(Luận án tiến sĩ) Nghiên cứu tổng hợp và đánh giá hoạt tính gây độc tế bào của các hợp chất quinazolin

Nghiên cứu tổng hợp và đánh giá hoạt tính gây độc tế bào của các hợp chất quinazolinNghiên cứu tổng hợp và đánh giá hoạt tính gây độc tế bào của các hợp chất quinazolinNghiên cứu tổng hợp và đánh giá hoạt tính gây độc tế bào của các hợp chất quinazolinNghiên cứu tổng hợp và đánh giá hoạt tính gây độc tế bào của các hợp chất quinazolinNghiên cứu tổng hợp và đánh giá hoạt tính gây độc tế bào của các hợp chất quinazolinNghiên cứu tổng hợp và đánh giá hoạt tính gây độc tế bào của các hợp chất quinazolinNghiên cứu tổng hợp và đánh giá hoạt tính gây độc tế bào của các hợp chất quinazolinNghiên cứu tổng hợp và đánh giá hoạt tính gây độc tế bào của các hợp chất quinazolinNghiên cứu tổng hợp và đánh giá hoạt tính gây độc tế bào của các hợp chất quinazolinNghiên cứu tổng hợp và đánh giá hoạt tính gây độc tế bào của các hợp chất quinazolinNghiên cứu tổng hợp và đánh giá hoạt tính gây độc tế bào của các hợp chất quinazolinNghiên cứu tổng hợp và đánh giá hoạt tính gây độc tế bào của các hợp chất quinazolinNghiên cứu tổng hợp và đánh giá hoạt tính gây độc tế bào của các hợp chất quinazolin

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO CỦA CÁC HỢP CHẤT QUINAZOLIN LUẬN ÁN TIẾN SỸ HÓA HỌC HÀ NỘI – 2019 VIỆN KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN HĨA HỌC NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO CỦA CÁC HỢP CHẤT QUINAZOLIN Chuyên ngành : Hóa học hữu Mã số : 9.44.27.01 Người thực : Đinh Thúy Vân Cơ quan cơng tác : Khoa Hóa học- Đại học Sư phạm- Đại học Thái Nguyên Ngƣời hƣớng dẫn: Hƣớng dẫn 1: GS.TS Nguyễn Văn Tuyến Hƣớng dẫn 2: TS Đặng Thị Tuyết Anh HÀ NỘI – 2019 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu khoa học độc lập riêng tơi cộng Các liệu trình bày, phân tích luận án có nguồn gốc rõ ràng, công bố theo quy định Các kết nghiên cứu luận án tự nghiên cứu, phân tích trình bày cách trung thực, khách quan phù hợp với yêu cầu luận án tiến sĩ Hóa Học Các kết chưa công bố nghiên cứu khác Nghiên cứu sinh Đinh Thúy Vân i LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới người thầy GS.TS Nguyễn Văn Tuyến, người thầy vô tận tậm nhiệt huyết định hướng dìu dắt tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Viện Hóa Học Tơi xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu trường Đại Học Sư Phạm- Đại học Thái Nguyên, Ban tổ chức cán bộ, Lãnh đạo Khoa Hóa học, Bộ mơn Hóa Ứng dụng tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành chương trình học tập cơng việc giao Tơi xin cảm ơn anh, chị, bạn chị em cán NCS phòng Hóa Dược – Viện Hóa Học, người tơi chia sẻ niềm vui, nỗi buồn, lo lắng công việc học tập Tôi xin cảm ơn thầy, cô, anh chị em đồng nghiệp, người cổ vũ giúp đỡ công việc động viên tinh thần để vượt qua khó khăn vất vả suốt thời gian học tập Đặc biệt, lời cảm ơn sâu sắc xin gửi đến gia đình, bố mẹ, anh-chị- em, chồng, Mọi người khơng nguồn động lực mà chỗ dựa vật chất tinh thần, nguồn tiếp sức mạnh lớn giúp NCS vượt qua khó khăn để hồn thiện luận án Xin chân trọng cảm ơn! Hà Nội, tháng năm 2019 Tác giả Đinh Thúy Vân ii MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1.TỔNG QUAN VỀ LỚP CHẤT QUINAZOLINE 1.1.1 Những nghiên cứu nước tổng hợp dẫn xuất quinazoline 1.1.2 Chuyển hóa vị trí C-2 N-3 khung quinazoline 10 1.1.3 Nghiên cứu nước quinazoline 19 1.2 TỔNG QUAN VỀ THUỐC ERLOTINIB 19 1.2.1 Cấu trúc, tính chất vật lý tính chất phổ Erlotinib hydrochloride 19 1.2.2 Hoạt tính sinh học erlotinib hydrochloride .20 1.2.3 Những nghiên cứu nước tổng hợp erlotinib hydrochloride 21 1.2.4 Tình hình nghiên cứu nước tổng hợp erlotinib 28 1.3 PHẢN ỨNG CLICK 29 1.4 KỸ THUẬT PROTEIN DOCKING……………………………………… ….30 1.4.1 Phương pháp Protein docking……………………………………… ………30 1.4.2 Quy trình docking……………………………………………………… … 32 1.5 NHIỆM VỤ CỦA ĐỀ TÀI LUẬN ÁN……………………………………….33 CHƢƠNG 2: THỰC NGHIỆM .34 2.1 HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ .34 2.1.1 Hóa chất dung mơi .34 2.1.2 Định tính phản ứng kiểm tra độ tinh khiết hợp chất sắc kí lớp mỏng .34 2.1.3 Phương pháp thiết bị nghiên cứu 34 2.1.4 Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư .35 2.2 TỔNG HỢP ERLOTINIB VÀ CÁC HỢP CHẤT LAI CỦA NÓ 35 2.2.1 Tổng hợp erlotinib 35 2.2.2 Tổng hợp hợp chất lai erlotinib azide qua cầu nối triazole 40 2.3 TỔNG HỢP CÁC DẪN XUẤT QUINAZOLINE CHỨA NHÓM CROWN ETHERỞ VỊ TRÍ C-6, C-7 42 2.3.1 Quy trình tổng hợp hợp chất 112a, b 42 2.3.2 Quy trình tổng hợp hợp chất 116a, b 44 2.3.3 Quy trình tổng hợp hợp chất 115a, b 45 2.3.4 Quy trình tổng hợp hợp chất 117a-d 46 iii 2.3.5 Quy trình tổng hợp hợp chất 119a-d 47 2.4 TỔNG HỢP CÁC HỢP CHẤT LAI CỦA DẪN XUẤT CROWN ETHERQUINAZOLINE-4-AMINE (119A-D) VỚI CÁC AZIDE QUA CẦU NỐI TRIAZOLE 49 2.4.1 Tổng hợp hợp chất lai N-(3-ethynylphenyl)quinazoline-4-amine (119a) với azide qua cầu nối triazole 50 2.4.2 Tổng hợp hợp chất lai N-(3-ethynylphenyl)-[1,3]dioxolo[4,5-g]quinazoline8-amine (119b) 51 2.4.3 Tổng hợp hợp chất lai N-(3-ethynylphenyl)-7,8-dihydro-[1,4]dioxino[2,3g]quinazoline-4-amine (119c) 54 2.4.4 Tổng hợp hợp chất lai N-(3-ethynylphenyl)-8,9-dihydro-7H-[1,4] dioxepino [2,3-g] quinazoline-4-amine (119d) 56 2.5 HOẠT TÍNH CHỐNG UNG THƯ CỦA CÁC DẪN XUẤT QUINAZOLINE 57 2.6 NGHIÊN CỨU DOCKING CÁC HỢP CHẤT TỔNG HỢP ĐƯỢC .58 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 59 3.1 MỤC TIÊU CỦA ĐỀ TÀI 59 3.2 TỔNG HỢP ERLOTINIB HYDROCLORIDE 61 3.2.1 Tổng hợp 3,4-bis(2-methoxyethoxy)-benzoic acid (107) .64 3.2.2 Tổng hợp 3,4-bis(2-methoxyethoxy)benzonitrile (108) 66 3.2.3 Tổng hợp 4,5-bis(2-methoxyethoxy)-2-nitrobenzonitrile 102 67 3.2.4 Tổng hợp 2-amino-4,5-bis(2-methoxyethoxy)-benzonitrile 102 70 3.2.5 Nghiên cứu tổng hợp erlotinib 105 73 3.2.6 Tổng hợp muối erlotinib hydrocloride 93 .80 3.3 TỔNG HỢP CÁC HỢP CHẤT LAI CỦA ERLOTINB- TRIAZOLE 83 3.4 TỔNG HỢP CÁC HỢP CHẤT LAI CỦA DẪN XUẤT QUINAZOLINE CHỨA NHĨM CROWN ETHERỞ VỊ TRÍ C-6, C-7 88 3.4.1 Tổng hợp hợp chất 119a, 119b từ benzaldehyd 89 3.4.2 Tổng hợp hợp chất 119c, 119d từ acid 3,4-dihidroxy benzoic (106) 90 3.5 TỔNG HỢP CÁC HỢP CHẤT LAI QUINAZOLINE- TRIAZOLE 95 3.5.1 Tổng hợp hợp chất lai dẫn xuất 119a 96 3.5.2 Tổng hợp hợp chất lai dẫn xuất 119b 100 3.5.3 Tổng hợp hợp chất lai dẫn xuất 119c 104 3.5.4 Tổng hợp hợp chất lai dẫn xuất 119d 108 iv 3.6 KHẢO SÁT HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO CỦA CÁC HỢP CHẤT QUINAZOLINE, QUINAZOLINE-TRIAZOLE 110 KẾT LUẬN 112 ĐIỂM MỚI CỦA LUẬN ÁN 116 CÁC CƠNG TRÌNH LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 117 TÀI LIỆU THAM KHẢO 118 v DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ 1.1: Quy trình tổng hợp dẫn xuất crown etherquinazoline Sơ đồ 1.2: Tổng hợp dẫn xuất gefitinib với nhóm dị vòng cạnh Sơ đồ 3: Quy trình tổng hợp dẫn xuất morpholin-3-on chứa khung quinazoline Sơ đồ 1.4: Quy trình tổng hợp hợp chất oxazine-quinazoline oxazepine-quinazoline Sơ đồ 1.5: Tổng hợp 4-anilino-6-bromoquinazoline dẫn xuất 6-fluorophenyl chúng 10 Sơ đồ 1.6: Quy trình tổng hợp dẫn xuất quinazoline 11 Sơ đồ 1.7: Tổng hợp số quinazoline-isatine liên hợp 11 Sơ đồ 1.8: Tổng hợp số semicacbazide semicabazone chứa khung quinazoline từ acid anthranilic 12 Sơ đồ 1.9: Quy trình tổng hợp hợp chất quinazoline chứa nhóm 1-adamatanamine 14 Sơ đồ 1.10: Quy trình tổng hợp hợp chất quinazoline chứa nhóm 1adamatanecarbonyl 14 Sơ đồ 1.11: Tổng hợp hợp chất ức chế kép EGFR/HDAC HER2/HDAC 16 Sơ đồ 1.12: Quy trình tổng hợp hợp chất lai ức chế kép VEGFR-2/HDAC 17 Sơ đồ 1.13: Quy trình tổng hợp chất ức chế kép HDAC/RTK 17 Sơ đồ 1.14 : Tổng hợp N’- (quinazoline-4-yl) isonicotinohydrazide sử dụng 4chloroquinazoline, isonicotinohydrazide 18 Sơ đồ 1.15: Tổng hợp erlotinib từ methyl-3,4-dihydroxybenzoat 22 Sơ đồ 1.16: Tổng hợp erlotinib hydrochloride từ hợp chất 98 23 Sơ đồ 1.17: Tổng hợp erlotinib hydrochloride từ hợp chất 102 23 Sơ đồ 1.18 Cơ chế hình thành hợp chất erlotinib 105 từ hợp chất 104 3-ethynyl aniline 24 Sơ đồ 1.19: Tổng hợp erlotinib từ hợp chất 3,4-dihydroxybenzoic acid 25 Sơ đồ 1.20: Cơ chế hình thành erlotinib từ hợp chất 104 26 Sơ đồ 1.22: Tổng hợp erlotinib hydrochloride theo Leila Barghi 28 Sơ đồ 1.23: Phản ứng “click” nhiệt 29 Sơ đồ 1.24: Phản ứng “click” dùng xúc tác Cu(I) 29 Sơ đồ 1.24: Phản ứng “click” dùng xúc tác phức [Cp*(RuCl(PPh3)2] 30 Sơ đồ 3.1: Quy trình tổng hợp erlotinib hydrocloride 93 60 vi Sơ đồ 3.2: Tổng hợp hợp chất lai dẫn xuất quinazoline 119a-d với azide qua cầu nối triazole 61 Sơ đồ 3.3: Tổng hợp hợp chất lai dẫn xuất quinazoline 119a-d với azide qua cầu nối triazole………………………………………………………… 61 Sơ đồ 3.4: Tổng hợp erlotinib 105 từ 2-amino-4,5-bis(2-methoxy-ethoxy) benzonitrile 103………………………….………………………………… …….61 Sơ đồ 3.5: Tổng hợp 3,4-bis(2-methoxyethoxy)benzoic acid 107 64 Sơ đồ 3.6: Tổng hợp 3,4-bis(2-methoxyethoxy)benzoic acid 107 theo quy trình one-pot 66 Sơ đồ 3.7: Tổng hợp 3,4-bis(2-methoxyethoxy)benzonitrile 108 66 Sơ đồ 3.8: Tổng hợp hợp chất 4,5-bis(2-methoxyethoxy)-2-nitrobenzonitrile 102 68 Sơ đồ 3.9: Tổng hợp hợp chất 103 70 Sơ đồ 3.10: Tổng hợp hợp chất 103 71 Sơ đồ 3.11: Tổng hợp hợp chất formamidine 104 73 Sơ đồ 3.12: Tổng hợp erlotinib 105 từ hợp chất trung gian formamidine 104 75 Sơ đồ 3.13: Tổng hợp erlotinib hydrocloride 93 80 Sơ đồ 3.14: Sơ đồ tổng hợp hợp chất 119a, 119b từ 3,4-dihidroxy benzoic 89 Sơ đồ 3.15: Sơ đồ tổng hợp hợp chất 119c, 119d từ 3,4-dihidroxy benzoic 90 vii DANH MỤC HÌNH Hình 1: Cấu trúc Quinazoline Hình 2: Cấu trúc hóa học số hợp chất quinazoline ức chế EGFR Hình 1.3: Thiết kế tổng hợp hợp chất dị vòng [1,4]dioxino[2,3-f]quinazoline Hình 1.4: Cấu trúc erlotinib hydrocloride 20 Hình 3.1: Phổ IR hợp chất 3,4-bis(2-methoxyethoxy)benzonitrile 108 67 Hình 3.2: Phổ IR hợp chất 4,5-bis(2-methoxyethoxy)-2-nitrobenzonitrile 102 69 Hình 3.3: Phổ 1H-NMR hợp chất 4,5-bis(2-methoxyethoxy)-2-nitrobenzonitrile 102 69 Hình 3.4: Phổ giãn 1H-NMR hợp chất 102 70 Hình 3.5: Phổ IR hợp chất 2-amino-4,5-bis(2-methoxyethoxy)-benzonitrile 103 72 Hình 3.6: Phổ 1H-NMR hợp chất trung gian 104 74 Hình 3.7: Phổ giãn 1H-NMR hợp chất formamidine 104 75 Hình 3.8: Phổ 1H-NMR hợp chất phenylbenzamidine 109 76 Hình 3.9: Phổ giãn 1H-NMR hợp chất phenylbenzamidine 109 76 Hình 3.10: Phổ giãn 1H-NMR hợp chất phenylbenzamidine 109 77 Hình 3.11: Phổ 1H NMR hợp chất erlotinib 105 78 Hình 3.12: Phổ giãn 1H-NMR hợp chất erlotinib 105 78 Hình 3.13: Phổ giãn 1H-NMR hợp chất erlotinib 105 79 Hình 3.14 Phổ MS hợp chất erlotinib 105 79 Hình 3.15: Phổ 1H-NMR hợp chất erlotinib hydrochloride 93 81 Hình 3.16: Phổ giãn 1H-NMR hợp chất erlotinib hydrochloride 93 82 Hình 3.17: Phổ giãn 1H-NMR hợp chất 93 82 Hình 3.18: Phổ giãn 13C-NMR hợp chất 93 83 Hình 3.19: Cấu trúc hóa học số đặc trưng vật lý hợp chất 84 Hình 3.20: Phổ 1H-NMR 105b 85 Hình 3.21: Phổ 1H-NMR giãn hợp chất 105b 86 Hình 3.22: Phổ 1H-NMR giãn hợp chất 105b 86 Hình 3.23: Phổ 13C-NMR hợp chất 105b 87 Hình 3.24: Phổ IR hợp chất 105b 88 Hình 3.25: Phổ HR-MS hợp chất 105b 88 Hình 3.26: Cấu trúc hợp chất 4-aminoquinazoline chứa nhóm crown etherở vị trí C6, C-7 119a-d 91 Hình 3.27: Phổ 1H-NMR hợp chất 119a 92 viii Hình 3.28: Phổ 1H-NMR giãn hợp chất 119a 92 Hình 3.29: Phổ 1H-NMR hợp chất 119b 93 Hình 3.30: Phổ 1H-NMR giãn hợp chất 119b 94 Hình 3.31: Phổ 1H-NMR giãn hợp chất 119c 94 Hình 3.32: Cấu trúc hóa học đặc trưng vật lí hợp chất lai 120a-d 97 Hình 3.33 : Phổ 1H-NMR giãn hợp chất 120a 98 Hình 3.34: Phổ 13C-NMR hợp chất 120a 99 Hình 3.35: Phổ 13C-NMR giãn hợp chất 120d 99 Hình 3.36: Cấu trúc hợp chất 121d tương tác HMBC 100 Hình 3.37: Phổ giãn HMBC hợp chất 121d 100 Hình 3.38: Phổ giãn HMBC hợp chất 121 d 102 Hình 3.39: Phổ HSQC hợp chất 121d 103 Hình 3.40: Phổ IR chất 121d 103 Hình 3.41: Phổ 1H-NMR giãn chất 121d 104 Hình 3.42: Cấu trúc phân tử hợp chất 122a 105 Hình 3.43: Phổ HMBC giãn hợp chât 122a 106 Hình 3.44: Phổ HSQC hợp chất 122a 107 Hình 3.45: Cấu trúc hóa học đặc trưng vật lí hợp chất lai 123a-c 108 Hình 3.46: So sánh tương đồng tín hiệu phổ 1H-NMR hai chất 123a 123c 109 Hình 3.47: Sơ đồ 2D thể tương tác docking hợp chất 120d, 122a, 122b, 123c với vị trí hoạt động đích protein EGFR…………………………… 112 Hình 3.48: Cấu trúc số hợp chất lai có hoạt tính tốt 114 ix DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1: Khảo sát phản ứng tổng hợp hợp chất 110 65 Bảng 3.2: Ảnh hưởng tác nhân khử hóa đến hiệu suất phản ứng amine hóa 71 Bảng 3.3: Phân tích phổ HMBC HSQC chất 121d 101 Bảng 3.4: Phân tích phổ HMBC HSQC chất 122a 105 Bảng 3.5: Hoạt tính gây độc tế bào hợp chất tổng hợp 110 x DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DCC N,N'-Dicyclohexylcarbodiimide THF Tetrahydrofuran AND acid deoxyribonucleic Boc2O Di-tert-butyl pyrocarbonate DCM Diclometan HDAC Histon deaxetylase AZT Zidovudin DMF Dimetylfoocmamit DIPEA N,N-Diisopropylethylamine TBAF Tetrabutylammonium fluoride IR Infra-red (phổ hồng ngoại) NMR Nuclear megenic resonance HRMS High resonance mass spectrometry (phổ khối phân giải cao) HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation HSQC Heteronuclear single-quantum correlation spectroscopy EC50 Half maximal effective concentration IC50 The half maximal inhibitory concentration Hep-G2 Tế bào ung thư gan Hela Tế bào ung thư cổ tử cung HT-29 Tế bào ung thư ruột kết PC3 Tế bào ung thư tiền liệt tuyến B16 Tế bào ung thư da A549 Tế bào ung thư phổi Lu Tế bào ung thư phổi tế bào nhỏ A2780 Tế bào ung thư buồng trứng MCF7 Tế bào ung thư vú 518A2 Tế bào ung thư da 8505C Tế bào ung thư tuyến giáp A375 Tế bào ung thư da MGC803 Tế bào ung thư dày xi Bcap-37 Ung thư biểu mô cổ tử cung EGFR Epidermal Growth Factor Receptor (Thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu bì) VEGFR Vascular Epidermal Growth Factor Receptor xii MỞ ĐẦU Theo số liệu thống kê Globocan, biểu đồ bệnh ung thư toàn cầu năm 2008, ung thư phổi chiếm 13% tổng số ca bệnh 18,2% số ca tử vong Ung thư phổi bệnh nguy hiểm giới, ung thư phổi khơng phải tế bào nhỏ (UTPKPTBN) phổ biến xem bệnh nguy hiểm (Ung thư phổi không tế bào nhỏ bắt đầu hình thành từ tế bào khỏe mạnh phổi Vì lý đó, phần lớn hút thuốc tiếp xúc thường xuyên với khói thuốc lá, tế bào khỏe mạnh phân chia khơng kiểm sốt, từ hình thành khối u phổi Khối u lành tính ác tính) Căn bệnh gia tăng đáng kể nước thu nhập thấp trung bình Tại Việt Nam, ung thư phổi đứng hàng thứ số ca bệnh số lượng bệnh nhân tử vong tổng số loại ung thư hàng năm hai giới nam nữ Ung thư phổi chia làm hai loại: ung thư phổi tế bào nhỏ UTPKPTBN Mỗi loại phát triển theo cách khác hướng điều trị khác Trong đó, UTPKPTBN chiếm khoảng 80% tổng số ca bệnh ung thư phổi Việc điều trị UTPKPTBN thường biết đến với phương pháp hóa trị xạ trị Tuy nhiên, liệu pháp có số hạn chế khả kéo dài thời gian sống bệnh nhân thường ngắn, thông thường năm kèm với chất lượng sống bị ảnh hưởng nặng nề Người bệnh phải gánh chịu nhiều tác dụng phụ thuốc, đặc biệt tác dụng phụ tủy xương, gây tình trạng thiếu máu, chảy máu giảm sức đề kháng thể dẫn đến khả nhiễm khuẩn huyết làm cho bệnh nhân sớm tử vong Với UTPKPTBN có đột biến hoạt hóa EGFR làm cho bệnh với mức độ ác tính mạnh thời gian sống bệnh nhân ngắn hơn, khả đáp ứng với hóa trị liệu thơng thường Quinazoline lớp chất đầy tiềm thiết kế tổng hợp loại thuốc chống ung thư theo chế ức chế enzyme kinase [1-4] Gefitinib (Iressa), erlotinib (Tarceva), lapatinib (Tykerb) vandetanib (Caprelsa) hợp chất quinazoline tiêu biểu đưa vào sản xuất thuốc điều trị ung thư Trong Gefitinib Erlotinib thuốc hoá trị liệu thụ thể yếu tố tăng sinh biểu bì (EGFR) hệ sử dụng để điều trị ung thư phổi không tế bào nhỏ Thuốc Erlotinb dẫn xuất quinazoline có tên thương mại Tarceva, sản xuất hãng dược phẩm Hoffmann - La Roche Thuốc sử dụng có hiệu cao cho điều trị bệnh ung thư phổi khơng phải tế bào nhỏ (UTPKPTBN) có đột biến hoạt hóa EGFR Đây phương pháp đột phá điều trị UTPKPTBN tạo hội kéo dài thời gian sống với chất lượng sống cao Ở Việt Nam, thuốc Tarceva có thành phần erlotinib hydrochloride chưa sử dụng rộng rãi, trước hết chi phí điều trị Tarceva đắt tiền, 2.000 USD/chu kỳ điều trị (một chu kỳ =1 tháng), giá bán thị trường Việt Nam khoảng 42 triệu đồng/ lọ/30 viên loại 150mg Trong nhiều nghiên cứu trước đó, hợp chất 1,2,3-triazole cho hoạt tính chống ung thư, kháng khuẩn kháng nấm mạnh Triazole hợp chất dị vòng thơm năm cạnh với nguyên tử nitơ có moment lưỡng cực cao, dễ dàng tham gia trình hình thành liên kết hydro tương tác lưỡng cực với ADN, protein tế bào Hợp chất dị vòng không bị thủy phân môi trường axit bazơ khơng bị phá huỷ q trình khử oxy hóa Với tính ưu việt mặt hố học hoạt tính sinh học, 1,2,3-triazole vừa tác nhân vừa cầu nối lý tưởng để lai hố với lớp chất có dược tính khác ví dụ 4-aminoquinazoline Vì vậy, đề tài “Nghiên cứu tổng hợp đánh giá hoạt tính gây độc tế bào hợp chất quinazolin” hướng nghiên cứu có ý nghĩa khoa học thực tiễn Mục tiêu luận án: Nghiên cứu cải tiến quy trình tổng hợp thuốc erlotinib hydrocloride Nghiên cứu tổng hợp xác định cấu trúc dẫn xuất quinazoline Nghiên cứu tổng hợp xác định cấu trúc hợp chất lai dẫn xuất quinazoline với azide qua cầu nối triazole Nghiên cứu thử hoạt tính gây độc tế bào hợp chất lai tổng hợp ba dòng tế bào ung thư người bao gồm KB (ung thư biểu mô, Hep-G2 (ung thư gan) Lu (ung thư phổi tế bào nhỏ) CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ LỚP CHẤT QUINAZOLINE Quinazoline hợp chất hữu với cơng thức C8H6N2 Nó dị vòng thơm với cấu trúc lưỡng tính bao gồm vòng benzen vòng pyrimidine Quinazoline phân tử phẳng Nó đồng phân với diazanaphthalen khác nhóm phụ benzodiazine: cinnoline, quinoxaline phthalazine Hình 1.1: Cấu trúc Quinazoline Quinazoline chất rắn tinh thể màu vàng sáng, hòa tan nước, gọi 1,3-diazanaphthalene, tên gọi quinazoline xuất phát từ dẫn xuất aza quinoline Mặc dù phân tử quinazoline mẹ đề cập tài liệu kỹ thuật dẫn xuất thay quan tâm nghiên cứu tổng hợp cho mục đích y học thuốc chống sốt rét thuốc chống ung thư Bằng cách ức chế enzim Tyrosine Kinase [1-4] thuốc chống ung thư tổng hợp từ lớp chất Quinazoline đem lại đột phá trị liệu ung thư Một số hợp chất quinazoline tiêu biểu Gefitinib (Iressa), erlotinib (Tarceva), lapatinib (Tykerb) vandetanib (Caprelsa) đưa vào sản xuất thuốc điều trị ung thư Trong Gefitinib erlotinib hai thuốc hoá trị liệu thụ thể yếu tố tăng sinh biểu bì (EGFR) thuộc hệ sử dụng để điều trị ung thư phổi không tế bào nhỏ Lapatinib dùng làm thuốc điều trị bệnh ung thư vú khối u rắn khác cách ức chế tyrosine kinase kép HER2/neu EGFR Vandetanib dùng điều trị bệnh ung thư tuyến giáp thể tuỷ di căn, cách ức chế kinase số thụ thể tế bào, chủ yếu mạch máu nội mạc thụ thể yếu tố tăng trưởng (VEGFR), EGFR kinase RET-tyrosine Tuy nhiên, hiệu thuốc bị giới hạn nhóm nhỏ bệnh nhân không đồng phân tử bên khối u khối u với nhau, khả đáp ứng thuốc kháng thuốc đột biến thụ thể [5-9] Vì vậy, nghiên cứu thiết kế tổng hợp hợp chất với mục tiêu ức chế EGFR ức chế đa chức cần thiết Hiện nay, dẫn xuất 4anilinoquinazoline chủ yếu tổng hợp cách đưa nhóm khác vào vị trí C-6, C-7 khung quinazoline vòng aniline nhằm tổng hợp hoạt chất để tìm kiếm dẫn chất có hoạt tính cao Chỉ có số nhỏ cơng trình nghiên cứu tổng hợp hợp chất lai quinazoline với chất chống ung thư theo chế tác dụng khác nhận kết đáng khích lệ O F Cl F N HN O Cl N O O O N N N N Erlotinib F Lapatinib Br F HN O HN N O HN O N O Gefitinib O O HN O S HN O O N O O O O HN HN N N N N Cl N O N O Icotinib Vandetanib Carnetinib F O O N HN HN O O F O Cl O N Cl HN HN N N O Afatinib Cl Cl N N Dacomitinib Hình 1.2: Cấu trúc hóa học số hợp chất quinazoline ức chế EGFR Trong phân tử 4-anilinoquinazoline, khung 4-anilinoquinazoline định khả ức chế EGFR, nhóm vị trí C-6 C-7 định tính chất hóa lý hợp chất [14-16] Các nhóm aniline vị trí C-4 khung quinazoline lựa chọn phù hợp để tạo tương tác kỵ nước quan trọng nhằm ức chế EGFR hiệu Những nghiên cứu tương quan cấu trúc hoạt tính sinh học (SAR) hợp chất quinazoline kích thước chất gốc aniline định ức chế chọn lọc enzym kinase, nhóm ưa nước vị trí C-6 khung quinazoline làm cải thiện tính chất vật lý có lợi cho tác dụng dược lý thuốc [15, 16] Các nhóm arylamino, phổ biến 3-ethynylphenylamino 3-chloro-4-flouro-phenylamino, thường dùng để thiết kế tổng hợp chất ức chế EGFR Với lợi việc thiết kế tổng hợp để đưa nhóm khác vào vị trí C-6, C-7 C-4 khung quinazoline hướng nghiên cứu nhiều tiềm 1.1.1 Những nghiên cứu nước tổng hợp dẫn xuất quinazoline 1.1.1.1 Chuyển hóa vị trí C-6, C-7 C4-NH khung quinazoline Những nghiên cứu trước erlotinib cho thấy rõ vai trò quan trọng nhóm chức ether gắn với khung quinazoline Các hợp chất tạo có hoạt tính chống ung thư mạnh Kế thừa phát triển nghiên cứu trước nhóm tác giả Yinxiang Wang vào năm 2012 tổng hợp dãy crown ether gắn với khung quinazoline phương pháp truyền thống từ nguyên liệu ban đầu metyl 3,4dihydroxy-benzoat qua bước phản ứng (sơ đồ 1.1) [17] Kết thử hoạt tính dẫn xuất crown ether quinazoline dòng enzym Abl Arg kinaza cho thấy hợp chất 7a có hoạt tính mạnh Hợp chất 7a (Icotinib) ức chế tăng sinh loạt xenograft khối u rắn người với liều lượng khoảng 50-100 mg/kg (một lần/ngày) Icotinib đưa vào thử nghiệm lâm sàng độc lập để điều trị bệnh nhân ung thư phổi tế bào nhỏ [18, 19] Những công bố gần nhấn mạnh icotinib cho tác dụng tương tự gefitinib, đồng thời có khả dung nạp tốt bệnh nhân ung thư phổi tế bào nhỏ điều trị trước với tác nhân hóa trị liệu khác [19] O HO O Lg OCH3 a HO O O OCH3 B b O O OCH3 B O O O Lg OCH3 B c NO2 O NH2 R OH O d Cl O N B O N e O R N B HN O H2N f N N B O N Sơ đồ 1.1: Quy trình tổng hợp dẫn xuất crown ether quinazoline [17] (a) K2CO3, DMF, 90oC, h, 24-45%; (b) HNO3/ H2SO4, AcOH, 72%; (c) H2, Pd/C, 96%; (d) NH2CHO/HCOONH4, 165oC, 80%; (e) POCl3, 77%; (f) i-PrOH/DMF, 72% HN O O O O N N 7a (Icotinib) Nhóm morpholine gefitinib không tham gia vào tương tác với EGFR lựa chọn ngẫu nhiên mật độ electron thấp Thay nhóm morphonline nhóm giàu điện tử vị trí C-6 khung 4anilinoquinazoline nhằm tăng cường hoạt tính gefitinib, điển hình với nhóm acrylamit vị trí C-6 thu chất ức chế EGFR không thuận nghịch [20] hay chất ức chế EGFR-T790M [21] R1 R N H HN H N () n X N Br N X O N N n = 1; X = S; R1 = n = 2; X = O; R1 = N R3 R2 HN , N S N R1 = H, OMe, CH2NMe2, O(CH2)3morph, R2 = Br, Cl, Me R3 = H, F, Me X = H, F, Me O H O N S O Các dẫn xuất gefitinib chứa nhóm dị vòng cạnh mạch nhánh C-6 khung quinazoline tổng hợp theo sơ đồ 1.2 [22] Các hợp chất 12a-g, 13ag cho hoạt tính ức chế EGFR tương đối tốt Trong đó, hợp chất 13g với nhóm 2-oxa-6-azaspiro[3,4]octan (IC50 = 0.016 μM) cho hoạt tính ức chế EGFR cao gefitinib (IC50 = 0.023 μM) khả kháng u tương đương với gefitnib nhờ độ tan nước tốt so với dẫn xuất khác Sơ đồ 1.2: Tổng hợp dẫn xuất gefitinib với nhóm dị vòng cạnh [22] Trong cơng trình cơng bố Zuo S.J [23], nhóm arylure kết hợp với amine bậc ba thay cho nhóm morpholine phân tử gefinitib tạo thành dẫn xuất 14 có khả ức chế EFGR-TK, đồng thời thể hoạt tính chống ung thư lý thú Hợp chất 14a (R1 = MeN(CH2CH2)2N; R2 = CH2; R3 = 3-Cl4-(3-FBnO)), 14b (R1 = (CH2)2N; R2 = CH2; R3 = 3-CF3), 14c (R1 = (CH2)4N; R2 = CH2; R3 = 3-CF3) 14d (R1 = (CH2)5N; R2 = CH2; R3 = 3-CF3) cho hoạt tính kháng tế bào A431, A549 tốt nhiều so với gefitinib với giá trị IC50 ~ µM R3 H N R HN H N N O R N 14 R1 = N ; N ; N ; N N ; O N ; N C-R2 = -; CH2; C=O R3 = 3-Cl-4-F; 3-Cl-4-(3-FBnO); 3-Cl-4-OCH3; 3-CF3; 3,4-diF; 3-ethynyl; 3-CON(CH2)4; Mới đây, với ý tưởng đóng vòng nội phân tử vị trí C-6 C-7 hợp chất gefitinib, nhóm nghiên