Nghiên cứu xây dựng phương pháp định tính, định lượng hoạt chất dược liệu hà thủ đỏ Fallopia multiflora (Thunb.) Haraldson Nguyễn Thị Hà Ly Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn ThS Chuyên ngành: Hóa phân tích; Mã số 60 44 01 18 Người hướng dẫn: TS Phương Thiện Thương, PGS.TS Tạ Thị Thảo Năm bảo vệ: 2013 Abstract Xây dựng phương pháp định tính ba hợp chất 2,3,5,4′tetrahydroxystilben-2-O-β-D-glucosid (THSG), resveratrol (RV) emodin (EM) dược liệu hà thủ ô đỏ Xây dựng phương pháp định lượng hai hợp chất THSG EM dược liệu hà thủ ô đỏ Đánh giá hàm lƣợng THSG EM số mẫu hà thủ ô đỏ thu hái vùng khác sản phẩm chế biến từ hà thủ đỏ Keywords Hóa phân tích; Phương pháp định tính; Phương pháp định lượng; Dược liệu MỞ ĐẦU Từ ngàn xƣa, ông cha ta biết sử dụng nguồn cỏ phong phú xung quanh để làm thuốc trị bệnh, bồi bổ thể, tăng cƣờng sức khỏe Các dƣợc liệu quý đƣợc ghi chép thành thuốc cổ truyền với nhiều tác dụng quý báu Một số dƣợc liệu quý hà thủ ô đỏ Trong số tài liệu ghi chép lƣu giữ, hà thủ ô đỏ đƣợc coi nhƣ vị thuốc trƣờng sinh, có khả làm ngƣời già thành trẻ, tóc bạc lại đen Theo quan điểm y học cổ truyền, hà thủ đỏ có nhiều tác dụng q nhƣ bổ huyết, điều hồ khí huyết, bổ gan thận, mạnh gân cốt, nhuận tràng, giúp ích cho tiêu hố Y học đại cịn phát hà thủ đỏ có tác dụng làm giảm lƣợng đƣờng máu, có tác dụng tốt trƣờng hợp suy nhƣợc thần kinh bệnh thần kinh, làm tăng hoạt động tim, làm tăng co bóp ruột, có tác dụng chống viêm Do đó, hà thủ đỏ đƣợc sử dụng rộng rãi để làm thuốc phục vụ đời sống ngƣời từ xƣa đến Tuy nhiên, thị trƣờng, vị thuốc quý bị giả mạo số loại rễ củ nhƣ: hà thủ ô trắng, củ nâu, củ cọc tình trạng ngƣời sử dụng mua phải dƣợc liệu rác bị chiết hết hoạt chất, gây ảnh hƣởng đến sức khoẻ ngƣời bệnh quyền lợi ngƣời tiêu dùng Vì vậy, việc nghiên cứu đánh giá chất lƣợng, tiêu chuẩn hoá dƣợc liệu hà thủ ô đỏ vấn đề cần thiết Ở Việt Nam, qui định thống việc kiểm tra chất lƣợng dƣợc liệu hà thủ đỏ cịn sơ sài Chuyên luận hà thủ ô đỏ Dƣợc Điển Việt Nam IV (2009) quy định hàm lƣợng chất chiết đƣợc etanol 30%, tiêu chí đánh giá khơng phản ánh đƣợc xác chất lƣợng dƣợc liệu hà thủ ô đỏ Trên giới có nhiều cơng trình nghiên cứu phƣơng pháp phân tích định tính, định lƣợng dƣợc liệu hà thủ ô đỏ Trong đó, phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) thƣờng đƣợc sử dụng độ nhạy tốt, phù hợp với đối tƣợng phân tích dƣợc liệu giá thành không cao Dƣợc Điển Trung Quốc (2010) có sử dụng phƣơng pháp để định lƣợng hai thành phần emodin 2,3,5,4′-tetrahydroxystilben-2-Oβ-D-glucosid dƣợc liệu hà thủ đỏ, tiêu chí đánh giá chất lƣợng dƣợc liệu hà thủ ô đỏ 11 Trong phạm vi luận văn thạc sĩ “Nghiên cứu xây dựng phƣơng pháp định tính, định lƣợng hoạt chất dƣợc liệu hà thủ ô đỏ Fallopia multiflora (Thunb.) Haraldson” tiến hành khảo sát điều kiện HPLC thích hợp để định tính, định lƣợng hoạt chất dƣợc liệu hà thủ đỏ Sau đó, áp dụng phƣơng pháp để đánh giá chất lƣợng dƣợc liệu hà thủ ô đỏ sản phẩm chế biến từ hà thủ ô đỏ Kết nghiên cứu nhằm gợi ý cho việc nâng cấp chuyên luận dƣợc liệu hà thủ ô đỏ Dƣợc Điển Việt Nam IV Mục tiêu nghiên cứu: Xây dựng đƣợc phƣơng pháp định tính ba hợp chất 2,3,5,4′-tetrahydroxystilben2-O-β-D-glucosid (THSG), resveratrol (RV) emodin (EM) dƣợc liệu hà thủ ô đỏ Xây dựng đƣợc phƣơng pháp định lƣợng hai hợp chất THSG EM dƣợc liệu hà thủ ô đỏ Đánh giá hàm lƣợng THSG EM số mẫu hà thủ ô đỏ thu hái vùng khác sản phẩm chế biến từ hà thủ ô đỏ 12 Tài liệu tham khảo Tiếng Việt Bộ Y tế (2009), Dược Điển Việt Nam IV, Nhà xuất Y học, Hà Nội, trang 772 – 773 Bộ Y tế (2011), Dược liệu học, tập 1, Nhà xuất Y học, Hà Nội, trang 75 – 76 Đỗ Huy Bích cộng (2003), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, tập I, II, NXB KHKT, Hà Nội, trang 884 – 887 Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y học, Hà Nội Trần Tứ Hiếu, Từ Vọng Nghi, Nguyễn Xuân Trung, Nguyễn Văn Ri (2003), Các phương pháp phân tích cơng cụ, NXB Đại Học Quốc Gia Hà Nội Phạm Thanh Huyền (2013), Nghiên cứu trồng thuốc địa: Ngũ gia bì gai, Sì to, Hà thủ ô đỏ cộng đồng dân tộc vùng cao số xã thuộc huyện Sa Pa, tỉnh Lào Cai, Viện Dƣợc liệu, Bộ Y tế Nguyễn Thị Ngọc Lan (2012), Phân lập số chất dùng làm chất đối chiếu phục vụ công tác tiêu chuẩn hóa kiểm tra chất lượng dược liệu, Đề tài cấp sở, Viện Dƣợc liệu, Bộ Y tế Đỗ Tất Lợi (2006), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội, trang 833 – 835 Phạm Luận (2000), Giáo trình, Cơ sở lý thuyết sắc ký lỏng hiệu cao, Đại Học Khoa Học Tự Nhiên-ĐHQGHN 10 Nguyễn Văn Ri (2009), Các phương pháp tách, Đại học Khoa học Tự Nhiên – ĐHQGHN 11 Viện Dƣợc liệu (2008), Chiết xuất dược liệu, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, trang 11-29, 39-49, 66-76 Tiếng Anh 12 Chen L.L., Huang X.J., Li M.M., Ou G.M., Zhao B.X., Chen M.F (2012), “Polygonflavanol A, a novel flavonostilbene glycoside from the roots of Polygonum multiflorum”, Phytochemistry Letters, 5, 756 – 760 13 Chu X., Sun A., Liu R (2005), “Preparative isolation and purification of five 76 compounds from the Chinese medicinal herb Polygonum cuspidatum Sieb et Zucc by high-speed counter-current chromatography”, Journal of Chromatography A, 1097, 33–39 14 Craig Z and Anna P (2011), “The photostability and photostabilizationof transresveratrol”, Cosmetics & Toiletries magazine, Vol 126, No 15 Han D.Q., Zhao J., Xu J., Peng H.S., Chen X.J and Li S.P (2013), “Quality evaluation of Polygonum multiflorum in China based on HPLC analysis of hydrophilic bioactive compounds and chemometrics”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical analysis, 72, 223 – 230 16 Feng Y et al (2010), “Emodin, a Natural Product, Selectively Inhibits 11βHydroxysteroid Dehydrogenase Type and Ameliorates Metabolic Disorder in Diet-Induced Obese Mice", British Journal of Pharmacology, 161 (1), 113– 126 17 Gu J., Hasuo W., Takeya H, Akasu M (2005), “Effects of emodin on synaptic transmission in rat hippocampal CA1 pyramidal neurons in vitro”, Neuropharmacology, 49 (1), 103–111 18 Hong Kong chinese Materia Medica Standards (2009), volum 3, pp 223 – 233 19 Ma J., Qi L.W., Li H.J., Li P (2012), “A segmental monitoring stragety based on variable wavelength detection for quality control of three Polygonaceae herbs”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 62, 155 – 161 20 Koyama J., Takeuchi A., Morita I., Nishino Y., Shimizu M., Inoue M., Kobayashi