Nghiên cứu xây dựng phương pháp định lượng Ketoprofen trong huyết tương

Nghiên cứu sinh dược và động dược học của thuốc là một lĩnh vực tương đối mới

đặt vấn đề Hiện nay ở nớc ta, việc nghiên cứu sinh dợc học và dợc động học của thuốc là một lĩnh vực tơng đối mới, đang ngày càng đợc quan tâm. Trong khi đó, ở các nớc khác, đây là một tiêu chí bắt buộc các hãng Dợc phẩm phải làm nếu muốn đa thuốc ra thị trờng. Một trong những vấn đề đánh giá sinh dợc học của thuốc là mức độ hấp thu thuốc và nồng độ thuốc đạt đợc trong huyết tơng. Các phơng pháp phân tích hay dùng để xác định nồng độ thuốc trong huyết tơng (dịch sinh vật) là sắc ký lỏng hiệu năng cao ( HPLC ), sắc ký khí (GC), sắc ký khí gắn với máy khối phổ (GC - MS ), phóng xạ miễn dịch, điện di mao quản Trong đó, HPLC đặc biệt là HPLC pha đảo với detector UV là phơng pháp hayđợc dùng hơn cả, do tinh u việt nổi trội về độ nhạy, tính chính xác, độ chọn lọc, tính kinh tế. Để có một qui trình dùng HPLC đảm bảo độ tin cậy để phân tích thuốc trong dịch sinh vật, chúng ta khảo sát các điều kiện sắc ký thích hợp nh cột; dung môi pha động; lu lợng dòng; bớc sóng quy trình xử lý mẫu, khoản nồng độ khảo sát. Ketoprofen- acid -2 (- benzoyl phenyl ) propionic - là thuốc chống viêm phi steroid; có tác dụng giảm đau, chống viêm, ức chế quá trình tổng hợp prostaglandin và leukotrien; ức chế sự kết dính tiểu cầu đợc dùng nhiều trong điều trị thấp khớp mãn tính, đặc biệt viêm đa khớp dạng thấp, thoái hoá khớp nặng. Ketoprofen là thuốc mới đợc đa vào sản xuất ở nớc ta và cha có tài liệu trong nớc nào đánh giá định lợng ketoprofen trong huyết tơng. Do đó chúng tôi thực hiện đề tài Nghiên cứu xây dựng phơng pháp định lợng ketoprofen trong huyết tơng với mục tiêu: -Khảo sát và lựa chọn dung môi chiết ketoprofen trong huyết tơng cho hiệu xuất chiết cao. -Khảo sát và tìm điều kiện sắc ký thích hợp để định lợng ketoprofen trong huyết tơng . -Xây dựng phơng pháp định lợng ketoprofen trong huyết tơng bằng HPLC. 1 -áp dụng định lợng ketoprofen trong huyết tơng ngời sau khi uống thuốc và theo dõi độ ổn định của ketoprofen theo thời gian bảo quản. 2 Phần i: tổng quan. 1.1 Đại cơng về Ketoprofen. 1.1.1 Công thức và tính chất lý hoá[1] [ 5]. - Phân tử lợng : 254.29 - Tên khoa học :acid 2 ( - benzoyl phenyl ) propionic - Tính chất: Bột kết tinh trắng, không mùi. Thực tế không tan trong nớc ở 20 0 C, tan hoàn toàn trong kiềm mạnh, ethanol 96 0 , aceton cloroform và ether. pKa =5,94 trong hỗn hợp methanol - nớc (3 : 1). Cực đại hấp thụ trong methanol ở bớc sóng 255 nm. Nhiệt độ nóng chảy khoảng 95 0 C. 1.1.2 Tác dụng dợc lý và dợc động học [5] [6]. Ketoprofen là thuốc chống viêm phi steroid, thuộc dẫn chất của acid aryl propionic, có tác dụng giảm đau, hạ sốt, chống viêm. Ketoprofen ức chế quá trình tổng hợp prostaglandin và ức chế sự kết tập tiểu cầu. Ketoprofen đợc hấp thu rất nhanh vào máu , đạt nồng độ tối đa sau 45 - 60 phút nếu đặt