Nghiên cứu xây dựng phương pháp định lượng ketoprofen trong huyết tương

BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI • • • «ĩ> «ỉ# «ỉ« rj> rj> r j i % ^ !ô #J> rj> rj> ftằ i% ôs> V #Ị> ^ L* y ũ THỊ THANH LOAN NGHIÊN CỨU XÂY DựNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG KETOPROFEN TRONG HUYẾT TƯƠNG ( KHỐ LUẬN TĨT NGHIỆP Dược SĨKHOẢ 1997- 2002 ) Người hướng dẫn : ThS NGUYỄN THỊ KIỂU ANH PGS TS TRẦN TỬ AN Noi thực : BỘ MÔN HỐ PHÂN TÍCH Thời gian thực : 3- 5/2002 HÀ NỘI - 05/2002 LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới ThS NGUYỄN THỊ KIỂU ANH PGS.TS TRẦN TỬ AN tận tình hướng dẫn tơi hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc tới thầy mơn HỐ PHÂN TÍCH tận tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình thực khố luận Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội ngày 26/5/2002 Sinh Viên VŨ THỊ THANH LOAN MỤC LỤC Trang Đặt vấn đ ề .1 Phần 1: Tổng quan 1.1 Đại cương Ketoprofen 1.1.1 Công thức tính chất lý hố 1.1.2 Tác dụng dược lý dược động học 1.1.3 Chỉ đ ịn h 1.1.4 Chống định 1.1.5 Tác dụng không mong m uốn 1.1.6 Liều dùng 1.1.7 Dạng bao chế .4 1.1.8 Các phương pháp định lượng 1.2 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu ng cao ( HPLC) 1.2.1 Phân loại phương pháp sắc ký 1.2.2 Đặc điểm, phương pháp 1.2.3 Nguyên tắc phương pháp 1.2.4 Một số thông số đặc trưng HPLC 1.2.5 Pha tĩnh pha động HPLC 1.2.6 Cách tính kết phương pháp HPLC 10 Phần : Thực nghiệm kết 11 2.1 Nguyên vật liệu phương pháp nghiên cứu 11 2.1.1 Nguyên vật liệu hoá chất 11 2.1.2 Phương pháp thực nghiệm 12 2.2 Kết thực nghiệm nhận x é t 14 2.2.1 Khảo sát tìm dung mơi chiết xuất 14 2.2.2 Khảo sát lựa chọn điều kiện sắc k ý .16 2.2.3 Xây dựng phương pháp định lượng Ketoprofen huyết tương Phần : Kết luận đề xuất 30 Tài liệu tham khảo 32 CHÚ GIẢI CHỮ VIẾT TẮT A Diện tích pic ACN Acetonitril AcOH Acid acetic HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao IS Chất nội chuẩn MeOH Methanol R Tỷ số diện tích pic Tri Triethylamin ĐẶT VẤN ĐỂ • Hiện nước ta, việc nghiên cứu sinh dược học dược động học thuốc lĩnh vực tương đối mới, ngày quan tâm Trong đó, nước khác, tiêu chí bắt buộc hãng Dược phẩm phải làm muốn đưa thuốc thị trường Một vấn đề đánh giá sinh dược học thuốc mức độ hấp thu thuốc nồng độ thuốc đạt huyết tương Các phương pháp phân tích hay dùng để xác định nồng độ thuốc huyết tương (dịch sinh vật) sắc ký lỏng hiệu cao ( HPLC ), sắc ký khí ( GC), sắc ký khí gắn với máy khối phổ (GC - MS ), phóng xạ miễn dịch, điện di mao quản Trong đó, HPLC đặc biệt HPLC pha đảo với detector UV phương pháp hay dùng cả, tính ưu việt trội độ nhạy, tính xác, độ chọn lọc, tính kinh tế Để có qui trình dùng HPLC đảm bảo độ tin cậy để phân tích thuốc dịch sinh vật, khảo