cứu Hu Liming thiết kế tổng hợp dẫn xuất gefitinib từ hợp chất chìa khóa trung gian methyl 3-oxo-3,4-dihydro-2Hbenzo[b][1,4]oxazin-6-carboxylat 19 [24] Từ nguyên liệu ban đầu 3-nitro-4hydroxy benzoic acid thu hợp chất quinazoline chứa khung morpholin-3on 25, 26 (tổng hợp qua 10 bước, sơ đồ 1.3) cho hoạt tính ức chế EGFR mong đợi Hầu hết dẫn xuất tổng hợp cho giá trị IC50 EGFRwt nhỏ µM, đó, hợp chất 26a (X = O, R1 = Cl, R2 = Cl) cho giá trị thấp IC50 = 53.1 nM Nhóm nghiên cứu dẫn xuất 26 chứa nhóm 3-morpholinopropyl (X = O) cho hoạt tính tốt so với dẫn xuất 25 3(piperidin-1-yl)propyl (X = CH) Điều cho thấy việc đưa nhóm ưa nước vào vị trí C6 khung quinazoline làm tăng khả ức chế EGFR Ngoài ra, hợp chất 26a (R1 = Cl, R2 = Cl) 26b (R1 = ethynyl, R2 = H) ức chế đột biến EGFRT790M/L858R có hoạt tính kháng hai dòng tế bào H358, A549 tốt so với gefinitib erlotinib O O2N OH HO Cl 15 O (e) (a) N O O O2N O NO2 O HO 20 X = CH (f) 16 (b) X O O2N O O O (c) O O H N (d) O O H N (g) O O N O X=O NO2 O O O N O O 17 18 O O 19 NO2 21 (h) X X R2 N R1 HN O N O X N (k) Cl O N N N N (i) O (j) O N O 25 X = CH 26 X = O X N N N O N N O O 23 24 O O NH NH2 22 Sơ đồ 1.3: Quy trình tổng hợp dẫn xuất morpholine-3-on chứa khung quinazoline [24] (a) CH3OH, H2SO4, đun hồi lưu; (b) ethyl bromoacetat, K2CO3, DMF, 70oC; (c) Fe, HAc, 70oC; (d) HAc/HNO3; (e) 1-bromo-3-cloropropan, Cs2CO3, CH3CN, 25-30oC; (f) piperidine, K2CO3, KI, DMF, 25-30oC; (g) 4-(3-chloropropyl)morpholine, K2CO3, KI, DMF, 80oC; (h) Fe, HAc, EtOH/H2O; (i) formamid acetat, EtOH, đun hồi lưu; (j) POCl3, 120oC; (k) aniline, i-PrOH, đun hồi lưu Nhóm tác giả Hu Liming áp dụng phản ứng đóng vòng nội phân tử cho hợp chất PD135035 dẫn xuất để tổng hợp hợp chất dị vòng [1,4]dioxino[2,3-f]quinazoline 27 (hình 1.3) [25] Các hợp chất dị vòng 27 xem chất ức chế EGFRwt EGFRT790M/L858R tiềm với IC50 < 50 nM, đồng thời chúng có khả ức chế tế bào ung thư H358 A549 R3 HN O O R2 O HN Br O N R1 N N O N 27 PD153035 Hình 1.3: Thiết kế tổng hợp hợp chất dị vòng [1,4]dioxino[2,3-f]quinazoline [25] Tương tự, phản ứng đóng vòng nội phân tử áp dụng dẫn xuất erlotinib (sơ đồ 1.4) Các hợp chất oxazin-quinazoline 31 oxazepinequinazoline 32 với nhóm R dị vòng chứa nitơ cho hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư N87, A431, H1975, BT474 Calu-3 (IC50 = 0.0462.06 µM) mạnh erlotinib (IC50 = 0.75-10 µM) gefitinib (IC50 = 0.36-1.00 µM) [26] HN H2N (a) N Cl ( ) n O H N HN O N ( )n N 28 29 O Br (b) N HN ( )nN O R (c) N ( )n N O HN N O N N 31 n =1 32 n = 30 Sơ đồ 1.4: Quy trình tổng hợp hợp chất oxazin-quinazoline oxazepinquinazoline [26] o (a) K2CO3, KI, DMF, 110 C, 24 h; (b) clorua bromocrotonic acid, Et3N, DCM, 35oC, 24 h; (c) amine, DMF, 30oC, h Những nghiên cứu trước cho thấy diện nguyên tử halogen vòng aniline cải thiện đáng kể hoạt tính sinh học dẫn xuất 4anilinoquinazoline Đặc biệt diện F phân tử làm tăng ổn định trao đổi chất khả gắn kết độ thấm màng Trên sở nhóm nghiên cứu tác giả Malose Jack Mphahlele [27] tiến hành tổng hợp loạt dẫn xuất 4-(halogenophenylamino)-6-bromoquinazoline 6-(4-fluorophenyl) từ dẫn xuất NH-4 (3H)–oxo 33a-33b O Cl Br NH N NHAr Br (i) (ii) N R N F Br N R N NHAr (iii) N R N 33a (R=H) 34a (R=H) 33b (R=4  ClC 6H -) 34b (R=4  ClC 6H -) 35a - f (R=H) 35g - l (R=4  ClC 6H -) a: R = H ; Ar=2-FC6H4-; g: R = 4-ClC6H4-; Ar = 2-FC6H4-; R 36a - d  f (R=H) 36g - j & 36l (4 - ClC 6H 4) b: R = H; Ar = 3-FC6H4-; h: R = 4-ClC6H4-; Ar = 3-FC6H4-; c: R = H; Ar =4-FC6H4-; i: R = 4-ClC6H4-; Ar =4-FC6H4-; d: R = H; Ar = 3-ClC6H4-; j: R = 4-ClC6H4-; Ar = 3-ClC6H4-; e: R = H; Ar = 4-BrC6H4-; k: R = 4-ClC6H4-; Ar = 4-BrC6H4-; f: R = H; Ar = 2,4-diFC6H3-; l: R = 4-ClC6H4-; Ar = 2,4-diFC6H3-; Sơ đồ 1.5: Tổng hợp 4-anilino-6-bromoquinazoline dẫn xuất 6fluorophenyl chúng [27] ◦ (i) POCl3, Et3N, hồi lưu, h; (ii) NH2Ar, HCl, THF-iPrOH, 70 C, h; (iii) 4-FC6H4B (OH) 2, ◦ PdCl2 (PPh3)2, Cs2CO3, THF-iPrOH, 70 C, h Kết nghiên cứu nhóm tác giả hầu hết hợp chất tổng hợp thể hoạt động ức chế chống lại MCF-7 HeLa Dựa kết độc tế bào in vitro cho thấy diện 4-fluorophenyl- 2,4difluorophenylaniline tốt cho độc tế bào hai dòng tế bào Sự kết hợp 2-(4-chlorophenyl) 6-(4-fluorophenyl) nhóm làm tăng hoạt động chống lại tế bào HeLa nhiều dòng tế bào MCF-5 Hợp chất 35l khơng thể hoạt động chống tăng sinh mạnh mẽ chống lại hai dòng tế bào ung thư, mà cho thấy hoạt động ức chế đáng kể (LC50 = 37,66 nM) EGFR so với thuốc Gefitinib (LC50 = 31,44 nM) Nghiên cứu phân tử (trong silico) nhà khoa học cho hợp chất tổng hợp gắn kết độc đáo với khu vực EGFR, với mối quan hệ ràng buộc tương đương với Gefitinib Các kết cho thấy có mặt chất thay 2-(4-halogenophenyl) làm tăng độc tính tế bào in vitro hoạt tính ức chế chống lại EGFR-TK Do việc chuyển hóa vị trí C-2 hướng nghiên cứu nhà nghiên cứu quan tâm 1.1.2 Chuyển hóa vị trí C-2 N-3 khung quinazoline Trong nghiên cứu gần nhóm tác giả Hatem A Abuelizz cộng [28] tổng hợp dãy dẫn xuất quinazoline 40a (R= methyl; R1= benzyl; R2= 3-(Phthalimido-2-yl)propyl), 40b (R= methoxy; R1= benzyl; R2= 3(Phthalimido-2-yl)propyl), 40c (R= methyl; R1= benzyl; R2= Morphilinoethyl) có độc tính đánh giá in-vitro với hai dòng tế bào ung thư HeLa MDA-MB231 tương đối tốt, với IC50 giá trị từ 1,85 đến 2,81 µM cho thấy chúng có hoạt tính tốt so với gefitinib (IC50 = 4,3 28,3 µM so với tế bào HeLa MDAMB231 tương ứng) 10 O O R OH N R R N N 42 HCOOH, NCN=C(SCH3)2 O 37 S 38 O O R NH2NH2 NH NH2 R Akylhalides N R R 41 N EtOH (DMF) Et3N N N N R NH2 Et3 N R + R EtOH N H S N DMF, K2CO3 N S R 40 39 Sơ đồ 1.6: Quy trình tổng hợp dẫn xuất quinazoline [28] Cùng chung ý tưởng trên, nhóm tác giả Adel S El-Azab [29] cộng phát triển thêm bước kết hợp hợp chất quinazoline 41 với nhánh isatine tạo loạt dẫn chất cho hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư vú MDA-MB-231 dòng tế bào ung thư ruột kết LOVO O X N N 43 O O R Y NH S O MeOH, AcOH O + NH2 44 N H X N N R NH S 45 Y=H, Cl, F, NO2 O H N N O a- X=CH3, R=Bn, Y= H b- X=CH3, R=Bn, Y= Cl c- X=CH3, R=Bn, Y= F d- X=CH3, R=Bn, Y= NO2 e- X= H, R=Ph, Y=H f- X= H, R=Ph, Y=Cl g- X= H, R=Ph, Y=F h- X= H, R=Ph, Y=NO2 i- X=CH3, R=Ph, Y=H k- X=CH3, R=Ph, Y=Cl l- X=CH3, R=Ph, Y=F m- X=CH3, R=Ph, Y=NO2 n- X=H, R=PhEt, Y=H o- X=H, R=PhEt, Y=Cl p- X=H, R=PhEt, Y=F Sơ đồ 1.7: Tổng hợp số quinazoline-isatine liên hợp [29] Kết đánh giá hoạt tính cho thấy hợp chất 45a-d, 45f, 45h-p có hoạt tính mạnh chống lại dòng tế bào MDA-MB-231 LOVO (IC50: 10.38–38.67 µM 9.91–15.77 µM, tương ứng); giá trị IC50 so sánh với 5-fluorouracil erlotinib dòng tế bào 70,28 µM, 22.24 µM 15.23 µM, 25.31 µM Xét nghiệm EGFR-TK cảm ứng apoptosis cho thấy hợp chất 45l có hoạt tính ức chế mạnh dòng tế bào MDA-MB-231 thể nồng độ 10 µM Hơn nghiên cứu hệ thống phân tử chất 45m erlotinib để xác minh độ gắn kết enzym kinase –EGFR cho kết tương tự giống với erlotinib 11 Y Cũng từ acid anthranilic, nhóm nghiên cứu Arunachalam Sumathy Sivanandy Palanisamy [30] tổng hợp số semicacbazide chứa khung quinazoline có khả ức chế phát triển dòng tế bào ung thư người Trong số hợp chất tổng hợp hai chất 53S1,53S3 hợp chất có hoạt tính mạnh chống lại dòng tế bào ung thư cổ tử cung người (HeLa).Với giá trị IC50 93,3mM; 6,9mM dẫn xuất quinazoline 53S1,53S3 đại diện có triển vọng cấu trúc cho phát triển hợp chất chống ung thư O COOH (a) Cl NH2 O O (b) O N + N N 46 48 47 NH2 49 Cl Cl (c) O N 50 NHCONH2 N Cl (d) R O R O NH N O (e) N R O NH H N + N R Cl 53 (S) R 51 52 R R1, R2 S1 CH3 4-OH S2 CH3 4-Cl S3 H 4-OH S4 H H S5 H 4-NO2 O N R R1, R2 S6 - Isatine S7 - 5- Bromo isatine S8 H Fufural S9 H 2- OCH3 S10 C6H5 Cl H Sơ đồ 1.8: Tổng hợp số semicacbazide semicabazone chứa khung quinazoline từ acid anthranilic [30] (a) NaHCO3, pyridine, khuấy 3h; (b) pyridin, HCl, NH2NH2.H2O, đun hồi lưu; (c) NaCNO, acid acetic băng; (d) NH2NH2.H2O, C2H5OH, đun hồi lưu 1,5h; (e) acid acetic băng, C2H5OH, đun hồi lưu 30 phút Trong nghiên cứu gần đây, Mani Ramanathan cộng [31] tiến hành tổng hợp số quinazoline-4(3H)-imine từ phản ứng trực tiếp muối aryldiazonium nitride 2-cyanoaniline Phương pháp sử dụng hình 12 thành chỗ N-arylnitrilium trung gian phản ứng song song với hình thành liên tiếp liên kết N−C Ưu điểm phương pháp khả tương thích nhóm chức rộng ester, nitrile, arylketone, amide, bromo, ether, điều kiện phản ứng nhẹ nhàng, thời gian phản ứng ngắn N2 +BF R NH H 2N + R RCN khan 80 °C, 2h NC R 55 N N 54 R R 56 Cơ chế phản ứng nhóm tác giả đề xuất sau: NC N +BF R R N + R N R NH N NH R NH R N N R Các chất tổng hợp nghiên cứu đạt hiệu suất cao từ 54 đến 97% Cho thấy phương pháp hiệu tổng hợp dẫn xuất quinazoline 1.1.1.3 Tổng hợp hợp chất lai quinazoline Tổng hợp hợp chất có cấu trúc lai hai nhiều hợp chất với vấn đề lý thú mẻ Cho đến nay, có số nhỏ cơng trình nghiên cứu tổng hợp hợp chất lai quinazoline Như phân tích trên, nhóm arylamino vị trí C-4 khung quinazoline đóng vai trò quan trọng việc tạo tương tác kỵ nước với gốc ATP nhằm ức chế thụ thể enzym tyrosine kinase Vì vậy, việc đưa nhóm kỵ nước vào nhóm 4-arylamino làm tăng hoạt tính ức chế EGFR Nhóm 1-adamatanamine biết đến nhóm kỵ nước mạnh, đồng thời có khả kháng virut chống bệnh Parkinson Bằng cách gắn nhóm 1-adamatanamine 1adamatanecarbonyl vào vòng aniline (sơ đồ 1.9, 1.10), nhóm nghiên cứu Yu H tổng hợp hợp chất 61, 65 có khả ức chế ung thư phổi tế bào nhỏ (IC50 < 10 nM EGFRwt, ~ 15 nM EFGRL858R/T790M) hiệu nhiều so với gefitinib [32] Các hợp chất quinazoline chứa nhóm 1- 13 adamatyl 61, 65 thể hoạt tính gây độc tế bào nhiều dòng tế bào ung thư tương đương với gefitinib Sơ đồ 1.9: Quy trình tổng hợp hợp chất quinazoline chứa nhóm 1adamatanamine (a) SOCl2, 80oC, h; (b) NaHCO3, axeton, đun hồi lưu, h; (c) Re/NH4Cl, MeOH/H2O,80oC, h; (d) MeOH, đun hồi lưu, h Sơ đồ 1.10: Quy trình tổng hợp hợp chất quinazoline chứa nhóm 1adamatanecarbonyl (a) NaHCO3, acetone, hồi lưu, h; (b) Re/NH4Cl, MeOH/H2O, 80oC, h; (c) MeOH, hồi lưu, h Quinazoline chalcon biết đến hai lớp chất chống ung thư vú ABCG2 tiềm Việc lai hóa khung 4-anilinoquinazoline với gốc chalcon nhằm làm tăng khả chống ung thư vú lớp chất nhóm nghiên cứu người Đức thực [33] Kết nghiên cứu hoạt tính dòng tế bào ung thư cho thấy khả ức chế tế bào ABCG2, A2780 tăng lên rõ rệt kết hợp 14 chalcon với khung 4-anilinoquinazoline (đối với pheophorbide A: IC50 ~ 0,2-3,5 µM, tế bào A2780: GI50 ~ 1-4 µM) Các tác giả nghiên cứu ảnh hưởng nhóm hoạt tính sinh học hợp chất lai chalconquinazoline 66, 67 hợp chất với nhóm cho điện tử R1 = 3,4dimethoxy R2 = 3,4-dimethoxyphenyl có hoạt tính cao Enzym histon diacetylat (HDAC) đóng vai trò quan trọng nhiều q trình sinh học Bằng cách kích hoạt q trình histon hyperacethylat, chất ức chế HDAC kìm hãm tăng sinh, phân ly trình tự chết tế bào khối u [40-43] Thông thường, chất ức chế HDAC bao gồm gốc capping, gốc zinc-binding (ZBG) liên kết tương ứng Có nhiều gốc ZBG khác acid hydroxamic, cacboxylat, aminobenzamid Bằng cách kết hợp chức ức chế histon diacethylat (HDAC) vào hợp chất có khả ức chế EGFR HER2 thuộc dòng RTK, nhóm nghiên cứu giới tổng hợp thành công hợp chất ức chế kép RKT/HADC cho hoạt tính tốt nhiều so với thuốc ban đầu Trong đó, gốc ZBG liên kết với khung quinazoline vị trí C-6, C-7 vị trí C4-NH Xiong Cai cộng tổng hợp thành công 24 hợp chất lai quinazoline acid hydroxamic 68-74 [35] Các hợp chất lai tiến hành đánh giá hoạt tính sinh học dòng enzym HDAC, EGFR HER2 Kết cho thấy, hợp chất 60 (CUDC-101) 61 hai hợp chất tiêu biểu với giá trị IC50 4,4; 2,4 15,7 nM hợp chất 68 IC50 6,5; 3,1 19,0 nM hợp chất 69 Trong hầu hết dòng tế bào ung thư thử nghiệm ung thư phổi tế bào nhỏ, ung thư gan, ung thư vú, ung thư đầu cổ, ung thư đại tràng ung thư tuyến tụy, hai hợp chất 68 69 cho khả ức chế mạnh nhiều so với vorinostat, erlotinib, lapatinib, hỗn hợp vorinostat/erlotinib 15 vorinostat/lapatinib Hiện nay, hợp chất 68 (CUDC-101) đưa vào thử nghiệm lâm sàng Những kết cho thấy hiệu việc kết hợp đồng thời chức ức chế HDAC, EGFR HER2 vào hợp chất để điều trị ung thư Nhóm nghiên cứu Mahboobi S tổng hợp hợp chất ức chế kép EGFR/HDAC HER2/HDAC 76 cách lai hố hợp chất có cấu trúc tương tự lapatinib [3-chloro-4-(3-fluorobenzyloxy)phenyl]-(6-iodoquinazoline-4-yl)amine 75 với gốc (E)-3-(aryl)-hydroxyacrylamide (sơ đồ 1.11) [38] Hầu hết hợp chất lai cho hoạt tính tốt dòng enzym tế bào ung thư khác Sơ đồ 1.11: Tổng hợp hợp chất ức chế kép EGFR/HDAC HER2/HDAC [38] Trong cơng trình Peng E.W, hai nhóm chất acid hydroxamic N-phenylquinazoline-4-amine kết hợp với để tạo thành hợp chất lai có tác dụng ức chế kép yếu tố tăng sinh nội mô mạch máu VEGFR-2 histon diaxetylat HDAC theo sơ đồ 1.12 [44] Các hợp chất 82 thể khả ức chế VEGFR-2 tốt vorinostat, ức chế HDAC tốt vandetanib gây độc tế bào khối u rắn MCF-7 tốt vorinostat vandetanib Trong đó, hợp chất 82a (R1 = H, R2 = Br, n = 5) hợp chất tiêu biểu dãy chất với giá trị IC50 74 nM, 2,2 nM 0,85 µM tương ứng với VEGFR-2, HDAC MCF-7 16 Sơ đồ 1.12: Quy trình tổng hợp hợp chất lai ức chế kép VEGFR-2/HDAC [44] (a) SOCl2, DMF, đun hồi lưu; (b) dẫn xuất aniline, isopropanol, đun hồi lưu; (c) LiOH.H2O.CH3OH, H2O; (d) ethyl bromoalkanoat, K2CO3, DMF, 40oC; (e) NH2OH, CH3OH, 0-30oC Các hợp chất 86 tổng hợp cách đưa nhóm acid hydroxamic vào vòng aniline khung 4-anilinoquinazoline theo sơ đồ 1.13 [45] Dựa kết phân tích hoạt tính ức chế enzyme HDAC-1, HDAC-3, HDAC-6, EGFR HER2, hợp chất lai 86 với nhóm hydroxamat vòng aniline ức chế HDAC/HER2 mạnh HDAC/EGFR Sơ đồ 1.13: Quy trình tổng hợp chất ức chế kép HDAC/RTK [45] (a) (E)-ethyl 3-(4-aminophenyl)acrylat/(E)-ethyl 3-(3-aminophenyl)acrylat, i-PrOH, đun hồi lưu; (b) H2NOTHP, LHMDS, THF, -78°C 1h, 0°C h; (c) 1N HCl (aq), MeOH; (d) H2NOBn, LHMDS, THF, 78°C h, 0°C 12 h; (e) 10% Pd/C, H2, MeOH 17 Năm 2018 Kinjal D Patel [46] cộng nghiên cứu tổng hợp loạt dẫn xuất isoniazide lai 4-chloro-3,4-dihydroquinazoline Các hợp chất lai tổng hợp hiệu thông qua phản ứng 4-chloro-3,4-dihydroquinazoline với isoniazide có mặt lượng xúc tác N, N-diisopropylethylamine (DIPEA) methanol hồi lưu N NH Cl HN H2N N R NH + N R N O DIPEA, MeOH - ngày N R O N R O O COOH R + 87 R NH2 a b O R COCl 88 N R N 89 a - s N NH R R 90 a - s NH HN Cl O d N R R N R c N N 92 a - s R 91 a - s Sơ đồ 1.14 : Tổng hợp N’- (quinazoline-4-yl) isonicotinohydrazide sử dụng 4chloroquinazoline, isonicotinohydrazide [46] (a) pyridine, 1h, 0-60C 3h hồi lưu, NaHCO3; (b) Fomamide, khuấy 3h; (c) PCl5, POCl3, hồi lưu, 24 h (d) INH, DIPEA, 24–98 h Cơ chế phản ứng nhóm tác giả đề xuất sau: N R R N Cl N R R +N C Cl N :NH2 - Cl O HN N + H NH O HN N N CIH - DIPEA R - R R R N HN O NH N Độc tính độ chọn lọc hợp chất tổng hợp đánh giá nhiều chủng vi sinh vật gây bệnh khác sốt rét, nhiễm trùng vi khuẩn, nhiễm nấm bệnh lao Kết cho thấy chất 92f (R= 4-Br; R1= C6H5), 92h (R= 4-Br; R1= 4-OCH3C6H5), 92k (R= 4-Br; R1= 2-Furan) 92r (R= 5-I; R1= 4NO2C6H5) ức chế tốt ký sinh trùng gây sốt rét P Falciparum (IC50 0,071; 0,1; 0,05 0,19 µg/ml ) Hợp chất 92n (R= 4-NO2; R1= 4-OCH3C6H5) gây ức chế 18 tốt chủng E.coli, S.aureus, S.Pyogenus (MICa µg/ml là: 62,5; 100 100) so sánh với thuốc tiêu chuẩn Ampiciline (MICa µg/ml = 100; 250; -) 1.1.3 Nghiên cứu nước quinazoline Hiện nay, nghiên cứu tổng hợp dẫn xuất quinazoline lĩnh vực mẻ Tuy nhiên nhóm nghiên cứu GS.TS Nguyễn Văn Tuyến nghiên cứu tổng hợp thành công erlotinib hydrocloride làm nguyên liệu bào chế thuốc điều trị ung thư phổi tế bào nhỏ, đồng thời nghiên cứu tổng hợp số hợp chất lai chứa khung quinazoline với nhóm R khác Các hợp chất lai cho hoạt tính gây độc tế bào ung thư mạnh so với chất đầu Qua nghiên cứu cơng trình cơng bố nước thấy nghiên cứu thiết kế tổng hợp hợp chất lai quinazoline với mục tiêu ức chế EGFR ức chế đa chức hướng nghiên cứu có ý nghĩa khoa học thực tiễn Tuy nhiên, chưa có cơng trình nghiên cứu việc đưa nhóm chất có hoạt tính chống ung thư theo chế khác azide vào mạch nhánh 4-aminoquinazoline qua cầu 1,2,3-triazole nhằm tạo hợp chất lai ức chế tác dụng kép Ngoài ra, tổng hợp hợp chất lai erlotinib qua cầu nối triazole với azide chưa đề cập tới Vì vậy, hướng nghiên cứu tổng hợp chất có cấu trúc lai chứa đồng thời 4-aminoquinazoline triazole hoàn toàn lý thú 1.2 TỔNG QUAN VỀ THUỐC ERLOTINIB 1.2.1 Cấu trúc, tính chất vật lý tính chất phổ Erlotinib hydrochloride Erlotinib hydrochloride thuốc sử dụng hiệu để chữa bệnh ung thư phổi tế bào nhỏ [47-55] sử dụng phối hợp với gemcitabine điều trị ung thư tụy Tên thương mại erlotinib hydrochloride Tarceva Tên hóa học erlotinib N-(3-ethynylphenyl)-6,7-bis(2- methoxylethoxyl)quinazoline-4-amine Về mặt cấu trúc erlotinib hydrochloride dẫn xuất 4-anilinoquinazoline chứa nhóm 2-methoxylethoxyl vị trí (Hình 1.4) Erlotinib hydrochloride tan nước methanol không tan acetonitrile, aceton, ethyl acetate hexane 19 Hình 1.4: Cấu trúc erlotinib hydrocloride Erlotinib hydrochloride tồn dạng tinh thể màu vàng, điểm chảy 225228oC [47-53] Trên phổ hồng ngoại IR xuất cực đại hấp thụ chính: 3276, 3056, 3020, 2921, 2896, 2819, 2746, 2711, 1667, 1564, 1512, 1446, 1284, 1122, 892 cm-1 Phổ 1H-NMR (DMSO-d6) xuất tín hiệu cộng hưởng độ dịch chuyển δ 11,45 (s, 1H, NH); 8,81 (s, 1H, H-Ar); 8,30 (s, 1H, H-Ar); 7,90-7,72 (m, 2H, H-Ar); 7,53-7,33 (m, 3H, H-Ar); 4,45-4,25 (m, 4H, 2CH2O); 3,79-3,70 (m, 4H, 2CH2O); 3,4 (s, 1H, ethynyl), 3,25 (s, 6H, 2OCH3) Trên phổ 13C-NMR (DMSO-d6) xuất tín hiệu cộng hưởng độ dịch chuyển δ 170,22; 159,11; 155,07; 151,20; 147,28; 142,31; 130,89; 125,76; 124,35; 122,34; 117,65; 114,15; 108,83; 100,97; 86,76; 80,63; 75,78; 73,52; 51,25 1.2.2 Hoạt tính sinh học erlotinib hydrochloride Erlotinib với tên thương mại Tarceva ức chế mạnh phosphoryl hóa nội tế bào HER1/EGFR HER1/EGFR bộc lộ bề mặt tế bào bình thường tế bào ung thư Trong mơ hình in vivo, ức chế EGFR phosphotyrosine kìm hãm gây chết tế bào Các nghiên cứu lâm sàng bao gồm nhiều bệnh nhân toàn giới xác nhận hiệu tính Erlotinib điều trị UTPKPTBN Ưu điểm liệu pháp giảm độc tính, tác dụng phụ giúp chất lượng sống bệnh nhân tốt Bên cạnh đó, phương pháp điều trị làm tăng khả đáp ứng bệnh, tăng thời gian sống Ngoài ra, Tarceva phối hợp với gemcitabine định để điều trị bước cho bệnh nhân ung thư tụy tiến triển chỗ, không cắt bỏ di Liều dùng hàng ngày khuyến cáo Tarceva 150mg dùng trước hai sau ăn điều trị Ung thư phổi tế bào nhỏ liều 100mg dùng trước hai sau ăn, phối hợp với gemcitabine cho định ung thư tụy Erlotinib theo đường uống hấp thu tốt có giai đoạn hấp thu kéo dài với nồng độ đỉnh huyết tương trung bình đạt sau uống Một nghiên 20 cứu người tình nguyện khoẻ mạnh bình thường cho thấy độ sinh khả dụng ước tính khoảng 59% Sau hấp thu, erlotinib gắn kết cao máu, khoảng 95% gắn với thành phần máu, chủ yếu với protein huyết tương (ví dụ albumin acid alpha-1 glycoprotein [AAG]), với khoảng 5% dạng tự Erlotinib chuyển hóa gan men cytochrome P450 gan người, chủ yếu CYP3A4 chuyển hóa CYP1A2 Chuyển hóa ngồi gan CYP3A4 ruột, CYP1A1 phổi, CYP1B1 mơ khối u có khả đóng góp vào thải chuyển hóa erlotinib Các nghiên cứu in vitro khoảng 80-95% erlotinib chuyển hóa men CYP3A4 Có ba đường chuyển hóa xác định: 1) khử O-methyl chuỗi bên hai, sau oxy hóa thành acid carboxylic; 2) oxy hóa nửa acetylene sau thủy phân thành acid aryl carboxylic; 3) hydroxyl hóa vòng thơm gốc phenyl-acetylene Những chất chuyển hóa erlotinib tạo khử O-methyl chuỗi bên có hiệu lực tương đương với erlotinib nghiệm pháp in vitro tiền lâm sàng mẫu mơ in vivo Các chất chuyển hóa erlotinib chúng có mặt huyết tương với nồng độ < 10% erlotinib có dược động học tương tự erlotinib 1.2.3 Những nghiên cứu nước tổng hợp erlotinib hydrochloride Các phương pháp truyền thống tổng hợp erlotinib hydrochloride công bố patent trước [56,57] bao gồm nhiều bước phản ứng với điều kiện phản ứng phức tạp nên có nhiều nhóm nghiên cứu giới nghiên cứu cải tiến quy trình tổng hợp erlotinib hydrochloride 1.2.3.1 Tổng hợp erlotilib hydrochloride từ methyl 3,4-dihydroxybenzoat theo Petr Knesl Năm 2006, nhóm nghiên cứu Petr Knesl cộng tổng hợp erlotinib hydrochloride xuất phát từ nguyên liệu ethyl-3,4-dihydroxybenzoat qua giai đoạn phản ứng với hiệu suất tổng đạt 56% [58] (sơ đồ 1.15) 21 Sơ đồ 1.15: Tổng hợp erlotinib từ methyl-3,4-dihydroxybenzoat [58] Giai đoạn phản ứng ankyl hóa ethyl-3,4-dihydroxylbenzoat 94 sử dụng tác nhân 1-clo-2-methoxyethan 1-brom-2-methoxyethan tạo thành hợp chất 95 Với hai tác nhân trên, phản ứng cho hiệu suất 90% Giai đoạn phản ứng nitro hóa hợp chất 95 nhận hợp chất 96 chọn lọc vị trí với hiệu suất phản ứng đạt 92% Q trình khử hóa nhóm nitro 96 thành amino 97 vòng hóa tạo thành dẫn xuất formamide 98 Giai đoạn thứ q trình clo hóa, nhóm tác giả sử dụng tác nhân phosphoryl clorid N,N-diethylaniline cho phản ứng clo hóa nhận sản phẩm 98 với hiệu suất 89% Hợp chất sau tinh chế làm kiểm tra độ tinh khiết phương pháp HPLC đạt độ 96% Giai đoạn cuối phản ứng tạo thành erlotinib hydrochloride tác nhân 3-ethylaniline pyridine iso-propanol với hiệu suất phản ứng đạt 95% Nhược điểm phương pháp sử dụng xúc tác đắt tiền PtO hydro nên dễ cháy nổ, khó thực thực tế 1.2.3.2 Tổng hợp erlotilib hydrochloride theo Venkateshappa Chandregowda Theo phương pháp này, hợp chất 98 phản ứng thio hóa sử dụng tác nhân phosphorous pentasulfid pyridine nhận hợp chất 100 Tiếp theo, hợp chất 100 phản ứng với methanol với có mặt NaOH/MeI thu hợp chất 4(methylthio)-6,7-bis-(2-methoxyethoxy)-quinazoline 101 Cuối cùng, hợp chất 101 tham gia phản ứng với 3-ethynylaniline hydrochloride iso-propylalcohol thu 22 sản phẩm erlotinib hydrochloride Hiệu suất tổng cho trình phản ứng ba giai đoạn 73% (sơ đồ 1.16) [59] Sơ đồ 1.16: Tổng hợp erlotinib hydrochloride từ hợp chất 98 [59] Ưu điểm phương pháp sử dụng tác nhân P2S5 để tạo thành hợp chất trung gian thioamide 100 thay cho bước tạo thành dẫn xuất trung gian 4chloroquinazoline không bền phương pháp thứ Phương pháp không sử dụng tác nhân độc hại thionyl chloride phosphoryl chloride Tuy nhiên, trình phản ứng tăng thêm bước phản ứng tạo hợp chất trung gian 4(methylthio)-6,7-bis-(2-methoxyethoxy)-quinazoline 101 1.2.3.3 Tổng hợp erlotilib hydrochloride theo quy trình cải tiến Venkates Chandregowda Trong cơng trình nghiên cứu khác Venkates Chandregowda cộng cải tiến quy trình tổng hợp erlotinib hydrochloride xuất phát từ hợp chất 102 qua bước phản ứng [60] (sơ đồ 1.17) Sơ đồ 1.17: Tổng hợp erlotinib hydrochloride từ hợp chất 102 [60] 23 Hợp chất 102 tổng hợp theo công trình cơng bố trước [61] Từ chất 102 tiến hành khử hóa nhóm nitro sử dụng tác nhân sodium dithionite dung môi nước nhiệt độ 50oC nhận hợp chất 103 với hiệu suất phản ứng đạt 95% Tiếp theo hợp chất 103 phản ứng với dimethylformamidinedimethylacetal (DMF-DMA) toluen tạo thành dẫn xuất N,N- dimethylformamidine 104 Phản ứng tổng hợp hợp chất 104 lần nhóm tác giả cơng bố cơng trình Sau đó, hợp chất formamidine 104 tiến hành cách thêm acid acetic 3-ethynyl aniline, phản ứng thực nhiệt độ 130oC 3h nhận bazơ tự với hiệu suất đạt 70% Sản phẩm erlotinib hydrochlorid 93 tạo thành cách cho erlotinib dung mơi methanol sục khí HCl, phản ứng cho hiệu suất 92% Hiệu suất tổng cho giai đoạn tạo thành erlotinib hydrochlorid 63% Đây phương pháp hiệu quả, kinh tế để tổng hợp erlotinib hydrochloride Do tránh bước tạo sản phẩm trung gian 4-chloroquinazoline không bền không làm tăng thêm bước phản ứng Cơ chế hình thành hợp chất erlotinib 105 từ hợp chất 104 3-ethynyl aniline đề xuất xảy theo chế chuyển vị Dimroth [62,63], hình thành imine A khẳng định Giday cộng [64] (sơ đồ 1.18) Sơ đồ 1.18: Cơ chế hình thành hợp chất erlotinib 105 từ hợp chất 104 