƣớc hệ ACN – nƣớc chứa 0,01% axit photphoric (pH ≈ 3,3) Chọn đƣợc hệ ACN – nƣớc chứa 0,01% axit photphoric (pH ≈ 3,3) cho khả tách tốt - Khảo sát loại axit tối ƣu đƣợc pH dùng pha động (axit phosphoric 0,01%, pH ≈ 3,3) - Lƣợng mẫu tiêm vào cột phù hợp 10 μl - Khảo sát chế độ rửa giải gradient khác chọn đƣợc chƣơng trình rửa giải phù hợp Dựa điều kiện tối ƣu khảo sát, tiến hành định tính 03 hợp chất (2,3,5,4′-tetrahydroxystilben-2-O-β-D-glucosid, resveratrol emodin) định lƣợng đồng thời 02 chất (2,3,5,4′-tetrahydroxystilben-2-O-β-D-glucosid emodin) Đã đánh giá đƣợc phƣơng pháp phân tích về: độ lặp lại tái lặp lại (các giá trị RSD RSDR nhỏ 1); tính tuyến tính (các giá trị R đạt 0,9999); độ đúng, độ thu hồi (hiệu suất thu hồi THSG EM đạt khoảng 93,5% 104,7%); giới hạn phát (LOD) THSG EM lần lƣợt lầ 0,32 ppm 0,43 ppm; giới hạn định lƣợng (LOQ) THSG EM lần lƣợt 1,04 ppm 1,41 ppm 74 Ứng dụng phƣơng pháp xây dựng để phân tích số mẫu dƣợc liệu hà thủ ô đỏ thu hái vùng khác Việt Nam Kết cho thấy hàm lƣợng emodin mẫu hà thủ ô đỏ thu hái nằm khoảng từ 0,045% đến 0,161%, mẫu hà thủ ô đỏ thị trƣờng không phát có emodin Hàm lƣợng 2,3,5,4′tetrahydroxystilben-2-O-β-D-glucosid tƣơng đối ổn định, nằm khoảng từ 2,24% đến 3,54% Kết nghiên cứu gợi ý cho việc nâng cấp chuyên luận dƣợc liệu hà thủ ô đỏ Dƣợc Điển Việt Nam IV Ứng dụng phƣơng pháp để phân tích mẫu sản phẩm thuốc từ hà thủ ô đỏ công ty cổ phần dƣợc phẩm Traphaco Kết cho thấy ứng với khối lƣợng trung bình viên thuốc 575,0 mg, hàm lƣợng 2,3,5,4′tetrahydroxystilben-2-O-β-D-glucosid đạt khoảng 20,398 mg/viên đặc biệt, mẫu thuốc này, không phát có mặt emodin 75 Tài liệu tham khảo Tiếng Việt Bộ Y tế (2009), Dược Điển Việt Nam IV, Nhà xuất Y học, Hà Nội, trang 772 – 773 Bộ Y tế (2011), Dược liệu học, tập 1, Nhà xuất Y học, Hà Nội, trang 75 – 76 Đỗ Huy Bích cộng (2003), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, tập I, II, NXB KHKT, Hà Nội, trang 884 – 887 Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y học, Hà Nội Trần Tứ Hiếu, Từ Vọng Nghi, Nguyễn Xuân Trung, Nguyễn Văn Ri (2003), Các phương pháp phân tích cơng cụ, NXB Đại Học Quốc Gia Hà Nội Phạm Thanh Huyền (2013), Nghiên cứu trồng thuốc địa: Ngũ gia bì gai, Sì to, Hà thủ đỏ cộng đồng dân tộc vùng cao số xã thuộc huyện Sa Pa, tỉnh Lào Cai, Viện Dƣợc liệu, Bộ Y tế Nguyễn Thị Ngọc Lan (2012), Phân lập số chất dùng làm chất đối chiếu phục vụ cơng tác tiêu chuẩn hóa kiểm tra chất lượng dược liệu, Đề tài cấp sở, Viện Dƣợc liệu, Bộ Y tế Đỗ Tất Lợi (2006), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội, trang 833 – 835 Phạm Luận (2000), Giáo trình, Cơ sở lý thuyết sắc ký lỏng hiệu cao, Đại Học Khoa Học Tự Nhiên-ĐHQGHN 10 Nguyễn Văn Ri (2009), Các phương pháp tách, Đại học Khoa học Tự Nhiên – ĐHQGHN 11.Viện Dƣợc liệu (2008), Chiết xuất dược liệu, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, trang 11-29, 39-49, 66-76 Tiếng Anh 12 Chen L.L., Huang X.J., Li M.M., Ou G.M., Zhao B.X., Chen M.F (2012), “Polygonflavanol A, a novel flavonostilbene glycoside from the roots of Polygonum multiflorum”, Phytochemistry Letters, 5, 756 – 760 13 Chu X., Sun A., Liu R (2005), “Preparative isolation and purification of five 76 compounds from the Chinese medicinal herb Polygonum cuspidatum Sieb et Zucc by high-speed counter-current chromatography”, Journal of Chromatography A, 1097, 33–39 14 Craig Z and Anna P (2011), “The photostability and photostabilizationof trans-resveratrol”, Cosmetics & Toiletries magazine, Vol 126, No 15 Han D.Q., Zhao J., Xu J., Peng H.S., Chen X.J and Li S.P (2013), “Quality evaluation of Polygonum multiflorum in China based on HPLC analysis of hydrophilic bioactive compounds and chemometrics”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical analysis, 72, 223 – 230 16 Feng Y et al (2010), “Emodin, a Natural Product, Selectively Inhibits 