hậu môn và 60- 90 phút sau khi uống. Liên kết với protein huyết tơng 99%, thời gian bán thải là 1,5-2,5 giờ. Sau khi uống 4 giờ nồng độ ketoprofen trong bao hoạt dịch cao hơn trong máu. Thuốc qua đợc hàng rào nhau thai. Một phần nhỏ chuyển hoá bằng cách hydroxyl hoá, còn phần lớn liên hợp với acid glucuronic. Thải trừ chủ yếu qua nớc tiểu (75- 90%), một ít qua 3 CH COOH C O CH 3 phân( 1-8% ). ở nớc tiểu ( 65-75%) là dạng glucuronyl, 1% là dạng cha biến đổi. Sau khi uống 6 giờ ketoprofen sẽ bị thải trừ 50% qua thận. 1.1.3 Chỉ định [5] [6]: Ketoprofen đợc chỉ định điều trị dài hạn các triệu chứng trong: - Viêm thấp khớp mãn tính, đặc biệt là viêm đa khớp dạng thấp, viêm cứng khớp cột sống. - Bệnh cứng khớp gây đau và tàn phế. Điều trị ngắn hạn các triệu chứng trong các cơn cấp tính của các bệnh: - Bệnh thấp khớp ngoài khớp (đau vai cấp tính, viêm gân . ). - Viêm khớp vi tinh thể. - Thoái hoá khớp. - Dạng viên nang còn dùng để giảm đau: đau lng, đau rễ thần kinh . 1.1.4 Chống chỉ định [6]: - Dị ứng với ketoprofen, aspirin, và các thuốc chống viêm phi steroid cùng loại. - Loét dạ dày-tá tràng tiến triển. - Suy thận nặng, suy gan tế bào nặng. - Phụ nữ có thai( 3 tháng cuối) và cho con bú. 1.1.5 Tác dụng không mong muốn [6] - Tác dụng phụ ở đờng tiêu hoá: khó chịu vùng dạ dày-ruột, đau dạ dày, buồn nôn, nôn mửa, táo bón, tiêu chảy, nặng thì loét dạ dày, xuất huyết tiêu hoá, thủng ruột. - Nhức đầu, chóng mặt, buồn ngủ. - Phản ứng quá mẫn ở da( nổi ban, mề đay, ngứa) và đờng hô hấp (suyễn, nhất là những ngời dị ứng với aspirin và các kháng viêm không steroid khác). - Giảm nhẹ hồng cầu ở ngời bị thiếu máu, một vài trờng hợp giảm bạch cầu nhẹ đã đợc ghi nhận. 4 1.1.6 Liều dùng: Liều khởi đầu: 300 mg chia làm 3 lần, uống khi no. Liều duy trì: 150-200mg hoặc nạp ngày 1-2 viên thuốc đạn. Tiêm bắp ngày100-200mg chia 2 lần. Không nên phối hợp Ketoprofen với thuốc chống đông máu đờng uống và các kháng viêm không steroid khác (kể cả salicylat liều cao) do làm tăng nguy cơ loét và xuất huyết tiêu hoá. 1.1.7 Dạng bào chế [5] [6]. - Viên nang 25mg, 50mg, 75mg. - Viên nén 100mg, 150mg. - Viến bao tan ở ruột 50mg. - Viên bao tác dụng kéo dài 200mg, viên nang tác dụng kéo dài 100mg, 150mg, 200mg. - Thuốc tiêm 100mg. - Thuốc mỡ 2,5%. Biệt dợc: Biprofenid, Profenid, Kefenid, Fastum, Ketum, Ketopron. 1.1.8 Các phơng pháp định lợng. A. Phơng pháp acid- bazơ: Định lợng ketoprofen nguyên liệu, xác định điểm tơng đơng bằng chỉ thị đỏ phenol [18] hoặc bằng phơng pháp đo điện thế [ 10] [18]. Tiến hành: Hoà tan khoảng 200mg Ketoprofen (cân chính xác) vào 25ml alcol. Thêm 25ml nớc và vài giọt đỏ phenol. Chuẩn độ với NaOH 0,1N. Song song làm một mẫu trắng trong cùng điều kiện. 1ml NaOH 0,1N tơng đơng với 25,43mg C 16 H 14 O 3 . 