3ethynyl aniline [64] 24 1.2.3.4 Tổng hợp erlotinib từ 3,4-dihydroxybenzoic acid theo Davoud Asgari Theo phương pháp Davoud Asgari cộng đưa năm 2011 [65], erlotinib tổng hợp toàn phần qua giai đoạn phản ứng với hiệu suất tổng đạt 60% cao hẳn so với cơng trình cơng bố trước Quy trình tổng hợp mơ tả sơ đồ 1.19 Sơ đồ 1.19: Tổng hợp erlotinib từ hợp chất 3,4-dihydroxybenzoic acid Ưu điểm vượt trội phương pháp sử dụng phản ứng one-pot cho giai đoạn chìa khóa tạo thành erlotinib 105 từ hợp chất trung gian 2aminobenzonitrile 3-ethylaniline Xuất phát từ hợp chất 2-amino benzonitrile 103 phản ứng với DMF-DMA toluen acetic acid tạo thành sản phẩm trung gian formamidine 104 DMF-DMA dư hỗn hợp phản ứng loại bỏ phương pháp chưng cất thêm 3-ethynyl aniline với acid acetic, phản ứng 25 trì 60oC 5h thu hợp chất trung gian 109 Hỗn hợp sản phẩm trung gian 109 đun hồi lưu 110oC 5h nhận sản phẩm erlotinib 105 Cơ chế trình hình thành erlotinib nhóm nghiên cứu khẳng định sơ đồ 1.20 Hợp chất trung gian 109 lần phân lập xác định cấu trúc phương pháp phổ NMR, IR LC/MS Sơ đồ 1.20: Cơ chế hình thành erlotinib từ hợp chất 104 Một ưu điểm khác phương pháp hình thành hợp chất 3,4-bis(2methoxyl)benzonitrile từ 3,4-bis(2-methoxyl)benzoic acid, lần tác giả công bố cơng trình này, qua phản ứng one-pot sử dụng urea phosphorus pentoxide Do đó, q trình tránh việc sử dụng tác nhân đắt tiền, độc tính cao khơng bền Deoxo-fluor, PCl5 diphosphorus tetraiodil [66,67] 1.2.3.5 Tổng hợp erlotilib hydrochloride từ 3,4-dihydroxybenzoic acid theo Leila Barghi Năm 2012, nhóm nghiên cứu Leila Barghi cộng phát triển phương pháp hiệu tổng hợp erlotilib hydrochloride từ 3,4-dihydroxybenzoic acid qua giai đoạn phản ứng với hiệu suất tổng 44% (sơ đồ 1.21) [68] Giai đoạn đầu phản ứng ankyl hóa 3,4-dihydroxybenzoic acid với đương lượng 1-chloro-2-methoxylethan DMF thu methoxyethoxy3,4-bis(2-methoxyl)-benzoat 110 Tiếp theo trình thủy phân ester 110 thực sau loại bỏ dung môi DMF nhận hợp chất 3,4-bis(2- 26 methoxyl)benzoic acid 111 với hiệu suất 99,2% Phản ứng ester hóa acid cacboxylic 111 sử dụng ethanol sulfuric acid tạo thành ethyl -3,4-bis(2methoxyl)benzoat 95 Giai đoạn q trình nitro hóa ethyl-3,4-bis(2methoxyl)benzoat 95 sử dụng nitric acid acetic acid băng 0oC nhận dẫn xuất 96 với hiệu suất đạt 92,75%, sản phẩm dùng cho bước mà khơng cần tinh chế Giai đoạn chìa khóa cho tồn q trình tổng hợp erlotinib phản ứng khử hóa Trước có cơng trình nghiên cứu công bố việc sử dụng ammonium formate tác nhân cho H in situ cho trình [69] Nhóm nghiên cứu tác giả tiến hành q trình khử hóa nhóm nitro ethyl3,4-bis(2-methoxylethoxyl)-2-nitro-benzoat 96 sử dụng amonium format xúc tác Pd/C dung mơi 2-propanol nhiệt độ phòng 20 phút thu 2amino-4,5-bis(2-methoxylethoxyl)-benzoat 97 với hiệu suất phản ứng đạt 92,33% Hợp chất vòng hóa tạo thành 6,7-bis(2-methoxylethoxyl)quinazolon sử dụng formamide ammonium format Tiếp sau đó, phản ứng clo hóa dẫn xuất quinazolon 98 tác nhân oxalylclorua dung môi clorofom 80oC 1,5 nhận sản phẩm 4-chloro-6,7-bis(2-methoxylethoxyl)quinazoline 99 với hiệu suất 83% Giai đoạn cuối cùng, sản phẩm erlotinib hydrochloride hình thành phản ứng hợp chất quinazoline 99 tác dụng với 3-ethynyanilin tạo thành bazơ tự tạo muối với HCl nhận sản phẩm với hiệu suất cao 99,1% Tổng hiệu suất tạo thành erlotinib hydrochloride qua giai đoạn phản ứng 44% Đây quy trình phản ứng đáp ứng tương đối tốt yêu cầu hiệu suất chất lượng sản phẩm Việc sử dụng tác nhân không đắt ammonium format tác nhân tạo hydro phản ứng in situ với xúc tác Pd/C cho phản ứng khử hóa nitro thay sử dụng khí H2 áp suất cao trước giúp cho việc tổng hợp erlotinib hydrochoride lượng lớn trở nên đơn giản hơn, an toàn hơn, hiệu kinh tế cao 27 Sơ đồ 1.21: Tổng hợp erlotinib hydrochloride theo Leila Barghi [68] 1.2.4 Tình hình nghiên cứu nước tổng hợp erlotinib Năm 2015 nhóm nghiên cứu Tạ Văn Đại cộng [119] tiến hành tổng hợp erlotinib từ ethyl 3,4-đihidroxybenzoat qua giai đoạn với hiệu suất tổng hợp 51% Đây quy trình hiệu tiết kiệm chi phí với bước tổng hợp đơn giản, sản phẩm trung gian bước sử dụng làm ngun liệu thơ cho bước sau mà không cần tinh chế phương pháp tách cột sắc kí 28 1.3 PHẢN ỨNG CLICK Trong nhiều nghiên cứu gần đây, phản ứng “click" phương pháp tổng hợp đại hóa hữu để tổng hợp dẫn xuất triazole Các triazole nhóm hợp chất dị vòng có nhiều hoạt tính sinh học quý kháng khuẩn, kháng nấm chống ung thư [71-73, 74–75] Đây hoạt tính tương tự số hợp chất nhóm imidazol, nhiều hợp chất imidazol sử dụng dược phẩm kháng khuẩn (ví dụ 5-nitroimidazol) [76], chống nấm (muconazol) [77], thuốc an thần (midazolam) [78] N R R N3  R' + N N R' 1,2,3 - triazol thê 1,4 R N N N R' 1,5 - triazol thê 1,5 Sơ đồ 1.22: Phản ứng “click” nhiệt [78] Phản ứng nhóm azide ankin Arthu Michael tìm cách kỷ, sau Huisgen nghiên cứu cách hệ thống phản ứng phản ứng đóng vòng kiểu 1,3- lưỡng cực khác phản ứng quan trọng để tổng hợp hợp chất triazole Khi phản ứng xảy tác dụng nhiệt, hai đồng phân thu sản phẩm 1,2,3-triazole thế-1,4 1,2,3-triazole thế-1,5 (sơ đồ 1.22) [78] Đến năm 2001, Sharpless cộng tìm xúc tác đặc hiệu cho phản ứng nhóm azide ankin xúc tác đồng (I) Với xúc tác này, phản ứng coupling nhóm azide ankin-thế cho sản phẩm sản phẩm cộng 1,2,3- triazole với hai nhóm vị trí 4, phản ứng gọi phản ứng click (sơ đồ 1.23) [78, 79] Tuy nhiên dùng xúc tác phức chất [Cp*(RuCl(PPh3)2] phản ứng lại chọn lọc theo hướng tạo sản phẩm vị trí (sơ đồ 1.24) R N3 + R' Cu(I) R N N N H2O R' 1,2,3 - triazole thê 1,4 Sơ đồ 1.23: Phản ứng “click” dùng xúc tác Cu(I) [78, 79] 29 R N3 + R' [Cp*(RuCl(PPh3)2] R N N N Dioxan,  R' 1,5 - triazole thê 1,5 Sơ đồ 1.24: Phản ứng “click” dùng xúc tác phức [Cp*(RuCl(PPh3)2] Phản ứng click với xúc tác Cu (I) có đặc điểm độ chọn lọc hiệu suất cao Đây phương pháp tổng hợp thực phản ứng “coupling” có ứng dụng vô quan trọng lĩnh vực tổng hợp hợp chất lai Đã có nhiều cơng trình cơng bố tổng hợp thành cơng hợp chất lai phản ứng click tạo cầu nối nhóm 1,2,3-triazole [80, 81-84] 1,2,3-triazole hợp chất dị vòng thơm năm cạnh với nguyên tử nitơ có moment lưỡng cực cao, dễ dàng tham gia trình hình thành liên kết hydro tương tác lưỡng cực với ADN, protein tế bào Hợp chất dị vòng không bị thủy phân môi trường acid bazơ khơng bị phá hủy q trình oxi hóa khử Triazole dễ dàng tổng hợp phản ứng cộng đóng vòng kiểu 1,3 lưỡng cực với xúc tác Cu(I) hay gọi phản ứng “click” Bên cạnh đó, hợp chất 1,2,3-triazole cho hoạt tính chống ung thư, kháng khuẩn kháng nấm mạnh [70, 80, 85] Với tính ưu việt mặt hóa học hoạt tính sinh học, 1,2,3-triazole vừa tác nhân vừa cầu nối lý tưởng để lai hóa hợp chất có dược tính khác 4anilinoqinazoline Việc đưa nhóm triazoyl có chứa vòng thơm chứa nhóm chức NO2 CF3 vị trí khác vào mạch nhánh làm tăng tương tác tyrosin kinase cải thiện tính chất hóa lý hợp chất quinazoline ban đầu Tuy nhiên chưa có cơng trình nghiên cứu tổng hợp dẫn xuất 4anilinoquinazoline chứa nhóm 1,2,3 triazole mạch nhánh Do nhóm cầu nối lí tưởng để lai hóa lớp chất có hoạt tính khác nhau, hứa hẹn tổng hợp nhiều hợp chất cấu trúc lai có hoạt tính sinh học q 1.4 KỸ THUẬT PROTEIN DOCKING: 1.4.1 Phương pháp protein docking: Từ năm 1980 phương pháp protein docking hình thành đời [112], công cụ thiết yếu sử dụng phổ biền trình thiết kế thuốc dựa cấu trúc Protein docking kĩ thuật mơ hình hóa phân tử nhằm dự đốn vị trí cấu hình thuận lợi mà phân tử chất gắn kết phân tử protein Phân tử chất cho dịch chuyển không gian 30 bao quanh phân tử protein để tìm vị trí có lượng gắn kết âm sử dụng hàm đánh giá phương pháp tìm kiếm cực trị tồn cục khác Docking có khả dự đốn với với nức độ xác đáng kể hình thành liên kết cấu tử với receptor túi liên kết Thuật toán docking phân tử mặt liên kết có ỹ nghĩa, mặt khác dự đoán định lượng khả liên kết hàm tính điểm, từ cung cấp thứ hạng khả liên kết mạnh yếu cấu tử [112,113] Docking trở thành toán tối ưu, tìm vị trí cấu hình phù hợp chất gắn kết lên protein Nhìn phía nhiệt động lực học, nhiệm vụ docking tìm cấu hình mà lượng tự tồn hệ thấp Để tìm cấu hình phù hợp cần phải liên hệ khơng gian cấu hình với giá trị số đánh giá khả gắn kết chất lên protein áp dụng thuật tốn tìm kiếm [114] Thuật giải di truyền (Genetic Algorithm - GA) thuật tốn tìm kiếm ứng dụng nhiều chương trình docking Autodock, Autodock Vina, GOLD[108],[111],[115] GA áp dụng lí thuyết liên quan đến học thuyết tiến hoá chọn lọc tự nhiên Đầu tiên, thuật toán mã hoá tất tham số cấu trúc ban đầu nhiễm sắc - biểu diễn vec tơ Từ nhiễm sắc thể ban đầu này, tạo ngẫu nhiên quần thể bao phủ miền lượng Quần thể đánh giá từ nhiễm sắc thể thích nghi (tức có giá trị lượng thấp nhất) chọn làm khung để tạo quần thể Quy trình làm giảm lượng trung bình tồn nhiễm sắc thể cách truyền đặc tính cấu trúc thuận lợi từ quần thể sang quần thể khác Sau số chu kỳ tìm kiếm đánh giá, cuối ta tìm nhiễm sắc thể (cấu dạng) phù hợp với mức lượng tối thiểu [110] Chương trình docking sử dụng hàm tính điểm (scoring function) để ước lượng lượng liên kết phức hợp cấu tử - receptor Năng lượng cho số liên kết (Kd) lượng tự Gibbs (ΔGL) Dự đoán lượng liên kết thực cách đánh giá tương tác hóa lý quan trọng bao gồm: tương tác liên phân tử, ảnh hưởng solvat entropy [114] Do đó, số lượng tham số hố lý đánh giá lớn độ xác cao Tuy nhiên, số lượng biến lớn thời gian tính tốn lâu Các hàm tính điểm hiệu nên đưa cân 31 độ xác tốc độ, điểm quan trọng làm việc với sỡ liệu lớn 1.4.2 Quy trình Docking: Trình tự ba bước để thực trình docking bao gồm: bước 1: chuẩn bị cấu tử, bước 2: chuẩn bị protein, bước 3: mô docking - Chuẩn bị cấu tử: cấu trúc 3D cấu tử lấy từ hệ thống liệu có sẵn Pubchem, Zinc[109],[112] Nếu khơng có sẵn, sử dụng phần mềm Chemsketch, ChemDraw… để xây dựng cấu trúc 3D cấu tử, Sau xây dựng cấu trúc 3D, sử dụng phần mềm để chuẩn bị cấu tử cho chương trình mơ docking, thông thường bước chuẩn bị tiến hành theo thứ tự: gắn hydro, gắn trường lực, xây dựng file pdbqt - Chuẩn bị protein: Cấu trúc 3D protein thường có sẵn ngân hàng liệu protein (protein data bank) Trong trường hợp khơng có sẵn sử dụng phương pháp mơ tính tương đồng (homology modeling) để xây dựng cấu trúc 3D protein Tiếp theo sau xây dựng cấu trúc 3D, sử dùng phần mềm để chuẩn bị protein cho chương trình mơ docking Các bước chuẩn bị theo thứ tự: loại nước cấu tử (nếu có), thêm hydro, gắn trường lực xây dựng file pdbqt - Mô docking: Trước phần mềm tiến hành tìm kiếm vị trí cấu dạng phù hợp cấu tử, cần khoanh vùng tìm kiếm (grid box) cho thuật tốn Kích thước vùng tìm kiếm khơng nên q lớn tốn thời gian độ lặp lại không cao, khơng nên q nhỏ phần mềm tìm kiếm vùng nhỏ, khơng có ý nghĩa Vị trí vùng tìm kiếm thơng thường đặt trung tâm hoạt động protein Sau xác định vị trí kích thước vùng tìm kiếm, phần mềm tự động tìm kiếm đưa cấu dạng phù hợp với lượng thấp Cấu dạng với tương tác với protein phân tích phần mềm chuyên dụng như: MOE, Pymol, Discovery studio… 1.5 NHIỆM VỤ CỦA ĐỀ TÀI LUẬN ÁN Với việc phân tích tổng quan xác định nhiệm vụ đề tài luận án bao gồm: 32 Tổng hợp, xác định cấu trúc erlotinib hợp chất lai với azide qua cầu nối triazole Thiết kế tổng hợp, xác định cấu trúc dẫn xuất chứa nhóm crown etherở vị trí C-6, khung 4-anilinoquinazoline hợp chất lai chúng với azide qua cầu nối triazole Thử hoạt tính gây độc tế bào hợp chất lai tổng hợp ba dòng tế bào ung thư người bao gồm KB (ung thư biểu mô, Hep-G2 (ung thư gan) Lu (ung thư phổi tế bào nhỏ) Nghiên cứu docking hợp chất tổng hợp thụ thể EGFR 33 CHƢƠNG 2: THỰC NGHIỆM 2.1 HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ 2.1.1 Hóa chất dung mơi Các hóa chất sử dụng cho việc tổng hợp phản ứng hữu dung môi mua sử dụng trực tiếp nhận từ hãng Merck (Đức) Aldrich (Mỹ) Silicagel cho sắc ký cột 100 - 200 mesh (Merck), mỏng sắc ký silica gel (Merck) 2.1.2 Định tính phản ứng kiểm tra độ tinh khiết hợp chất sắc kí lớp mỏng Sắc kí lớp mỏng (SKLM) sử dụng để định tính chất đầu sản phẩm Thông thường chất đầu sản phẩm có giá trị Rf khác nhau, màu sắc phát quang khác Dùng sắc kí lớp mỏng để biết phản ứng xảy hay không xảy ra, phản ứng kết thúc hay chưa kết thúc dựa vào vết mỏng, giá trị Rf tương ứng Giá trị Rf chất phụ thuộc vào độ phân cực phân tử chất phụ thuộc vào dung môi làm pha động Dựa tính chất đó, tìm dung môi hay hỗn hợp dung môi để tách chất hỗn hợp nhiều chất khác 2.1.3 Phương pháp thiết bị nghiên cứu Để xác định cấu trúc chất hữu tổng hợp được, tiến hành phương pháp sau: Xác định nhiệt độ nóng chảy: Nhiệt độ nóng chảy chất tổng hợp đo máy Gallenkamp Anh phòng thí nghiệm Hóa Dược - Viện Hố học - Viện Hàn lâm Khoa học & Công nghệ Việt Nam Phổ hồng ngoại (IR): Phổ IR chất nghiên cứu ghi máy Spectrum Two hãng PerkinElmer, phòng Hóa Dược, Viện Hố học - Viện Hàn lâm Khoa học & Công nghệ Việt Nam, đo dạng ép viên với KBr rắn Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR): Phổ 1H-NMR (500MHz), 13 C-NMR (125 MHz), HMBC, HSQC HRMS chất nghiên cứu đo máy Bruker XL-500 với dung môi CDCl3, CD3OD TMS chất chuẩn, Trung tâm Phổ ứng dụng - Viện Hoá học - Viện Hàn lâm Khoa học & Công nghệ Việt Nam 34 Phổ khối lượng (MS): Phổ khối ESI-MS chất nghiên cứu ghi máy Agilent 6530 Accurate-Mass Q-TOC LC/MS Phòng nghiên cứu cấu trúc – viện Hóa Sinh Biển - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Khoa Hóa Học, Đại Học Khoa Học Tự Nhiên Mẫu hòa tan dung mơi phun vào hệ thống tạo ion, nguồn ESI ion hóa mẫu dịch lỏng sau máy khối phổ ghi nhận tín hiệu ion mảnh 2.1.4 Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư Hoạt tính gây độc tế bào ung thư hợp chất quinazoline thực phòng Hóa sinh ứng dụng - Viện Hố học - Viện Hàn lâm Khoa học & Công nghệ Việt Nam Hoạt tính thử nghiệm dòng tế bào ung thư người, ung thư biểu mô KB (Human epidermic carcinoma), ung thư gan HepG2 (Hepatocellular carcinoma) ung thư phổi tế bào nhỏ Lu 2.2 TỔNG HỢP ERLOTINIB VÀ CÁC HỢP CHẤT LAI CỦA NÓ 2.2.1 Tổng hợp erlotinib Tổng hợp hợp chất acid 3,4-bis(2-methoxyethoxy)-benzoic (107) Hỗn hợp acid 3,4-dihydroxy benzoic 106 (10 g; 65 mmol), kali carbonate (35,9 g; 260 mmol), tetrabuthyl ammonium hydrosunfat (2,2 g; 6,5 mmol) 100 ml DMF khuấy nhiệt độ 100oC Sau làm lạnh hỗn hợp phản ứng xuống 50oC, 1-bromo-2-methoxyethan (24 ml; 260 mmol) thêm vào dung dịch phản ứng tiếp tục khuấy 110oC Sau 20 phản ứng kết thúc, hỗn hợp sản phẩm làm lạnh xuống nhiệt độ phòng Chất rắn lọc rửa 150 ml ethyl acetate Phần dịch chiết phần ethyl acetate rửa chất rắn gộp lại, loại dung môi áp suất thấp thu sản phẩm este trung gian 110 (chất dầu màu nâu) với khối lượng khơng đổi Hòa tan este dung dịch chứa 100 ml methanol, 30 ml nước KOH (10,9 g; 195 mmol) khuấy nhiệt độ phòng Sau phản ứng kết thúc, loại bỏ methanol cách cô quay áp suất thấp, điều chỉnh pH hỗn hợp phản ứng đến pH ~ dung dịch HCl 10% 0oC xuất kết tủa trắng Sản phẩm rắn tạo thành lọc, rửa nước đá sấy khô 50oC Thu 15,8 g acid 3,4-bis(2methoxyethoxy)benzoic 107 (hiệu suất 72,5%) 35 Acid 3,4-bis(2-methoxyethoxy)benzoic 107 chất rắn màu trắng có điểm chảy 107-109oC IR 2978; 2924; 2808; 1666,8 (C=O); 1588; 1515,7; 1439; 1278; 1234; 871; 763 cm-1 Tổng hợp hợp chất 3,4-bis(2-methoxyethoxy)benzonitrile (108) Hỗn hợp phản ứng gồm 12,3 g (0,08 mol) acid 3,4-bis(2-methoxyethoxy)benzoic 107 48 g (0,8 mol) urea đun khuấy đến 220oC Sau đun, hỗn hợp phản ứng làm nguội xuống nhiệt độ phòng, thêm 150 ml xylene 45,4 g (0,32 mol) P2O5 đun hồi lưu 142oC 15 Khi phản ứng kết thúc, hỗn hợp phản ứng làm lạnh xuống 80oC, loại bỏ cặn phương pháp lọc, rửa cặn ethyl acetate nóng (50 ml x lần) Phần cặn lại hòa tan nước tiếp tục chiết với ethyl acetate Pha hữu gộp lại, rửa dung dịch NaHCO3 (50 ml x 3), làm khan Na2SO4 loại dung môi áp suất thấp đến thu chất dầu màu vàng Sau tinh chế làm cột silica gel với hệ dung môi n-hexane/ethyl acetate thu 16,1 g 3,4-bis(2-methoxyethoxy)benzonitrile 108 (hiệu suất 80%) 3,4-Bis(2-methoxyethoxy)benzonitrile 108 chất dầu màu vàng IR 2925,8; 2225,2 (CN), 1512,2; 1451; 1269; 1238,5; 864; 780 cm-1 Tổng hợp hợp chất 2-amino-4,5-bis(2-methoxyethoxy)benzonitrile (103) Dung dịch 15 g (0,06 mol) 3,4-bis(2-methoxyethoxy)benzonitrile 108 15 ml acid acetic băng nhỏ giọt vào 45 ml acid nitric 65% 0oC Sau đó, tăng nhiệt độ lên 50oC khuấy hỗn hợp phản ứng nhiệt độ Sản phẩm phản ứng tạo thành kiểm tra mỏng TLC sau 30 phút phản ứng Kết thúc phản ứng, hỗn hợp phản ứng làm lạnh xuống nhiệt độ phòng, chiết dung dịch với ethyl acetate nước lạnh Phần dịch chiết làm khan Na2SO4, lọc loại dung môi áp suất thấp đến thu chất rắn màu vàng sản phẩm nitro hóa trung gian 4,5-bis(2-methoxyethoxy)-2- 36 nitrobenzonitrile 102 IR: 2920,3; 2223 (CN), 1533 (NO2); 1502; 1295; 1225; 1121,3; cm-1 1H-NMR (CDCl3) 7,8 (s, 1H, H-Ar), 7,3 (s, 1H, H-Ar), 4,27-4,30 (m, 4H, CH2O), 3,80-3,82 (m, 4H, CH2O), 3,44 (s, 6H, OCH3) Hỗn hợp 102, 150 ml nước 42,2 g (0,24 mol) natri dithionite khuấy đun 50oC Tiếp theo, nhiệt độ bình phản ứng tăng lên 65 oC thêm ml HCl đậm nhỏ giọt 10 phút tiếp tục khuấy nhiệt độ 30 phút Kết thúc phản ứng, hỗn hợp phản ứng làm lạnh xuống nhiệt độ phòng, điều chỉnh pH tới 10-11 dung dịch natri hydroxide 50%, chiết với ethyl acetate Phần dịch chiết làm khan Na2SO4, lọc loại dung môi áp suất thấp đến thu chất rắn màu nâu (14,4 g, hiệu suất 90%) 2-Amino-4,5-bis(2-methoxyethoxy)-benzo-nitrile 103 có điểm chảy 72-73°C IR 3356 (N-H); 3238 (N-H); 2924; 2205 (CN); 1508; 1453; 1437; 1265; 1238; 1130; 860 cm-1 1H-NMR (CDCl3) 6,91 (s, 1H, H-Ar), 6,26 (s, 1H, H-Ar), 4,20-4,04 (m, 4H, CH2O), 3,79-3,70 (m, 4H, CH2O), 3,44 (s, 6H, OCH3) 13C-NMR (CDCl3) 152,3; 151,2; 141,4; 124,3; 121,1; 115,2; 90,5; 73,9; 70,8; 61,7 N,N-dimethylformamidine 104 N,N-dimethylformamidine 104 chất rắn màu vàng nhạt 1H-NMR (CDCl3) 7,55 (s, 1H, N=CH), 7,28 (s, 1H, H-Ar), 7,02 (s, 1H, H-Ar), 6,49(s, 1H, H-Ar), 4,03-4,16 (m, 4H, CH2O), 3,74-3,78 (m, 4H, CH2O), 3,44 (s, 6H, OCH3), 3,06 (s, 6H, NCH3) 13 C-NMR (CDCl3) 153,77; 153,7; 151,5; 144,8; 119,02; 118,3; 105,9; 96,91; 77,3; 77,06; 76,8; 71; 70,7; 69,6; 68,3; 59,2; 59,1; 40,3; 34,6 37 Phenylbenzamidine 109 Phenylbenzamidine 109 chất rắn màu vàng; IR: (KBr) 3487- 3056 (rộng), 2935, 2820, 2113 (ethynyl), 1630, 1600, 1568, 1455, 1269, 1234, 1128, 866 cm-1; H-NMR (CDCl3) δ 7.72 (s, 1H, H-formamidine), 7.71 (s, 1H, H-Ar), 7.66 (d, 1H, J = 8.0 Hz, H-Ar), 7.63 (s, 1H, H-Ar), 7.56 (t, 1H, J = 8.0 Hz, J = 8.0 Hz, H-Ar), 7.44 (d, 1H, J = 8.0 Hz, H-Ar), 7.02 (s, 1H, H-Ar), 5.64 (brs, 2H, NH), 4.27-4.23 (m, 4H, CH2O), 3.83-3.78 (m, 4H, CH2O ), 3.41 (s, 6H, OCH3), 3.22 (s, 1H, ethynyl), 3.02 (s, 6H, NCH3); 13 C-NMR (CDCl3) δ 174.30 (C-benzamidine), 152.99 (C- formamidine), 152.84 (C-Ar), 148.06 (C-Ar), 142.65 (C-Ar), 139.71 (C-Ar), 136.07 (C-Ar), 132.66 (C-Ar), 130.69 (C-Ar), 129.54 (C-Ar), 127.43 (C-Ar), 123.90 (CAr), 108.59 (C-Ar), 106.36 (C-Ar), 80.63 (C-ethynyl), 78.75 (C-ethynyl), 69.69 (CO), 69.50 (C-O), 67.76 (C-O), 67.48(C-O), 58.17 (C-O), 58.10 (C-O), 39.71 (CNCH3), 36.07 (C-NCH3) Tổng hợp erlotinib 105 Hỗn hợp phản ứng gồm 13,3 g (0,05 mol) 2-amino-4,5-bis(2-methoxyethoxy) benzonitrile 103, 130 ml toluene, 0,5 ml acid acetic 13,3 ml (0,1 mol) N,Ndimethylformamide dimethyl acetal DMF-DMA đun hồi lưu Kết thúc phản ứng, DMF-DMA dư lượng nhỏ loại bỏ cách cô quay áp suất thấp Tiếp theo, thêm vào hỗn hợp phản ứng 5,9 g (0,05 mol) 3-ethynyl aniline 5,7 ml (0,1 mol) acid acetic Hỗn hợp phản ứng đun khuấy nhiệt độ 60oC giờ, sau đun hồi lưu Sau phản ứng kết thúc, hòa hỗn hợp phản ứng vào 100 ml nước lạnh trung hòa dung dịch natri bicarbonate 50% Chất rắn màu nâu tạo thành lọc, rửa với 100 ml nước lạnh 100 ml n-hexane Sau kết tinh methanol thu 12,8 g erlotinib 105 (hiệu suất 70%, độ 90%) 38 Erlotinib 105 chất rắn có điểm chảy 152-153oC IR 3250; 3071; 2928; 2893; 1501; 1464; 1429; 1332; 1255; 1218; 1129; 850 cm-1 1H-NMR (CDCl3) δ 8,63 (s, 1H, H-Ar); 7,86 (s, 1H, H-Ar); 7,76 (d, J = 8,0 Hz, 1H, H-Ar); 7,33 (m, 1H, H-Ar); 7,26 (m, 1H, H-Ar); 7,20 (s, 1H, H-Ar); 4,26 (dt, J = 19,5 Hz, J = 4,5 Hz, 4H, CH2O); 3,82 (m, 4H, CH2O); 3,45 (s, 6H, OCH3); 3,09 (s, 1H, C≡CH) 13 C-NMR (CDCl3) 168,1; 158,5; 154,2; 152,0; 146,7; 142,3; 129,2; 123,3; 122,1; 121,1; 116,5; 112,7; 108,2; 99,4; 82,4; 79,8; 72,2; 69,7; 52,3 MS (ESI): m/z [M+H]+ 394,1; theo tính tốn là: 394,4 [M+H]+ Tổng hợp erlotinib hydrocloride (93) Cho khí HCl khan qua dung dịch 12 g (0,03 mol) erlotinib 105 150 ml methanol nhiệt độ khoảng 15-20oC 10 phút Chất rắn tạo thành lọc, sấy 50oC, thu 11,6 g erlotinib hydrocloride (hiệu suất 90%) Erlotinib hydrocloride 93 chất rắn màu vàng có điểm chảy 228-229oC IR 3277, 3053, 3021, 2922, 2896, 2820, 2745, 2710, 1667, 1564, 1510, 1446, 1284, 1122, 8920 cm-1 1H-NMR (DMSO-d6) 11,45 (s, 1H, NH); 8,81 (s, 1H, H-Ar); 8,30 (s, 1H, H-Ar); 7,90-7,72 (m, 2H, H-Ar); 7,53-7,33 (m, 3H, HAr); 4,45-4,25 (m, 4H, CH2O); 3,79-3,70 (m, 4H, CH2O), 3,40 (s, 1H, C≡CH), 3,25 (s, 6H, OCH3) 13 C- NMR (DMSO-d6) 170,2; 159,1; 155,1; 151,2; 147,3; 142,3; 130,9; 125,8; 124,0; 122,3; 117,65; 114,2; 108,8; 100,9; 87,1; 80,6; 76,7; 73,5; 51,3 39 2.2.2 Tổng hợp hợp chất lai erlotinib azide qua cầu nối triazole Hòa tan erlotinib 93 (1 mmol) THF (10 ml) sau thêm CuI (0,2 mmol N, N-diisopropylethylamine DIPEA (12 mmol) hỗn hợp phản ứng khuấy nhiệt độ phòng 30 phút Thêm vào hỗn hợp phản ứng phenyl azide (1,1 mmol) khuấy nhiệt độ phòng phản ứng hồn thành (2-5 ngày, kiểm tra TLC) Hỗn hợp thu đem chiết ethyl acetate (3 x 15 mL) Pha hữu làm khan Na2SO4 sau lọc quay chân khơng Phần cặn thu đem phân lập tinh chế phương pháp sắc ký cột (n-hexane /ethyl acetate) với hệ rửa n-hexane/ethyl acetate (50-70%) Thu hợp chất lai erlotinib 109a-d với độ tinh khiết cao 6,7-Bis(2-methoxyethoxy)-N-(3-(1-(2-nitro-phenyl)-1H-1,2,3-triazole-4-yl)phenyl)-quinazoline-4-amine (109a) HN H3C O N N O N N O 2N O H3C O N 109a Chất rắn khơng màu Nhiệt nóng chảy 124oC Hiệu suất 75% IR (KBr) cm-1 : 3510, 2915, 1628, 1585, 1530, 1464, 1441, 1423, 1354, 1252, 1124, 1032, 930, 872 1H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ: 9.67 (1H, s, NH), 9.19 (1H, s), 8.57 (1H, br s), 8.38 (1H, s), 8.26 (1H, d, J = Hz), 8.02-7.96 (3H, m), 7.92 (1H, d, J = Hz), 7.90-7.86 (1H, m), 7.65 (1H, d, J = 7.5 Hz), 7.53 (1H, t, J = Hz), 7.25 (1H, s), 4.33-4.29 (4H, m, CH3OCH2CH2O), 3.81-3.75 (4H, m, CH3OCH2CH2O), 3.38 (3H, s, OCH3), 3.36 (3H, s, OCH3).13C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz) δ: 156.4, 153.7, 148.2, 147.1, 144.1, 140.1, 134.5, 131.3, 130.1, 129.2, 129.1, 127.5, 125.6, 122.8, 122.4, 120.7, 119.1, 103.3, 70.1, 70.0, 68.4, 68.1, 58.4, 58.3 HRMS (m/z) tìm thấy: 558.2065 Theo tính toán: C28H28N7O6: 558.2023 [M+H]+ 40 6,7-Bis(2-methoxyethoxy)-N-(3-(1-(3-nitro-phenyl)-1H-1,2,3-triazole-4yl)phenyl)quinazoline-4-amine (109b) HN H3C H3C O O O O N N N N N NO 109b Chất rắn khơng màu Nhiệt nóng chảy 121oC Hiệu suất 83% IR (KBr) cm-1: 2930, 1623, 1583, 1535, 1507, 1442, 1350, 1238, 1034, 928 H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ: 9.61 (1H, s, NH), 9.56 (1H, s), 8.81 (1H, t, J = Hz), 8.51-8.47 (2H, m), 8.40 (1H, s), 8.35-8.33 (1H, m), 7.95-7.92 (3H, m), 7.67 (1H, d, J = 5.5 Hz), 7.53 (1H, t, J = Hz), 7.23 (1H, s), 4.33-4.28 (4H, m, CH3OCH2CH2O), 3.81-3.75 (4H, m, CH3OCH2CH2O), 3.38 (3H, s, OCH3), 3.36 (3H, s, OCH3) 13 C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz) δ: 156.4, 153.6, 152.9, 148.6, 148.1, 147.7, 140.2, 137.2, 131.6, 103.2, 129.2, 125.9, 123.1, 122.4, 120.6, 120.1, 119.1, 114.6, 108.2, 103.3, 70.1, 70.0, 68.4, 68.1, 58.4, 58.3 HRMS/MS (m/z) tìm thấy: 558.2062 Theo tính toán: C28H28N7O6: 558.2023 [M+H]+ 