sát điều kiện sắc ký thích hợp cột; dung mơi pha động; lưu lượng dòng; bước sóng quy trình xử lý mẫu, khoản nồng độ khảo sát Ketoprofen- acid -2 (- benzoyl phenyl ) propionic - thuốc chống viêm phi steroid; có tác dụng giảm đau, chống viêm, ức chế trình tổng hợp prostaglandin leukotrien; ức chế kết dính tiểu cầu dùng nhiều điều trị thấp khớp mãn tính, đặc biệt viêm đa khớp dạng thấp, thối hố khớp nặng Ketoprofen thuốc đưa vào sản xuất nước ta chưa có tài liệu nước đánh giá định lượng ketoprofen huyết tương Do chúng tơi thực đề tài “ Nghiên cứu xây dựng phương pháp định lượng ketoprofen huyết tương” với mục tiêu: -Xây dựng chương trình sắc ký HPLC nhằm định lượng ketoprofen huyết tương cho kết tin cậy lặp lại -Áp dụng định lượng ketoprofen huyết tương người sau uống thuốc theo dõi độ ổn định ketoprofen huyết tương theo thời gian bảo quản PHẦN I: TỔNG QUAN 1.1 ĐẠI CƯƠNG VỂ KETOPROFEN 1.1.1 Công thức tính chất lý hố[l] [ 5] CH3 C H -C O O H o - Phân tử lượng: 254.29 /- - Tên khoa học: acid Ợ- benzoyl phenyl) propionic - Tính chất: Bột kết tinh trắng, khơng mùi Thực tế khơng tan nước 20°c, tan hồn tồn kiềm mạnh, ethanol 96°, aceton, cloroform ether pKa = 5,94 hỗn hợp methanol - nước (3 : 1) Cực đại hấp thụ methanol bước sóng 255 nm Nhiệt độ nóng chảy khoảng 95°c 1.1.2 Tác dụng dược lý dược động học [5] [6] Ketoprofen thuốc chống viêm phi Steroid, thuộc dẫn chất acid aryl propionic, có tác dụng giảm đau, hạ sốt, chống viêm Ketoprofen ức chê trình tổng hợp prostaglandin ức chế kết tập tiểu cầu Ketoprofen hấp thu nhanh vào máu, đạt nồng độ tối đa sau 45 60 phút đặt hậu môn 60- 90 phút sau uống Liên kết với protein huyết tương 99%, thời gian bán thải 1,5-2,5 Sau uống nồng độ ketoprofen bao hoạt dịch cao máu Thuốc qua hàng rào thai Một phần nhỏ chuyển hoá cách hydroxyl hố, phần lớn liên hợp với acid glucuronic Thải trừ chủ yếu qua nước tiểu (75- 90%), qua phân (1-8%) Ở nước tiểu (65-75%) dạng glucuronyl, 1% dạng chưa biến đổi Sau uống ketoprofen bị thải trừ 50% qua thận 1.1.3 Chỉ định [5] [6]: Ketoprofen định điều trị dài hạn triệu chứng trong: - Viêm thấp khớp mãn tính, đặc biệt viêm đa khớp dạng thấp, viêm cứng khớp cột sống - Bệnh cứng khớp gây đau tàn phế Điều trị ngắn hạn triệu chứng cấp tính bệnh: - Bệnh thấp khớp khớp (đau vai cấp tính, viêm gân ) - Viêm khớp vi tinh thể - Thối hố khớp - Dạng viên nang dùng để giảm đau: đau lưng, đau rễ thần kinh 1.1.4 Chống định [6]: - Dị ứng với ketoprofen, aspirin, thuốc chống viêm phi Steroid loại - Loét dày- tá tràng tiến triển - Suy thận nặng, suy gan tế bào nặng - Phụ nữ có thai (3 tháng cuối) cho bú 1.1.5 Tác dụng không mong muốn [6] - Tác dụng phụ đường tiêu hố: khó chịu vùng dày- ruột, đau dày, buồn nơn, nơn mửa, táo bón, tiêu chảy, nặng loét