Tạo chủng vi khuẩn agrobacterium tumefaciensn mang gen mã hoá chitinase từ theobroma cacao l (LV00778)

LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn TS Lê Thị Thu Hiền, Phó Viện trưởng, Trưởng phòng Đa dạng sinh học hệ gen, Viện Nghiên cứu hệ gen, Viện Khoa Formatted: Header distance from edge: 0.75" Formatted: Font: Not Bold Formatted: Font: Not Bold Formatted: Font: Not Bold học Công nghệ Việt Nam hướng dẫn tận tình, chu hoàn thành luận văn tốt nghiệp Tôi xin trân trọng cảm ơn PGS TS Nông Văn Hải, Viện trưởng Viện Formatted: Font: Not Bold Nghiên cứu hệ gen, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, tạo điều kiện giúp thực tập Viện tạo điều kiện cho thực luận văn tốt nghiệp Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới thầy cô giáo, giảng viên trường Đại học sư phạm Hà Nội giúp đỡ dạy suốt trình học tập thực hiên đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn tới cán nghiên cứu thuộc Viện Nghiên cứu hệ gen, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, đặc biệt NCS Hà Hồng Hạnh, HVCH Nguyễn Văn Phòng nhiệt tình hướng dẫn cho lời khuyên kinh nghiệm trình thực đề tài Cuối cùng, xin cảm ơn gia đình bạn bè động viên, giúp đỡ suốt trình học tập nghiên cứu Luận văn hoàn thành khuôn khổ nhiệm vụ hợp tác quốc tế “Nghiên cứu tái sinh in vitro tạo ca cao (Theobroma cacao L.) chuyển gen” thuộc “Chương trình trọng điểm phát triển ứng dụng công nghệ sinh học lĩnh vực nông nghiệp phát triển nông thôn đến năm 2020” Hà Nội,, 24 tháng 12 năm 2012 Học viên cao học Formatted: Centered LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Nguyễn Lệ Thủy Formatted: Left, Indent: Left: 0", First line: 0" LỜI CAM ĐOAN Formatted: Font: 15 pt Tôi xin cam đoan: Đây công trình nghiên cứu số kết đạt qua trình cộng tác với đồng nghiệp khác Các số liệu kết trình bày luận án trung thực, phần công bố tạp chí khoa học chuyên ngành với đồng ý cho phép đồng tác giả Phần lại chưa công bố công trình Hà Nội, tháng năm 2012 Học viên cao học Nguyễn Lệ Thủy MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN Formatted [1] Formatted [2] Field Code Changed [4] Formatted [5] Formatted [3] Field Code Changed [6] Formatted [7] Field Code Changed [8] Formatted [9] Formatted [10] Formatted [11] Formatted [12] Formatted [13] Formatted [14] Formatted [15] Formatted [16] Formatted [17] Formatted [18] Formatted [19] Formatted [20] Formatted [21] Formatted [22] Formatted [23] 1.2 THỰC TRẠNG VÀ TRIỂN VỌNG CHUYỂN GEN CÓ GIÁ TRỊ VÀO CÂY TRỒNG VÀ CÂY CA CAO 87 1.2.1 Chuyển gen vào trồng 87 Formatted [24] Formatted [25] Formatted [26] Formatted [27] 1.2.2 Tình hình nghiên cứu chuyển gen vào ca cao sử dụng vi khuẩn Formatted [28] Formatted [29] Formatted [30] Formatted [31] Formatted [32] Formatted [33] Field Code Changed [34] Formatted [35] Field Code Changed [36] Formatted [37] Formatted [38] Formatted [39] Formatted [40] Formatted [41] Formatted [42] Formatted [43] Formatted [44] Formatted [45] Formatted [46] Formatted [47] Formatted [48] LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC HÌNH VÀ BẢNG MỞ ĐẦU .1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 CÂY CA CAO VÀ TIỀM NĂNG PHÁT TRIỂN .3 1.1.1 Giới thiệu chung ca cao 1.1.2 Tình hình phát triển ca cao Việt Nam A tumefaciens 1110 1.3 PROTEIN VÀ GEN MÃ HÓA