6,7-Bis(2-methoxyethoxy)-N-(3-(1-(4-nitro-phenyl)-1H-1,2,3-triazole-4-yl)phenyl)quinazoline-4-amine (109c) HN H3C H3C O O O O N N N NO N N 109c Chất rắn khơng màu Nhiệt nóng chảy 102oC Hiệu suất 86% IR (KBr) cm-1: 2933, 1622, 1598, 1527, 1507, 1448, 1433, 1343, 1238, 1123, 1033, 854 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9.62 (1H, s, NH), 9.52 (1H, s), 8.50-8.47 (3H, m), 8.40 (1H, s), 8.29-8.27 (2H, m), 7.95-7.94 (2H, m), 7.66 (1H, d, J = Hz), 7.53 (1H, t, J = Hz), 7.23 (1H, s), 4.33-4.28 (4H, m, CH3OCH2CH2O), 3.81-3.75 (4H, m, CH3OCH2CH2O), 3.38 (3H, s, OCH3), 3.36 (3H, s, OCH3) HRMS (m/z) tìm thấy: 558.2062 Theo tính tốn: C28H28N7O6: 558.2023 [M+H]+ 41 5-(4-(3-((6,7-Bis(2-methoxyethoxy)quinazoline-4-yl)amino)phenyl)-1H-1,2,3triazole-1-yl)-2-(trifluoromethyl)benzonitrile (109d) CN HN H3C H3C O O O O CF N N N N N 109d Chất rắn không màu Nhiệt độ nóng chảy 140oC Hiệu suất 90% IR (KBr) cm-1: 2926, 1645, 1553, 1516, 1461, 1384, 1316, 1150 1H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ: 9.70 (1H, s, NH), 9.64 (1H, s), 8.60 (1H, s), 8.56-8.54 (2H, m), 8.48-8.46 (1H, m), 8.39 (1H, s), 7.95-7.93 (2H, m), 7.68-7.66 (1H, m), 7.55 (1H, t, J = Hz), 7.25 (1H, s), 4.33-4.29 (4H, m, CH3OCH2CH2O), 3.81-3.75 (4H, m, CH3OCH2CH2O), 3.38 (3H, s, OCH3), 3.36 (3H, s, OCH3) 13 C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz) δ: 156.5, 153.8, 152.7, 148.4, 148.0, 140.2, 139.8, 137.6, 133.0, 132.7, 130.0, 129.5, 123.8, 122.9, 121.1, 120.9, 120.4, 119.4, 118.3, 118.2, 115.4, 107.9, 103.4, 70.2, 70.1, 68.6, 68.3, 58.5, 58.4 HRMS (m/z) tìm thấy: 606.2017 Theo tính tốn: C30H27F3N7O6: 606.1998 [M+H]+ 2.3 TỔNG HỢP CÁC DẪN XUẤT QUINAZOLINE CHỨA NHÓM CROWN ETHER Ở VỊ TRÍ C-6, C-7 2.3.1 Quy trình tổng hợp hợp chất 112a, b Hỗn hợp 2-nitro-benzaldehyde 111a, b (20 mmol) metanol (15 mL) dung dịch hydroxylamine hydrochloride (40 mol) nước (10 mL) khuấy trộn nhiệt độ phòng vòng 30 phút Sau thêm vào hỗn hợp dung dịch natri hydroxide (0,4 mol) cách nhỏ giọt Hỗn hợp kiềm hóa khuấy vòng 30-60 phút nhiệt độ phòng Sau phản ứng kết thúc, dung mơi loại bỏ áp suất giảm, cặn làm lạnh sâu cách ngâm nước đá nghiền (10 mL) pH điều chỉnh đến ~ với acid acetic 50% Kết tủa hình thành lập, rửa nước lạnh (20 mL) n-hexane (30 mL), sấy khô 50°C để thu dẫn xuất oxi tương ứng 112a, b sử dụng cho bước 42 (E)-2-nitrobenzaldehyde oxime (112a) Chất rắn màu vàng Hiệu suất 80% IR (KBr) 3293, 1612,1573, 1521, 1487, 1448, 1347, 1211, 1145, 978, 928, 892, 741 cm-1 (E)-6-nitrobenzo[d][1,3]dioxole-5-carbaldehyde oxime (112b) Chất rắn màu vàng nhạt Hiệu suất 76%, IR (KBr) 3064, 2934, 1766, 1593, 1512, 1498, 1435, 1370, 1339, 1322, 1287, 1215, 1035, 1006, 924, 889 cm-1 2.3.2 Quy trình tổng hợp hợp chất 113a, b Hỗn hợp oxa tương ứng 112a, b (18 mmol) anhydrit acetic (10 mL) đun hồi lưu 8-12 h Sau đó, dung mơi loại bỏ cách cô quay hỗn hợp chân không áp suất thấp, phần lại thêm nước lạnh (10 mL), giữ nhiệt độ hỗn hợp thu 15-20°C 1-2 h Kết tủa hình thành đem cô lập, sấy khô 40oC thu hợp chất 113a, b tương ứng làm nguyên liệu cho bước sau 2-Nitrobenzonitrile (113a) Chất rắn màu vàng, Hiệu suất 70% IR (KBr) 3112, 3085, 2233, 1613, 1571, 1531, 1345, 1482, 1345, 1201, 1150, 1082, 969, 859, 791, 743 cm-1 6-Nitrobenzo[d][1,3]dioxole-5-carbonitrile (113b) Chất rắn màu vàng, Hiệu suất 90% IR (KBr) 3115, 3061, 2926, 2232 (C≡N), 1601, 1530, 1505, 1486, 1430, 1373, 1337, 1289, 1179, 1037, 927, 883, 757, 620 cm-1 43 2.3.2 Quy trình tổng hợp hợp chất 116a, b Tổng hợp hợp chất 114c, d Hỗn hợp phản ứng gồm g (13 mmol) acid 3,4- dihydroxy benzoic 1, 7,18 g (52 mmol) kali carbonat, 0,44 g (1,3 mmol) tetrabutyl ammonium hydrosunfat 20 ml aceton khuấy nhiệt độ phòng Sau đó, thêm 52 mmol 1,2dicloethan; 1,3-dibrompropan vào dung dịch phản ứng đun hồi lưu Sau 10 phản ứng kết thúc, hỗn hợp phản ứng làm lạnh xuống nhiệt độ phòng Chất rắn lọc rửa 30 ml ethyl acetate Phần dịch lọc phần ethyl acetate rửa chất rắn gộp lại, loại dung môi áp suất thấp thu sản phẩm ester trung gian (chất dầu màu nâu) với khối lượng khơng đổi Hòa tan ester dung dịch chứa 20 ml metanol, ml nước 2,18 g (39 mmol) KOH nhiệt độ phòng Sau phản ứng kết thúc, loại bỏ methanol cách cô quay áp suất thấp, điều chỉnh pH hỗn hợp phản ứng đến pH ~ dung dịch HCl 10% 0oC xuất kết tủa trắng Sản phẩm rắn tạo thành lọc, rửa nước đá sấy khô 50 oC Thu hợp chất 114 (hiệu suất 85%-90%, độ 95-97%) 2,3-Dihydrobenzo[b][1,4]dioxine-6-carboxylic acid (114c) Hợp chất 3-Dihydrobenzo[b][1,4]dioxine-6-carboxylic acid 114c chất rắn màu trắng, có điểm chảy 138- 139oC IR 2927; 1697 (C=O); 1611; 1588; 1509; 1463; 1432; 1291; 1263; 1236; 1194; 1120; 1065; 1045; 911; 888; 824; 763; 745; 556 (cm-1) 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 7,63-7,62 (2H, m); 6,91 (1H, d, J = Hz, H-Ar); 4,33-4,27 (4H, m, OCH2) 3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioxepine-7-carboxylic acid (114d) Chất rắn khơng màu Nhiệt độ nóng chảy 156-158oC IR (KBr) 2949, 1693, 1676, 1604, 1572, 1507, 1436, 1414, 1311, 1268, 1241, 1117, 1095, 1040, 945, 831, 44 774, 763, 737, 647, 543 cm-1 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 7.71 (1H, s, H-Ar), 7.68 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-Ar), 6.99 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-Ar), 4.33 (2H, t, J = 5.5 Hz, OCH2), 4.27 (2H, t, J = 5.5 Hz, OCH2), 2.26-2.22 (2H, m, OCH2CH2CH2O) 2.3.3 Quy trình tổng hợp hợp chất 115a, b Hỗn hợp phản ứng gồm 11 mmol acid 114a, b 6,6 g (0,11 mol) urea đun khuấy đến 150-160oC Sau đun, hỗn hợp phản ứng làm nguội xuống nhiệt độ phòng, thêm 20 ml xylen 6,24 g (44 mmol) P2O5 đun hồi lưu 142oC Khi phản ứng kết thúc, hỗn hợp phản ứng làm lạnh xuống 80oC, loại bỏ cặn phương pháp lọc, rửa cặn ethyl acetate nóng (4 x 30 ml) Phần cặn lại hòa tan nước tiếp tục chiết với ethyl acetat Pha hữu gộp lại, rửa dung dịch NaHCO3 (50 ml x 3), làm khan Na2SO4 loại dung môi áp suất thấp đến thu chất dầu màu vàng Sau tinh chế làm cột silica gel với hệ dung môi n-hexane/ethyl acetate thu sản phẩm tinh khiết (hiệu suất 80-85%) 2,3-Dihydrobenzo[b][1,4]dioxine-6-carbonitrile (115c) Chất rắn màu vàng nhạt Hiệu suất 80%, có điểm chảy 124oC IR 2956; 2226 (CN); 1609; 1580; 1508; 1456; 1421; 1317; 1293; 1245; 1211; 1148; 1123; 1062; 909; 881; 813; 752; 713; 614; 487 (cm-1) 3,4-Dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioxepine-7-carbonitrile (115d) Chất rắn không màu Hiệu suất 80% IR (KBr) 2966, 2919, 2850, 2223 (C≡N), 1608, 1567, 1506, 1416, 1321, 1275, 1104, 1060, 996, 968, 898, 835, 700, 627 cm-1 Hòa tan chất benzonitrile 115a, b (15 mmol) acid acetic băng (2 mL) Sau nhỏ giọt dung dịch vào acid nitric lạnh 65% (5 mL), vừa nhỏ vừa khuấy 10 phút Nhiệt độ nâng lên 50°C khuấy Sau hoàn thành, hỗn hợp phản ứng làm lạnh đến 25°C, thêm vào hỗn hợp nước đá lạnh (15 mL) Kết tủa hình thành lọc, rửa nước lạnh, nhexane sấy khơ khơng khí để thu 2-nitro-benzonitrile 116a, b tương ứng 45 7-Nitro-2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioxine-6-carbonitrile (116a) Chất rắn màu vàng Hiệu suất 90% Nhiệt độ nóng chảy 148oC IR (KBr) 3468, 2236 (C≡N), 1578 1519, 1384, 1351, 1334, 1307, 1058, 902, 836, 756 cm-1 8-Nitro-3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioxepine-7-carbonitrile (116b) Chất rắn màu vàng Hiệu suất 90% IR (KBr) 2976, 2909, 2231 (C≡N), 1610, 1566, 1532, 1498, 1469, 1326, 1300, 1274, 1182, 1157, 1113, 1053, 981, 915, 895, 831, 806, 762, 750, 695, 644, 621, 604 cm-1 2.3.4 Quy trình tổng hợp hợp chất 117a-d Hỗn hợp chất 2-nitro-benzonitrile 113a, b 116c, d (15 mmol) natri dithionite (60 mmol) nước (10 mL), khuấy đun nóng đến 50°C 3-4 Sau đó, nhiệt độ nâng lên 65°C thêm HCl đậm đặc (5 mL) cách nhỏ giọt, hỗn hợp tiếp tục khuấy 30 phút Sau phản ứng kết thúc, làm lạnh hỗn hợp thu đến 20°C điều chỉnh pH đến ~ 10 dung dịch natri hydroxit 50% Kết tủa hình thành lọc, rửa nước lạnh, n-hexane sấy khô 40oC để thu hợp chất 2-amino-benzonitrile 117a-d, tương ứng 2-Aminnobenzonitrile (117a) Chất rắn màu vàng Hiệu suất 55% IR (KBr) 2923, 2852, 2216, 1681, 1614, 1468, 1126, 1030 cm-1 6-Aminobenzo[d][1,3]dioxole-5-carbonitrile (117b) 46 Chất rắn màu vàng Hiệu suất 60% IR (KBr) 3451 (N-H), 3361 (N-H), 3251, 2921, 2203 (C≡N), 1643, 1612, 1502, 1483, 1340, 1270, 1234, 1223, 1174, 1036, 931, 868, 850, 825, 742 cm-1 7-Amino-2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioxine-6-carbonitrile (117c) Nhiệt độ nóng chảy Hiệu suất 65% 166-167oC IR (KBr) 3453 (N-H), 3369 (N-H), 3247, 2991, 2206 (C≡N), 1646, 1573, 1499, 1463, 1305, 1216, 1192, 1129, 1071, 1022, 929, 903, 881, 822, 714 cm-1 8-Amino-3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioxepine-7-carbonitrile (117d) Chất rắn màu vàng nhạt Hiệu suất 60% IR (KBr) 3445 (N-H), 3362 (N-H), 2968, 2908, 2868, 2211 (C≡N), 1631, 1559, 1504, 1452, 1432, 1417, 1388, 1304, 1283, 1252, 1213, 1187, 1116, 985, 950, 881, 848, 671, 522 cm-1 2.3.5 Quy trình tổng hợp hợp chất 119a-d Hỗn hợp 2-amino-benzonitrile 117a-d (5 mmol) toluene (5 mL) acid acetic (2,5 mL) DMF-DMA (10 mmol) đun hồi lưu từ - Sau kết thúc phản ứng, DMF-DMA dư loại bỏ khỏi hỗn hợp phản ứng cách cô quay áp suất thấp Sau đó, hỗn hợp thu được làm lạnh đến nhiệt độ phòng thêm 3-ethynylaniline (5 mmol) acid acetic (10 mmol) Hỗn hợp phản ứng khuấy 60°C 2-3 Tiếp theo, hỗn hợp đun hồi lưu khuấy vòng 2-3 Sau phản ứng kết thúc, hỗn hợp phản ứng làm nguội đến nhiệt độ phòng chiết ethyl acetate (3 x 15 mL) Các chất chiết xuất pha hữu làm khan Na2SO4, lọc quay khô chân không Phần cặn tinh chế phương pháp sắc ký cột (n-hexan/ethyl acetate) để thu chất mục tiêu 119a-d 47 N-(3-ethynylphenyl)quinazoline-4-amine (119a) Chất rắn màu vàng nhạt Hiệu suất 63% Nhiệt nóng chảy: 140-142oC IR (KBr) 3213, 1624, 1609, 1581, 1540, 1502, 1442, 1391, 1362, 1323, 1272, 912, 764 cm-1 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9.82 (1H, s, NH), 8.65 (1H, s), 8.55 (1H, d, J = Hz), 8.09 (1H, s), 7.94 (1H, d, J = Hz), 7.88 (1H, d, J = 7.5 Hz), 7.82-7.80 (1H, d, J = Hz), 7.66 (1H, t, J = 7.5 Hz), 7.41 (1H, t, J = Hz), 7.24 (1H, d, J = 7.5 Hz), 4.19 (1H, s, C≡CH) N-(3-ethynylphenyl)-[1,3]dioxolo[4,5-g]quinazoline-8-amine (119b) Chất rắn màu vàng sáng Hiệu suất 60% Nhiệt nóng chảy: 210-212oC IR (KBr) 3302, 1616, 1590, 1534, 1495, 1471, 1437, 1241, 1035, 906, 890 cm-1 1HNMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9.38 (1H, s, NH), 8.49 (1H, s), 8.04 (1H, t, J = 1.5 Hz), 7.97 (1H, s), 7.88 (1H, dd, J = 1.5 Hz, J = Hz), 7.38 (1H, t, J = Hz), 7.20 (1H, s), 7.19 (1H, s), 6.24 (2H, s, OCH2O), 4.17 (1H, s, C≡CH) N-(3-ethynylphenyl)-7,8-dihydro-[1,4]dioxino[2,3-g]quinazoline-4-amine (119c) 48 (10c) Chất rắn khơng màu Hiệu suất 57% Nhiệt độ nóng chảy: 253-254oC IR (KBr) 3325, 3275, 1613, 1594, 1565, 1539, 1508, 1431, 1339, 1290, 1236, 1138, 1071, 899, 788 cm-1 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 8.65 (1H, s), 7.89 (1H, s), 7.76 (1H, d, J = Hz), 7.37-7.34 (2H, m), 7.29 (1H, m), 7.10 (1H, br s), 4.41-4.38 (4H, m, OCH2), 3.10 (1H, s, C≡CH) HRMS (ESI+) m/z tìm thấy: 304.1057 Theo tính tốn C18H14N3O2 [M+H]+ 304.1008 N-(3-ethynylphenyl)-8,9-dihydro-7H-[1,4]dioxepino[2,3-g]quinazoline-4-amine (119d) Chất rắn khơng màu Nhiệt độ nóng chảy 231-232oC Hiệu suất: 50% IR (KBr) 3455, 2924, 2853, 1696, 1661, 1625, 1577, 1504, 1458, 1427, 1244, 1124, 930, 868, 758 cm-1 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9.68 (1H, s, NH), 8.57 (1H, s), 8.11 (1H, d, J = 9.5 Hz), 8.05 (1H, s), 7.89 (1H, d, J = Hz), 7.39 (1H, t, J = Hz), 7.26 (1H, d, J = Hz), 7.21 (1H, d, J = 7.5 Hz), 4.32 (4H, dt, J = 5.5 Hz, J = 18 Hz, OCH2), 4.18 (1H, s, C≡CH), 2.24 (2H, t, J = 5.5 Hz, OCH2CH2CH2O) 2.4 TỔNG HỢP CÁC HỢP CHẤT LAI CỦA DẪN XUẤT CROWN ETHERQUINAZOLINE-4-AMINE (119a-d) VỚI CÁC AZIDE QUA CẦU NỐI TRIAZOLE Hỗn hợp gồm chất 119a-d (1 mmol) THF (10 ml) thêm CuI (0,2 mmol N, N-diisopropylethylamine DIPEA (12 mmol), hỗn hợp phản ứng khuấy nhiệt độ phòng 30 phút Thêm vào hỗn hợp phản ứng phenyl azide (1,1 mmol) khuấy nhiệt độ phòng phản ứng hoàn thành (12h-24h, kiểm tra TLC) Hỗn hợp thu đem chiết ethyl acetate (3 x 15 mL) Pha hữu làm khan Na2SO4 sau lọc quay chân khơng Phần cặn thu đem phân lập tinh chế phương pháp sắc ký cột (n-hexan/ethyl acetat) với hệ rửa n-hexane/ethyl acetate (1:9) Thu hợp chất lai 120123(a-d) với độ tinh khiết cao 49 2.4.1 Tổng hợp hợp chất lai N-(3-ethynylphenyl)quinazoline-4-amine (119a) với azide qua cầu nối triazole N-(3-(1-(2-nitrophenyl)-1H-1,2,3-triazole-4-yl)phenyl)quinazoline-4-amine (120a) Chất rắn không màu Nhiệt độ nóng chảy 212oC Hiệu suất 87% IR (KBr) 3132, 2924, 2853, 1611, 1568, 1538, 1492, 1411, 1354, 1033, 924, 888, 773 cm-1 H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9.96 (1H, s, NH), 9.19 (1H, s), 8.65 (1H, s), 8.62 (1H, d, J = Hz), 8.50 (1H, t, J = 1.5 Hz), 8.26 (1H, d, J = 7.5 Hz), 8.03-7.95 (3H, m), 7.88 (2H, t, J = Hz), 7.82 (1H, d, J = 7.5 Hz), 7.68-7.65 (2H, m), 7.54 (1H, t, J = Hz) 13 C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz) δ 157.9, 154.5, 149.7, 147.1, 144.1, 139.9, 134.5, 133.1, 131.3, 130.2, 129.3, 129.1, 127.8, 127.5, 126.4, 125.6, 123.0, 122.9, 122.5, 121.0, 119.3, 115.2 ESI-MS (m/z) tìm thấy: 410.3196 Theo tính tốn: C22H16N7O2: 410.1287 [M+H]+ N-(3-(1-(3-nitrophenyl)-1H-1,2,3-triazole-4-yl)phenyl)quinazoline-4-amine (120b) Chất rắn khơng màu Nhiệt độ nóng chảy 242-243oC Hiệu suất 87% IR (KBr) 3146, 2922, 1623, 1578, 1528, 1492, 1416, 1356, 1235, 1047 cm-1 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9.97 (1H, s, NH), 9.57 (1H, s), 8.82 (1H, t, J = Hz), 8.67 (1H, br.s), 8.63 (1H, d, J = 8.5 Hz), 8.50 (1H, s), 8.49 (1H, dd, J = Hz, J = Hz), 8.36 (1H, dd, J = 1.5 Hz, J = Hz), 7.97-7.93 (2H, m), 7.89 (1H, t, J = 7.5 Hz), 7.82 (1H, d, J = Hz), 7.71 (1H, d, J = Hz), 7.67 (1H, t, J = 7.5 Hz), 7.55 (1H, t, J = Hz) 13 C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz) δ 157.9, 154.5, 149.7, 148.6, 147.7, 139.9, 137.2, 133.1, 131.6, 130.2, 129.2, 127.8, 126.3, 125.9, 123.1, 123.0, 122.5, 121.0, 120.1, 129.4, 115.2, 114.6 HRMS tìm thấy: 410.1361 Tính tốn: C22H16N7O2: 410.1287 [M+H]+ 50 N-(3-(1-(4-nitrophenyl)-1H-1,2,3-triazole-4-yl)phenyl)quinazoline-4-amine (120c) Chất rắn không màu Nhiệt độ nóng chảy 267oC Hiệu suất 72% IR (KBr) 3124, 1620, 1599, 1571, 1521, 1490, 1410, 1344, 1228, 1033, 853 cm-1 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9.97 (1H, s, NH), 9.53 (1H, s), 8.65 (1H, s), 8.62 (1H, d, J = 7.5 Hz), 8.52-8.49 (3H, m), 8.33-8.29 (2H, m), 7.96 (1H, d, J = Hz), 7.88 (1H, t, J = Hz), 7.82 (1H, d, J = Hz), 7.71-7.70 (2H, m), 7.55 (1H, t, J = Hz) ESI-MS (m/z) tìm thấy: 410.1291 Theo tính tốn: C22H16N7O2: 410.1287 [M+H]+ 5-(4-(3-(quinazolin-4-ylamino)phenyl)-1H-1,2,3-triazole-1-yl)-2 (trifluoromethyl) Benzonitrile (120d) Chất rắn không màu Nhiệt độ nóng chảy 186oC Hiệu suất 90% IR (KBr) 3387, 2234, 1616, 1572, 1532, 1494, 1442, 1408, 1316, 1184, 1141, 1036, 926 cm-1 H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9.92 (1H, s, NH), 9.53 (1H, s), 8.64 (1H, s), 8.59 (1H, d, J = Hz), 8.52 (1H, d, J = 1.5 Hz), 8.45-8.46 (2H, m), 8.37 (1H, d, J = 8.5 Hz), 7.95 (1H, d, J = Hz), 7.85 (1H, t, J = Hz), 7.79 (1H, d, J = Hz), 7.64 (2H, d, J = Hz), 7.50 (1H, t, J = Hz) 13 C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz) δ 157.9, 154.5, 149.7, 147.9, 139.9, 139.6, 137.4, 133.1, 132.7 (q, J = 31.3 Hz, Cq-CF3), 129.9, 129.2, 127.8, 126.3, 123.6, 123.2, 122.6, 121.0, 1209, 120.1, 119.3, 117.9, 115.2, 115.0, 107.7 HRMS tìm thấy: 458.1336 Theo tính tốn: C24H15F3N7: 458.1263 [M+H]+ 2.4.2 Tổng hợp hợp chất lai N-(3-ethynylphenyl)-[1,3]dioxolo[4,5g]quinazoline-8-amine (119b) 51 N-(3-(1-(2-nitrophenyl)-1H-1,2,3-triazole-4-yl)phenyl)-[1,3]dioxolo[4,5g]quinazoline-8-amine (121a) Chất rắn màu vàng sáng Nhiệt độ nóng chảy 285oC Hiệu suất 85% IR (KBr) 3134, 2916, 1615, 1580, 1532, 1494, 1467, 1440, 1386, 1346, 1213, 1036, 912 cm-1 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9.52 (1H, s, NH), 9.17 (1H, s), 8.50 (1H, s), 8.45 (1H, t, J = Hz), 8.26 (1H, dd, J = Hz, J = Hz), 8.04 (1H, s), 8.01-7.97 (2H, m), 7.92 (1H, dd, J = Hz, J = Hz), 7.89-7.86 (1H, m), 7.63 (1H, d, J = Hz), 7.50 (1H, t, J = Hz), 7.19 (1H, s), 6.25 (2H, s, OCH2O) 13 C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz) δ 156.9, 153.0, 152.4, 148.5, 147.2, 147.1, 144.0, 140.2, 134.5, 131.3, 130.1, 129.2, 129.1, 127.5, 125.6, 122.8, 122.0, 120.4, 118.8, 110.2, 104.6, 102.3, 98.9 HRMS tìm thấy: 454.1529.Tính tốn: C23H16N7O4: 454.1186 [M+H]+; N-(3-(1-(3-nitrophenyl)-1H-1,2,3-triazole-4-yl)phenyl)-[1,3]dioxolo[4,5-g] quinazoline-8-amine (121b) Chất rắn màu vàng sáng Nhiệt độ nóng chảy 290oC Hiệu suất 85% IR (KBr) 3440, 3027, 2914, 1615, 1581, 1527, 1465, 1439, 1393, 1349, 1227, 1036, 910 cm-1 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9.55 (2H, s), 8.81 (1H, t, J = Hz), 8.49-8.46 (3H, m), 8.35 (1H, dd, J = Hz, J = Hz), 8.06 (1H, s), 7.93 (2H, t, J = Hz), 7.65 (1H, d, J = Hz), 7.51 (1H, t, J = Hz), 7.19 (1H, s), 6.25 (2H, s, OCH2O) 13 C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz) δ 156.9, 153.0, 152.4, 148.6, 147.7, 147.3, 140.2, 137.2, 131.6, 130.1, 129.2, 126.0, 123.1, 122.1, 120.5, 120.1, 118.9, 114.6, 104.7, 102.3, 98.9 ESI-MS (m/z) tìm thấy: 454.1228 Theo tính tốn: C23H16N7O4: 454.1186 [M+H]+ 52 N-(3-(1-(4-nitrophenyl)-1H-1,2,3-triazole-4-yl)phenyl)-[1,3]dioxolo[4,5g]quinazoline-8-amine (121c) Chất rắn màu vàng sáng Nhiệt độ nóng chảy 3210C Hiệu suất 70% IR (KBr) 3268, 2923, 1615, 1524, 1493, 1471, 1439, 1342, 1244, 1217, 1036, 911, 852 cm-1 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9.53 (1H, s, NH), 9.51 (1H, s), 8.51-8.46 (4H, m), 8.31-8.28 (2H, m), 8.05 (1H, s), 7.93 (1H, dd, J = Hz, J = 1.5 Hz), 7.66 (1H, d, J = Hz), 7.52 (1H, t, J = Hz), 7.20 (1H, s), 6.25 (2H, s, OCH2) 13 C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz) δ 156.9, 153.1, 152.0, 148.6, 147.7, 147.3, 140.2, 137.3, 131.6, 130.1, 129.5, 126.2, 123.1, 122.1, 120.5, 120.4, 118.9, 114.6, 104.7, 102.3, 98.9 ESI-MS (m/z) tìm thấy: 454.1228 Theo tính tốn: C23H16N7O4: 454.1186 [M+H]+ 5-(4-(3-([1,3]Dioxolo[4,5-g]quinazoline-8-ylamino)phenyl)-1H-1,2,3-triazole-1yl)-2-(trifluoro-methyl)benzonitrile (121d) Chất rắn màu vàng nhạt Nhiệt độ nóng chảy 256-257oC Hiệu suất 90% IR (KBr) 3282, 3132, 2238 (CN), 1615, 1580, 1529, 1493, 1470, 1439, 1386, 1315, 1271, 1242, 1217, 1183, 1135, 1030, 911, 845, 790, 688 cm-1 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9.60 (1H, s, H-triazole), 9.53 (1H, s, NH), 8.59 (1H, s, H19), 8.54 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-23), 8.49 (1H, s, H-2), 8.47 (2H, m, H-11, H-22), 8.14 (1H, s, H-5), 7.93 (1H, d, J = Hz, H-15), 7.63 (1H, d, J = 7.5 Hz, H-13), 7.52 (1H, t, J = Hz, H-14), 7.19 (1H, s, H-9), 6.25 (2H, s, OCH2) 13C-NMR (DMSOd6, 125 MHz) δ 156.9 (C-4), 153.0 (C-2), 152.4 (C-6), 148.6 (C-9a), 148.0 (C-16), 147.3 (C-8), 140.3 (C-10), 139.7 (C-18), 137.5 (C-22), 132.7 (q, J = 32.5 Hz, C-21), 129.8 (C-12), 129.2 (C-14), 123.7 (C-23), 122.2 (C-15), 120.4 (C-13), 120.2 (C-17), 118.9 (C-11), 1181 (C-19), 115.0 (C≡N), 110.2 (C-4a), 107.7 (C-20), 104.6 (C-9), 53 102.3 (C-7), 98.9 (C-5) HRMS Theo tính tốn: C25H15F3N7O2: 502.1161 [M+H]+; Tìm thấy: 502.1233 2.4.3 Tổng hợp hợp chất lai N-(3-ethynylphenyl)-7,8-dihydro[1,4]dioxino[2,3-g]quinazoline-4-amine (119c) N-(3-(1-(2-nitrophenyl)-1H-1,2,3-triazole-4-yl)phenyl)-7,8-dihydro [1,4] dioxino [2,3-g] quinazoline-4-amine (122a) Chất rắn màu vàng sáng Hiệu suất: 80% Nhiệt nóng chảy: 195oC IR (KBr) 3134, 1603, 1568, 1531, 1505, 1415, 1348, 1289, 1220, 1066, 901 cm-1 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9.67 (1H, br.s, NH), 9.17 (1H, s), 8.49 (2H, s), 8.26 (1H, d, J = Hz), 8.14 (1H, s), 8.02-7.97 (2H, m), 7.95 (1H, d, J = Hz), 7.88 (1H, t, J = Hz), 7.63 (1H, d, J = 7.5 Hz), 7.51 (1H, t, J = Hz), 7.19 (1H, s), 4.42 (4H, d, J = 3.5 Hz, OCH2) 13 C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz) δ 156.7, 152.9, 149.2, 147.1, 145.7, 144.1, 143.7, 140.2, 134.5, 131.3, 130.1, 129.2, 129.1, 127.5, 125.6, 122.8, 122.1, 120.6, 118.9, 112.3, 110.0, 108.5, 64.5, 64.2 HRMS (ESI+) m/z tìm thấy: 468.1416 Theo tính tốn: C24H18N7O4 [M+H]+ 468.1342 N-(3-(1-(3-nitrophenyl)-1H-1,2,3-triazole-4-yl)phenyl)-7,8-dihydro [1,4] dioxino [2,3-g] quinazoline-4-amine (122b) Chất rắn màu vàng sáng Nhiệt độ nóng chảy 295oC Hiệu suất 84% IR (KBr) 3432, 1618, 1564, 1529, 1502, 1408, 1351, 1288, 1227, 1067, 1040, 900, 795 cm-1 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9.62 (1H, s, NH), 9.53 (1H, s), 8.80 (1H, d, J = Hz), 8.49-8.46 (3H, m), 8.34 (1H, dd, J = 1.5 Hz, J = Hz), 8.14 (1H, s), 7.97 (1H, dd, J = 1.5 Hz, J = Hz), 7.93 (1H, d, J = 8.5 Hz), 7.65 (1H, d, J = 7.5 Hz), 7.51 (1H, t, J = Hz), 7.19 (1H, s), 4.41 (4H, d, J = Hz, OCH2) 54 13 C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz) δ 156.6, 153.0, 149.1, 148.6, 147.7, 146.1, 143.6, 140.2, 137.2, 131.6, 130.1, 129.2, 125.9, 123.1, 122.1, 120.5, 120.1, 118.9, 114.6, 112.5, 108.5, 64.5, 64.2 HRMS tìm thấy: 468.4461 Theo tính tốn: C24H18N7O4: 468.1342 [M+H]+ N-(3-(1-(4-nitrophenyl)-1H-1,2,3-triazole-4-yl)phenyl)-7,8-dihydro [1,4] dioxino [2,3-g] quinazoline-4-amine (122c) Chất rắn màu vàng nhạt Nhiệt độ nóng chảy 278-279oC Hiệu suất 73% IR (KBr) 1600, 1568, 1524, 1507, 1428, 1413, 1342, 1291, 1222, 1034, 900, 852 cm-1 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9.62 (1H, s, NH), 9.49 (1H, s), 8.508.48 (4H, m), 8.29 (2H, d, J = Hz), 8.14 (1H, s), 7.97 (1H, d, J = Hz), 7.65 (1H, d, J = Hz), 7.51 (1H, t, J = Hz), 7.19 (1H, s), 4.42 (4H, d, J = Hz, OCH2) 13CNMR (DMSO-d6, 125 MHz) δ 156.6, 153.0, 149.1, 147.9, 146.7, 146.0, 143.6, 140.9, 140.2, 123.0, 129.2, 125.6, 122.1, 120.6, 120.5, 120.0, 118.9, 112.5, 110.0, 108.4, 64.5, 64.2 HRMS tìm thấy: 468.4470 Theo tính tốn: C24H18N7O4: 468.1342 [M+H]+ 5-(4-(3-((7,8-Dihydro-[1,4]dioxino[2,3-g]quinazoline-4-yl)amino)phenyl)-1H1,2,3-triazole-1-yl)-2-(trifluoromethyl)benzonitrile (122d) Chất rắn màu vàng sáng Nhiệt độ nóng chảy 240oC HIệu suất 90% IR (KBr) 3335, 2236, 1615, 1567, 1532, 1510, 1420, 1325, 1292, 1134, 1070, 902 cm-1 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9.61 (1H, s, NH), 9.58 (1H, s), 8.57 (1H, s), 8.53-8.49 (3H, m), 8.43 (1H, d, J = 8.5 Hz), 8.13 (1H, s), 7.97 (1H, d, J = Hz), 7.61 (1H, d, J = 7.5 Hz), 7.51 (1H, t, J = Hz), 7.18 (1H, s), 4.14 (4H, d, J = Hz, OCH2) 13 C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz) δ 156.6, 152.9, 149.0, 147.9, 146.1, 143.6, 140.2, 139.6, 137.4, 132.6 (q, J = 32.5 Hz, Cq-CF3), 129.8, 129.1, 123.6, 55 123.1, 122.1, 120.9, 120.4, 120.1, 118.8, 118.0, 114.9, 112.5, 108.4, 107.7, 64.5, 64.1 HRMS tìm thấy: 516.1391 Theo tính tốn: C26H17F3N7O2: 516.1318 [M+H]+ 2.4.4 Tổng hợp hợp chất lai N-(3-ethynylphenyl)-8,9-dihydro-7H[1,4]dioxepino[2,3-g]quinazolin-4-amine (119d) N-(3-(1-(2-nitrophenyl)-1H-1,2,3-triazole-4-yl)phenyl)-8,9-dihydro-7H-[1,4] dioxepino[2,3-g]quinazoline-4-amine (123a) Chất rắn khơng màu Nhiệt độ nóng chảy 278oC Hiệu suất 79% IR (KBr) 2926, 1609, 1574, 1537, 1479, 1415, 1350, 1330, 1064, 991 cm-1 H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9.81 (1H, s, NH), 9.17 (1H, s), 8.58 (1H, s), 8.48 (1H, s), 8.26 (1H, dd, J = Hz, J = Hz), 8.18 (1H, d, J = Hz), 8.02-7.97 (2H, m), 7.91 (1H, d, J = Hz), 7.89 (1H, td, J = 8.5 Hz, J = Hz), 7.65 (1H, d, J = Hz), 7.51 (1H, t, J = Hz), 7.26 (1H, d, J = Hz), 4.36-4.31 (4H, m, OCH2), 2.24 (2H, t, J = 5.5 Hz, OCH2CH2CH2O) 13 C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz) δ 