11β- Hydroxysteroid Dehydrogenase Type and Ameliorates Metabolic Disorder in Diet-Induced Obese Mice", British Journal of Pharmacology, 161 (1), 113– 126 17 Gu J., Hasuo W., Takeya H, Akasu M (2005), “Effects of emodin on synaptic transmission vitro”, Neuropharmacology, 49 (1), 103–111 18 Hong Kong chinese Materia Medica Standards (2009), volum 3, pp 223 – 233 19 Ma J., Qi L.W., Li H.J., Li P (2012), “A segmental monitoring stragety based on variable wavelength detection for quality control of three Polygonaceae herbs”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 62, 155 – 161 20 Koyama J., Takeuchi A., Morita I., Nishino Y., Shimizu M., Inoue M., Kobayashi N (2009), “Characterization of emodin metabolites in Raji cells by LC–APCI-MS/MS”, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 17, 7493–7499 21 Knauer (2011), “Determination of Phthalates”, Applications Journal, page 32 22 Kim K.W., Ha K.T., Park C.S., Jin U.H., Chang H.W., Lee I.S., Kim C.H (2007), “Polygonum cuspidatum, compared with Baicalin and Berbrine, inhibits inducible Nitric Oxide Synthase and Cyclooxygenase-2 Gene Expression in RAW 264.7 macrophages”, Vascular Pharmacology, 47, 99107 77 23 Liang Z., Chen H., Yu Z., Zhao Z (2010), “Comparison of raw and processed Radix Polygoni Multiflori (Heshouwu) by high performance liquid chromatography and mass spectrometry”, Liang et al Chinese Medicine, (29) 24 Liang Z., Leung N.N., Chen H and Zhao Z (2012), “Quality evaluation of various commercial specifications of Polygoni Multiflori Radix and its dregs by determination of active compounds”, Liang et al Chemistry Central Journal, (53) 25 Lin S et al (2011), “Antiproliferative and antimetastatic effects of emodin on human pancreatic cancer”, Oncology Reports, 26 (1), 81–89 26 Lloyd R Snyder, Joseph J Kirkland and John W.Dolan (2010), “Introduction to Modern Liquid Chromatography”, Third Edition A John Wiley & Sons Inc., Chap 27 Michael W.Dong (2006), “Modern HPLC for Practicing Scientists”, A John Wiley & Sons, Inc., Publication, 20 – 25 28 Pharmacopoeia of the People’s Republic of China (2010), pp 348 – 349 29 Sun Y et al (2008), “Chemosensitization by emodin, a plant-derived anti-cancer agent: mechanism of action”, Cancer Biology & Therapy, (3), 476–478 30 Xu Y.L., Qi Dong, Hu F.Z (2009), “Simultaneous quantitative determination of eight active components in Polygonum multiflorum Thunb by RP-HPLC”, Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences, 18, 358 – 361 31 Yu J., Xie J., Mao X.J., Wei H., Zhao S.L., Ma Y.G., Li N., Zhao R.H (2012), “Comparison of laxative and antioxidant activities of raw, processed and fermented Polygoni Multiflori Radix”, Chinese Journal of Natural Medicines, 10 (1), 0063-0067 32 Zhu Z.W., Li J., Gao X.M., Kang L.Y., Hu L.M., Zhang B.L., Chang Y.X (2012), “Simultaneous determination of stilbenes, phenolic acids, flavonoids and anthraquinones in Radix polygoni multiflori by LC–MS/MS”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 62, 162– 166 78 33 Wang M., Zhao R., Wang W., Mao X., Yu J (2012), “Lipid regulation effects of Polygoni Multiflori Radix, its processed products and its major substances on steatosis human liver cell line L02”, Journal of Ethnopharmacology, 139, 287– 293 79 ... giá chất lƣợng dƣợc liệu hà thủ ô đỏ 11 Trong phạm vi luận văn thạc sĩ ? ?Nghiên cứu xây dựng phƣơng pháp định tính, định lƣợng hoạt chất dƣợc liệu hà thủ ô đỏ Fallopia multiflora (Thunb. ) Haraldson? ??... (THSG), resveratrol (RV) emodin (EM) dƣợc liệu hà thủ ô đỏ  Xây dựng đƣợc phƣơng pháp định lƣợng hai hợp chất THSG EM dƣợc liệu hà thủ ô đỏ  Đánh giá hàm lƣợng THSG EM số mẫu hà thủ ô đỏ thu... (THSG), resveratrol (RV) emodin (EM) dƣợc liệu hà thủ ô đỏ  Xây dựng đƣợc phƣơng pháp định lƣợng hai hợp chất THSG EM dƣợc liệu hà thủ ô đỏ  Đánh giá hàm lƣợng THSG EM số mẫu hà thủ ô đỏ thu