CHITINASE 1312 1.3.1 Giới thiệu protein gen mã hóa chitinase 1312 1.3.2 Các nguồn gen mã hóa chitinase 1413 1.3.3 Phân loại chitinase 1514 1.3.4 Vai trò gen mã hóa chitinase công nghệ gen 1716 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 1918 2.1 NGUYÊN LIỆU 1918 2.1.1 Nguyên liệu sinh học 1918 2.1.2 Hóa chất 2120 2.1.3 Thiết bị 2221 2.2 PHƯƠNG PHÁP 2321 2.2.1 Điện di DNA gel agarose 2321 Formatted [49] Formatted [50] Formatted [51] Formatted [52] Formatted [53] Formatted [54] Formatted [55] 2.2.5 Biến nạp DNA vào vi khuẩn E coli 2725 Formatted [56] Formatted [57] 2.2.6 Biến nạp DNA vào A tumefaciens 2826 Formatted [58] Formatted [59] Formatted [60] Formatted [61] Formatted [62] Formatted [63] CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3533 Formatted [64] Formatted [65] 3.1 THIẾT KẾ VECTOR BIỂU HIỆN THỰC VẬT MANG GEN MÃ HÓA CHITINASE (TcChi1) SỬ DỤNG HỆ VECTOR pCB 301 3533 3.1.1 Sơ đồ thí nghiệm 3634 Formatted [66] Field Code Changed [67] Field Code Changed [68] Formatted [69] Formatted [70] Formatted [71] Formatted [72] Formatted [73] 3.1.4 Thiết kế vào tạo vector biểu thực vật mang gen mã hóa Formatted [74] Formatted [75] chitinase 4240 Formatted [76] Formatted [77] Formatted [78] Formatted [79] Formatted [80] Formatted [81] Formatted [82] Formatted [83] Formatted [84] Formatted [85] Formatted [86] Formatted [87] Formatted [88] Formatted [89] Formatted [90] Formatted [91] Formatted [92] Formatted [93] Formatted [94] 2.2.2 Nhân gen kỹ thuật PCR (Polymerase chain reaction) 2422 2.2.3 Tách tinh đoạn gen từ gel agarose 2523 2.2.4 Phản ứng ghép nối gen với vector 2624 2.2.7 Tách chiết DNA plasmid 3028 2.2.8 Phân tích enzyme hạn chế 3331 2.2.9 Xác định trình tự 3331 3.1.2 Nhân đoạn gen mã hóa chitinase TcChi1 từ dòng pJET+TcChi1W/1 kỹ thuật PCR 3735 3.1.3 Tạo vector trung gian pRTRA + TcChi1 tái tổ hợp 3836 3.1.5 Tạo chủng A tumefaciens mang Ti-plasmid pCB301+TcChi1 tái tổ hợp phương pháp xung điện 4744 3.2 THIẾT KẾ VECTOR BIỂU HIỆN THỰC VẬT MANG GEN MÃ HÓA CHITINASE (TcChi1-U) SỬ DỤNG HỆ VECTOR pPIPRA 5148 3.2.1 Sơ đồ thí nghiệm 5148 3.2.2 Kết nhân đoạn gen mã hóa chitinase TcChi1-U từ dòng pJET+TcChi1-W/1 kỹ thuật PCR 5350 3.2.3 Thiết kế vector trung gian pPIPRA522 mang gen mã hóa TcChi1-U 5451 3.2.4 Thiết kế vector biểu thực vật pPIPRA558 với cấu trúc gen GUS loại bỏ thay cấu trúc gen mã hóa TcChi1-U 5653 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5855 Field Code Changed KẾT LUẬN 5855 Field Code Changed KIẾN NGHỊ 5855 TÀI LIỆU THAM KHẢO 6056 MỞ ĐẦU…………………………………………………………………… CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 33 Formatted: Font: 14 pt Formatted: Tab stops: 6.02", Centered,Leader: … + 6.1", Centered,Leader: … Field Code Changed Formatted: Font: 14 pt Field Code Changed Field Code Changed 1.1 CÂY CA CAO VÀ TIỀM NĂNG PHÁT TRIỂN …33 1.1.1 Giới thiệu chung ca cao 33 Field Code Changed Field Code Changed Formatted: Font: 14 pt 1.1.2 Tình hình phát triển ca cao Việt Nam 66 1.2 THỰC TRẠNG VÀ TRIỂN VỌNG CHUYỂN GEN CÓ GIÁ TRỊ VÀO CÂY TRỒNG VÀ CÂY CA CAO 88 1.2.1 Chuyển gen vào trồng 88 1.2.2 Tình hình nghiên cứu chuyển gen vào ca cao sử dụng vi khuẩn A tumefaciens 1111 Formatted: Tab stops: 6.1", Centered,Leader: … + Not at 6.1" Formatted: Tab stops: 6.1", Centered,Leader: … Formatted: Font: 