MỞ ĐẦU
CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.1. CÂY CA CAO VÀ TIỀM NĂNG PHÁT TRIỂN
1.2. THỰC TRẠNG VÀ TRIỂN VỌNG CHUYỂN GEN CÓ GIÁ TRỊ VÀO CÂY TRỒNG VÀ CÂY CA CAO
1.3. PROTEIN VÀ GEN MÃ HÓA CHITINASE
1.3.1 Giới thiệu về protein và gen mã hóa chitinase
1.3.2. Các nguồn gen mã hóa chitinase
1.3.3. Phân loại chitinase
1.3.4. Vai trò của gen mã hóa chitinase trong công nghệ gen
CHƯƠNG 2. NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
Hình 2.1. Một số vector tạo dòng và biểu hiện thực vật
sử dụng trong nghiên cứu
Bảng 2.1. Trình tự các cặp mồi được sử dụng
Bảng 2.2. Môi trường nuôi cấy các chủng vi sinh vật [24]
2.2. PHƯƠNG PHÁP
2.2.1. Điện di DNA trên gel agarose
2.2.2. Nhân gen bằng kỹ thuật PCR (Polymerase chain reaction)
2.2.3. Tách và tinh sạch đoạn gen từ gel agarose
Đoạn DNA được điện di trên gel agarose 0.8%, sau đó phần gel có băng DNA mong muốn được thu lại và DNA được tinh sạch bằng Kit GenJETTM Gel Extration. Quy trình tinh sạch DNA gồm các bước sau:
2.2.4. Phản ứng ghép nối gen với vector
2.2.5. Biến nạp DNA vào vi khuẩn E. coli
2.2.6. Biến nạp DNA vào A. tumefaciens
2.2.7. Tách chiết DNA plasmid
2.2.8. Phân tích bằng enzyme hạn chế
2.2.9. Xác định trình tự
CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
Hình 3.1. Sơ đồ thiết kế vector biểu hiện pCB301 mang gen mã hóa TcChi1
Hình 3.2. Sản phẩm PCR nhân gen mã hóa TcChi1 và sản phẩm xử lý enzyme
hạn chế các plasmid tái tổ hợp pJET+TcChi1 trên gel agarose 0,8%
Hình 3.4. Các cấu trúc gen và sơ đồ thiết kế vector pRTRA-TcChi1
Hình 3.5. Hình ảnh điện di kết quả chọn lọc các plasmid pRTRA tái tổ hợp trên gel agarose 0.8%
Hình 3.6. Hình ảnh điện di kết quả tạo pRTRA+TcChi1 trên gel agarose 0,8%
Hình 3.7. Các vị trí nhận biết của enzyme HindIII
Hình 3.8. Các cấu trúc gen và sơ đồ thiết kế vector pCB301+TcChi1
Hình 3.9. Hình ảnh điện di chọn lọc các plasmid tái tổ hợp pCB301 mang gen mã hóa TcChi1
Hình 3.10. Điện di sản phẩm xử lý pCB301+TcChi1 bằng HindIII trên gel agarose 0,8%
M. Thang DNA chuẩn 1 kb;
Hình 3.11. Hình ảnh điện di sản phẩm PCR gen mã hóa TcChi1 từ chủng vi khuẩn A. tumefaciens tái tổ hợp trên gel agarose 0.8%
Bảng 3.1. Thông tin về các chủng vi khuẩn A. tumefaciens tái tổ hợp mang vector pCB301+TcChi1
Hình 3.12. Sơ đồ thiết kế vector biểu hiện pPIPRA558+TcChi1-U
Hình 3.13. Điện di sản phẩm PCR nhân gen mã hóa TcChi1-U trên gel agarose 0,8%
Hình 3.14. Các vị trí nhận biết của enzyme BamHI và BglII
Hình 3.15. Điện di sản phẩm tinh sạch vector pPIPRA522 và gen mã hóa TcChi1-U trên gel agarose 0.8%
Hình 3.16. Kiểm tra pPIPRA522 tái tổ hợp bằng BamHI
Hình 3.178. Sản phẩm tinh sạch pPIPRA558/PacI đã loại bỏ cấu trúc FMV34S+GUS+E9 trên gel agarose 0.8%
CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ
KẾT LUẬN
1. Đã tạo được các vector tạo dòng tái tổ hợp mang gen mã hóa chitinase:
KIẾN NGHỊ
1. Tiếp tục tạo vector biểu hiện thực vật và chủng vi khuẩn A. tumefaciens mang gen mã hóa TcChi1-U.
2. Chuyển các cấu trúc đã thiết kế vào cây ca cao và các cây trồng khác.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
TÀI LIỆU THAM KHẢO