dày, xuất huyết tiêu hố, thủng ruột - Nhức đầu, chóng mặt, buồn ngủ - Phản ứng mẫn da (nổi ban, mề đay, ngứa) đường hô hấp (suyễn, người dị ứng với aspirin kháng viêm không Steroid khác) - Giảm nhẹ hồng cầu người bị thiếu máu, vài trường hợp giảm bạch cầu nhẹ ghi nhận 1.1.6 Liều dùng[6]: - Liều khởi đầu: 300 mg chia làm lần, uống no - Liều trì: 150-200mg nạp ngày 1-2 viên thuốc đạn - Tiêm bắp ngàyl00-200mg chia lần Không nên phối hợp Ketoprofen với thuốc chống đông máu đường uống kháng viêm không Steroid khác (kể salicylat liều cao) làm tăng nguy loét xuất huyết tiêu hoá 1.1.7 Dạng bào chê [5] [6] - Viên nang 25mg, 50mg, 75mg - Viên nén 100mg, 150mg - Viến bao tan ruột 50mg - Viên bao tác dụng kéo dài 200mg, viên nang tác dụng kéo dài 100mg, 150mg, 200mg - Thuốc tiêm 100mg - Thuốc mỡ 2,5% % Biệt dược: Biprofenid, Profenid, Kefenid, Fastum, Ketum, Ketopron 1.1.8 Các phương pháp định lượng ♦ Phương pháp acid- bazơ: Định lượng ketoprofen nguyên liệu, xác định điểm tương đương thị đỏ phenol [9 ] [18] phương pháp đo điện [ 12 ] •Ỉ& Tiến hành: Hồ tan khoảng 200mg Ketoprofen (cân xác) vào 25ml alcol Thêm 25ml nước vài giọt đỏ phenol Chuẩn độ với NaOH 0,1N Song song làm mẫu trắng điều kiện, lml NaOH 0,1N tương đương với 25,43mg C 16H 140 Hoặc: Hồ tan khoảng 200mg Ketoprofen (cân xác) vào 25ml alcol - Thêm 25ml nước Chuẩn độ với NaOH 0,1N, xác định điểm tương đương bước nhảy điện lml NaOH 0,1N tương đương với 25,43mg C|6H 140 ♦ Phương pháp quang phổ[7] [9] [10]: Dùng để định lượng ketoprofen chế phẩm Hoà lượng chế phẩm có chứa khoảng 50 mg ketoprofen (cân xác) 300 ml methanol 75 %, lắc 10 phút, thêm methanol 75 % vừa đủ 500 ml Lọc Lấy ml dịch lọc pha loãng thành 100 ml với methanol 75 % đem đo độ hấp thụ dung dich bước sóng 258nm; cuvet thạch anh có chiều dày cm với mẫu trắng methanol 75% Tính kết dựa vào A (1%, lcm) bước sóng 258 nm 662 ♦ Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao ( HPLC ) Dùng để định lượng ketoprofen huyết tương xác định tạp chất nguyên liệu CÔT C18 5ịim 150 X 4,6 mm MẪU THỬ 5fJ.m 200 X 4,6 mm C18 2|j,m 250 X 4,6 mm C18 [im Huyết tương [11] PHA ĐÔNG Đêm phosphat pH 3,5 - ACN - H20 (2:43:55) NH4CH,COO 1% - MeOH ACN (55:30:15) Đêm phosphat pH 3,2 - ACN (60:40) NH4CH3COO 20 mM MeOH; đ i ề u c h ỉ n h pH 7,0 A C N : AcOH 1% ( 38 : 62 ) Cl8 10|j.m 3,9 X 300 mm Huyết tương [16] Đêm Phosphat 0,05M pH : ACN (90 : 10 ) Cl8 ịim 4,6 X 250mm Huyết tương STT TÀI LIÊU [9] [10] [18] [10] [13] [12] c,8 Nguyên liệu Nguyên liệu Huyết tương ♦ Phương pháp điện di mao quản: Định lượng ketoprofen huyết tương [14] tách đồng phân ketoproíen [17] 1.2 PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO ( HPLC ) Sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) gọi sắc ký lỏng cao áp hay