14 pt Formatted: Font: 14 pt Formatted: Tab stops: 6.1", Centered,Leader: … + Not at 6.1" Formatted: Tab stops: 6.1", Centered,Leader: … Formatted: Font: 14 pt 1.3 PROTEIN VÀ GEN MÃ HÓA CHITINASE 1313 Formatted: Font: 14 pt 1.3.1 Giới thiệu protein gen mã hóa chitinase 1313 Formatted: Tab stops: 6.1", Centered,Leader: … + Not at 6.1" 1.3.2.Các nguồn gen mã hóa chitinase 1313 Formatted: Tab stops: 6.1", Centered,Leader: … 1.3.3 Phân loại chitinase 1515 Formatted: Font: 14 pt 1.3.4 Vai trò gen mã hóa chitinase công nghệ gen 1616 Formatted: Font: 14 pt CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 181819 2.1.NGUYÊN LIỆU 181819 Formatted: Font: 14 pt Formatted: Font: 14 pt Formatted: Tab stops: 6.02", Centered,Leader: … + 6.1", Centered,Leader: … 2.1.1 Nguyên liệu sinh học 181819 Formatted: Tab stops: 6.1", Centered,Leader: … + Not at 6.1" 2.1.2 Hóa chất 202021 Formatted: Tab stops: 6.1", Centered,Leader: … Formatted: Font: 14 pt Formatted: Font: 14 pt 2.1.3.Thiết bị 212122 2.2 PHƯƠNG PHÁP 212122 Formatted: Font: 14 pt Formatted: Tab stops: 6.1", Centered,Leader: … + Not at 6.1" 2.2.1 Điện di DNA gel agarose [36] 212122 Formatted: Font: 14 pt 2.2.2 Nhân gen kỹ thuật PCR (Polymerase Chain Reaction- PCR) Formatted: Tab stops: 6.1", Centered,Leader: … 222223 Formatted: Font: 14 pt 2.2.3 Tách tinh đoạn gen từ gel agarose 232324 Formatted: Font: 14 pt 2.2.4 Phản ứng ghép nối gen với vector 242425 Formatted: Font: 14 pt 2.2.5 Biến nạp DNA vào vi khuẩn E coli 252526 Formatted: Font: 14 pt 2.2.6 Biến nạp DNA vào A tumefaciens 262627 Formatted: Font: 14 pt 2.2.7 Tách chiết DNA plasmid 282829 Formatted: Font: 14 pt 2.2.8 Phân tích enzyme hạn chế 3131 Formatted: Font: 14 pt 2.2.9 Xác định trình tự 313132 Formatted: Font: 14 pt CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 333334 3.1 THIẾT KẾ VECTOR BIỂU HIỆN THỰC VẬT MANG GEN MÃ HÓA CHITINASE (TcChi1) SỬ DỤNG HỆ VECTOR pCB 301 333334 Formatted: Tab stops: 6.02", Centered,Leader: … + 6.1", Centered,Leader: … Formatted: Tab stops: 6.1", Centered,Leader: … + Not at 6.1" 3.1.1 Sơ đồ thí nghiệm 343435 Formatted: Font: 14 pt 3.1.2 Nhân đoạn gen mã hóa chitinase TcChi1 từ dòng pJET+TcChi1- Formatted: Tab stops: 6.1", Centered,Leader: … W/1 kỹ thuật PCR 3535 3.1.3 Tạo vector tái tổ hợp trung gian pRTRA + TcChi1 3636 Formatted: Font: Italic Formatted: Font: 14 pt Formatted: Font: 14 pt 3.1.4 Thiết kế vào tạo vector biểu thực vật mang gen mã hóa chitinase 4040 Formatted: Font: 14 pt 3.1.5 Tạo chủng A tumefaciens mang Ti-plasmid pCB + CaMV35S + TcChi1 tái tổ hợp phương pháp xung điện 4444 3.2 THIẾT KẾ VECTOR BIỂU HIỆN THỰC VẬT MANG GEN MÃ Formatted: Font: 14 pt Formatted: Tab stops: 6.1", Centered,Leader: … + Not at 6.1" HÓA CHITINASE SỬ DỤNG HỆ VECTOR pPIPRA 4848 3.2.1 Sơ đồ thí nghiệm 4848 Formatted: Tab stops: 6.1", Centered,Leader: … Formatted: Font: 14 pt LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC 3.2.2 Kết nhân đoạn gen mã hóa chitinase TcChi1-U từ dòng pJET+TcChi1-W/1 kỹ thuật PCR 5050 Formatted: Font: 14 pt 3.2.3 Thiết kế vector trung gian pPIPRA522 mang gen mã hóa TcChi1-U .ssssssssss5151 Formatted: Font: 14 pt 3.2.4 Thiết kế vector biểu thực vật pPIPRA558 với cấu trúc gen GUS loại bỏ thay cấu trúc gen mã hóa TcChi1-U535354 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 