157.7, 154.3, 153.0, 147.2, 144.2, 140.1, 134.7, 131.5, 130.2, 129.4, 129.2, 127.6, 125.7, 122.9, 122.6, 121.1, 121.0, 119.4, 117.5, 70.8, 70.7, 30.9 HRMS tìm thấy: 482.1573 Theo tính tốn: C25H20N7O4: 482.1499 [M+H]+ N-(3-(1-(3-nitrophenyl)-1H-1,2,3-triazole-4-yl)phenyl)-8,9-dihydro-7H[1,4]dioxepino[2,3-g]quinazoline-4-amine (123b) Chất rắn màu vàng sáng Nhiệt độ nóng chảy 259oC Hiệu suất 80% IR (KBr) 3088, 2957, 1615, 1569, 1530, 1477, 1407, 1351, 1328, 1264, 1049, 954 cm-1 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9.81 (1H, s, NH), 9.56 (1H, s), 8.82 (1H, t, J = Hz), 8.58 (1H, s), 8.50 (1H, s), 8.49 (1H, s), 8.30 (1H, dd, J = Hz, J = 1.5 Hz), 8.19 (1H, d, J = Hz), 7.97-7.92 (2H, m), 7.68 (1H, d, J = 7.5 Hz), 7.53 (1H, t, J = 7.5 Hz), 7.27 (1H, d, J = Hz), 4.37-4.31 (4H, m, OCH2), 2.25 (2H, t, J = 5.5 Hz, OCH2CH2CH2O) 13 C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz) δ 157.5, 154.1, 56 152.8, 148.6, 147.7, 140.0, 137.2, 131.6, 130.1, 129.1, 125.9, 123.1, 122.4, 120.9, 120.8, 120.1, 119.2, 117.3, 114.6, 111.5, 70.6, 70.5, 30.7 ESI-MS (m/z) tìm thấy: 482.1527 Theo tính tốn: C25H20N7O4: 482.1499 [M+H]+ 5-(4-(3-((8,9-Dihydro-7H-[1,4]dioxepino[2,3-g]quinazoline-4-yl)amino)phenyl)1H-1,2,3-triazole-1-yl)-2-(trifluoromethyl)benzonitrile (123c) Chất màu vàng sáng Hiệu suất: 90% Nhiệt độ nóng chảy: 242oC IR (KBr) 2964, 2231, 1617, 1532, 1473, 1328, 1316, 1190, 1140, 1053, 1024, 993 cm-1 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 9.81 (1H, s, NH), 9.62 (1H, s), 8.60-8.54 (3H, m), 8.48-8.46 (2H, m), 8.18 (1H, d, J = Hz), 7.93 (1H, d, J = Hz), 7.66 (1H, d, J = Hz), 7.54 (1H, t, J = Hz), 7.26 (1H, d, J = Hz), 4.36-4.30 (4H, m, OCH2), 2.25 (2H, t, J = 5.5 Hz, OCH2CH2CH2O) 13C-NMR (DMSO-d6, 125 MHz) δ 157.5, 154.0, 152.8, 147.9, 144.9, 144.3, 140.0, 139.7, 137.6, 132.5, 129.8, 129.2, 123.7, 122.5, 120.9, 120.7, 120.2, 119.2, 118.1, 117.3, 115.0, 111.5, 107.8, 89.1, 70.6, 70.5, 30.7 HRMS (ESI+) m/z tìm thấy: 530.1548 Theo tính tốn: C27H19F3N7O4 [M+H]+ 530.1474 2.5 HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO CỦA CÁC DẪN XUẤT QUINAZOLINE Các hợp chất tổng hợp bao gồm erlotinib, hợp chất lai erlotinib, dẫn xuất quinazoline thử hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư có nguồn gốc từ Bảo tàng giống chuẩn Hoa kỳ (ATCC) gồm: ung thư biểu mô biểu bì miệng KB (Human epidermic carcinoma; CCL-17TM), ung thư gan Hep-G2 (Hepatocellular carcinoma; HB - 8065TM) ung thư phổi LU-1 (Human Lung Carcinoma) phương pháp MTT mơ hình thử độ độc tế bào in vitro Viện Ung thư Quốc gia Hoa kỳ (NCI) xác nhận phép thử độ độc tế bào chuẩn nhằm sàng lọc, phát chất có khả kìm hãm phát triển diệt tế bào ung thư điều kiện in vitro [86] Các dòng tế bào ung thư nghiên cứu nuôi cấy môi trường ni cấy phù hợp có bổ sung thêm 10% huyết phơi bò (FBS) thành phần cần thiết khác điều kiện tiêu chuẩn (5% CO2; 370C; độ ẩm 98%; vô trùng 57 tuyệt đối) Tùy thuộc vào đặc tính dòng tế bào khác mà lựa chọn thời gian cấy phù hợp Quy trình thử độc tế bào: 200 l dung dịch tế bào pha loãng nồng độ x 105 tế bào/ml vào giếng (đĩa 96 giếng) môi trường RPMI 1640 cho dòng tế bào Hep-G2, KB; mơi trường DMEM cho LU-1 Mẫu thử xử lí với tế bào nồng độ pha loãng khác cho đạt đến nồng độ cuối 128 g/ml; 32 g/ml; g/ml; g/ml 0,5 g/ml Ủ mẫu thử điều kiện 37oC, 5% CO2, thời gian ngày, giếng điều khiển gồm 200 l dung dịch tế bào 3x104 tế bào/ml, ủ 37oC, 5% CO2, thời gian ngày Sau thêm 50 l MTT (1 mg/ml) pha môi trường nuôi cấy không huyết thanh), ủ 370C, Tiếp theo loại bỏ môi trường, thêm 100 l DMSO lắc đọc kết bước sóng 540 nm máy spectrophotometter Genios TECAN Phần trăm kìm hãm phát triển tế bào (Growth inhibition) IC50 tính dựa kết số liệu phần trăm kìm hãm phát triển tế bào phần mềm máy tính table curve Kết thử hoạt tính gây độc tế bào thể Bảng 3.5 2.6 NGHIÊN CỨU DOCKING CÁC HỢP CHẤT TỔNG HỢP ĐƢỢC Để chuẩn bị mơ hình protein, thu thập xử lý cấu trúc tinh thể tia X EGFR từ ngân hàng liệu Protein (Protein Data Bank) (https://www.rcsb.org/): 1) EGFR hoạt hóa khơng đột biến mang mã 1M17 2ITX, 2) EGFR hoạt hóa mang đột biến L834R có mã 2ITV, 3) EGFR khơng hoạt hóa mang mã 4HJO 1XKK Các hợp chất tổng hợp xây dựng cấu trúc 3D sử dụng phần mềm LigPrep-Schrodinger (https://www.schrodinger.com/ligprep) Mô docking thực chương trình ICM-pro 3.8 (www.molsoft.com/icmpro) 58 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 MỤC TIÊU CỦA ĐỀ TÀI Như phân tích phần tổng quan, lớp chất quinazoline biết đến chất ức chế mạnh mẽ thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu bì (EGFR) tyrosine kinase [87], phối tử cho thụ thể benzodiazepine GABA hệ thống CNS [88,89] chất kết dính DNA [90] dẫn xuất Quinazoline cho thấy hoạt tính sinh học đáng kể kháng viêm, kháng sinh [91-93, 94], kháng virus [95] quan trọng khả chống lại tế bào ung thư [96-100] giúp chúng trở thành dược phẩm quan trọng sử dụng rộng rãi loại thuốc chống ung thư Các hợp chất tiêu biểu bao gồm gefitinib, erlotinib, lapatinib (Hình 1.1) FDA chấp thuận áp dụng thành cơng phòng khám để điều trị nhiều bệnh ung thư, chẳng hạn ung thư phổi tế bào nhỏ [101,102], ung thư tuyến tụy [102] ung thư vú [103] Dựa tầm quan trọng hợp chất này, tổng hợp dẫn xuất quinazoline rất quan tâm nghiên cứu Trong phân tử 4-anilinoquinazoline, khung 4-anilinoquinazoline định khả ức chế EGFR, nhóm vị trí C-6 C-7 định tính chất hóa lý hợp chất [14-16] Các nhóm aniline vị trí C-4 khung quinazoline lựa chọn phù hợp để tạo tương tác kỵ nước quan trọng nhằm ức chế EGFR hiệu Những nghiên cứu tương quan cấu trúc hoạt tính sinh học (SAR) hợp chất quinazoline kích thước chất gốc aniline định ức chế chọn lọc enzym kinase, nhóm ưa nước vị trí C-6 khung quinazoline làm cải thiện tính chất vật lý có lợi cho tác dụng dược lý thuốc [15, 16] Do đó, luận án tập trung nghiên cứu xây dựng quy trình tối ưu tổng hợp erlotinib hydrochloride (sơ đồ 3.1) nhằm đưa quy trình tổng hợp erlotinib hydrochloride có khả ứng dụng vào sản xuất Việt Nam, tổng hợp dẫn xuất quinazoline (sơ đồ 3.2) hợp chất lai khung quinazoline với nhóm triazole (sơ đồ 3.3) để tìm kiếm hợp chất có hoạt tính sinh học lý thú 59 Sơ đồ 3.1: Quy trình tổng hợp erlotinib hydrocloride (93) Sơ đồ 3.2: Tổng hợp dẫn xuất quinazoline chứa nhóm crown ether vị trí C-6, C-7 60 Sơ đồ 3.3: Tổng hợp hợp chất lai dẫn xuất quinazoline 119a-d với azide qua cầu nối triazole 3.2 TỔNG HỢP ERLOTINIB HYDROCLORIDE Erlotinib (tên thương mại Tarceva) ức chế mạnh phosphoryl hóa nội tế bào HER1/EGFR giúp kìm hãm gây chết tế bào ung thư [48, 49] Erlotinib sử dụng điều trị bệnh nhân NSCLC giai đoạn hai ba sau thất bại với phác đồ hoá trị Phương pháp điều trị NSCLC erlotinib có tỷ lệ đáp ứng thuốc cao giúp kéo dài thời gian thêm nâng cao chất lượng sống cho bệnh nhân [50] Đây thuốc hết hạn quyền bảo hộ nên nhiều quốc gia giới quan tâm nghiên cứu tổng hợp, nhằm ứng dụng vào sản xuất thương mại Xây dựng quy trình tối ưu cho tổng hợp thuốc erlotinib hydrochloride nhiều nhà khoa học quan tâm nghiên cứu Do đó, luận án nghiên cứu xây dựng, cải tiến quy trình tổng hợp erlotinib hydrochloride với điều kiện phòng thí nghiệm Việt Nam Từ phương pháp tổng hợp erlotinib hydrochloride đề cập tài liệu tham khảo mô tả sơ đồ 1.15-1.23 kết nghiên cứu bước đầu nhóm tác giả, chúng tơi thấy rằng, phương pháp có ưu nhược điểm định Hai khó khăn lớn phương pháp khử hóa nhóm nitro thành nhóm amine phản ứng tổng hợp chất trung gian 4chloroquinazoline Để lựa chọn đường tổng hợp thuốc phù hợp với điều kiện Việt Nam, nghiên cứu kỹ ưu nhược điểm phương pháp kết hợp với nghiên cứu bước đầu lựa chọn phương pháp phù hợp để nghiên cứu, cải tiến tổng hợp erlotinib hydrochloride sơ đồ 3.1 61 Sơ đồ 3.1: Quy trình tổng hợp erlotinib hydrocloride (93) (a) BrCH2CH2OCH3, K2CO3, Bu4NHSO4, DMF, 110°C; (b) H2O, CH3OH, KOH, 30oC; (c) Urea, 210-220°C; (d) P2O5, xylene, đun hồi lưu; (e) HNO3, acid acetic băng, 0°C; (f) Na2S2O4, H2O, HCl; (g) DMF-DMA, acid acetic, toluene, 105°C; (h) 3-ethynylaniline, acid acetic, toluene, 60110oC; (i) khí HCl, CH3OH, 15-20°C Sơ đồ 3.1 cải tiến so với cơng trình nghiên cứu trước chỗ: sử dụng nhiều bước one-pot steps Hợp chất trung gian chìa khóa 3,4-bis(2-methoxyethoxy)benzonitrile 108 tổng hợp phản ứng one-pot gồm bước amid hóa tách nước phân tử amid Hợp chất acid 3,4-bis(2-methoxyethoxy)benzoic 107 amid hóa tác nhân urea nhiệt độ 210-220oC tạo thành hợp chất trung gian 3,4-bis(2-methoxyethoxy)- benzamid Phản ứng tách nước thực bình phản ứng với có mặt tác nhân loại nước P2O5 dung môi xylene nhiệt độ sơi 142oC Hiệu suất q trình one-pot tổng hợp 3,4-bis(2-methoxyethoxy)-benzonitrile 108 80% Phản ứng nitro hóa hợp chất 3,4-bis(2-methoxyethoxy)benzonitrile 108 với tác nhân điện tử ion nitronium, ion tạo in situ trình proton hóa ion nitrat mơi trường acid acetic Kết khảo sát cho thấy, nhiệt độ làm thay đổi tốc độ hiệu suất phản ứng Ở 0oC phản ứng gần không xảy ra, nhiệt độ phòng phản ứng kéo dài 24 giờ, nhiên tăng nhiệt độ lên 50oC phản ứng kết thúc sau với hiệu suất mỏng TLC khoảng 90-95% Sản phẩm nitro hoá 4,5-bis(2-methoxy-ethoxy)-2-nitro-benzonitrile 102 sử dụng trực tiếp cho phản ứng mà khơng cần xử lý làm 62 Nhóm nitro khử amino tác nhân khử natri dithionite môi trường nước [116] [117] So với phương pháp khử truyền thống sử dụng khí hydro áp suất cao tác nhân ammonium format với xúc tác Pd/C, phương pháp khử đơn giản với tác nhân khử dễ tìm, phản ứng thân thiện với mơi trường hiệu suất chuyển hoá cao (> 90%) Sản phẩm khử hoá 103 đánh giá cấu trúc phổ 1H-NMR, 13C-NMR IR Erlotinib 105 tổng hợp từ hợp chất trung gian chìa khố 2-amino-4,5bis(2-methoxy-ethoxy)benzonitrile 103 phản ứng one-pot qua giai đoạn Hợp chất 103 phản ứng với lượng dư dimethylformamid dimethylacetal (DMFDMA) hỗn hợp dung môi toluene acid acetic tạo thành hợp chất trung gian 104 (sơ đồ 3.4) Sau đó, hợp chất 104 đóng vòng tạo khung quinazoline tác nhân 3-ethynylaniline môi trường acid Để tránh tạo thành nhiều sản phẩm phụ, nhiệt độ phản ứng cần giữ 60oC để phản ứng tạo thành sản phẩm trung gian benzamidin 109 xảy hồn tồn, sau tăng nhiệt độ lên 110oC để đóng vòng tạo thành erlotinib 105 [6] Sản phẩm tạo thành kết tinh lần methanol thu erlotinib 105 có độ > 90% Muối erlotinib hydrocloride 93 nhận cách cho khí HCl qua dung dịch erlotinib methanol Phổ 1H-NMR cho thấy tín hiệu đặc trưng sản phẩm erlotinib Cụ thể proton khung quinazoline nhóm aniline xuất trường thấp: 8,63 (s, 1H, H-Ar), 7,86 (s, 1H, H-Ar), 7,76 (d, J = 8,0 Hz, 1H, H-Ar), 7,33 (m, 1H, H-Ar), 7,26 (m, 1H, H-Ar) 7,20 (s, 1H, H-Ar); tín hiệu nhóm methyn 3,09 ppm (s, 1H, C≡CH) Kết phù hợp với nghiên cứu trước [5-9] Từ liệu phổ trên, khẳng định sản phẩm erlotinib tổng hợp thành công với độ tinh khiết cao 63 Sơ đồ 3.4: Tổng hợp erlotinib 105 từ 2-amino-4,5-bis(2-methoxyethoxy)benzonitrile (103) 3.2.1 Tổng hợp 3,4-bis(2-methoxyethoxy)-benzoic acid (107) Hợp chất 3,4-bis(2-methoxyethoxy)-benzoic acid 107 tổng hợp từ nguyên liệu đầu 3,4-dihydroxybenzoic acid 106 theo sơ đồ 3.5 Sơ đồ 3.5: Tổng hợp 3,4-bis(2-methoxyethoxy)benzoic acid (107) Phản ứng O-alkyl hóa nguyên liệu đầu acid 3,4-dihydroxybenzoic 106 1bromo-2-methoxyethan 1-chloro-2-methoxyethan với có mặt kali cacbonat xúc tác chuyển pha tetrabutyl ammonium hydrosulfat Bu4NHSO4 Ba nhóm hydroxyl acid 3,4-hydroxybenzoic chuyển dạng phenolat ester nhờ xúc tác chuyển pha Bu4NHSO4 tham gia phản ứng SN2 với 1-bromo-2methoxyethan Các quy trình khảo sát điều kiện phản ứng 3,4-dihydroxybenzoic acid 106 tác nhân alkyl hóa miêu tả chi tiết bảng 3.1 Phản ứng ankyl hóa khơng xảy dung mơi aceton nhiệt độ hồi lưu 56oC, xảy tốt thực dung môi DMF nhiệt độ từ 85 oC đến 110oC Đồng thời, sử 64 dụng 1-bromo-2-methoxyethan kali carbonate cho hiệu suất phản ứng tốt so với 1-chloro-2-methoxyethan natri carbonate Bảng 3.1: Khảo sát phản ứng tổng hợp hợp chất 110 Quy trình Dung mơi Aceton DMF DMF DMF DMF Nhiệt độ, o C 56 85 85 110 110 DMF 110 Tỷ lệ acid 110 1-bromo-2methoxyethane 1:3 1:3 1:5 1:5 1:5 1:5 (sử dụng 1-chloro-2-ethoxyethane) K2CO3 K2CO3 K2CO3 K2CO3 Na2CO3 Hiệu suất, % 37 50 83 66 K2CO3 54 Bazơ Dựa vào kết khảo sát bảng 3.1, thấy phản ứng tổng hợp 2methoxyethyl 3,4-bis(2-methoxyethoxy) benzoat 110 từ 3,4-dihydroxy benzoic acid 106 1-bromo-2-methoxyethan (tỷ lệ 1:5) với có mặt xúc tác kali carbonate (4 đương lượng) xúc tác chuyển pha tetrabuthyl ammonium hydrosunfat (0,1 đương lượng) thực dung môi DMF 110oC 20 cho hiệu suất cao 83% Phản ứng thủy phân ester 110 thực hỗn hợp dung môi methanol/nước (tỷ lệ thể tích 3:1) mơi trường kiềm KOH nhiệt độ phòng để tạo thành 3,4-bis(2-methoxyethoxy)-benzoic acid 107 Sau khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ xúc tác bazơ KOH ester 110 đến hiệu suất phản ứng thủy phân, nhận thấy tỷ lệ KOH/110 = 1/3 cho hiệu suất phản ứng cao Cụ thể, hiệu suất phản ứng thủy phân đạt 91% hiệu suất chung bước đạt 72,5% Cấu trúc sản phẩm 3,4-bis(2-methoxyethoxy)-benzoic acid 107 khẳng định phổ IR, H-NMR tương ứng với phổ chuẩn [65] Nhằm nâng cao hiệu suất tổng hợp hợp chất 107, quy trình one-pot thực cách sử dụng trực tiếp hợp chất hợp 2-methoxyethyl 3,4-bis(2methoxyethoxy) benzoat 110 nhận từ phản ứng ankyl hóa 3,4dihydroxybenzoic acid khơng cần qua tinh chế cho phản ứng thủy phân (sơ đồ 3.6) 65 Sơ đồ 3.6: Tổng hợp 3,4-bis(2-methoxyethoxy)benzoic acid 107 theo quy trình one-pot Ưu điểm quy trình one-pot tổng hợp acid 107 sản phẩm ester trung gian 110 sử dụng trực tiếp cho bước mà không cần xử lý tinh chế Do đó, hạn chế hao tổn sản phẩm trung gian việc tinh chế sắc kí cột, làm tăng hiệu suất chung trình phản ứng 3.2.2 Tổng hợp 3,4-bis(2-methoxyethoxy)benzonitrile (108) Hợp chất trung gian chìa khóa 3,4-bis(2-methoxyethoxy)benzonitrile 108 tổng hợp qua bước phản ứng amid hóa tách nước phân tử amid Hợp chất acid 3,4-bis(2-methoxyethoxy)benzoic 107 amid hóa tác nhân urea nhiệt độ 210-220oC tạo thành hợp chất trung gian 3,4-bis(2-methoxyethoxy)benzamid 107a Phản ứng tách nước thực với có mặt tác nhân loại nước P2O5 dung môi xylene nhiệt độ sôi 142oC (sơ đồ 3.7) Việc sử dụng xylene với hai mục đích: thứ làm dung mơi kỵ nước, có nhiệt độ sơi gần với nhiệt độ thích hợp hút nước P2O5 Và xylene dễ dàng loại bỏ sau phản ứng Sơ đồ 3.7: Tổng hợp 3,4-bis(2-methoxyethoxy)benzonitrile (108) Sản phẩm trung gian benzamide 107a sử dụng trực tiếp cho phản ứng loại nước mà không cần phải tinh chế làm sắc kí cột Tuy nhiên, xử lý tinh chế sơ sản phẩm benzamide 107a sau bước phản ứng thứ nhằm loại bỏ urea dư phản ứng cách chiết với ethyl acetate, hiệu suất chung quy trình one-pot đạt khoảng 70% Trong đó, sử dụng trực tiếp hỗn hợp sau phản ứng amide hóa cho phản ứng loại nước tiếp theo, hiệu 66 suất chung quy trình one-pot đạt khoảng 85-90% Điều cho thấy, lượng urea dư không làm ảnh hưởng đến hiệu suất phản ứng loại nước tạo sản phẩm benzonitrile 108 Hiệu suất tạo thành hợp chất 108 theo quy trình one-pot 90% C≡N Hình 3.1: Phổ IR hợp chất 3,4-bis(2-methoxyethoxy)benzonitrile (108) Trên phổ IR hợp chất 108 (Hình 3.1) xuất tín hiệu đặc trưng nhóm chức có mặt phân tử Tín hiệu hấp thụ cường độ mạnh 2225 cm-1 đặc trưng cho nhóm chức C≡N Các dao động hóa trị liên kết C=C vòng thơm 1512 1451 cm-1; tín hiệu hấp thụ 1292 cm-1 đặc trưng dao động hóa trị liên kết C-H bão hòa Ngồi ra, phổ IR khơng tín hiệu hấp thụ 1666,8 cm-1 đặc trưng cho nhóm cacbonyl hợp chất 107, chứng tỏ hợp chất acid 107 tham gia phản ứng amid hóa thủy phân để tạo thành sản phẩm nitrile 108 3.2.3 Tổng hợp 4,5-bis(2-methoxyethoxy)-2-nitrobenzonitrile (102) Phản ứng nitro hóa xảy theo chế electrophil SE đặc trưng hợp chất thơm với tác nhân electrophil ion nitronium NO2+ Thông thường, tác nhân nitro hóa thường sử dụng hỗn hợp HNO3/H2SO4 Tuy nhiên phân tử hợp chất 108 có nhóm chức nitrile bền, sử dụng hỗn hợp HNO3/CH3COOH để thực phản ứng 67 Sơ đồ 3.8: Tổng hợp hợp chất 4,5-bis(2-methoxyethoxy)-2-nitrobenzonitrile (102) Phản ứng nitro hóa hợp chất 3,4-bis(2-methoxyethoxy)benzonitrle 108 với tác nhân điện tử ion nitronium, ion tạo in situ q trình proton hóa ion nitrat mơi trường acid acetic Để tăng tốc độ hiệu phản ứng, sử dụng lượng dư acid nitric Tuy nhiên, lượng acid sử dụng dư nhiều không thu hồi lại được, đồng thời dư nhiều acid nitric khơng làm kết tinh sản phẩm nitro hóa dẫn đến phải xử lý tinh chế sản phẩm phản ứng cách chiết với ethyl acetate Do đó, chúng tơi tiến hành khảo sát phụ thuộc hiệu suất phản ứng đến lượng acid nitric sử dụng Kết để nitro hóa 300 mg hợp chất 108 cần ml HNO3 65% nhận hiệu suất tạo thành hợp chất 102 cao 95% Nếu tăng thêm acid hiệu suất không thay đổi đáng kể Bên cạnh đó, nhiệt độ làm thay đổi tốc độ hiệu suất phản ứng Ở 0oC phản ứng nitro hóa gần khơng xảy ra, nhiệt độ phòng phản ứng kéo dài 24 giờ, nhiên tăng nhiệt độ lên 50oC phản ứng kết thúc sau với độ chuyển hóa theo mỏng TLC khoảng 90-95% Mặc khác, kéo dài thời gian phản ứng, hiệu suất nitro hóa giảm xuống phản ứng sinh nhiều sản phẩm phụ nitro vào vị trí khơng mong muốn nhiều nhóm nitro Để tách sản phẩm cần pha loãng hỗn hợp phản ứng nước đá Chất rắn màu vàng tạo thành lọc, rửa với nước đá n-hexane lạnh Cấu trúc sản phẩm nitro 102 khẳng định phổ 1H-NMR, phổ IR so sánh với phổ chuẩn [65] Trên phổ IR (hình 3.2), tín hiệu dao động đặc trưng cho liên kết NO2 CN xuất bước sóng 1533, 2223 cm-1 Trên phổ H-NMR (hình 3.2- 3.3), vùng dịch chuyển đặc trưng cho vòng thơm benzene xuất tín hiệu singlet proton 7.85 ppm 7.26 ppm Điều chứng tỏ nhóm NO2 vào vị trí C-2 vòng benzene 68 C≡N Hình 3.2: Phổ IR hợp chất 4,5-bis(2-methoxyethoxy)-2-nitrobenzonitrile 102 Hình 3.3: Phổ 1H-NMR hợp chất 4,5-bis(2-methoxyethoxy)-2nitrobenzonitrile (102) 69 Hình 3.4: Phổ giãn 1H-NMR hợp chất (102) 3.2.4 Tổng hợp 2-amino-4,5-bis(2-methoxyethoxy)-benzonitrile (102) 2-Amino-4,5-bis(2-methoxyethoxy)-benzonitrile 103 tổng hợp phản ứng khử nhóm nitro phân tử hợp chất 4,5-bis(2-metoxyethoxy)-2nitro-benzonitrile 102 theo sơ đồ 3.9 Sơ đồ 3.9: Tổng hợp hợp chất 103 Để khử hóa nhóm nitro thành nhóm amino sử dụng loại tác nhân sau: - Phương pháp khử kim loại môi trường acid kiềm Kim loại Fe Sn sử dụng môi trường acid kim loại Zn sử dụng acid lẫn kiềm Trong số chất khử nêu kim loại Fe mơi trường acid sử dụng phổ biến để điều chế amine thơm [122] - Tác nhân khử khí hydro: thiết bị phức tạp chịu nhiệt, chịu áp suất cao - Khử hóa hydro có xúc tác: Phản ứng khử hóa với xúc tá - c Nickel-Raney, platin-carbon Pt/C, paladin-carbon Pd/C, rodi-nhôm oxit, Pt2O.H2O Phản ứng cần thực nhiệt độ cao, áp suất cao, xúc tác đắt tiền nên sử dụng phương pháp khử khác khơng có hiệu 70 - Tác nhân khử ammonium format/Nickel Raney, hydrazin monohydrat/Zn-C - Tác nhân khử hydrua kim loại: sử dụng cho phản ứng phản ứng xảy khơng chọn lọc, tạo nhiều sản phẩm phụ - Tác nhân khử hợp chất chứa lưu huỳnh Na2S, Na2S2, Na2SO3, NaHS, Na2S2O4 [116][117] Quá trình khử thực dung mơi nước mơi trường kiềm Q trình khử diễn phức tạp với hình thành dẫn chất nitrozo, hydroxylamine, azoxy, hydrazo, amine, azo Tuy nhiên, phản ứng thân thiện với môi trường hiệu suất cao Để hạn chế sản phẩm trung gian, sau phản ứng khử kết thúc thêm vào bình phản ứng vài giọt acid HCl H2SO4 loãng Để đánh giá khả khử hóa nhóm nitro thành nhóm amino nghiên cứu lựa chọn phương pháp khả thi điều kiện Việt Nam, lựa chọn tác nhân Na2S2O4 tác nhân Fe/acid để khảo sát phản ứng Bảng 3.2: Ảnh hƣởng tác nhân khử hóa đến hiệu suất phản ứng amin hóa Tác nhân khử hóa Nhiệt độ, oC Thời gian, h Hiệu suất, % Fe/HCl 50 37 Fe/H2SO4 50 45 Na2S2O4 50 90 Kết khảo sát bảng 3.2 cho thấy phản ứng khử hóa hợp chất nitro 102 natri dithionite dung môi nước cho hiệu suất cao Phản ứng xảy hiệu trường hợp mà sắc kí mỏng cho vết sản phẩm (vết sản phẩm phát huỳnh quang chiếu ánh sáng tử ngoại) Do vậy, lựa chọn natri dithionite làm tác nhân khử hóa để tổng hợp 2-amino-4,5-bis(2metoxyethoxy)-benzonitrile (103) Sơ đồ 3.10: Tổng hợp hợp chất 103 71 - Cơ chế phản ứng khử nhóm nitro thành nhóm amino sử dụng Na2S2O4trong dung môi nước đề xuất sau: -6e +3 R - NO +3 R - NO + Na 2S2O4 +2e +1 R - NO +6 + 2H2O R - NH + 2NaHSO4 +2e R -1 N -3 R - NH OH H + 6e + 2H+ Ngoài ra, tiến hành khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất phản ứng amine hóa tỷ lệ nguyên liệu nitro 102 tác nhân khử Na2S2O4, nhiệt độ cách xử lý phản ứng sau hết nguyên liệu đầu Kết cho thấy, tỷ lệ 102 Na2S2O4 : : cho hiệu suất tương đương Do đó, để tiết kiệm tác nhân phản ứng, chọn tỷ lệ : để thực khảo sát Kết khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ cho thấy tăng nhiệt độ (50-70oC) hiệu suất phản ứng tănng lên đồng thời rút ngắn thời gian phản ứng so với nhiệt độ phòng 30oC Tuy nhiên, hiệu suất phản ứng khử nhiệt độ khoảng 50-70oC tương đương Vì vậy, lựa chọn nhiệt độ thích hợp 50oC để tiến hành phản ứng amine hóa Sau phản ứng kết thúc (dựa vào mỏng TLC), trước xử lý tinh chế sản phẩm, hỗn hợp phản ứng thêm vào acid HCl đậm đặc nhằm tăng độ chuyển hóa thành amine Hiệu suất trình đạt khoảng 85-90% 89 85 80 1370.16cm-1 3238.41cm-1 %T 75 1198.63cm-1 3356.53cm-1 70 2924.29cm-1 1577.56cm-1 2204.93cm-1 65 524.01cm-1 60 860.19cm-1 1619.45cm-1 55 1051.88cm-1 1453.03cm-1 1435.61cm-1 50 49 4000 1238.03cm-1 3000 2500 2000 1123.00cm-1 1265.51cm-1 1507.86cm -1 3500 1500 1032.24cm-1 1000 500 400 cm-1 Name TG-241-47 Description Hình 3.5: Phổ IR hợp chất 2-amino-4,5-bis(2-methoxyethoxy)-benzonitrile (103) 72 Cấu trúc sản phẩm amino 103 khẳng định phổ 1H-NMR, phổ IR so sánh với phổ chuẩn [65] Trên phổ IR (hình 3.5), tín hiệu dao động đặc trưng cho liên kết NH2 xuất bước sóng 3356 (N-H); 3238 (N-H) cm-1 Đồng thời, tín hiệu dao động đặc trưng cho liên kết NO2 khơng chứng tỏ nhóm nitro chuyển hóa hồn tồn thành nhóm amino 3.2.5 Nghiên cứu tổng hợp erlotinib (105) Hợp chất chìa khóa trung gian 103 phản ứng với dimethylformamidinedimethylacetal (DMF-DMA) toluen tạo thành hợp chất trung gian N,Ndimethylformamidine 104 Sau đó, hợp chất 12 đóng vòng tạo khung quinazoline tác nhân 3-ethynylaniline môi trường acid nhận bazơ tự 105 + Giai đoạn thứ nhất: Nghiên cứu tổng hợp N'-[2-cyano-4,5-{bis(2methoxyethoxy)phenyl}]-N,N-dimethylformamidine Hợp chất 103 phản ứng với lượng dư dimethylformamid dimethylacetal (DMF-DMA) hỗn hợp dung môi toluen acid acetic tạo thành hợp chất trung gian 104 (sơ đồ 3.11) Sơ đồ 3.11: Tổng hợp hợp chất formamidine 104 Kết nghiên cứu khảo sát ảnh hưởng dung môi, nhiệt độ tỷ lệ chất tham gia phản ứng cho thấy rằng, phản ứng xảy sử dụng toluene làm dung môi nhiệt độ sôi hồi lưu 110oC Phản ứng không nên kéo dài lâu, dẫn đến phân hủy sản phẩm formamidine tạo thành nhiều tạp chất, làm giảm hiệu suất phản ứng Tỷ lệ hợp chất amino 103 DMF-DMA tối ưu cho phản ứng : Đồng thời, lượng acid acetic băng sử dụng phản ứng không ảnh hưởng đến hiệu suất phản ứng Khi đó, hiệu suất tạo thành hợp chất 104 sau tinh chế đạt khoảng 73% Sản phẩm 104 xác định cấu trúc phương pháp phổ đại 1HNMR, 13C-NMR IR Trên phổ IR, tín hiệu đặc trưng cho nhóm NH2 khơng xuất hiện, chứng tỏ nhóm amino phân tử hợp chất 103 tham gia phản ứng với 73 DMF-DMA Ngoài ra, tín hiệu dao động bước sóng 2220 cm-1 đặc trưng cho nhóm nitrile CN Trên phổ 1H-NMR (hình 3.6-3.7), xuất singlet proton trường thấp độ dịch chuyển 7,56 ppm quy kết cho proton formamidine N=CH, tín hiệu singlet proton trường cao độ dịch chuyển 3,06 ppm đặc trưng cho hai nhóm NCH3 Các liệu phổ khẳng định cấu trúc hợp chất formamidine 104, phù hợp với công bố trước [65] Hình 3.6: Phổ 1H-NMR hợp chất trung gian 104 74 Hình 3.7: Phổ giãn 1H-NMR hợp chất formamidine 104 + Giai đoạn thứ hai: Tổng hợp