sắc ký lỏng đại đời vào năm cuối 1960 Nó xây dựng phát triển không ngừng ngày thể rõ tính ưu việt, đặc biệt lĩnh vực nghiên cứu sinh dược học thuốc 1.2.1 Phân loại phương pháp sắc ký [ 2], - Sắc ký phân bố: + sắc ký lỏng- lỏng + sắc ký phân bố pha liên kết - Sắc ký hấp phụ hiệu cao - Sắc ký trao đổi ion hiệu cao - Sắc ký lỏng hiệu cao gel ( sắc ký theo loại c ỡ ) Trong phân tích sinh dược học kiểm nghiệm, người ta hay sử dụng phương pháp sắc ký lỏng phân bố pha liên kết (Bonded Phase Chromatography ) 1.2.2 Đặc điểm phương pháp [2] Trong sắc ký lỏng phân bố pha liên kết, pha tĩnh gắn hoá học (liên kết) với chất mang (Silicagel) tạo nên hợp chất Siloxan CH3 — S i- OH CH HoC ch3 + Cl - Si - R ►- Si - H,c CH Nhóm Silanol Dẫn chất Silicagel clorosilan o CH -S i - R CH Dẫn chất Siloxan I 1 * "I1 I 11 1 1 5» n n n ZD n 11 II 1 1 1 ZD n I I 11 II 11 I II I It 11 1 1 n n r, II I II I I 4-, Hình 2: Hệ ACN : AcOH : Tri : H ,0 ( 40 :1 : 0,3 : 58,7 ) J •t y N IJ h h b tí •* N •* n -L ±- :s« J3 ' II T IIIIIIIIIIIII n 2D Hình ¿"I Hình ~ IIIIIIIIII Hệ ACN : AcOH : Tri : H20 Hê ACN : AcOH : Tri : H20 (50 : 1: 0,3 : 48,7 ) ( 60 : 1: 0,3 : 38,7 ) 19 Bảng 3: Kết Rs hệ dung môi chạy Lưu lượng dòng STT ACN AcOH Tri 60 60 Thời gian (ml/phút) Rs.1 Rs ,2 Rs,3 (phút) 0,3 0,85 0,971 0,993 0,975 11,0 0,3 1,2 1,05 1,44 1,22 10,62 60 0,3 0,5 1,23 1,41 0,98 12,5 50 0,3 0,5 1,05 1,28 0,99 20,28 50 0,3 0,85 1,63 1,61 1,09 17,94 50 0,3 0,85 1,39 2,99 1,35 16,52 40 0,3 1,2 2,04 6,39 6,39 25,5 40 0,3 0,5 7,35 17,28 17,28 50,71 40 0,3 0,85 2,20 8,08 6,96 30,28 Nhận xét: Độ phân giải Rs hệ tăng dần tỷ lệ ACN giảm dần Nhưng thời gian chạy sắc ký tăng lên nhiều Hệ 7, , ( tỷ lệ ACN 40 ) có độ phân giải Rs cao thời gian chạy sắc ký lâu Hệ độ phân giải R S1 =1,39; R S2 =2,99; R S3 =1,35 ; pictách gần có hồn tồn thời gian chạy sắc ký khơng q lâu Do đótrong đề tài chúng tơi chọn hệ dung môi pha động số I ' f) ? ACN : AcOH : T ri: H20 ( 50 : 0,5 : 0,3 : 49,2 ) •Ỉ& Bước sóng: Để tăng độ nhạy phát ketoprofen huyết tương tiến hành xác định cực đại hấp thụ ketoprofen điều kiện giống phân tích mẫu thực Pha dung dịch ketoprofen chuẩn dung mơi pha động Qt phổ Ketoprofen có cực đại hấp thụ bước sóng 253 nm Từ kết trên, điều kiện sắc ký chọn là: - Pha tĩnh : Cột Nucleosil ODS 5|nm (4,6 20 X 250 mm) uv - Pha động: ACN: AcOH : Tri :H20 ( 50 : 0,5 : 0,3 : 48,7) - Lưu lượng dòng: 0,85ml/ phút - Bước sóng : 253 nm - Thể tích mẫu tiêm : 50mcl / dêi ■ 2.2.3 Xây dựng phương pháp định lượng ketoprofen huyết tương Xây dựng đường chuẩn pha động: Pha dãy dung dịch hỗn hợp ketoprofen IS pha động với nồng độ ketoprofen 0,05mcg/ml; 0,2mcg/ml; 0,8mcg/ml; 2mcg/ml; 5mcg/ml nồng độ IS 25mcg/ml.