5 - Hoặc: Hoà tan khoảng 200mg Ketoprofen (cân chính xác) vào 25ml alcol. Thêm 25ml nớc Chuẩn độ với NaOH 0,1N, xác định điểm tơng đơng bằng bớc nhảy điện thế. 1ml NaOH 0,1N tơng đơng với 25,43mg C 16 H 14 O 3 . B. Phơng pháp quang phổ [7] [8][10]: Dùng để định lợng ketoprofen trong chế phẩm. Hoà một lợng chế phẩm có chứa khoảng 50 mg ketoprofen (cân chính xác) trong 300 ml methanol 75 %, lắc trong 10 phút, thêm methanol 75 % vừa đủ 500 ml. Lọc. Lấy 5 ml dịch lọc pha loãng thành 100 ml với methanol 75 % và đem đo độ hấp thụ của dung dich này ở bớc sóng 258nm; cuvet thạch anh có chiều dày 1 cm với mẫu trắng là methanol 75%. Tính kết quả dựa vào A (1%, 1cm) ở bớc sóng 258 nm là 662. C. Phơng pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao ( HPLC ). Dùng để định lợng ketoprofen trong huyết tơng và xác định tạp chất trong nguyên liệu. stt tài liệu pha động cột mẫu thử 1 [10] [18] Đệm phosphat pH 3,5 - ACN - H 2 O (2:43:55) C 18 5àm 150*4,6 mm Nguyên liệu 2 [10] NH 4 CH 3 COO 1% - MeOH - ACN (55:30:15) C 18 5àm 200*4,6 mm Nguyên liệu 3 [13] Đệm phosphat pH 3,2 - ACN (60:40) C 18 2àm 250*4,6 mm Huyết tơng 4 [12] NH 4 CH 3 COO 20 mM - MeOH; điều chỉnh pH 7,0. C 18 4 àm Huyết tơng 5 [11] ACN : AcOH 1% ( 38 : 62 ). C 18 10àm 3,9*300 mm Huyết tơng 6 [16] Đệm Phosphat 0,05M pH 7 : ACN (90 : 10 ). C 18 5 àm 4,6*250mm Huyết tơng D. Phơng pháp điện di mao quản: Định lợng ketoprofen trong huyết tơng [14] và tách đồng phân của ketoprofen [17]. 1.2 Phơng pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao ( HPLC ). 6 Sắc ký lỏng hiệu năng cao ( High Performance Liquid Chromatography ) còn gọi là sắc ký lỏng cao áp hay sắc ký lỏng hiện đại ra đời vào những năm cuối 1960. Nó đợc xây dựng và phát triển không ngừng và ngày càng thể hiện rõ tính u việt, đặc biệt là trong lĩnh vực nghiên cứu sinh dợc học của thuốc. Phân loại các phơng pháp sắc ký [ 2]: - Sắc ký phân bố : + sắc ký lỏng- lỏng. +sắc ký phân bố pha liên kết. - Sắc ký hấp phụ hiệu năng cao. - Sắc ký trao đổi ion hiệu năng cao. - Sắc ký lỏng hiệu năng cao trên gel ( sắc ký theo loại cỡ ). Trong phân tích sinh dợc học và kiểm nghiệm, ngời ta hay sử dụng phơng pháp sắc ký lỏng phân bố pha liên kết (Bonded Phase Chromatography ). Đặc điểm phơng pháp [2]: Trong sắc ký lỏng phân bố pha liên kết, pha tĩnh đợc gắn hoá học (liên kết ) với chất mang ( Silicagel ) tạo nên hợp chất cơ Siloxan Nhóm Silanol Dẫn chất Dẫn chất Siloxan của Silicagel clorosilan - Nếu R là một nhóm ít phân cực nh octyl (C 8 ), octadecyl (C 18 ) hay phenyl và dung môi phân cực nh methanol, acetonitril thì có sắc ký pha đảo (sắc ký pha ngợc ). 7 Si CH 3 CH 3 CH 3 Cl CH 3 OH Si R SiSi O CH 3 CH 3 R + H 3 C H 3 C - Nếu R là nhóm khá phân cực nh: alkylamin - ( - CH 2 - ) n -NH 2 hay alkyl nitril -( - CH 2 - ) n - CN và dung môi ít phân cực nh hexan thì ta có sắc ký pha thuận. - Cách chọn pha: thờng chọn pha tĩnh có tính chất phân cực giống các chất cần tách và khác với pha động. Nguyên tắc của phơng pháp [2] [3]: Các chất trong hỗn hợp đợc tách dựa trên khả năng phân bố khác nhau của chúng vào hai pha không