erlotinib 105 từ dẫn xuất trung gian 104 Trong giai đoạn thứ hai này, hợp chất formamidine 104 đóng vòng tạo khung quinazoline tác nhân 3-ethynylaniline môi trường acid Vấn đề quan trọng ảnh hưởng đến hiệu suất phản ứng điều khiển nhiệt độ phản ứng Theo cơng trình cơng bố trước đây, phản ứng hợp chất trung gian 104 3-ethynylaniline đun trực tiếp 125-130oC dung môi toluen với có mặt acid acetic tạo thành erlotinib 105 với hiệu suất khoảng 60% khoảng 25-30% lại tạp chất formamidine 3-ethynylaniline [14] Các tạp chất kết phân hủy formamidin 3ethynylaniline nhiệt độ cao 125-130oC Hơn nữa, tạp chất làm cho trình xử lý phân tách kết tinh sản phẩm trở nên khó khăn hơn, làm giảm hiệu suất phản ứng đáng kể Sơ đồ 3.12: Tổng hợp erlotinib 105 từ hợp chất trung gian formamidine 104 Sau loạt khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến hiệu suất tạo thành erlotinib 105, nhận thấy rằng, nhiệt độ phản ứng formamidine 104 3ethynylaniline cần giữ 60oC để phản ứng xảy hoàn toàn tạo thành hợp chất trung gian phenyl benzamidine 109, sau tăng nhiệt độ lên 110oC để đóng vòng tạo thành erlotinib 105 (sơ đồ 3.12) Sự hình thành hợp chất trung gian phenylbenzamidine 109 khẳng định phổ 1H-NMR (hình 3.8-3.9) [65] 75 Bên cạnh đó, tỷ lệ chất tham gia phản ứng tổng hợp erlotinib tối ưu 1,5 đương lượng 3-ethynylaniline đương lượng acid acetic Hiệu suất giai đoạn thứ đạt khoảng 70-72%, hiệu suất chung qua bước phản ứng đạt khoảng 60-65% Hình 3.8: Phổ 1H-NMR hợp chất phenylbenzamidine 109 Hình 3.9: Phổ 1H-NMR giãn hợp chất phenylbenzamidine 109 76 Hình 3.10: Phổ 1H-NMR giãn hợp chất phenylbenzamidine 109 Sản phẩm 105 xác định cấu trúc phương pháp phổ đại 1HNMR, 13C- NMR, IR MS Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR hợp chất 105 (Hình 3.11-3.14) xuất đầy đủ tín hiệu đặc trưng cho độ chuyển dịch hóa học proton có mặt phân tử Tín hiệu singlet độ dịch chuyển 3,09 ppm đặc trưng cho nhóm C≡CH Tín hiệu singlet với cường độ mạnh độ dịch chuyển 3,45 ppm đặc trưng cho proton nhóm OCH3 Tín hiệu doublet-triplet độ dịch chuyển 4,26 ppm với số tương tác J = 19,5 Hz 4,5 Hz đặc trưng cho proton nhóm CH3OCH2CH2O, tín hiệu multiplet độ dịch chuyển 3,83-3,82 ppm đặc trưng cho proton nhóm CH3OCH2CH2O Tín hiệu singlet trường yếu 8,63 ppm đặc trưng cho proton N=CH-N chứng tỏ khung quinazoline tạo thành Tín hiệu cộng hưởng proton vòng thơm lại xuất vị trí δH (ppm) 7,86 (1H, s); 7,76 (1H, d, J = 8,0 Hz); 7,33 (1H, m); 7,26 (1Hm); 7,20 (1H, s) Trên phổ MS đặc trưng cho ion [M+H]+ (hình 3.14) xuất pic 394,1 với cường độ mạnh Trong đó, hợp chất erlotinib 105 có cơng thức phân tử C22H23N3O4 phân tử lượng 393,4 Điều chứng tỏ, sản phẩm 105 tổng hợp erlotinib Như vậy, dựa vào liệu phổ 1H-NMR MS, phổ MS chứng minh cấu trúc hợp chất 105 xác 77 Hình 3.11: Phổ 1H-NMR hợp chất erlotinib 105 Hình 3.12: Phổ giãn 1H-NMR hợp chất erlotinib 105 78 Hình 3.13: Phổ giãn 1H-NMR hợp chất erlotinib 105 Hình 3.14: Phổ MS hợp chất erlotinib 105 Từ kết khảo sát điều kiện tối ưu phản ứng tổng hợp erlotinib 105 trên, tiến hành tổng hợp erlotinib 105 theo quy trình one-pot nhằm nâng cao hiệu suất sản phẩm Kết cho thấy hiệu suất quy trình onepot đạt khoảng 70% 79 3.2.6 Tổng hợp muối erlotinib hydrocloride 93 Hiện nay, Tarceva thuốc sản xuất hãng dược phẩm Hoffmann - La Roche tồn dạng muối hydroclorua hợp chất erlotinib Erltinib hydrocloride tổng hợp theo sơ đồ 3.13 từ nguyên liệu đầu erlotinib tác nhân HCl Sơ đồ 3.13: Tổng hợp erlotinib hydrocloride 93 phương pháp tổng hợp khác để đưa quy trình tối ưu cho phản ứng tạo muối hydroclorua sau: 1) Sử dụng dung dịch HCl 12N: Dung dịch HCl 12N nhỏ giọt vào dung dịch erlotinib metanol ethanol 90% nóng đun hồi lưu 2-8 2) Sử dụng dung dịch 15% HCl metanol HCl: Erlotinib hòa tan DMSO metanol nhiệt độ phòng, sau thêm vào dung dịch 15% HCl metanol pH dung dịch đạt giá trị khoảng 2-3 Dung dịch phản ứng khuấy nhiệt độ phòng 15-30 phút 3) Sử dụng khí HCl (được tạo thành cách nhỏ giọt H2SO4 đậm đặc vào muối NaCl): Khí HCl sục từ từ vào dung dịch erlotinib metanol etanol 50oC 10-20 phút 15-20oC khoảng 1-2 Kết khảo sát phương pháp cho thấy, hiệu suất tổng hợp erlotinib hydroclorid cách cho khí HCl khan qua dung dịch erlotinib metanol nhiệt độ 15-20oC cho hiệu suất cao khoảng 85-90% Sản phẩm 93 xác định cấu trúc phương pháp phổ đại 1HNMR, 13C-NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR hợp chất 93 (Hình 3.133.15) xuất đầy đủ tín hiệu đặc trưng cho độ chuyển dịch hóa học proton có mặt phân tử Tín hiệu singlet với cường độ mạnh độ dịch chuyển 3,35 ppm đặc trưng cho proton nhóm OCH3 Tín hiệu singlet độ dịch chuyển 4,22 ppm đặc trưng cho nhóm C≡CH Tín hiệu multiplet độ dịch chuyển 4,37-4,30 ppm đặc trưng cho proton nhóm CH3OCH2CH2O, tín hiệu multiplet độ dịch chuyển 3,77-3,776 ppm đặc trưng cho proton nhóm CH3OCH2CH2O 80 Tín hiệu singlet trường yếu 11,42 ppm đặc trưng cho proton nhóm NH Tín hiệu cộng hưởng proton vòng thơm lại xuất vị trí δH (ppm) 8,80 (1H, s, H-Ar); 8,33 (1H, s, H-Ar); 7,86 (1H, t, J = Hz, H-Ar); 7,787,76 (1H, m, H-Ar), 7,48 (1H, t, J = Hz, H-Ar), 7,40-7,38 (1H, m, H-Ar); 7,36 (1H, s, H-Ar) Trên phổ cộng hưởng từ 13C-NMR hợp chất 105 (Hình 3.16) xuất tín hiệu đặc trưng cho carbon nhóm methoxy OCH3 xuất độ dịch chuyển 58,5 ppm Tín hiệu cộng hưởng nguyên tử carbon liền kề nhóm OCH3 (cụ thể CH3OCH2CH2O) xuất 68,9 69,2 ppm, nguyên tử carbon gần với vòng thơm (cụ thể CH3OCH2CH2O) xuất trường cao 69,9 70,0 ppm Hai nguyên tử carbon nhóm ethynyl cộng hưởng độ dịch chuyển 81,3 83,0 ppm Các nguyên tử carbon lại vòng thơm xuất δc (ppm) 158,2; 155,8; 149,5; 148,7; 137,3; 135,5; 129,5; 129,3; 127,7; 125,4; 122,1; 107,4; 105,1; 100,7 Như vậy, dựa vào 1H-NMR 13C-NMR chứng minh cấu trúc hợp chất 93 Hình 3.15: Phổ 1H-NMR hợp chất erlotinib hydrochloride 93 81 Hình 3.16: Phổ giãn 1H-NMR hợp chất erlotinib hydrochloride 93 Hình 3.17: Phổ 1H-NMR (giãn)của hợp chất 93 82 Hình 3.18: Phổ 13C-NMR (giãn) hợp chất 93 3.3 TỔNG HỢP CÁC HỢP CHẤT LAI CỦA ERLOTINB- TRIAZOLE Việc tổng hợp hợp chất có cấu trúc lai hai nhiều chất có hoạt tính sinh học với vấn đề lý thú mẻ, nhiều nhà khoa học quan tâm Tổng hợp hợp chất lai từ hai hợp chất có hoạt tính chống ung thư, đặc biệt chất hoạt động theo chế tác dụng khác làm tăng hoạt tính cải thiện nhược điểm hợp chất ban đầu Mặt khác, hợp chất có cấu trúc lai đưa vào thể thủy phân nhờ enzym thể tạo chất ban đầu, giảm hiệu ứng phụ tăng hiệu có thời gian bán hủy dài Để tìm kiếm mở rộng hoạt tính lý thú dẫn xuất erlotinib, nghiên cứu tổng hợp hợp chất lai erlotinib với azide qua cầu nối triazole phản ứng click Kết thu dẫn xuất 105a-d Phản ứng click coi đường dễ dàng hiệu để gắn kết hai phân tử hai phân tử cồng kềnh Qua phản ứng click gắn kết thành phần hoạt tính erlotinib azide Liên kết triazole cầu nỗi hai thành phần sản phẩm Trong nghiên cứu trước 83 hợp chất chứa vòng triazole có nhiều hoạt tính sinh học q [72, 75, 80] nhóm góp phần làm tăng hoạt tính sản phẩm lai Phản ứng tổng hợp hợp chất lai theo sơ đồ sau: Sơ đồ 3.3 : Tổng hợp hợp chất lai erlotinib azide qua cầu nối triazole HN HN N H3C O O N N N O2 N O H3C H3C O H3C N O O O O N N N N NO2 N 105b 105a CN HN HN H3C H3C O O O O NO N N H3C N N H3C N O O O O N N CF N N N 105d 105c Hình 3.19: Cấu trúc hóa học hợp chất lai 105a-d Cấu trúc dự kiến hợp chất lai 105a-d khẳng định kiện phổ IR, MS, 1H-NMR 13 C-NMR chúng Trong phổ 1H-NMR chất 105b xuất đầy đủ tín hiệu đặc trưng cho độ chuyển dịch hóa học proton có mặt phân tử Các tín hiệu phổ đặc trưng cho phần erlotinib là: Tín hiệu singlet với cường độ mạnh độ dịch chuyển 3,36-338 ppm đặc trưng cho proton nhóm OCH3 Tín hiệu multiplet độ dịch chuyển 4.33-4.28 ppm đặc trưng cho proton nhóm CH3OCH2CH2O, tín hiệu multiplet độ dịch chuyển 3.81-3.75 ppm đặc trưng cho proton nhóm CH3OCH2CH2O Tín hiệu singlet trường yếu 9.61 ppm đặc trưng cho proton nhóm NH Những dấu hiệu dễ nhận thấy phản ứng click xảy như: tín hiệu singlet độ dịch chuyển 4,22 ppm đặc trưng cho nhóm C≡CH phân tử erlotnib, xuất thêm tín hiệu singlet độ chuyển dịch 9.56 trường mạnh tương ứng với proton triazolyl 84 xuất thêm 11 tín hiệu cộng hưởng proton vòng thơm vị trí δH (ppm) 8.81 (1H, t, J = Hz), 8.51-8.47 (2H, m), 8.40 (1H, s), 8.35-8.33 (1H, m), 7.95-7.92 (3H, m), 7.67 (1H, d, J = 5.5 Hz), 7.53 (1H, t, J = Hz), 7.23 (1H, s) Kết ba phổ 1H-NMR ba chất 105a, b, c thấy có tương đồng tín hiệu phổ Tương tự phổ 1H-NMR chất 105d có đầy đủ tín hiệu phổ đặc trưng chất 105b có 10 tín hiệu proton vòng thơm Hình 3.20: Phổ 1H-NMR 105b 85 H-triazole NH Hình 3.21: Phổ 1H-NMR (giãn) hợp chất 105b CH3OCH2CH2O CH3OCH2CH2O Hình 3.22: Phổ 1H-NMR (giãn) hợp chất 105b 86 Trên phổ cộng hưởng từ 13C-NMR hợp chât 105b xuất đầy đủ 28 tín hiệu tương ứng với 28 nguyên tử carbon phân tử, tín hiệu đặc trưng cho hợp phần erlotinib là: tín hiệu carbon nhóm methoxy OCH3 xuất độ dịch chuyển 58,3-58,4 ppm; Tín hiệu cộng hưởng nguyên tử carbon liền kề nhóm OCH3 (cụ thể CH3OCH2CH2O) xuất 68,0 68,4 ppm, ngun tử carbon gần với vòng thơm (cụ thể CH3OCH2CH2O) xuất trường thấp δ 70,0 70,1 ppm Sự tín hiệu hai ngun tử carbon nhóm ethynyl xuất thêm tín hiệu phổ vòng thơm khẳng định phản ứng click xảy Các nguyên tử carbon lại vòng thơm xuất δc (ppm) 156.4, 153.6, 152.9, 148.6, 148.1, 147.7, 140.2, 137.2, 131.6, 103.2, 129.2, 125.9, 123.1, 122.4, 120.6, 120.1, 119.1, 114.6, 108.2, 103.3 Khi phân tích phổ 13C-NMR hợp chất dãy, tín hiệu cộng hưởng carbon thay đổi hợp chất dãy Trên phổ HR-MS hợp chất 105b tìm thấy pic ion phân tử 558.2061 [M+H]+ (Theo tính tốn 558.2023) Hình 3.23: Phổ 13C-NMR hợp chất 105b 87 NO2 Hình 3.24: Phổ IR hợp chất 105b Hình 3.25: Phổ HR-MS hợp chất 105b Như vậy, dựa vào phổ IR, 1H-NMR 13 C-NMR HRMS chứng minh cấu trúc hợp chất 105a-d Như tổng hợp thành công hợp chất lai erlotinib 3.4 TỔNG HỢP CÁC HỢP CHẤT LAI CỦA DẪN XUẤT QUINAZOLINE CHỨA NHĨM CROWN ETHERỞ VỊ TRÍ C-6, C-7 Những nghiên cứu mối quan hệ cấu trúc hoạt tính sinh học (SAR) chất ức chế EGFR cho thấy khung 4-anilinoquinazoline quan trọng hoạt động ức chế EGFR, nhóm vị trí C-6 C-7 chủ yếu 88 đóng góp vào tính chất hóa lý chúng với khả tương thích tốt với nhánh cồng kềnh [15,16,104,105] Với lợi này, năm gần đây, nhiều dẫn xuất 4-anilinoquinazoline thiết kế tổng hợp liên tiếp Trong số đó, chất tương tự anilinoquinazoline kết hợp với chất ức chế men tyfin EGFR [17,106,107] SAR cho thấy dị vòng có chứa oxy có kích thước vòng cao 12 thành viên anilinoquinazoline hợp nhất, nhóm ưu tiên 4-anilino halogen clo, brơm, nhóm phenyl vị trí meta [17,107] Một số số chúng chứng minh hoạt động xét nghiệm phosphoryl hóa nội bào EGFR qua trung gian tế bào khối u người A431 [17] loại khác cho thấy có hoạt tính mạnh chống phân ly ức chế hai thụ thể tyrosine kinase bao gồm EGFR, VEGFR, PDGFR, nonreceptor TKs bao gồm C-Src Abl kinase với hoạt tính ức chế cao chống lại EGFR [107] Theo kết đề cập trên, xuất phát từ erlotinib, nghĩ tổng hợp serie quinazoline hợp vòng dioxygenated chứa nhóm ethynyl vị trí meta anilin khơng có vòng, với mục đích thu thập tác nhân hiển thị hoạt động chống ung thư mạnh Trong nghiên cứu này, tổng hợp crown etherquinazoline 119a-d qua 5-6 bước hai đường khác Một từ benzaldehyd khác nhau, hai từ acid 3,4-dihidroxy benzoic 106 mô tả sơ đồ 3.14 3.4.1 Tổng hợp hợp chất 119a, 119b từ benzaldehyd Sơ đồ 3.14: Sơ đồ tổng hợp hợp chất 119a, 119b từ 3,4-dihidroxy benzoic Điều kiện phản: (a) NH2OH.HCl, NaOH, MeOH, H2O, khuấy, 30-60 phút, 95-98%; (b) Ac2O, hồi lưu, 8-12 h, 90-95%; (c) Na2S2O4, H2O, 50-65oC, 3-4 h, 80-85%; (d) DMF-DMA, acetic acid, toluene, khuấy, 4-6 h; (e) 3-ethynylaniline, acetic acid, toluene, 60oC-110oC, 4-6 h, 50-63% 89 Chuyển đổi nhóm aldehyde benzaldehyd 111a, b sang hợp chất (E )oxim 112a, b, xử lý hợp chất (E )-oxim acetic anhydrit thu benzonitrile 113a, b tương ứng Khử hóa nhóm nitro 113a, b cách sử dụng natri dithionit dung dịch acid cho amin tương ứng 117a, b Bước tiếp theo, liên kết amin 117a,b với DMF-DMA tạo chất trung gian formamidine 118a,b, đóng vòng với 3-ethynylaniline để thu dẫn xuất quinazoline 119a,b với hiệu suất từ 50-63% 3.4.2 Tổng hợp hợp chất 119c, 119d từ acid 3,4-dihidroxy benzoic (106) Xuất phát từ acid 3,4-dihidroxy benzoic 106, để tổng hợp vòng crown ether có chứa hai ba nhóm metylen chúng tơi dựa bước tổng hợp với điều kiện tối ưu tổng hợp erlotinib phần nghiên cứu trước Việc thay 1bromo-2-methoxyethan 1,2-dicloethan 1,3-dibrompropan cho sản phẩm đóng vòng nội phân tử 119c,d với hiệu suất cao 80-90% Sơ đồ 3.15: Sơ đồ tổng hợp hợp chất 119c, 119d từ 3,4-dihidroxy benzoic Điều kiện phản ứng: (d) 1,2-dicloetan 1,3-dibrompropan K2CO3, Bu4NHSO4, aceton, đun hồi lưu, 10 h; (e) H2O, MeOH, KOH, 30oC, h; (g) Urê, 150-160°C, h; (h) P2O5, xylen, dun hồi lưu, h; (i) HNO3, acid acetic băng, 0°C, h; (c) Na2S2O4, H2O, 50-65oC, 4h; (k) DMF-DMA, acid acetic, toluen, 105°, h; (l) 3-ethynylaniline, acid acetic, toluen, 60-110oC, h Tổng hợp dioxine, dioxipine acid phản ứng one-pot đóng vòng nội phân tử acid 3,4-dihidroxy benzoic với 1,2-dicloethan 1,3-dibrompropan Hợp chất trung gian chìa khóa benzonitrile 115c-d tổng hợp qua bước phản ứng amid hóa tách nước phân tử amid Hợp chất acid benzoic 106 amid hóa tác nhân urea nhiệt độ 210-220oC tạo thành hợp chất trung gian benzamid 114’ Phản ứng tách nước thực với có mặt tác 90 nhân loại nước P2O5 dung môi xylen nhiệt độ sôi 142oC thu nitrile Bước hợp chất nitrile 115c,d nitrat hóa acid nitric 65% acid acetic 50oC thu hợp chất 116c, d sau đem khử hóa natri dithionite dung dịch acid để thu amine tương ứng 117c, d Từ hợp chất trung gian chìa khố 117c, d, hợp chất 4aminoquinazoline 119c, d tổng hợp phản ứng one-pot qua giai đoạn Hợp chất 117a, b phản ứng với đương lượng dimethylformamide dimetylacetal (DMF-DMA) hỗn hợp dung môi toluene acid acetic tạo thành hợp chất trung gian 118c, d Sau đó, hợp chất 118c, d đóng vòng tạo khung quinazoline tác nhân 3-ethynylaniline môi trường acid Cấu trúc hợp chất 119a-d xác định đơn giản dựa phân tích liệu phổ, bao gồm IR 1H-NMR Hình 3.26: Cấu trúc hợp chất 4-aminoquinazoline chứa nhóm crown ether vị trí C-6, C-7 119a-d Trên phổ IR hợp chất 119a xuất tín hiệu đặc trưng nhóm chức có mặt phân tử Tín hiệu hấp thụ 3213 cm-1 đặc trưng cho liên kết CH thuộc nhóm alkin C≡CH Tín hiệu hấp thụ 1609 cm-1 đặc trưng cho liên kết C-N Ngồi phổ IR xuất dao động hóa trị liên kết C=C vòng thơm 1540 1502 cm-1 Trên phổ 1H-NMR chất 119a xuất đầy đủ tín hiệu 11 proton phân tử Tín hiệu singlet xuất trường yếu 9.82 ppm đặc trưng cho proton nhóm NH Tín hiệu xuất dạng singlet trường mạnh vị trí 91 4.19 ppm đặc trưng cho proton nối ba C≡CH Các proton vòng thơm xuất δ 8.65 (1H, s), 8.55 (1H, d, J = Hz), 8.09 (1H, s), 7.94 (1H, d, J = Hz), 7.88 (1H, d, J = 7.5 Hz), 7.82-7.80 (1H, d, J = Hz), 7.66 (1H, t, J = 7.5 Hz), 7.41 (1H, t, J = Hz), 7.24 (1H, d, J = 7.5 Hz) Trong vùng có hai tín hiệu singlet proton H-2 H-2’nhưng proton H-2 tương tác gần với nguyên tử N nên cộng hưởng trường thấp proton H-2’, nên qui kết tín hiệu phổ độ chuyển dịch 8.65 ppm H-2; H-2’ 8.09 ppm C≡CH NH Hình 3.27: Phổ 1H-NMR hợp chất 119a Hình 3.28: Phổ 1H-NMR giãn hợp chất 119a 92 Trên phổ 1H-NMR chất 119b xuất đầy đủ tín hiệu 11 proton phân tử Tín hiệu singlet xuất trường yếu 9.38 ppm đặc trưng cho proton nhóm NH Tín hiệu xuất dạng singlet trường mạnh vị trí 4.17 ppm đặc trưng cho proton nối ba C≡CH So với chất 119a, phổ chất 119b xuất thêm pic singlet độ chuyển dịch 6.24 ppm proton nhóm OCH2O; proton nhóm ankyl liên kết trực tiếp với hai nguyên tử O nên độ chuyển dịch bị đẩy phía trường thấp Bốn pic singlet pic cộng hưởng trường thấp ứng với độ chuyển dịch 8.49 ppm H-2 Tiếp theo H-2’ với độ chuyển dịch 8.04 ppm Có thể qui kết tín hiệu dd vị trí 7,88 ppm H-5’ proton bị tách proton không tương đương H4’ H-6’ C≡CH Hình 3.29: Phổ 1H-NMR hợp chất 119b 93 OCH2O NH Hình 3.30: Phổ 1H-NMR giãn hợp chất 119b Phân tích tương tự cho phổ 1H-NMR hai chất 119c 119d ta thấy tương tự số tín hiệu đặc trưng Ngồi phân tích phổ 1H-NMR chất 119c thấy xuất thêm hai tín hiệu triplet trường mạnh 4,33 4.32 đặc trưng cho proton nhóm dioxino OCH2 Trên phổ hợp chất 119d có đồng thời nhóm tín hiệu là: hai tín hiệu triplet 4,33 4.32 đặc trưng cho proton nhóm dioxino OCH2 Khác với chất 119c, tín hiệu vị trí δ 2.24 với tín hiệu triplet đặc trưng cho proton nhóm OCH2CH2CH2O Kết phân tích đồng thời phổ 1H-NMR hợp chất 119a, b, d nhận thấy độ chuyển dịch proton nhóm C≡CH chênh lệch cụ thể: δ 4.19; 4.17 4.18 ppm C≡CH OCH Hình 3.31: Phổ 1H-NMR giãn hợp chất 119c 94 3.5 TỔNG HỢP CÁC HỢP CHẤT LAI QUINAZOLINE- TRIAZOLE Triazole hợp chất dị vòng thơm năm cạnh với nguyên tử nitơ có moment lưỡng cực cao, dễ dàng tham gia trình hình thành liên kết hydro tương tác lưỡng cực với DNA, protein tế bào Hợp chất dị vòng khơng bị thủy phân môi trường acid bazơ khơng bị phá huỷ q trình khử oxy hóa Triazole dễ dàng tổng hợp phản ứng cộng đóng vòng kiểu 1,3 lưỡng cực với xúc tác Cu(I) hay gọi phản ứng “click” [78, 79] Bên cạnh đó, hợp chất 1,2,3-triazole cho hoạt tính chống ung thư, kháng khuẩn kháng nấm mạnh [71-73, 74–75] Với tính ưu việt mặt hố học hoạt tính sinh học, 1,2,3-triazole vừa tác nhân vừa cầu nối lý tưởng để lai hoá với lớp chất có dược tính khác ví dụ 4-aminoquinazoline Tuy nhiên chưa có cơng trình nghiên cứu tổng hợp dẫn xuất 4-aminoquinazoline có chứa nhóm 1,2,3-triazoyl mạch nhánh Việc đưa nhóm triazoyl vào mạch nhánh làm tăng tương tác với enzym tyrosin kinase cải thiện tính chất hóa lý hợp chất quinazoline Sau có 4-anilinoquinazoline chúng tơi nghĩ đến việc lai hóa với azide khác qua cầu nối triazole Với mục đích tìm kiếm hợp chất lai có hoạt tính gây độc tế bào lý thú mẻ Các dẫn xuất lai với ba hợp phần: hợp phần 4-anilinoquinazoline coi phần khung, vòng triazole hợp phần aryl gắn với nhóm thay đổi Hầu hết chất ức chế men EGFRtyrosine kinase có 4-anilinoquinazoline, có nhóm chuỗi bên biến đổi Sự thay nhóm axetylen vị trí C-3 vòng phenyl phân tử quinazoline ban đầu hạt nhân triazole liên kết đơn làm cứng cấu trúc phân tử tạo thành Do làm tăng liên kết hydro vòng triazole xương sống peptide thụ thể EGFR từ cải thiện hoạt động ức chế hợp chất lai thu Bên cạnh đó, chúng tơi xem xét ảnh hưởng nhóm triazolyl đến chức hoạt hóa sinh học chất, đặc biệt hai nhóm nitro- trifluoromethylphenyltriazole Do đặc tính hóa học vật lý nitơ flo mà có mặt hai nhóm nguyên tử NO2 CF3 phân tử làm tăng hoạt tính dược học có lợi cho phân tử thu Do nhà hóa học hữu dược phẩm ngày quan tâm đến thiết kế tổng hợp khung chứa hai loại nhóm chức NO2 CF3 Với lí đó, chúng tơi tiếp tục sử dụng phản ứng click với xúc tác đồng (I) gắn kết alkyne trung gian quan trọng 119a-d với nitrophenyl- trifluoromethylphenylazide tạo 95 hợp chất lai triazole thay 4-anilinoquinazoline-mục tiêu 120-123a-d với hiệu suất 70-90% (sơ đồ 3.3) Cấu trúc hợp chất lai 120-123a-d xác định quang phổ 1H-NMR, 13C-NMR MS (ESI) chúng Đáng ý, phổ 1HNMR hợp chất lai cho thấy pic singlet 9,17-9,65 ppm tương ứng với triazolyl proton, phổ 13C-NMR cho thấy đỉnh 120-123 ppm 147149 ppm tương ứng với đặc tính CH Cq vòng triazole Sơ đồ 3.3: Tổng hợp hợp chất lai dẫn xuất quinazoline 119a-d với azide qua cầu nối triazole Thuốc thử điều kiện: equiv 4-anilinoquinazoline 119a-d, 1,1 azid equiv, 12 equiv DIPEA, 0,2 equiv CuI, THF, khuấy, 1-2 ngày, 70-90% Trong nhiều cơng bố trước đây, nhóm nghiên cứu giáo sư Nguyễn Văn Tuyến tổng hợp nhiều hợp chất lai qua cầu nối triazole có hoạt tính sinh học chống ung thư tốt, hợp chất lai tritecpenoid AZT qua cầu nối amid-triazole, betulin AZT qua cầu este-triazole Tiếp nối thành công tổng hợp hợp chất lai qua cầu nối triazole, tiến hành phản ứng click để tạo liên kết dẫn xuất quinazoline 119 với azide qua cầu nối triazole Kết thu hợp chất lai 120-123a-d có hoạt tính tương đối tốt với dòng ung thư người KB (ung thư biểu mô, Hep-G2 (ung thư gan) Lu (ung thư phổi tế bào nhỏ) 3.5.1 Tổng hợp hợp chất lai dẫn xuất 119a Các hợp chất lai dãy 120a-d tinh thể khơng màu có điểm chảy từ 186-267oC Hiệu suất tổng hợp 72%-90% Khi phân tích liệu phổ cộng hưởng từ hạt nhân dãy hợp chất lai 120a-d thấy có số tín hiệu đặc trưng thay đổi dãy như: Trên phổ 1H-NMR chất xuất hai tín hiệu singlet độ dịch chuyển 9.97-9.92 ppm đặc trung cho proton nhóm NH, tín hiệu singlet cộng hưởng trường mạnh độ chuyển dịch 9.2-9.57 96 ppm tín hiệu proton –triazole Hai tín hiệu xuất trường thấp nhiên với cường độ khác nhau, cụ thể tín hiệu singlet proton nhóm NH có cường độ nhỏ Đặc điểm cường độ tín hiệu phổ đặc trưng dãy 119a-d; 120-123a-d 120a 120b 120c 120d Hình 3.32: Cấu trúc hóa học hợp chất lai 120a-d Trên phổ 1H-NMR chất 120a thấy xuất đầy tín hiệu 15 nguyên tử H phân tử Trong tín hiệu singlet độ chuyển dịch 9.96 ppm proton nhóm NH Tín hiệu singlet thứ hai có cường độ mạnh độ chuyển dịch 9.2 ppm proton vòng triazole Tín hiệu singlet cộng hưởng 8.65 ppm proton H-2, tín hiệu khơng thay đổi nhiều dãy hợp chất 119a Tín hiệu proton H-10 bị đẩy phía trường thấp so với hợp chất 119a ảnh hưởng từ vòng triazole độ chuyển dịch 8.5 ppm Các proton lại cộng hưởng 8.62 (1H, d, J = Hz), 8.26 (1H, d, J = 7.5 Hz), 8.03-7.95 (3H, m), 7.88 (2H, t, J = Hz), 7.82 (1H, d, J = 7.5 Hz), 7.68-7.65 (2H, m), 7.54 (1H, t, J = Hz) 97 H-triazole H-2 H-10 H-NH Hình 3.33: Phổ 1H-NMR giãn hợp chất 120a Có thể thấy tín hiệu phổ tương đồng so sánh phổ 1H-NMR chất 120b, 120c, 120d với 120a Trên phổ 13C- NMR hợp chất 120a xuất đầy đủ tín hiệu 22 nguyên tử carbon phân tử Trong có 20 tín hiệu carbon thơm, tín hiệu carbon vòng triazole cộng hưởng 122.9 (C-16); 147.1 (C-15) Các nguyên tử carbon thơm lại cộng hưởng δ 157.9, 154.5, 149.7, 144.1, 139.9, 134.5, 133.1, 131.3, 130.2, 129.3, 129.1, 127.8, 127.5, 126.4, 125.6, 123.0, 122.5, 121.0, 119.3, 115.2 98 Hình 3.34: Phổ 13C-NMR hợp chất 120a Đối với hợp chất 120d, phổ IR xuất tín hiệu nhóm C≡N cộng hưởng 2234 cm-1, phổ 13C-NMR xuất 24 tín hiệu 24 nguyên tử C phân tử, tín hiệu C-CF3 cộng hưởng 132.7 cm-1 Hình 3.35: Phổ 13C-NMR (giãn) hợp chất 120d Qua liệu phân tích khẳng định cấu trúc hợp chất 120a-d Như phản ứng click tổng hợp thành công hợp chất lai 99 dẫn xuất 119a Các chất tiếp tục thử hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư người KB (ung thư biểu mô, Hep-G2 (ung thư gan) Lu (ung thư phổi tế bào nhỏ) 3.5.2 Tổng hợp hợp chất lai dẫn xuất 119b Cấu trúc dự kiến hợp chất lai 121a-d khẳng định kiện phổ IR, MS, 1H-NMR 13 C-NMR chúng Trong phổ 1H-NMR hợp chất lai 121a-d so sánh với chất 119b tín hiệu singlet cộng hưởng trường mạnh proton nhóm C≡CH Đồng thời xuất thêm pic singlet trường yếu đặc trưng proton triazole Đây hai dấu hiệu dễ dàng nhận thấy phản ứng click xảy Tín hiệu singlet xuất vùng 5.5-6.5 ppm proton nhóm OCH2O, độ chuyển dịch proton bị đẩy phía trường thấp so với tín hiệu proton nhóm ankyl liên kết trực tiếp với nguyên tử O có độ âm điện mạnh Và tín hiệu dường không thay đổi từ hợp chất 119b đến hợp chất lai 121a-d Để tiện theo dõi phân tích phổ chúng tơi quy định cách đánh số carbon hình 3.37 Để khẳng định việc quy kết tín hiệu phổ cộng hưởng từ hạt nhân hợp chất 121a-d 119b, sử dụng phổ DEPT, HMBC HSQC hợp chất 121d Hình 3.36: Cấu trúc hợp chất 121d tƣơng tác HMBC Trên phổ IR hợp chất 121d thấy xuất vân phổ đặc trưng cho nhóm C≡N 2238 cm-1 Phổ 1H-NMR xuất đầy đủ 14 tín hiệu proton phân tử, phổ 13C-MNR hợp chất 121d xuất đầy đủ tín hiệu 25 nguyên tử cacbon Từ phổ HSQC nhận thấy pic singlet proton khơng có tương tác trực tiếp với nguyên tử carbon nào, nên quy kết proton NH vị trí 9.5 ppm Tín hiệu khơng thay đổi dãy 121a-d hợp chất 119b 100 Từ phổ DEPT quy kết tín hiệu nhóm CH2 C-7 có độ chuyển dịch 102.3ppm Trong phổ HSQC tìm thấy C-7 có tương tác trực tiếp với H-7 nên xác định H-7 tín hiệu singlet có độ chuyển dịch 6.28 ppm H-7 có tương tác với C-6, C-8 Từ phổ HMBC xác định hai vân phổ C-6, C-8 C-6 có tương tác với H-9, H-5 H-5 tương tác với C-8, C-4, C-9a H-9 tương tác với C-6, C-4a Cho nên ta qui kết H-9 pic singlet có độ chuyển dịch 7.19 ppm, H-5 8.04 ppm Chiếu vào phổ HSQC xác định pic C-9 104.6 ppm, C-5 98.9 ppm; từ phổ HMBC xác định C-8 có độ chuyển dịch 147.3 ppm, C-6 152.4ppm; từ phổ HSQC qui kết H-triazole 9.6 ppm C-17 120.2 ppm Kết phân tích phổ HMBC HSQC hợp chất 121d trình bày bảng 3.3, xác định xác cơng thức cấu trúc dự kiến quy kết đầy đủ tín hiệu proton carbon phổ NMR Bảng 3.3: Phân tích phổ HMBC HSQC chất 121d 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 C 9a 16 10 18 22 21 12 14 23 15 13 17 11 19 24 4a 20 δC 156.9 153.0 152.4 148.6 148.0 147.3 140.3 139.7 137.5 132.7 129.8 129.2 123.7 122.2 120.4 120.2 118.9 118.1 115.0 110.2 107.7 104.6 102.3 98.9 Cq CH Cq Cq Cq Cq Cq Cq CH Cq Cq CH CH CH CH CH CH CH Cq Cq Cq CH CH CH δH (mult., J = Hz) HMBC (H → C) 8.49 (s) 4, 9a 8.47 (d, J = 3.5) 18, 20 7.52 (t, J = 8) 8.54 (d, J = 8.5) 7.93 (d, J = 8) 7.63 (d, J = 7.5) 9.60 (s) 8.47 (s) 8.59 (s) 10, 12 11, 13 11, 15, 17 16 10, 16, 20, 23, 21 7.19 (s) 6.28 (s) 8.14 (s) 4a, 6, 6, 4, 8, 9a 101 Hình 37: Phổ giãn HMBC hợp chất 121 d Hình 38: Phổ HMBC (giãn) hợp chất 121 d 102 Hình 39: Phổ HSQC hợp chất 121d C≡N Hình 3.40: Phổ IR chất 121d 103 H-7 H-trazol H-23 H-5 H-2 H-22,11 H-19 H-NH H-9 H-13 H-14 H-15 Hình 3.41: Phổ 1H-NMR (giãn) chất 121d Qua việc phân tích phổ IR, NMR, DEPT, HSQC, HMBC phổ HRMS khẳng định cấu trúc hợp chất dãy 121a-d 119b Các hợp chất lai thu tiếp tục đem đánh giá hoạt tính chống ung thư 3.5.3 Tổng hợp hợp chất lai dẫn xuất 119c Các hợp chất lai dãy 122a-d tinh thể màu vàng nhạt, có nhiệt độ nóng chảy từ 195-295oC Hiệu suất phản ứng click dãy từ 73-90% Trên phổ 1H-NMR hợp chất 122a xuất đầy đủ tín hiệu 17 proton Trên tìm thấy pic singlet trường thấp độ chuyển dịch 9,67 ppm đặc trưng cho proton nhóm NH Sở dĩ quy kết pic phổ phổ HSQC có proton khơng có tương tác trực tiếp với C Tín hiệu doublet cộng hưởng trường mạnh độ chuyển dịch 4.4ppm tín hiệu cộng hưởng proton nhóm OCH2 Tín hiệu giữ nguyên từ hợp chất 119c đến hợp chất dãy 122a-d Dễ dàng nhận thấy tín hiệu singlet độ chuyển dịch 9.17 ppm proton-triazole có cường độ mạnh proton nhóm NH Trên phổ 13C-NMR thể đầy đủ 24 tín hiệu cộng hưởng 24 nguyên tử carbon phân tử tín hiệu cộng hưởng trường thấp 156.7 cm-1 104 C-4 Tiếp theo tín hiệu C-2 152.9 cm-1 Hai tín hiệu cộng hưởng trường mạnh hai carbon thuộc nhóm OCH2 64.5(C-7); 64.2(C-8) Có thể nhận thấy hai tín hiệu carbon nhóm CH2 phổ DEPT Hình 3.42: Cấu trúc phân tử hợp chất 122a Bảng 3.4: Phân tích phổ HMBC HSQC chất 122a C 17 10a 20 11 23 22 13 19 15 24 21 18 16 14 12 10 4a δC 156.7 152.9 149.2 147.1 145.7 144.1 143.7 140.2 134.5 131.3 130.1 129.2 129.1 127.5 125.6 122.8 122.1 120.6 118.9 112.3 110.0 108.5 64.5 64.2 Cq CH Cq Cq Cq Cq Cq Cq CH CH Cq Cq CH CH CH CH CH CH CH CH Cq CH OCH2 OCH2 δH (mult., J = Hz) HMBC (H → C) 8.48 (s) 4, 10a 8.01 (t, J = Hz) 7.88 (t, J = Hz) 19, 21 20, 24 7.51 (t, J = Hz) 7.98 (d, J = Hz) 8.26 (d, J = Hz) 9.17 (s) 7.95 (d, J = Hz) 7.63 (d, J = 7.5 Hz) 8.49 (s) 7.19 (s) 11, 13 20, 22 19, 23 17 12, 16, 17 4, 17 4a, 6, 8.14 (s) 4.42 (d, J = 3.5 Hz) 4.42 (d, J = 3.5 Hz) 4, 6, 9, 10a 105 Hình 3.43: Phổ HMBC (giãn) hợp chât 122a 106 Hình 3.44: Phổ HSQC hợp chất 122a Phân tích phổ hợp chất 122b, 122c, 122d thấy tín hiệu phổ tương đương với hợp chất 122a Riêng hợp chất 122d so sánh với hợp chất 121d hợp phần vòng aryl, vòng triazole hợp phần azide, cho thấy tín hiệu phổ tương đương như: tìm thấy tín hiệu phổ 13 C-NMR độ chuyển dịch 132.6 cm-1 với J=32.5 Hz đặc trưng cho C-CF3; phổ IR hợp chất 122d tìm thấy tín hiệu nhóm C≡N 2236 cm-1 Như việc phân tích phổ IR, NMR, HSQC, HMBC, ESI-MS HRMS khẳng định cấu trúc hợp chất lai 122a-d Như tổng hợp thành công hợp chất lai dẫn xuất 119c Các hợp chất lai tiếp tục đem đánh giá hoạt tính độc tế bào ung thư, kết thử hoạt tính bảng 3.5 cho thấy dãy hợp chất lai có hoạt tính tốt nhât ba dòng tế bào ung thư thử nghiệm 107 3.5.4 Tổng hợp hợp chất lai dẫn xuất 119d Các hợp chất lai 123a-c tinh thể có nhiệt độ nóng chảy từ 242-2780C, Hiệu suất phản ứng click từ 79-90% Phân tích so sánh phổ tương ứng dãy thấy tín hiệu đặc trưng sau: Trên phổ 1H-NMR ba hợp chất thấy tín hiệu singlet độ cộng hưởng 9.81 ppm đặc trưng cho proton nhóm NH Tín hiệu singlet có cường độ mạnh cộng hưởng độ chuyển dịch 9.17-9.62 ppm proton triazole Hai tín hiệu tuân theo quy luật dãy hợp chất lai phân tích Tín hiệu muntiplet 4.36-4.31ppm đặc trưng cho proton nhóm OCH2 Tín hiệu triplet 2.24 ppm proton nhóm OCH2CH2CH2O Hai tín hiệu khơng thay đổi dãy hợp chất mẹ 119d 123b 123a 123c Hình 3.45: Cấu trúc hóa học hợp chất lai 123a-c Trên phổ 1H-NMR chất 123a, b thể đầy đủ 18 tín hiệu proton phân tử So sánh hai phổ hai chất thấy có tín hiệu phổ tương đương sau: 108 OCH2 OCH2CH2CH2O OCH2 OCH2CH2CH2O Hình 3.46: So sánh tƣơng đồng tín hiệu phổ 1H-NMR hai chất 123a 123c Trên phổ 13C- NMR chất 123a 123b xuất 25 tín hiệu carbon phân tử Phổ 13C-NMR hợp chất 123a nguyên tử carbon cộng hưởng δ 157.7, 154.3, 153.0, 147.2, 144.2, 140.1, 134.7, 131.5, 130.2, 129.4, 129.2, 127.6, 125.7, 122.9, 122.6, 121.1, 121.0, 119.4, 117.5, 70.8, 70.7, 30.9 Phổ 13C-NMR hợp chất 123b nguyên tử carbon cộng hưởng δ 157.5, 154.1, 152.8, 148.6, 147.7, 140.0, 137.2, 131.6, 130.1, 129.1, 125.9, 123.1, 122.4, 120.9, 120.8, 120.1, 119.2, 117.3, 114.6, 111.5, 70.6, 70.5, 30.7 Trên phổ IR hợp chất 123d xuất tín hiệu nhóm CN 2231cm-1 phổ hai hợp chất 123a,b khơng có tín hiệu Khi phân tích phổ 1H-NMR thấy có đầy đủ 27 tín hiệu 27 proton phân tử tín hiệu phổ độ chuyển dịch δ 9.81 (1H, s, NH), 9.62 (1H, s), 8.60-8.54 (3H, m), 8.48-8.46 (2H, m), 8.18 (1H, d, J = Hz), 7.93 (1H, d, J = 109 Hz), 7.66 (1H, d, J = Hz), 7.54 (1H, t, J = Hz), 7.26 (1H, d, J = Hz), 4.36-4.30 (4H, m, OCH2), 2.25 (2H, t, J = 5.5 Hz, OCH2CH2CH2O) Trên phổ 13 C NMR hợp chất 123d tín hiệu nguyên tử carbon cộng hưởng vị trí δ 157.5, 154.0, 152.8, 147.9, 144.9, 144.3, 140.0, 139.7, 137.6, 132.5, 129.8, 129.2, 123.7, 122.5, 120.9, 120.7, 120.2, 119.2, 118.1, 117.3, 115.0, 111.5, 107.8, 89.1, 70.6, 70.5, 30.7 3.6 KHẢO SÁT HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO CỦA CÁC HỢP CHẤT QUINAZOLINE, QUINAZOLINE-TRIAZOLE 3.6.1 Kết thử hoạt tính độc tế bào Q trình khảo sát hoạt tính gây độc tế bào thực phòng Hóa sinh ứng dụng viện Hóa học Các hợp chất sau tổng hợp đánh giá hoạt tính gây độc tế bào với dòng tế bào ung thư người, bao gồm KB (ung thư biểu mô, HepG2 (ung thư gan) Lu (ung thư phổi tế bào nhỏ) Sử dụng Erlotinib, erlotinib hydrochloride (nguyên liệu bào chế thuốc chữa ung thư phổi tế bào nhỏ) ellipticine làm chất đối chứng dương tính Các kết thử hoạt tính trình bày Bảng 3.5 Như thể Bảng 3.5, nói chung, hợp chất tổng hợp thể tác dụng ức chế độc tế bào tốt hầu hết trường hợp có hoạt tính ức chế cao so với thuốc tham chiếu erlotinib erlotinib hydrochloride Bảng 3.5: Hoạt tính gây độc tế bào hợp chất tổng hợp đƣợc TT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 R1,R2 H -OCH2O- -O(CH2)2O- -O(CH2)3O- R 2-NO2 3-NO2 4-NO2 3-CN-4-CF3 2-NO2 3-NO2 4-NO2 3-CN-4-CF3 2-NO2 3-NO2 4-NO2 3-CN-4-CF3 2-NO2 3-NO2 3-CN-4-CF3 Erlotinib Erlotinib.HCl Ellipticine Hợp chất 119a 120a 120b 120c 120d 119b 121a 121b 121c 121d 119c 122a 122b 122c 122d 119d 123a 123b 123c 110 IC50 (KB), µM 5.46 5.50 104.20 5.47 1.46 75.60 193.33 6.35 30.10 4.59 2.60 0.04 3.51 79.09 0.27 54.83 20.44 53.17 1.49 13.01 49.62 1.95 IC50 (HepG2), µM 4.16 4.64 286.75 8.11 1.86 26.17 207.01 6.88 11.29 6.10 2.84 0.14 0.88 230.02 6.09 69.89 43.35 76.81 1.61 25.01 14.17 2.72 IC50 (Lu), µM 4.16 4.76 259.74 9.16 4.50 64.88 216.84 6.66 44.48 27.46 3.36 1.03 5.67 54.77 4.44 80.67 14.75 230.40 1.81 99.76 31.15 1.38 Sự thay dị vòng oxy khác vị trí C-6 C-7 khung quinazoline ảnh hưởng đến ức chế độc tế bào khác Kết hoạt tính cho thấy hợp chất 119a dẫn xuất dioxin 119c rõ ràng có hoạt tính độc tế bào mạnh dẫn xuất dioxolan dioxepine 119b, 119d Hiệu thay khơng thuận lợi kết cản trở vô trùng Đặc biệt nữa, hợp chất 119a 119c tìm thấy chất ức chế độc tế bào chống lại ba dòng tế bào ung thư mạnh erlotinib erlotinib hydrochloride với IC50 có giá trị từ đến µM Bằng phản ứng click tạo cầu nối triazole liên kết hai hợp phần crown ether quinazoline 119 với azide tạo dãy hợp chất lai 120-123a-d có hoạt tính độc tế bào tăng lên đáng kể So sánh với dược điển thuốc tham chiếu có tác động độc tế bào với giá trị giá trị IC50 từ đến 100 µM hợp chất lai tổng hợp 120a, c, d, 121b, d, 122a, b, d 123c có tác động mạnh nhiều (với giá trị IC50 dao động từ 0.04 µM đến 25 µM) Kết cho thấy đường tổng hợp hợp chất đầy hứa hẹn hoạt động chống lại dòng tế bào ung thư Điều tra sơ mối quan hệ cấu trúc hoạt động (SAR) hợp chất lai tổng hợp 120-123a-d cho thấy chất vòng dị oxy nhóm aryl liên kết với vòng triazole ảnh hưởng đến hoạt tính độc tế bào đáng kể Ví dụ, kết cho thấy hoạt tính độc tế bào dioxan thay tương tự 122a-d mạnh so với dioxolane tương ứng, dioxepine, chất tương tự khơng có biến dị oxy (IC50: 122a> 120a> 123a> 121a, 122b> 121b> 123b> 120b, 122d> 123c ≈ 120d> 121d) Đặc biệt, hợp chất 122a cho thấy hoạt tính ức chế mạnh ba dòng tế bào KB, Hep-G2 Lu với giá trị IC50 tương ứng 0,04 µM, 0,14 µM 1,03 µM, tương ứng cao gấp 100 lần so với erlotinib Sự có mặt nhóm hút điện tử mạnh NO2, CF3 aryl liên kết với triazole cải thiện đáng kể hoạt động tế bào Kết cho thấy vào nhóm trifluoromethyl aryl dường tốt so với nhóm nitro (IC50: 120d> 120a> 120c> 120d, 121d> 121b> 121c> 121b, 123c> 123a> 123b) Ngồi ra, vị trí nhóm aryl dường ảnh hưởng đến hoạt tính độc tế bào chất Trên thực tế, với nhóm nitro, thay vị trí orto tốt vị trí meta para hầu hết trường hợp 111 3.6.2 Nghiên cứu docking hợp chất tổng hợp đƣợc thụ thể EGFR Các hợp chất thiết kế tổng hợp dựa khung cấu trúc hợp chất quinazoline tiêu biểu, đặc biệt erlotinib Trong số hợp chất tìm thấy hợp chất 120d, 122a, 122b, 123c có hoạt tính gây độc tế bào tốt, đặc biệt hợp chất 122a cho thấy hoạt tính ức chế mạnh ba dòng tế bào KB, Hep-G2 Lu với giá trị IC50 tương ứng 0,04 µM, 0,14 µM 1,03 µM, tương ứng cao gấp 100 lần so với erlotinib Phương pháp mô protein docking sử dụng Protein docking kỹ thuật mơ hình hóa nhằm dự đốn vị trí cấu trúc thuận lợi mà phân tử chất gắn kết đích tác dụng nó, thường phân tử protein Do erlotinib có khả ức chế EGFR khơng hoạt hóa EGFR-TKD đột biến tế bào ung thư phổi tế bào nhỏ (non-small-cell lung cancer, NSCLC) hướng đến nghiên cứu tương tác 120d, 122a, 122b, 123c với kiểu hình (phenotype) khác hệ EGFR Để chuẩn bị mơ hình protein, chúng tơi thu thập xử lý cấu trúc tinh thể tia X EGFR từ ngân hàng liệu Protein PDB (https://www.rcsb.org/): 1) EGFR hoạt hóa khơng đột biến mang mã 1M17 2ITX, 2) EGFR hoạt hóa mang đột biến L834R có mã 2ITV, 3) EGFR khơng hoạt hóa mang mã 4HJO 1XKK Các hợp chất 120d, 122a, 122b, 123c xây dựng cấu trúc 3D sử dụng phần mềm LigPrep-Schrodinger (https://www.schrodinger.com/ligprep) Mô docking thực chương trình ICM-pro 3.8 (www.molsoft.com/icmpro) Kết docking cho thấy hợp chất 120d, 122a, 122b, 123c có tương tác tốt với EGFR dạng hoạt hóa (đột biến hay khơng đột biến) khơng hoạt hóa hình 3.47 Do đặc tính thân dầu trung tâm hoạt động đích, khung aminoquinazoline tạo mạng lưới dày đặc tương tác van der Waals với acid amin quan trọng Leu844, Val726, Ala743, Lys745 đột biến L858R Ngồi ra, nhóm triazole tương tác mạnh với acid amine thân dầu miệng túi Lys745 Nhìn chung hợp chất đầu cho thấy khả ức chế EGFR dạng hoạt hóa khơng hoạt hóa Tuy nhiên, khác với erlotinib, hợp chất thể hoạt tính yếu đích EGFR hoạt hóa (có khơng đột biến), hoạt tính đích EGFR khơng hoạt hóa mạnh 112 Năng lượng liên kết tính cho Erlotinib ba hệ dao động từ -7,1 đến 9,9 kcal/mol Trong đó, hợp chất 120d, 122a, 122b, 123c cho mức lượng tương tác với EGFR hoạt hóa cao erlotinib (từ -10,0 đến -10,6 kcal/mol) Năng lượng tính cho hệ EGFR khơng hoạt hóa cao (từ -10,6 đến -12,3 kcal/mol) Tóm lại, kết nghiên cứu mơ docking phân tử giúp dự đốn hoạt tính hướng đích hợp chất 120d, 122a, 122b, 123c, góp phần giải thích chế gây độc tế bào hợp chất Kết hợp nghiên cứu lý thuyết thực nghiệm hợp chất 122a xem hit mới, làm định hướng cho tổng hợp hợp chất dẫn đường ức chế EGFR, hướng điều trị ung thư phổi tương lai Compound 120d Compound 122a Compound 122b Compound 123c Hình 3.47: Sơ đồ 2D thể tƣơng tác docking hợp chất 120d, 122a, 122b, 123c với vị trí hoạt động đích protein EGFR (Trong ngun tử phân loại theo mầu, số ô lượng liên kết (kcal/mol) hợp chất) 113 120d 122a IC50 (µM): 1.46 (KB); 1.86 (Hep-G2); IC50 (µM): 0.04 (KB); 0.14 (Hep-G2); 1.03 Lu 119c 122b IC50 (µM): 2.6 (KB); 2.84 (Hep-G2); IC50 (µM): 0.88 (Hep-G2); 122d 123c IC50 (µM): 0.27 (KB); IC50 (µM): 1.49 (KB); 1.61 (Hep-G2); 1.81( Lu) Hình 3.48: Cấu trúc số hợp chất lai có hoạt tính tốt 114 KẾT LUẬN Luận án tổng hợp thành cơng erlotinib hydrocloride theo quy trình cải tiến Đã tổng hợp 39 chất có 23 dẫn xuất quinazoline; 19 hợp chất lai chưa thấy công bố trước bao gồm: * hợp chất lai erlotinib –triazole * hợp chất lai N-(3-ethynylphenyl) quinazoline-4-amine (119a) azide qua cầu nối triazole * hợp chất lai N-(3-ethynylphenyl)-[1,3] dioxolo [4,5-g] quinazoline-8-amine (119b) azide qua cầu nối triazole * hợp chất lai N-(3-ethynylphenyl)-7,8-dihydro-[1,4] dioxino [2,3-g] quinazoline-4-amine (119c) azide qua cầu nối triazole * hợp chất lai N-(3-ethynylphenyl)-8,9-dihydro-7H-[1,4] dioxepino [2,3-g] quinazoline-4-amine (119d) azide qua cầu nối triazole Đã chứng minh cấu trúc 19 hợp chất lai phương pháp phổ đại IR, 1H-NMR, 13 C-NMR, DEPT, HSQC, HMBC, phổ khối lượng phân giải cao (HRMS) Đã thử hoạt tính gây độc tế bào với 19 hợp chất tổng hợp ba dòng tế bào ung thư người KB, Hep-G2 Lu Kết cho thấy nhiều hợp chất lai có hoạt tính tốt, tốt nhiều so với erlotinib hợp chất 120a, 120d; 121b, 121d; 122a, 122b, 122d 123c Đặc biệt, hợp chất 122a cho thấy hoạt tính ức chế mạnh ba dòng tế bào KB, Hep-G2 Lu với giá trị IC50 tương ứng 0,04 µM, 0,14 µM 1,03 µM, tương ứng cao gấp 100 lần so với erlotinib Sử dụng mơ protein docking để dự đốn hoạt tính hướng đích hợp chất 120d, 122a, 122b, 123c, góp phần giải thích chế gây độc tế bào hợp chất 115 ĐIỂM MỚI CỦA LUẬN ÁN Đã tổng hợp thành công erlotinib hidrocloride theo quy trình cải tiến Tổng hợp 23 dẫn xuất quinazoline theo đường hoàn toàn  hợp chất lai erlotinib với azide khác qua cầu nối triazole  dẫn xuất quinazoline -4- amine chứa nhóm crown ether vị trí C-6, C-7  15 hợp chất lai crown etherquinazoline với azide qua cầu nối triazole Đã khẳng định cấu trúc 19 hợp chất lai từ kết phân tích liệu phổ hồng ngoại (IR), phổ cộng hưởng từ hạt nhân (1H-NMR 13C-NMR, HMBC, HSQC) phổ khối lượng (MS) Đã đánh giá hoạt tính gây độc tế bào 19 dẫn xuất quinazoline ba dòng tế bào ung thư người bao gồm KB (ung thư biểu mô, Hep-G2 (ung thư gan) Lu (ung thư phổi tế bào nhỏ) có 13 chất có khả gây độc tế bào ung thư khảo sát Trong có chất thể hoạt tính độc tế bào ung thư mạnh với giá trị IC50 từ đến µM Sử dụng mơ protein docking để dự đốn hoạt tính hướng đích hợp chất 120d, 122a, 122b, 123c Đã tổng hợp hợp chất 122a có hoạt tính ức chế mạnh ba dòng tế bào ung thư KB, Hep-G2 Lu với giá trị IC50 tương ứng 0,04 µM, 0,14 µM 1,03 µM, tương ứng cao gấp 100 lần so với erlotinib Hợp chất 123c có giá trị IC50 1.49; 1.61; 1.81 µM tương đương với chất chuẩn Ellipticine (IC50 1.95; 2.72; 1.38 µM ) 116 CÁC CƠNG TRÌNH LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Lê Nhật Thùy Giang, Đinh Thúy Vân, Đặng Thị Tuyết Anh, Nguyễn Văn Tuyến Nghiên cứu quy trình cải tiến tổng hợp erlotinib Tạp chí Hóa học số 6e2, tập 54, tr (2016) Lê Nhật Thùy Giang, Đinh Thúy Vân, Hoàng Thị Phương, Đặng Thị Tuyết Anh, Nguyễn Hà Thanh, Nguyễn Thị Nga, Nguyễn Thanh Phương, Nguyễn Văn Tuyến Nghiên cứu tổng hợp dẫn xuất erlotinib N-(3-ethynylphenyl)-7,8-dihydro-[1,4]dioxino[2,3g]quinazolin-4-amin Tạp chí Hóa học, số 5E34, tập 55, tr 13-16 (2017) Le Nhat Thuy Giang, Dinh Thuy Van, Dang Thi Tuyet Anh, Hoang Thi Phuong, Nguyen Thi Nga, Nguyen Van Tuyen Synthesis and cytotoxicity evaluation of novel substituted triazole–erlotinib hybrid compounds Vietnam iournnal of chemistry, volume 56, Number 4e1, (2018) Giang Le Nhat Thuy, Thuy Van Dinh, Hai Pham-The, Hung Nguyen Quang, Tuyet Anh Dang Thi, Phuong Hoang Thi, Tu Anh Le Thi, Ha Thanh Nguyen, Phuong Nguyen Thanh, Trung Le Duc, Tuyen Van Nguyen Design, synthesis and evaluation of novel hybrids between 4-anilinoquinazolines and substituted triazoles as potent cytotoxic agents Bioorganic & Meedicinal Chemistry Letters 28, 3741-3747.(2018) 117 TÀI LIỆU THAM KHẢO Garofalo, A.; Goossens, L.; Baldeyrou, B.; Lemoine, A.; Ravez, S.; Six, P.; David Cordonnier, M.; Bonte, J.; Depreux, P.; Lansiaux, A.; Goossens, J Design, synthesis, and DNA-binding of N-alkyl (anilino)quinazoline derivatives Journal of Medicinal Chemistry 2010, 53, 8089-8103 Alafeefy, A M Some newquinazolin-4(3H) one derivatives synthesis and antitumor activity J Saudi Chem Soc 2011, 15, 337-343 Carmi, C.; Cavazzoni, A.; Vezzosi, S.; Bordi, F.; Vacondio, F.; Silva, C.; Rivara, S.; Lodola, A.; Alfieri, R R.; La Monica, S.; Galetti, M.; Ardizzoni, A.; Petronini, P G.; Mor, M Novel irreversible epidermal growth factor receptor inhibitors by chemical modulation of the cysteine-trap portion Journal of Medicinal Chemistry 2010, 53, 2038-2050 Singh, K.; Sharma, P.; Kumar, A.; Chaudhary, A.; Roy, R 4-Aminoquinazoline Analogs: A Novel Class of Anticancer Agents Mini Rev Journal of Medicinal Chemistry 2013, 13, 1177-1194 Sharma, S V.; Bell, D W.; Settleman, J.; Haber, D A Epidermal growth factor receptor mutations in lung cancer Nat Rev Cancer 2007, 7, 169 Zhang, H.; Berezov, A.; Wang, Q.; Zhang, G.; Drebin, J.; Murali, R.; Greene, M I ErbB receptors: from oncogenes to targeted cancer therapies J Clin Invest., 2007, 117, 2051 Avizienyte, E.; Ward, R A.; Garner, A P Comparison of the EGFR resistance mutation profiles generated by EGFR-targeted tyrosine kinase inhibitors and the impact of drug combinations Biochem J 2008, 415, 197 Li, Y B.; Wang, Z Q.; Yan, X.; Chen, M W.; Bao, J L.; Wu, G S.; Ge, Z M.; Zhou, D M.; Wang, Y T.; Li, R T Cancer Lett 2013, 340, 88 Huang, S.; Li, C.; Armstrong, E A.; Peet, C R.; Saker, J.; Amler, L C.; Sliwkowski, M X.; Harari, P M Dual targeting of EGFR and HER3 with MEHD7945A overcomes acquired resistance to EGFR inhibitors and radiation Cancer Res 2013, 73, 824 118 10 Mendelsohn, J.; Baselga, J The EGF receptor family as targets for cancer therapy Oncogene 2000, 19, 6550-6565 11 Ciardiello, F.; Tortora, G EGFR antagonists in cancer treatment N.Engl J Med 2008, 358, 1160-1174 12 Harandi, A.; Zaidi, A S.; Stocker, A M.; Laber, D A Clinical Efficacy and Toxicity of Anti-EGFR Therapy in Common Cancers Journal of Oncology 2009, 1-14 13 Gschwind, A.; Fischer, O M.; Ullrich A The discovery of receptor tyrosine kinases: targets for cancer therapy Nat Rev Cancer 2004, 4, 361-370 14 Cheng, W.; Yuan, Y.; Qui, N.; Peng, P.; Sheng, R.; Hu, Y Identification of novel 4-anilinoquinazoline derivatives as potent EGFR inhibitors both under normoxia and hypoxia Bioorg Journal of Medicinal Chemistry 2014, 22, 67966805 15 Yun, C H.; Boggon, T J.; Li, Y Q.; Woo, M S.; Greulich, H.; Meyerson, M.; Eck, M Structures of lung cancer-derived EGFR mutants and inhibitor complexes: mechanism of activation and insights into differential inhibitor sensitivity J Cancer Cell 2007, 11, 217 16 Stamos, J.; Sliwkowski, M.X.; Eigenbrot, C Structure of the epidermal growth factor receptor kinase domain alone and in complex with a 4-anilinoquinazoline inhibitor J Biol Chem 2002, 277, 46265 17 Hu, S.; Xie, G.; Zhang, A X.; Davis, C.; Long, W; Hu, Y.; Wang, F.; Kang, X.; Tan, F.; Ding, L.; Wang Y Synthesis and biological evaluation of crown ether fused quinazoline analogues as potent EGFR inhibitors Bioorg Med Chem Lett 2012, 22, 6301-6305 18 Zhao, Q.; Shentu, J.; Xu, N.; Zhou, J.; Yang, G.; Yao, Y Phase I study of icotinib hydrochloride (BPI-2009H), an oral EGFR tyrosine kinase inhibitor, in patients with advanced NSCLC and other solid tumors Lung Cancer 2011, 73, 195-202 19 Sun, Y.; Shi, Y.; Zhang, L.; Liu, X.; Zhou, C.; Zhang, L A randomized, doubleblind phase III study of icotinib versus gefitinib in patients with advanced nonsmall cell lung cancer (NSCLC) previously treated with chemotherapy (ICOGEN) J Clin Oncol 2011, 29, 7522 (No.15_suppl; abstr 7522) 20 Hamed M.M., Abou El Ella D.A., Keeton A.B., Piazza G.A., Hartmann R.W., Engel M., and A.H Abadi 6-aryl and heterocycle quinazoline derivatives as 119 potent EGFR inhibitors with improved activity toward Gefitinib-sensitive and resistant tumor cell lines Chem Med Chem 2013,8:1495-1504 21 Smaill, J B.; Rewcastle, G W.; Loo, J A.; Greis, K D.; Chan, O H.; Reyner, E L.; Lipka, E.; Hollis Showalter, H D.; Vincent, P W.; Elliott, W L.; Denny, W A Tyrosine kinase inhibitors 17 Irreversible inhibitors of the epidermal growth factor receptor: 4-(phenylamino)quinazoline- (phenylamino)pyrido[3,2-d]pyrimidine-6-acrylamides and bearing 4- additional solubilizing functions Journal of Medicinal Chemistry 2000, 43, 1380-1397 22 Zhao, F.; Lin, Z.; Wang, F.; Zheng, X.; Yun, H.; Zhao, W.; Dong, X Fourmembered heterocycles-containing 4-anilino-quinazoline derivatives as epidermal growth factor receptor (EGFR) kinase inhibitors Bioorg Med Chem Lett 2013, 23, 5385-5388 23 Zuo, S.-J.; Zhang, S.; Mao, S.; Xie, X.-X.; Xiao, X.; Xin, M.-H.; Xuan, W.; He, Y.-Y.; Cao, Y.-X.; Zhang, S.-Q Combination of anilinoquinazoline, arylurea and tertiary amine moiety to discover novel anticancer agents Bioorg Med Chem 2016, 24, 179-190 24 Qin, X.; Lv, Y.; Liu, P.; Li, Z.; Hu, L.; Zeng, C.; Yang, L Novel morpholin-3one fused quinazoline derivatives as EGFR tyrosine kinase inhibitors Bioorg Med Chem Lett 2016, 26(6):1571-1575 25 Qin, X.; Li, Z.; Yang, L.; Liu, P.; Hu, L.; Zeng, C.; Pan, Z Discovery of new [1,4]dioxino[2,3-f]quinazoline-based inhibitors of EGFR including the T790M/L858R mutant Bioorg Med Chem 2016, 24, 2871-2881 26 Chen, X.; Du, Y.; Sun, H.; Wang, F.; Kong, L.; Sun, M Synthesis and biological evaluation of novel tricyclic oxazine and oxazepine fused quinazolines Part 1: Erlotinib analogs Bioorg Med Chem Lett 2014, 24, 884-887 27 Malose Jack Mphahlele; Hugues K Paumo; Yee Siew Choong Synthesis and In Vitro Cytotoxicity of the 4-(Halogenoanilino)-6-bromoquinazolines and Their 6(4-Fluorophenyl) Substituted Derivatives as Potential Inhibitors of Epidermal Growth Factor Receptor Tyrosine Kinase Pharmaceuticals 2017, 10, 87 28 Hatem A Abuelizz; Mohamed Marzouk; Hazem Ghabbour; Rashad Al-Salahi Synthesis and anticancer activity of new quinazoline derivatives Saudi Pharmaceutical Journal 2017, 25, 1047–1054 120 29 Adel S El-Azab, Abdullah Al-Dhfyan, Alaa A.