^iịư , Tiến hành chạy sắc ký với điều kiện trang 21 Kết thu biểu thị diện tích pic từ tính tỷ số diện tích pic ketoprofen I S Bảng 4: Kết xây dựng đường chuẩn Ketoprofen pha động Nồng độ ( mcg/ml) 0,05 0,2 0,8 Aịtet 4245 17779 90037 242424 613525 Ais 118674 110665 127804 119413 114211 ^ K e t/IS 0,0357 0,1606 0,7045 2,0301 5,3718 21 Đồ thị 1: Đường chuẩn Ketoprofen pha động Phương trình hồi qui y = 1,085 Trong đó: X - 0,087 y tỷ số diện tích pic ketoprofen IS X nồng độ ketoprofen (mcg/ml) Hệ số tương quan hồi q u i: r = 0,9998 % Xây dựng đường chuẩn huyết tương Chuẩn bị thang chuẩn huyết tương với nồng độ ketoprofen 0,05mcg/ml; 0,2mcg/ml; 0,8mcg/ml; 2mcg/ml; 5mcg/ml, nồng độ IS 25mcg/ml Tiến hành xử lý mẫu sơ đồ hình tiến hành chạy sắc ký với điều kiện trang 21 Kết thu biểu thị diện tích pic, từ tính RKet/Is Bảng : Kết xây dựng đường chuẩn Ketoprofen huyết tương Nồng độ ( mcg /m l) ^Ket 0,05 0,2 0,8 3882 14047 86292 232658 607150 Ajs 105190 105131 105812 104177 106458 I^Ket/IS 0,0369 0,1336 0,8155 2,2333 5,7032 22 Phương trình hồi qui : y = 1,154x - 0,074 Trong : y tỷ số diện tích pic ketoprofen IS X nồng độ ketoprofen ( mcg/ml ) Hệ số tương quan hồi qui : r = 0,9998 y + 0,074 Từ suy ra: X = 1,154 Như vậy, đường chuẩn ketoprofen/ huyết tương có độ dốc lớn (1,154) so với đường chuẩn pha động (1,085), đường chuẩn có xu hướng lên Xác định tính xác phương pháp Lấy mẫu huyết tương có chứa ketoprofen với nồng độ 0,5 mcg/ml; 4mcg /ml chất chuẩn nội có nồng độ 25 mcg /ml x lý mẫu sơ đồ hình tiến hành chạy sắc ký với điều kiện trang 21 Kết thu biểu thị diện tích pic, từ tính tỷ số diện tích pic ketoprofen IS 23 Bảng 6: Kết xác định tính xác phương pháp 4mcg/ml 0,5 mcg/ml \ c ^K et Ais ^ K e t/IS ^Ket Ais ^ K e t/IS 55794 119470 0,4659 484278 115522 4,192 61432 128838 0,4768 483315 116414 4,152 57239 118666 0,4723 475357 114211 4,162 57678 129152 0,4466 483012 115792 4,171 58622 125792 0,4660 482356 116534 4,139 64353 148740 0,4426 476235 115235 4,132 TB 0,4617 TB 4,158 Phương sai 0,0139 Phương sai 0,0219 RSD(%) 3,016 RSD(%) 0,528 Chúng tiến hành xác định độ xác ngày phân tích khác Kết thu sau: Bảng 6: Kết xác định tính xác phương pháp ( ngày phân tích khác) 0,5 m cg/m l rVK^,ýwl TB 0,4922 TB 4,037 Phương sai 0,0123 Phương sai 0,023 RSD (%) 2,5 RSD(%) 0,581 Từ kết thu (trong ngày ngày phân tích) để đánh giá độ lặp lại phương pháp định lượng ketoproíen huyết tương nồng độ 0,5mcg/ml; 4mcg/ml với n = , cho thấy phương pháp có tính xác cao Tính phương pháp: - Mẫu thử: huyết tương người sau uống viên nang ketoproíen 50 mg khoảng 90 phút, thêm IS 25mcg/ml 24 - Mẫu chuẩn: Ketoprofen chuẩn 0,8mcg/ml huyết tương, thêm IS 25 mcg/ml - Mẫu chuẩn + thử: mẫu thử + ketoprofen chuẩn ,8 mcg/ml + IS 25mcg/ml Xử lý mẫu sơ đồ hình Tiến hành chạy sắc ký với điều kiện trang 21 Xác định tỷ số diện tích pic ketoprofen IS, ta có sắc đồ sau: Hình 5: Mẫu trắng Hình : Mẫu chuẩn pha động 25 XI _n _L 7^ n N 'A l w, n Hình 7: Mẫu chuẩn huyết tương Hình : Mẫu thực Kết thu biểu thị tỷ số diện tích pic Ketoprofen chất nội chuẩn Bảng : Kết xác định tính phương pháp Mẫu Chuẩn Thử Thử + Chuẩn 0,704 1,116 1,867 0,684 1,217 1,845 ’ i1 0,712 1,119 1,905 — - ị 1,83 0,728 1,136 0,685 1,122 1,901 Trung bình 0,7032 1,142 1,8696 RSD (%) 2,5506 3,372 1,778 26 1 : Ị 07 • _ 1,8696-1,142 i n n _ irv, 995 Hình 10: Chồng phổ hấp thụ mãu thực mẫu chuẩn đỉnh pic 27 DAD1 A Sig=252,4 Ref=360,5 Hl AU ! |r ! 20 15 10 Hình Hình 10 Kết luận: với điều kiện xử lý mẫu chọn chương trình sắc ký xây dựng cho thấy phương pháp hoàn tồn thích hợp để định lượng Ketoprofen huyết tương # Theo dõi độ ổn định ket mẫu thử theo thời gian bảo quản Mẫu huyết tương người sau uống thuốc 90 phút, bảo quản -30°c, sau thời gian 30,60,90 ngày lấy đem xử lý mẫu sơ đồ hình tiến hành chạy sắc ký với điều kiện trang 21 Tính kết theo phương pháp đường chuẩn xây dựng ngày phân tích Kết thu sau: 28 Bảng 8: Nồng độ ketoprofen theo thòi gian bảo quản STT Thời gian bảo quản (ngày) Nồng độ (mcg/ml) 4,90 30 4,89 60 4.92 90 4,94 Kết luận: Sau 90 ngày bảo quản mẫu thử có chứa ketopren nồng độ ketoproíen huyết tương ổn định 29 30°c, thấy PHẦN 3: KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT Trong đề tài thực số cơng việc sau: Đã hồn thành xây dựng chương trình sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) để định lượng ketoproíen huyết tương người sau uống viên nang 50mg $$ Chiết xuất: khảo sát dung mơi tìm ACN có khả chiết tốt nhất, cho hiệu xuất chiết cao (95,2%), xây dựng qui trình xử lý mẫu thích hợp để chiết ketopren huyết tương, thòi gian chiết ngắn khoảng 60phút, độ lặp lại tốt RSD = 1,934% Chương trình sắc ký: - Cột: khảo sát loại pha tĩnh Cg, c18, phenyl, cho thấy cột c18là phù hợp - Pha động: Khảo sát hệ dung môi pha động chọn hệ cho kết khả quan Khảo sát lượt với hệ vừa tìm với tỷ lệ thành phần lưu lượng dòng khác để chọn điều kiện hợp lý (ketoproíen tách khỏi tạp chất chuẩn nội, thời gian làm mẫu không lâu ) để định lượng ketoprofen huyết tương - Bước sóng: Quét phổ hấp phụ xác định À-max = 253nm Từ chọn điều kiện sắc ký là: Cột: Nucleosil C18 Pha động: ACN: AcOH: Tri: H20 ( 50: 1: 0,3: 48,7 ) Bước sóng: 253nm Lưu lượng dòng: 0,85 ml/phút % Kết quả: - Tính xác: xác định độ lặp lại ngày ngày nồng độ 0,5 mcg/ml; 4mcg/ml cho kết tốt RSD ~ 2,5 ( nồng độ 0,5 m cg/m l), RSD ~ 0,5 ( nồng độ 4mcg/ml), n =6 30 - Tính đúng: Dùng phương pháp thêm, khả tìm lại ketopren chuẩn cho vào 103,5% - Phổ định tính ketoprofen huyết tương có hệ số Match>995 Đã dùng chương trình để theo dõi độ ổn định ketoprofen huyết tương ngưòi theo thời