hoà lẫn vào nhau, luôn tiếp xúc nhau: một pha tĩnh và một pha động. Dung dịch mẫu thử đợc đa vào hệ thống sắc ký qua van tiêm mẫu và đợc dung môi pha động kéo tới cột phân tích nhờ một bơm cao áp. Tại cột xảy ra quá trình tách, những phân tử nào có ái lực thấp với pha tĩnh thì đợc rửa giải ra trớc, còn những phân tử nào có ái lực mạnh với pha tĩnh thì đợc rửa giải ra sau. Chất ra khỏi cột đợc phát hiện bằng detector gắn với máy ghi, máy tính hay máy tích phân. Thời gian lu t R là đặc trng định tính của chất, chiều cao hay diện tích pic là đặc trng định lợng của chất. Sắc ký đợc tiến hành so với chuẩn. Một số thông số đặc trng của HPLC [2]: Ví dụ: Ta có 1 sắc đồ sau: - Thời gian lu t R ( phút ) là thời gian tính từ lúc tiêm mẫu vào hệ thống sắc ký đến lúc xuất hiện đỉnh của pic. So sánh thời gian lu của mẫu thử và mẫu chuẩn làm trong cùng điều kiện ta sẽ định tính đợc chất đó. - Thời gian chết t M ( phút ) là thời gian của một chất không bị lu giữ tức là bằng tốc độ di chuyển trung bình của các phân tử dung môi. - Thời gian lu hiệu chính t R , đợc tính theo công thức: 8 t R = t R , + t M ( hay t R , = t R - t M ). - Thừa số dung lợng k dùng để mô tả tốc độ di chuyển của một chất Qs t R t R - t M V R -V M k = = = = Q M t M t M V M - Thừa số chọn lọc : Mô tả tốc độ di chuyển tỷ đối của hai chất. k B k B t R,B = = = k A k A t R,A Qui ớc B là chất bị lu giữ mạnh hơn A nên 1. Để tách riêng 2 chất thì > 1, thờng từ 1,05 2,00. - Số đĩa lý thuyết N: Biểu thị hiệu lực cột sắc ký. N = 2 b w r t x 16 hoặc N = 2 2/1 w r t x 54,5 Trong đó: W B chiều rộng pic ở đáy pic. W 1/2 chiều rộng pic đo ở nửa chiều cao của đỉnh. - Độ phân giải R S là đại lợng đo mức độ tách hai chất trên một cột sắc ký. t R,B t R,A R s = 1/2( W B + W A ) Để tách riêng hai chất, R s 1,5 ( khi 2 sắc đồ có độ lớn cùng cỡ ). - Chiều cao pic hay diện tích pic là đặc trng định lợng của chất. Khi so sánh chiều cao pic hay diện tích pic của mẫu thử và chuẩn trong cùng điều kiện làm ta tính đợc hàm lợng hoạt chất trong mẫu thử. Pha tĩnh và pha động trong HPLC [3]. *Pha tĩnh trong HPLC chính là chất nhồi cột để làm nhiệm vụ tách một hỗn hợp chất phân tích. Nó là những chất rắn, xốp và kích thớc hạt rất nhỏ, đ- ờng kính cỡ hạt từ 3-10àm, diện tích bề mặt riêng thờng từ 50-500 m 2 /g.Căn cứ theo bản chất chính của quá trình sắc ký trên cột tách, ngời ta chia nó thành nhiều loại nh hấp phụ, phân bố, trao đổi ion và rây phân tử. Tơng ứng với loại chất nhồi nh thế ngời ta có một loại sắc ký riêng trong kỹ thuật HPLC. 9 Trong đề tài này, chúng tôi sử dụng phơng pháp sắc ký phân bố pha liên kết. Bản chất chính của sự tách trong loại sắc ký này là dựa trên khả năng tách của các chất trong hai pha không hoà lẫn vào nhau. Các yêu cầu chung của pha tĩnh trong kỹ thuật HPLC: + Phải trơ và bền vững với các điều kiện của môi trờng sắc ký, không có các phản ứng hoá học phụ với dung môi rửa giải hay với chất phân tích. + Có