N (2009), “Characterization of emodin metabolites in Raji cells by LC–APCI-MS/MS”, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 17, 7493–7499 21 Knauer (2011), “Determination of Phthalates”, Applications Journal, page 32 22 Kim K.W., Ha K.T., Park C.S., Jin U.H., Chang H.W., Lee I.S., Kim C.H (2007), “Polygonum cuspidatum, compared with Baicalin and Berbrine, inhibits inducible Nitric Oxide Synthase and Cyclooxygenase-2 Gene Expression in RAW 264.7 macrophages”, Vascular Pharmacology, 47, 99107 77 23 Liang Z., Chen H., Yu Z., Zhao Z (2010), “Comparison of raw and processed Radix Polygoni Multiflori (Heshouwu) by high performance liquid chromatography and mass spectrometry”, Liang et al Chinese Medicine, (29) 24 Liang Z., Leung N.N., Chen H and Zhao Z (2012), “Quality evaluation of various commercial specifications of Polygoni Multiflori Radix and its dregs by determination of active compounds”, Liang et al Chemistry Central Journal, (53) 25 Lin S et al (2011), “Antiproliferative and antimetastatic effects of emodin on human pancreatic cancer”, Oncology Reports, 26 (1), 81–89 26 Lloyd R Snyder, Joseph J Kirkland and John W.Dolan (2010), “Introduction to Modern Liquid Chromatography”, Third Edition A John Wiley & Sons Inc., Chap 27 Michael W.Dong (2006), “Modern HPLC for Practicing Scientists”, A John Wiley & Sons, Inc., Publication, 20 – 25 28 Pharmacopoeia of the People’s Republic of China (2010), pp 348 – 349 29 Sun Y et al (2008), “Chemosensitization by emodin, a plant-derived anti-cancer agent: mechanism of action”, Cancer Biology & Therapy, (3), 476–478 30 Xu Y.L., Qi Dong, Hu F.Z (2009), “Simultaneous quantitative determination of eight active components in Polygonum multiflorum Thunb by RP-HPLC”, Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences, 18, 358 – 361 31 Yu J., Xie J., Mao X.J., Wei H., Zhao S.L., Ma Y.G., Li N., Zhao R.H (2012), “Comparison of laxative and antioxidant activities of raw, processed and fermented Polygoni Multiflori Radix”, Chinese Journal of Natural Medicines, 10 (1), 0063-0067 32 Zhu Z.W., Li J., Gao X.M., Kang L.Y., Hu L.M., Zhang B.L., Chang Y.X (2012), “Simultaneous determination of stilbenes, phenolic acids, flavonoids and anthraquinones in Radix polygoni multiflori by LC–MS/MS”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 62, 162– 166 78 33 Wang M., Zhao R., Wang W., Mao X., Yu J (2012), “Lipid regulation effects of Polygoni Multiflori Radix, its processed products and its major substances on steatosis human liver cell line L02”, Journal of Ethnopharmacology, 139, 287– 293 79 ... sĩ ? ?Nghiên cứu xây dựng phƣơng pháp định tính, định lƣợng hoạt chất dƣợc liệu hà thủ đỏ Fallopia multiflora (Thunb. ) Haraldson? ?? tiến hành khảo sát điều kiện HPLC thích hợp để định tính, định. .. dƣợc liệu hà thủ ô đỏ Xây dựng đƣợc phƣơng pháp định lƣợng hai hợp chất THSG EM dƣợc liệu hà thủ ô đỏ Đánh giá hàm lƣợng THSG EM số mẫu hà thủ ô đỏ thu hái vùng khác sản phẩm chế biến từ hà thủ. .. định tính, định lƣợng hoạt chất dƣợc liệu hà thủ ô đỏ Sau đó, áp dụng phƣơng pháp để đánh giá chất lƣợng dƣợc liệu hà thủ ô đỏ sản phẩm chế biến từ hà thủ ô đỏ Kết nghiên cứu nhằm gợi ý cho việc