-M Abdel-Aziz, Laila A AbouZeid, Hamad M Alkahtani, Abdulrahman M Al-Obaid and Manal A AlGendy Synthesis, anticancer and apoptosis-inducing activities of quinazoline– isatin conjugates: epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase assay and molecular docking studies JOURNAL OF ENZYME INHIBITION AND MEDICINAL CHEMISTRY, 2017 VOL 32, NO 1, 935–944 30 Arunachalam Sumathy; Sivanandy Palanisamy Synthesis of Some Novel Quinazoline Derivatives Having Anti-Cancer Activity Glob J Pharmaceu 005 Sci 2017; 3(2): 555610 31 Mani Ramanathan, Yi-Hung Liu, Shie-Ming Peng, and Shiuh-Tzung Liu Synthesis of Substituted Quinazolin-4(3H)-imines From Aryldiazonium Salts, Nitriles and 2-Cyanoanilines via A Metal-Free Tandem Approach Org Lett 2017, 19, 5840-5843 32 Yu, H.; Li, Y.; Ge, Y.; Song, Z.; Wang, C.; Huang, S.; Jin, Y.; Han, X.; Zhen, Y.; Liu, K.; Zhou, Y.; Ma, X Eur Novel 4-anilinoquinazoline derivatives featuring an 1-adamantyl moiety as potent EGFR inhibitors with enhanced activity against NSCLC cell lines J Med Chem 2016, 110, 195-203 33 Kraege, S.; Stefan, K.; Juvale, K.; Ross, T.; Willmes, T.; Wiese M Eur The combination of quinazoline and chalcone moieties leads to novel potent heterodimeric modulators of breast cancer resistance protein (BCRP/ABCG2).J Med Chem 2016, 117, 212-229 34 Rubin, B P.; Duensing, A Mechanisms of resistance to small molecule kinase inhibition in the treatment of solid tumors Lab Invest 2006, 86, 981-986 35 Cai, X.; Zhai, H.X.; Wang, J.; Forrester, J.; Qu, H.; Yin, L.; Lai, C.J.; Bao, R.; Qian, C Discovery of 7-(4-(3-ethynylphenylamino)-7-methoxyquinazolin-6-yloxy)N-hydroxyheptanamide (CUDc-101) as a potent multi-acting HDAC, EGFR, and HER2 inhibitor for the treatment of cancer J Med Chem 2010, 53, 2000-2009 36 Lai, C.J.; Bao, R.; Tao, X.; Wang, J.; Atoyan, R.; Qu, H.; Wang, D.G.; Yin, L.; Samson, M.; Forrester, J.; et al CUDC-101, a multitargeted inhibitor of histone deacetylase, epidermal growth factor receptor, and human epidermal growth factor receptor 2, exerts potent anticancer activity Cancer Res 2010, 70, 3647-3656 121 37 Mahboobi, S.; Dove, S.; Sellmer, A.; Winkler, M.; Eichhorn, E.; Pongratz, H.; Ciossek, T.; Baer, T.; Maier, T.; Beckers, T Design of chimeric histone deacetylase- and tyrosine kinase-inhibitors: a series of imatinib hybrides as potent inhibitors of wild-type and mutant BCR-ABL, PDGF-Rbeta, and histone deacetylases J Med Chem 2009, 52, 2265-2279 38 Mahboobi, S.; Sellmer, A.; Winkler, M.; Eichhorn, E.; Pongratz, H.; Ciossek, T.; Baer, T.; Maier, T.; Beckers, T Novel chimeric histone deacetylase inhibitors: a series of lapatinib hybrides as potent inhibitors of epidermal growth factor receptor (EGFR), human epidermal growth factor receptor (HER2), and histone deacetylase activity J Med Chem 2010, 53, 8546-8555 39 Zhang, X.; Zhang, J.; Tong, L.; Luo, Y.; Su, M.; Zang, Y.; Li, J.; Lu, W.; Chen, Y., The discovery of colchicine-SAHA hybrids as a new class of antitumor agents Bioorg Med Chem 2013, 21, 3240-3244 40 Saito, A.; Yamashita, T.; Mariko, Y.; Nosaka, Y.; Tsuchiya, K.; Ando, T.; Suzuki, T.; Tsuruo, T.; Nakanishi, O A synthetic inhibitor of histone deacetylase, MS-27-275, with marked in vivo antitumor activity against human tumors Proc Natl Acad Sci USA 1999, 96, 4592-4297 41 Glick, R.D.; Swendeman, S.L.; Coffey, D.C.; Rifkind, R.A.; Marks, P.A.; Richon, V.M.; La Quaglia, M.P Hybrid polar histone deacetylase inhibitor induces apoptosis and CD95/CD95 ligand expression in human neuroblastoma Cancer Res 1999, 59, 4392-4399 42 Butler, L.M.; Agus, D.B.; Scher, H.I.; Higgins, B.; Rose, A.; Cordon-Cardo, C.; Thaler, H.T.; Rifkind, R.A.; Marks, P.A.; Richon, V.M Suberoylanilide hydroxamic acid, an inhibitor of histone deacetylase, suppresses the growth of prostate cancer cells in vitro and in vivo Cancer Res 2000, 60, 5165-5170 43 Oyelere, A.K.; Chen, P.C.; Guerrant, W.; Mwakwari, S.C.; Hood, R.; Zhang, Y.; Fan, Y Non-Peptide Macrocyclic Histone Deacetylase Inhibitors Journal of Medicinal Chemistry 2008;52(2):456–468 122 44 Peng, E.-W.; Xuan, J.; Wu, T.-T.; Xue, J.-Y.; Ren, Z.-W.; Liu, D.-K.; Wang, X.-Q.; Chen, X.-H.; Zhang, J.-W.; Xu, Y.-G.; Shi, L Design, synthesis and biological evaluation of N-phenylquinazolin-4-amine hybrids as dual inhibitors of VEGFR-2 and HDAC Eur J Med Chem 2016, 109, 1-12 45 Zhang, X.; Su, M.; Chen, Y.; Li, J ; Lu, W The Design and Synthesis of a New Class of RTK/HDAC Dual-Targeted Inhibitors Molecules 2013, 18, 6491-6503 46 Kinjal D Patel , Rajesh H Vekariya , Neelam P Prajapati , Dhaval B Patel , Hitesh D Patel , Tauhid Shaikh , Dhanji P Rajani , Smita Rajani b, Naumita S Shah , Devendrasinh Jhala Synthesis of N’-(Quinazolin-4-yl) sonicotinohydrazides and their biological screening, docking and ADME studies Arabian Journal of Chemistry 2018 47 D S Krause, R A Van Etten Tyrosine kinases as targets for cancer therapy Engl J Med Chem 2005, 353, 172-187 48 .S Huang, E A Armstrong, S Benavente, P Chinnaiyan, P M Harari Dualagent molecular targeting of the epidermal growth factor receptor (EGFR): combining anti-EGFR antibody with tyrosine kinase inhibitor Cancer Res 2004, 64, 5355-5362 49 G Gridelli, M A Bareschino, C Schettino, A Rossi, P Maione, F J Ciardiello Erlotinib in non-small cell lung cancer treatment: Current status and future development Oncologist 2007, 12, 840-849 50 F Brahimi, S L Matheson, F Dudouit, J P Mcnamee, A M Tari, B J JeanClaude Inhibition of epidermal growth factor receptor-mediated signaling by "Combi-triazene" BJ2000, a new probe for combi-targeting postulates J Pharm Exp Ther 2002, 303, 238-246 51 C A Townsley, P Major, L L Siu, J Dancey, E Chen, G R Pond, T Nicklee, J Ho, D Hedley, M Tsao, M J Moore, A M Oza Phase II study of erlotinib (OSI-774) in patients with metastatic colorectal cancer British J Cancer 2006, 94, 1136-1143 52 Y Y Lu, D D Jing, M Xu, K Wu, X P Wang Anti-tumor activity of erlotinib in the BxPC-3 pancreatic cancer cell line World J Gastroenterol 2008, 14, 5403-5411 123 53 C Festuccia, G L Gravina, L Biordi, S Ascenzo, V Dolo, C Ficorella, E Ricevuto, V J Tombolini Effects of EGFR tyrosine kinase inhibitor erlotinib in prostate cancer cells in vitro Prostate 2009, 69, 1529-1537 54 F Yamasaki, D Zhang, C Bartholomeusz, T Sudo, G Hortobagyi, K Kurisu, N T Ueno Sensitivity of breast cancer cells to erlotinib depends on cyclindependent kinase activity J Mol Cancer Ther 2007, 6, 2168-2177 55 P A Vasey, M Gore, R Wilson, G Rustin, H Gabra, J P Guastalla, E P Lauraine, J Paul, K Carty, S Kaye A phase Ib trial of docetaxel, carboplatin and erlotinib in ovarian, fallopian tube and primary peritoneal cancers Brit J Cancer, 2008, 98, 1774-1780 56 A J Barker Quinazoline derivatives European Patent Application 0566226A1 (1993) 57 R C Schnur, L D Arnold Alkynyl and azido-substituted 4- anilinoquinazolines Patent US5747498A 1998 58 P Knesl, D RoseLling, U Jordis Improved synthesis of substituted 6,7dihydroxy-4-quinazolineamines: Tandutinib, erlotinib and gefitinib Molecules 2006, 11, 286-297 59 V Chandregowda, G V Rao, G C Reddy Improved synthesis of gefitinib and erlotinib hydrochloride - anticancer agents Synthetic communication 2007, 37, 3409-3415 60 V Chandregowda, G V Rao, G C Reddy Convergent approach for commercial synthesis of gefitinib and erlotinib Org Proc Res Dev 2007, 11, 813-816 61 V Chandregowda, G V Rao, G C Reddy One-pot conversion 2nitrobenzonitriles to quinazolin-4(3H)-ones and synthesis of gefitinib and erlotinib hydrochloride Heterocycle 2007, 71, 39-48 62 M Wahren Die dimroth-umlagerung - Platzwechsel zwischen ring- und seitenkettenatomen von heteroaromaten oder ihren dihydrostufen unter intermediärer ringöffnung Zeitschrift für Chemie 1969, 9, 241-252 63 R Fischer, M Misum Large-scale synthesis of a pyrrolo[2,3-d]pyrimidine via Dakin−West reaction and Dimroth rearrangement Org Proc Res Dev 2001, 5, 581-586 124 64 J P Gilday, M J Wellham Process for the manufacture of gefitinib PCT Int Appl WO023783 2005 65 D Asgari, A Aghanejad, J S Mojarrad An improved convergent approach for synthesis of erlotinib, a tyrosine kinase inhibitor, via a ring closure reaction of phenyl benzamidine intermediate Bull Korea Chem Soc 2011, 32, 3, 909-914 66 C O Kangani, B W Day, D E Kelley Direct, facile synthesis of acyl azides and nitriles from carboxylic acids using bis(2-methoxyethyl)aminosulfur trifluoride Tetrahedron Lett 2007, 48, 5933-5937 67 V N Telvekar, R A Rane A novel system for the synthesis of nitriles from carboxylic acids Tetrahedron Lett 2007, 48, 6051-6053 68 L Barghi, A Aghanejad, H Valizadeh, J Barar, D Asgari Modified Synthesis of Erlotinib Hydrochloride Advanced Pharmacetical Bulletin 2012, 2, 119-122 69 E Byun, B Hong, K A De Castro, M Lim, H Rhee One-pot reductive monon-alkylation of aniline and nitroarene derivatives using aldehydes J Org Chem 2007, 72, 9815-9817 70 A Wallace Hayes, Claire L.Kruger, Hayes Principles and methods of toxicology, sixth edition, Taylor & Francis, CRC Press, 2014 71 Liang-Zhong Xu, Shu-Sheng Zhang, Shu-Yan Niu, Yong-Qi Qin, Xue-Mei Li and Kui Jiao Synthesis and biological activities of novel triazolee compounds containing 1,3-dioxolane rings Molecules 2004, 9, 913–921 72 Antonino Lauria, Riccardo Delisi, Francesco Mingoia, Alessio Terenzi, Annamaria Martorana, Giampaolo Barone, and Anna Maria Almerico 1,2,3Triazolee in130 Heterocyclic Compounds, Endowed With Biological Activity, Through 1,3-Dipolar Cycloadditions European J Org Chem 2014(16), 3289– 3306 73 G Ravi, A Ravinder Nath and A Nagaraj Synthesis of New Biologically Active Compounds Containing Triazolee and Tetrazole Heterocycles Journal of Current Chemical and Pharmaceutical Sciences, 2014, 4(3), 126-134 74 Nisar A.Dangroo, JasvinderSingh, Alamgir A.Dar, NidhiGupta, Praveen K.Chinthakindi, AnpurnaKaul, Mohmmed A.Khuroo, Payare L.Sangwan Synthesis of  α-santonin derived acetyl santonous acid triazolee derivatives and 125 their bioevaluation for T and B-cell proliferation Eur J Med Chem 2016, 120, 160–169 75 Revankar GR, Solan VC, Robins RK WJ Synthesis and biological activityof certain 1,2,3-triazolee carboxamide nucleosides related to bredinin and pyrazofurin Nucleic Acids Symp Ser 1981, 9, 65–68 76 Alka Mital Synthetic nitroimidazoles: Biological activities and mutagenicity relationships Sci Pharm 2009, 77, 497–520 77 World Health Organization WHO Model List of Essential Medicines (19th List) 2009 78 Liyuan Liang, Didier Astruc The copper(I)-catalyzed alkyne-azide cycloaddition (CuAAC) “click” reaction and its applications An overview Coordination Chemistry Reviews 2011, 255, 2933–2945 79 Hartmuth C Kolb, M G Finn, and K Barry Sharpless Click chemistry: Diveverse chemical funtion from a few good reactions Angew Chemie - Int Ed 2011, 40, 2004–2021 80 Pertino MW, Lopez C, Theoduloz C, Schmeda-Hirschmann G 1,2,3triazolee-substituted oleanolic acid derivatives: Synthesis and antiproliferative activity Molecules, 2013, 18, 7661–7674 81 Showkat Rashid, Bilal Ahmad Dar, Rabiya Majeed, Abid Hamid, Bilal Ahmad Bhat Synthesis and biological evaluation of ursolic acid-triazoleyl derivatives as potential anti-cancer agents Eur J Med Chem 2013, 66, 238–245 82 Han Wang, Renyang Xu, Yongying Shi, Longlong Si, Pingxuan Jiao, Zibo Fan, Xu Han, Xingyu Wu, Xiaoshu Zhou, Fei Yu, Yongmin Zhang, Lihe Zhang, Demin Zhou, Sulong Xiao Design, synthesis and biological evaluation of novel l-ascorbic acid-conjugated pentacyclic triterpene derivatives as potential influenza virus entry inhibitors Eur J Med Chem 2016, 110, 376–388 83 Raisa Haavikko Synthesis of Betulin Derivatives with New bioactivities 2015 84 Tatyana S Khlebnicova, Yuri A Piven, Alexander V Baranovsky, Fedor A Lakhvich, Svetlana V Shishkina, Daina Zicāne, Zenta Tetere, Irisa Rāviņa, Viktors Kumpiņ š, Inese Rijkure, Inese Mieriņa, Uldis Peipiņ š, Māris Turks Synthesis of novel lupane triterpenoid-indazolone hybrids with oxime ester linkage Steroids, 2017, 117, 77–89 126 85 Veda Prachayasittikul, Ratchanok Pingaew, Nuttapat Anuwongcharoen, Apilak Worachartcheewan, Chanin Nantasenamat, Supaluk Prachayasittikul, Somsak Ruchirawat and Virapong Prachayasittikul Discovery of novel 1,2,3-triazolee derivatives as anticancer agents using QSAR and in silico structural modification Springerplus 2015, 4, 571 (1–22) 86 Périgaud C, Gosselin G, Imbach JL Nucleoside Analogues as Chemotherapeutic Agents: A Review Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids 1992, 11, 903–945 87 Ple PA, Green TP, Hennequin LF, Curwen J, Fennell M, Allen J, Lambertvan der Brempt C, Costello G J Discovery of a new class of anilinoquinazoline inhibitors with high affinity and specificity for the tyrosine kinase domain of cSrc Med Chem 2004, 47:871-887 88 Colotta V, Catarzi D, Varano F, Lenzi O, Filacchioni G, Costagli C, Galli A, Ghelardini C, Galeotti N, Gratteri P, Sgrignani J, Deflorian F, Moro S Structural Investigation of the 7-Chloro-3-hydroxy-1H-quinazoline-2,4-dione Scaffold to Obtain AMPA and Kainate Receptor Selective Antagonists Synthesis, Pharmacological, and Molecular Modeling Studies J Med Chem 2006;49:6015-6026 89 Lewerenz A, Hentschel S, Vissiennon Z, Michael S, Nieber K A3 receptors in cortical neurons: Pharmacological aspects and neuroprotection during hypoxia Drug Dev Res 2003;58:420-427 90 Malecki N, Carato P, Rigo G, Goossens JF, Houssin R, Bailly C, Henichart JP Bioorg Med Chem 2004;12:641-647 91 Chao Q, Deng L, Shih H, Leoni LM, Genini D, Carson DA, Cottam HB J Med Chem 1999;42:3860-3873 92 Alagarsamya V, Raja Solomonb V, Dhanabal K Bioorg Med Chem 2007;15:235-241 93 Alafeefy AM, Kadi AA, Al-Deeb OA, El-Tahir KE, Al-Jaber NA Eur J Med Chem 2010;45:4947-4952 94 Nesterova IN, Radkevich TP, Granik VG Pharm Chem J 1991;25:786-789 95 Gupta VD, Singh J, Kinger M, Arora AK, Jaswal VS Asian J Chem 2015;27:4379-4382 96 Mendelsohn J, Baselga J Oncogene 2000;19:6550-6565 97 Blume-Jensen P, Hunter T Nature 2001;411:355-365 127 98 Ghorab MM, Alsaid MS Acta Pharm 2015;65:299-309 99 Madhavi S, Sreenivasulu R, Yazala JP, Raju RR Saudi Pharm J 2017;25:275-279 100 Song P, Cui F, Li N, Xin J, Ma Q, Meng X, Wang C, Cao Q, Gu Y, Ke Y, Zhang Q, Liu H Chin J Chem 2017;35:1633-1639 101 Lynch TJ, Bell DW, Sordella R, Gurubhagavatula S N Eng J Med 2004;350:2129-2139 102 Morgan MA, Parsels LA, Kollar LE Clin Cancer Res 2008;14:5142-5149 103 László K Pathol Oncol Res 2008;14:1-8 104 Wood ER, Truesdale AT, McDonald OB, Yuan D, Hassell A, Dickerson SH, Ellis B, Pennisi C, Horne E, Lackey K, Alligood KJ, Rusnak DW, Gilmer TM, Shewchuk L Cancer Res 2004;64:6652-6659 105 Solca F, Dahl G, Zoephel A, Bader G, Sanderson M, Klein C, Kraemer O, Himmelsbach F, Haaksma E, Adolf GR J Pharmacol Exp Ther 2012;343:342-350 106 Chilin A, Conconi MT, Marzaro G, Guiotto A, Urbani L, Tonus F, Parnigotto P J Med Chem 2010;53:1862-1866 107 Conconi MT, Marzaro G, Urbani L, Zanusso I, Liddo RD, Castagliuolo I, Brun P, Tonus F, Ferrarese A, Guiotto A, Chilin A Eur J Med Chem 2013;67:373-383 108 Dokmanovic M., Marks P.A, Prospects: histone deacetylase inhibitors, Journal Cell Biochem, 2005, 96(2), pp.293-304 109 Glozak M.A., Seto E, Histone deacetylases and cancer, Oncogene, 2007, 26, pp.5420 110 Grasso, C., Functionally defined therapeutic targets in diffuse intrinsic pontine glioma, Nature Medicine, 2015,21(6), pp.555-559 111 Hammett L.P., Some relations between reaction rates and equilibrium constants, Chemical (Reviews), 1935, 17, pp.125-136 112 Hevener K.E et al., Validation of Molecular Docking Programs for Virtual Screening against Dihydropteroate Synthase, Journal of chemicalinformation and modeling, 2009, 49(2), pp.444–460 113 Irwin J.J, Shoichet B.K, ZINC – A Free Database of Commercially Available Compounds for Virtual Screening, Journal of chemical information and modeling, 2005, 45 (1), pp.177-182 128 114 Jain A.N, Scoring functions for protein-ligand docking, Current Protein and Peptpde Science, 2006, 7(5), pp.407-420 115 Richet C, On the relationship between the toxicity and the physical properties of substances, Comptes Rendus Des Seances De La SocietherDe Biologie Et De Ses Filiales, 1893, 9, pp.775-776 116 Randall A Scheuerman; David Tumelty The reduction of aromatic nitro groups on solid supports using sodium hydrosulfite (Na2S2O4) Tetrahedron Letters 41, 2000; 6531-6535 117 Alessio Nocentini, Elena Trallori, Srishti Singh, Carrie L Lomelino, Gianluca Bartolucci, Lorenzo Di Cesare Mannelli, Carla Ghelardini, Robert McKenna, Paola Gratteri, and Claudiu T Supuran 4-Hydroxy-3-nitro-5-ureido-benzenesulfonamides Selectively Target the Tumor-Associated Carbonic Anhydrase Isoforms IX and XII Showing Hypoxia-Enhanced Antiproliferative Profiles J Med Chem 2018, 61, 10860−10874 118 Trần Thị Thu Thủy Tổng hợp erlotinib hydrochloride đánh giá hoạt tính kháng khối u thạch mềm Tạp chí Dược liệu, 2015, 471(55), 29-33 119 Ta Van Đai, Le Tat Thanh, Pham Quoc Long, Tran Thi Thu Thuy Preparation of erlotinib hydrochloride Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, 2015, 53 (6), 789-795 120 Trần Ngọc Quyển, Trần Thị Cẩm Tú, Bùi Thị Thuý Hạnh, Nguyễn Thị Hường, Nguyễn Cửu Khoa, Phan Minh Tuấn, Nguyễn Thị Phương, Hà Đăng Cấp Nghiên cứu tổng hợp toàn phần erlotinib làm nguyên liệu cho thuốc điều trị ung thư Tạp chí Dược học, 2015, T 55, S 7, 43-49 121 Đỗ Trung Đàm, Phương pháp xác định độc tính thuốc, Nhà xuất Y học, 2014 122 PGS.TS Đỗ Đình Rãng (chủ biên); PGS.TS Đặng Đình Bạch-PGS.TS Lê Thị Anh Đào; ThS Nguyễn Mạnh Hà-TS Nguyễn Thị Thanh Phong Hóa học Hữu 2,3 Nhà xuất Giáo dục 2008 129 PHỤ LỤC PL1 MỤC LỤC PHỤ LỤC Phổ IR hợp chất 107 Phổ IR hợp chất 108 Phổ 13C-NMR chất 104 Phổ 13C-NMR chất 109 Phổ 13C-NMR giãn chất 109 Phổ 13C-NMR giãn chất 109 Phổ IR hợp chất 112a Phổ IR hợp chất 113a Phổ IR hợp chất 117a Phổ IR hợp chất 112b Phổ IR hợp chất 113b Phổ IR hợp chất 117b Phổ IR hợp chất 114c Phổ IR hợp chất 114’ Phổ IR hợp chất 115c Phổ IR hợp chất 117c Phổ IR hợp chất 114d Phổ 1H-NMR giãn hợp chất 114d Phổ 1H-NMR giãn hợp chất 114d 10 Phổ 1H-NMR giãn hợp chất 114d 10 Phổ IR hợp chất 115d 11 Phổ IR hợp chất 116d 11 Phổ IR hợp chất 117d 12 Phổ IR hợp chất 118d 12 Phổ 1H-NMR chất 118c 13 Phổ IR hợp chất 119a 13 Phổ 1H-NMR chất 119a 14 Phổ IR hợp chất 119b 14 Phổ 1H-NMR giãn chất 119b 15 Phổ 1H-NRM chất 119c 15 Phổ IR hợp chất 119c 16 Phổ HRMS chất 119c 16 Phổ 1H-NMR chất 119d 17 PL2 Phổ 1H-NMR giãn chất 119d 17 Phổ 1H-NMR giãn chất 119d 18 Phổ IR hợp chất 109a 18 Phổ 1H-NMR chất 109a 19 Phổ 13C-NMR chất 109a 19 Phổ HRMS hợp chất 109a 20 Phổ IR hợp chất 109b 20 Phổ 1H-NMR chất 109b 21 Phổ 13C-NMR chất 109b 21 Phổ HRMS hợp chất 109b 22 Phổ 1H-NMR chất 109c 22 Phổ HRMS hợp chất 109c 23 Phổ IR chất 109d 24 Phổ HRMS chất 109d 24 Phổ 1H-NMR chất 109d 25 Phổ 13C-NMR chất 109d 25 Phổ 1H-NMR chất 120a 26 Phổ 13C-NMR chất 120a 26 Phổ IR chất 120a 27 Phổ HRMS chất 120a 27 Phổ 1H-NMR chất 120b 28 Phổ 13C-NMR chất 120b 28 Phổ MS hợp chất 120b 29 Phổ IR chất 120c 29 Phổ 13C-NMR chất 120c 30 Phổ HRMS hợp chất 120c 30 Phổ 1H-NMR chất 120d 31 Phổ 13C-NMR chất 120d 31 Phổ MS hợp chất 120d 32 Phổ IR hợp chất 121a 32 Phổ 1H-NMR chất 121a 33 Phổ 13C-NMR chất 121a 33 Phổ MS hợp chất 121a 34 PL3 Phổ IR hợp chất 121b 34 Phổ 1H-NMR chất 121b 35 Phổ 13C-NMR chất 121b 35 Phổ MS hợp chất 121b 36 Phổ IR chất 121c 36 Phổ 13C-NMR chất 121c 37 Phổ 1H-NMR chất 121d 37 Phổ 13C-NMR chất 121d 38 Phổ DEPT hợp chất 121d 38 Phổ DEPT giãn hợp chất 121d 39 Phổ HMBC hợp chất 121d 40 Phổ HMBC giãn hợp chất 121d 41 Phổ HMBC giãn hợp chất 121d 42 Phổ HMBC giãn hợp chất 121d 43 Phổ HSQC hợp chất 121d 44 Phổ IR hợp chất 121d 45 Phổ MS hợp chất 121d 45 Phổ 1H-NMR giãn hợp chất 122a 46 Phổ 13C-NMR hợp chất 122a 46 Phổ DEPT hợp chất 122a 47 Phổ HMBC hợp chất 122a 48 Phổ HMBC giãn hợp chất 122a 49 Phổ HMBC giãn hợp chất 122a 50 Phổ HMBC giãn hợp chất 122a 51 Phổ HMBC giãn hợp chất 122a 52 Phổ HSQC giãn hợp chất 122a 53 Phổ IR hợp chất 122a 54 Phổ MS hợp chất 122a 54 Phổ IR hợp chất 122b 55 Phổ 1H-NMR hợp chất 122b 55 Phổ 13C-NMR hợp chất 122b 56 Phổ 1H-NMR hợp chất 122c 56 Phổ 13C-NMR hợp chất 122c 57 PL4 Phổ 1H-NMR hợp chất 122d 57 Phổ 13C-NMR hợp chất 122d 58 Phổ MS hợp chất 122d 58 Phổ 1H-NMR hợp chất 123a 59 Phổ 13C-NMR hợp chất 123a 59 Phổ MS hợp chất 123a 60 Phổ 1H-NMR hợp chất 123b 60 Phổ 13C-NMR hợp chất 123b 61 Phổ 1H-NMR hợp chất 123c 61 Phổ 1H-NMR hợp chất 123c 62 Phổ MS hợp chất 123c 62 PL5 Phổ IR hợp chất 107 Phổ IR hợp chất 108 PL1 Phổ 13C-NMR chất 104 Phổ 13C-NMR chất 109 PL2 Phổ 13C-NMR giãn chất 109 Phổ 13C-NMR giãn chất 109 PL3 Phổ IR hợp chất 112a Phổ IR hợp chất 113a PL4 Phổ IR hợp chất 117a Phổ IR hợp chất 112b PL5 Phổ IR hợp chất 113b Phổ IR hợp chất 117b PL6 Phổ IR hợp chất 114c Phổ IR hợp chất 114’ PL7 Phổ IR hợp chất 115c Phổ IR hợp chất 117c PL8 Phổ IR hợp chất 114d Phổ 1H-NMR giãn hợp chất 114d PL9 Phổ 1H-NMR giãn hợp chất 114d Phổ 1H-NMR giãn hợp chất 114d PL10 Phổ IR hợp chất 115d Phổ IR hợp chất 116d PL11 Phổ IR hợp chất 117d Phổ IR hợp chất 118d PL12 Phổ 1H-NMR chất 118c Phổ IR hợp chất 119a PL13 Phổ 1H-NMR chất 119a Phổ IR hợp chất 119b PL14 Phổ 1H-NMR giãn chất 119b Phổ 1H-NRM chất 119c PL15 Phổ IR hợp chất 119c Phổ HRMS chất 119c PL16 Phổ 1H-NMR chất 119d Phổ 1H-NMR giãn chất 119d PL17 Phổ 1H-NMR giãn chất 119d Phổ IR hợp chất 109a PL18 Phổ 1H-NMR chất 109a Phổ 13C-NMR chất 109a PL19 Phổ HRMS hợp chất 109a Phổ IR hợp chất 109b PL20 Phổ 1H-NMR chất 109b Phổ 13C-NMR chất 109b PL21 Phổ HRMS hợp chất 109b Phổ 1H-NMR chất 109c PL22 Phổ HRMS hợp chất 109c PL23 Phổ IR chất 109d Phổ HRMS chất 109d PL24 Phổ 1H-NMR chất 109d Phổ 13C-NMR chất 109d PL25 Phổ 1H-NMR chất 120a Phổ 13C-NMR chất 120a PL26 Phổ IR chất 120a Phổ HRMS chất 120a PL27 Phổ 1H-NMR chất 120b Phổ 13C-NMR chất 120b PL28 Phổ MS hợp chất 120b Phổ IR chất 120c PL29 Phổ 13C-NMR chất 120c Phổ HRMS hợp chất 120c PL30 Phổ 1H-NMR chất 120d Phổ 13C-NMR chất 120d PL31 Phổ MS hợp chất 120d Phổ IR hợp chất 121a PL32 Phổ 1H-NMR chất 121a Phổ 13C-NMR chất 121a PL33 Phổ MS hợp chất 121a Phổ IR hợp chất 121b PL34 Phổ 1H-NMR chất 121b Phổ 13C-NMR chất 121b PL35 Phổ MS hợp chất 121b Phổ IR chất 121c PL36 Phổ 13C-NMR chất 121c Phổ 1H-NMR chất 121d PL37 Phổ 13C-NMR chất 121d Phổ DEPT hợp chất 121d PL38 Phổ DEPT giãn hợp chất 121d PL39 Phổ HMBC hợp chất 121d PL40 Phổ HMBC giãn hợp chất 121d PL41 Phổ HMBC giãn hợp chất 121d PL42 Phổ HMBC giãn hợp chất 121d PL43 Phổ HSQC hợp chất 121d PL44 Phổ IR hợp chất 121d Phổ MS hợp chất 121d PL45 Phổ 1H-NMR giãn hợp chất 122a Phổ 13C-NMR hợp chất 122a PL46 Phổ DEPT hợp chất 122a PL47 Phổ HMBC hợp chất 122a PL48 Phổ HMBC giãn hợp chất 122a PL49 Phổ HMBC giãn hợp chất 122a PL50 Phổ HMBC giãn hợp chất 122a PL51 Phổ HMBC giãn hợp chất 122a PL52 Phổ HSQC giãn hợp chất 122a PL53 Phổ IR hợp chất 122a Phổ MS hợp chất 122a PL54 Phổ IR hợp chất 122b Phổ 1H-NMR hợp chất 122b PL55 Phổ 13C-NMR hợp chất 122b Phổ 1H-NMR hợp chất 122c PL56 Phổ 13C-NMR hợp chất 122c Phổ 1H-NMR hợp chất 122d PL57 Phổ 13C-NMR hợp chất 122d Phổ MS hợp chất 122d PL58 Phổ 1H-NMR hợp chất 123a Phổ 13C-NMR hợp chất 123a PL59 Phổ MS hợp chất 123a Phổ 1H-NMR hợp chất 123b PL60 Phổ 13C-NMR hợp chất 123b Phổ 1H-NMR hợp chất 123c PL61 Phổ 1H-NMR hợp chất 123c Phổ MS hợp chất 123c PL62  ... Nghiên cứu tổng hợp đánh giá hoạt tính gây độc tế bào hợp chất quinazolin hướng nghiên cứu có ý nghĩa khoa học thực tiễn Mục tiêu luận án: Nghiên cứu cải tiến quy trình tổng hợp thuốc erlotinib...VIỆN KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN HĨA HỌC NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO CỦA CÁC HỢP CHẤT QUINAZOLIN Chuyên ngành : Hóa học hữu... khiết hợp chất sắc kí lớp mỏng .34 2.1.3 Phương pháp thiết bị nghiên cứu 34 2.1.4 Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào ung thư .35 2.2 TỔNG HỢP ERLOTINIB VÀ CÁC HỢP CHẤT