khả năng tách chọn lọc một hỗn hợp chất tan nhất định trong điều kiện sắc ký. + Tính chất bề mặt phải ổn định. + Cân bằng động học của sự tách phải xảy ra nhanh và lặp lại tốt. + Cỡ hạt phải tơng đối dồng nhất. Pha tĩnh thờng đợc chế tạo trên các chất nền sau: + Pha tĩnh trên nền Silicagel ( SiO 2 ) + Pha tĩnh trên nền Oxid nhôm ( Al 2 O 3 ) + Pha tĩnh trên nền cao phân tử hữu cơ ( polystyren, cellulo .) + Pha tĩnh trên nền mạch carbon. Trong 4 loại này thì nền Silicagel đợc sử dụng nhiều nhất và pha tĩnh đợc chế tạo trên nền này cũng có nhiều u việt hơn, nh khả năng chịu áp cao, độ tr- ơng nở nhỏ khi thay đổi dung môi rửa giải, bền với nhiệt. *Pha động là dung môi dùng để rửa giải các chất tan ( chất phân tích ) ra khỏi cột tách để thực hiện một quá trính sắc ký. Pha động trong HPLC có thể chỉ là một dung môi hữu cơ nh Metanol, Acetonitril, n-Hexan, hay cũng có thể là hỗn hợp của hai hay nhiều dung môi trộn với nhau theo những tỷ lệ phù hợp. Nó cũng có thể là dung dịch nớc của các muối có chứa chất đệm, chất tạo phức, chất làm chậm. Nói chung mỗi loại sắc ký sẽ có các hệ dung môi rửa giải riêng cho nó, để có đợc hiệu quả tốt. Pha động là một trong những yếu tố quyết định thời gian lu giữ của chất mẫu và hiệu quả sự tách sắc ký, ảnh hởng tới sự phân giải của chất trong pha tĩnh. Pha động trong kỹ thuật HPLC cần phải thoả mãn một số điều kiện sau: + Phải trơ đối với pha tĩnh. + Phải hoà tan đợc chất mẫu 10 [...]... ketoprfen trong huyết tơng b .Xây dựng phơng pháp định lợng ketoprofen trong huyết tơng Xây dựng đờng chuẩn trong pha động: Pha 1 dãy dung dịch hỗn hợp ketoprofen và chất chuẩn nội trong pha động với nồng độ ketoprofen lần lợt là 0,05mcg/ml; 0,2mcg/ml; 0,8mcg/ml; 2mcg/ml; 5mcg/ml và nồng độ chất chuẩn nội là 25àg/ml Tiến hành chạy sắc ký, xác định thời gian lu và diện tích pic của ketoprofen và chuẩn... để định lợng ketoprofen trong huyết tơng - Bớc sóng: Quét phổ hấp phụ xác định đợc max = 253nm Từ đó chọn đợc điều kiện sắc ký là: Cột: Nucleosil C18 Pha động: ACN: AcOH: Tri: H2O ( 50: 1: 0,3: 48,7 ) Bớc sóng: 253nm Lu lợng dòng: 0,85 ml/phút 3 Xây dựng đợc phơng pháp định lợng ketoprofen trong huyết tơng bằng HPLC với IS là acid 2- ( 4- isobutylphenyl )propionic - Đờng chuẩn trong huyết tơng dợc xây. .. mẫu thử có chứa ketoprofen ở 300C, thấy nồng độ của ketoprofen trong huyết tơng vẫn ổn định 29 Phần 3:kết luận và đề xuất Trong đề tài này chúng tôi đã thực hiện đợc một số công việc sau: 1 Đã khảo sát 5 dung môi chiết ketoprofen trong huyết tơng tìm đợc ACN có khả năng chiết tốt nhất, cho hiệu xuất chiết cao (91,2%) Xây dựng qui trình xử lý mẫu thích hợp để chiết ketoprofen trong huyết tơng, thời... dụng: Dùng phơng pháp đã xây dựng để định lợng ketoprofen trong huyết tơng ngời tình nguyện sau khi uống viên nang 50 mg cho kết quả định lợng đáng tin cậy ( đã đợc kiểm tra bằng HPLC gắn với detector Diod array ) - Đã theo dõi độ ổn định của mẫu thử