gian bảo quản Kết cho thấy huyết tương để - 30°c sau 30; 60; 90 ngày nồng độ ketoprofen không thay đổi Có thể dùng chương trình sắc ký xây dựng để đánh giá sinh khả dụng tương đương sinh học viên nang thông qua thử nghiệm người tình nguyện 31 TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ y tế (2002) - Dược điển Việt Nam 3, Nhà xuất y học Hà Nội Phạm Gia Huệ, Trần Tử An ( 1998 ) - Hoá phân tích 2- Chế in trung tâm thơng tin Đại học Dược Hà Nội Phạm Luận (1989) - G ĩ sở lý thuyết sắc kỷ lỏng cao áp - HPLC, Trường đại học Tổng hợp Hà Nội, trang 36-58 Tào Duy Cần (1999) - Tra cứu sử dụng thuốc biệt dược nước ngoài, Nhà xuất khoa học kỹ thuật, trang 1101 Nguyễn Duy Cương, Nguyễn Hữu Quỳnh (1999) - Từ điển bách khoa dược học, Nhà xuất từ điển bách khoa Hà Nội Vidal Việt Nam 2001 - Nhà xuất Plushier, trang 462,463,464,467 Công ty dịch vụ y tế tổng hợp Q4 TPHCM - TCCS XNLD Rhone - Poulenc Roger - TCCS BP 93, trang 372,977 10 BP98,trang767,1771 11 Chi Yin Wong, Da Peng Wang (1994) -Drug development and industrial Pharmacy, No 20, page 1077 - 1078 12.European Pharmacopoeia (1997),page 1074 13.J.A.Cordero, L.Alarcon, E.Escribano, R.Obach and J.Domenech (1997) The transdermal Penetration o f a series o f Nonsteroidal Ation flammatory Drugs - Journal of pharmaceutical Sciences, No 86, page 503 John Me Ewen, Masimo De Luca, Alessandro casini, (1998 ) - the Effec 14 o f Food and Antacid on the Bioavailability o f Dexketoprrofen Trometamol - Journal Clinical Pharmacology, page 42 15.J.R.Veraat et al.(1998) - At line Solid- phase extraction fo r capillary electrophoresis application to negatively charged Solutes - Journal of Chromatography B, No 719, page 199 -208 32 16.N Tarimci, D Ermis (1997) - Sustained release characteristics and pharmacokinetic parameters o f ketoprofen suppositories using chitosan International Journal of Pharmaceutics, No 147, page 72,73 17.S Heitmeier, G Blaschke (1999) - Direct assay o f nonopiod analgesic and their metabolites in human urine by capillary ellectrophoresis and capillary electrophoresis - mass spectrometry- Journal of Chromatography B, No 721, page 124 18.USP 24, page 946 33 ... nặng Ketoprofen thuốc đưa vào sản xuất nước ta chưa có tài liệu nước đánh giá định lượng ketoprofen huyết tương Do chúng tơi thực đề tài “ Nghiên cứu xây dựng phương pháp định lượng ketoprofen huyết. .. ketoprofen huyết tương với mục tiêu: -Xây dựng chương trình sắc ký HPLC nhằm định lượng ketoprofen huyết tương cho kết tin cậy lặp lại -Áp dụng định lượng ketoprofen huyết tương người sau uống... Ketum, Ketopron 1.1.8 Các phương pháp định lượng ♦ Phương pháp acid- bazơ: Định lượng ketoprofen nguyên liệu, xác định điểm tương đương thị đỏ phenol [9 ] [18] phương pháp đo điện [ 12 ] •Ỉ&