trong điều kiên bảo quản ở - 300C trong 1, 2, 3 tháng Đề tài này đợc thực hiện trong một thời gian ngắn, do đó cha định lợng đợc nhiều mẫu thử Trong thời gian... 5 : Kết quả xây dựng đờng chuẩn Ketoprofen trong huyết tơng Nồng độ ( mcg /ml ) 0,05 0,2 0,8 2 5 AKet AIS 3882 105190 14047 105131 86292 105812 232658 104177 607150 106458 RKet/IS 0,037 0,134 0,815 2,233 5,730 R (ket/IS) Đường chuẩn trong huyết tương 7 6 5 4 3 2 1 0 0 2 4 6 C (mcg/ml) Đồ thị 2 : Đờng chuẩn định lợng Ketoprofen trong huyết tơng 23 Phơng trình hồi qui : y = 1,154x - 0,074 Trong đó :... phơng pháp này có thể áp dụng để định lợng ketoprofen trong huyết tơng * áp dụng áp dụng định lợng mẫu thực: một ngời tình nguyện khoẻ mạnh, uống1 viên nang 50 mg, sau 90 phút lấy máu đem ly tâm để lấy huyết tơng Xử lý mẫu nh sơ đồ hình 1, tiến hành chạy sắc ký thu đợc sắc đồ hình 9 Thẩm định phơng pháp dùng Detector UV Diod arrays (Phòng vật lýViện kiểm nghiệm - Bộ Y Tế) để định lợng ketoprofen trong. .. Tính % ketoprofen chuẩn tìm lại đợc ứng dụng Dùng phơng pháp đã xây dựng để định lợng ketoprofen mẫu huyết tơng ngời sau khi uống viên nang ketoprofen 50 mg; 1,50 giờ và theo dõi độ bền vững của ketoprofen trong huyết tơng bảo quản ở - 300C, sau 1; 2; 3 tháng 2.2 Kết quả thực nghiệm và nhận xét 2.2.1 Khảo sát tìm dung môi chiết xuất Dung môi hữu cơ dùng để chiết xuất phải có khả năng hoà tan tốt ketoprofen. .. chuẩn nội phải đảm bảo tách khỏi ketoprofen và ổn định trong điều kiện sắc ký Pha các dung dịch ketoprofen và acid-2-(4-isobutylphenyl) propionic, ketoprofen và acid -2-[( 6- methoxy) naphtyl] propionic (IS1) trong pha động và trong huyết tơng Tiến hành chạy sắc ký, xác định thời gian lu tR của các chất, tính thừa số chọn lọc của các chất đối với ketoprofen, từ đó xác định chất nội chuẩn ( chất có ... ACN: AcOH : Tri :H2O ( 50 : 0,5 : 0,3 : 48,7) - Lu lợng dòng: 0,85ml/ phút - Bớc sóng : 253 nm - Thể tích mẫu tiêm : 50àl 21 2.2.3 Xây dựng phơng pháp định lợng ketoprofen trong huyết tơng Xây dựng đờng chuẩn trong pha động: Pha một dãy các dung dịch hỗn hợp ket và IS trong pha động với các nồng độ của ket là 0,05mcg/ml; 0,2mcg/ml ; 0,8mcg/ml ; 2mcg/ml ; 5mcg/ml và nồng độ IS là 25mcg/ml Tiến hành... định thời gian lu và diện tích pic của ketoprofen và chuẩn nội, từ đó tính đợc tỷ số diện tích pic giữa ketoprofen và chất chuẩn nội Xây dựng mối tơng quan giữa nồng độ ketoprofen và tỷ số diện tích pic giữa ketoprofen và chất chuẩn nội Xây dựng đờng chuẩn trong huyết tơng Chủ động cho ketoprofen vào huyết tơng để đợc một dãy các nồng độ 0,05mcg/ml; 0,2mcg/ml; 0,8mcg/ml; 2mcg/ml; 5mcg/ml Tiếp đó cho . để định lợng ketoprofen trong huyết tơng . -Xây dựng phơng pháp định lợng ketoprofen trong huyết tơng bằng HPLC. 1 -áp dụng định lợng ketoprofen trong. trong nớc nào đánh giá định lợng ketoprofen trong huyết tơng. Do đó chúng tôi thực hiện đề tài Nghiên cứu xây dựng phơng pháp định lợng ketoprofen trong