555556 TÀI LIỆU THAM KHẢO 565657 Formatted: Font: 14 pt Formatted: Tab stops: 6.02", Centered,Leader: … + 6.1", Centered,Leader: … Formatted: Tab stops: 6.1", Centered,Leader: … CÁC TỪ VIẾT TẮT Amp Ampicillin Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li Bp Cặp base Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li DNA Deoxyribonucleic acid Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li dNTP Deoxynucleoside triphosphate Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li ddNTP Dideoxynucleoside triphosphate Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li EGFP Enhanced greenflorescent protein Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li EtOH Cồn (Ethanol) Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li GlcNAC N-acetylglucosamine Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li GMOs Genetically modified organisms Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li GUS ß-Glucuronidase Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li Kan Kanamycin Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li Kb Kilo base (1kb = 1000bp) Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li LB Luria broth Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li PCR Phản ứng chuỗi polymerase (Polymerase Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li chain reaction) RNA Ribonucleic acid Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li RIP Ribosome inactivating protein Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li rRNA Ribosome ribonucleic acid Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li SDS Sodium dodecyl sulphate Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li T-DNA Transfer-DNA Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li TAE Tris-acetate-EDTA Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li Tm Nhiệt độ nóng chảy Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li ISAAA International Service for the Acquisition of Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li Agri-biotech Aplications v/p Vòng/phút Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC 1 Lê Trần Bình (2009), ‘‘Thành tựu nghiên cứu phát triển trồng chuyển gen: hội thách thức’’, Hội nghị Quốc gia sinh vật biến đổi gen Quản lý an toàn sinh Formatted: Font: 12 pt Formatted: No bullets or numbering học,1-6 2 Lê Tấn Đức, Nguyễn Hữu Hổ, Nguyễn Văn Uyển (2003), Tạo Hông (Paulownia fortune) chuyển gen kháng sâu thông qua vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens, Báo cáo khoa học Hội nghị Công nghệ sinh học toàn quốc 2003: 1088 – 1090 3 Lê Thị Thu Hiền (2003), Tạo chủng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens mang gen kháng côn trùng để chuyển vào trồng, Luận án tiến Tiến sĩ Sinh học, Viện Công nghệ sinh học, Hà Nội 4 Nguyễn Hữu Hổ, Lê Tấn Đức, Nguyễn Thị Thanh (2009), Bước đầu nghiên cứu tạo phôi sô-ma từ rễ in vitro sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis et grushv, Báo cáo hội nghị Công nghệ sinh học toàn quốc năm 2009 Nhà xuất Đại học Thái Nguyên: p 138-143 5 Nguyễn Thị Thanh, Võ Phan Mi Sa, Lê Tấn Đức (2009), ‘‘Nghiên cứu chuyển gen gna kháng rầy rệp vào giống hồ tiêu Karimunda’’., Hội nghị Quốc gia Sinh vật biến đổi gen Quản lý an toàn sinh học: 165-170 6 Nguyễn Văn Uyển, Lê Tấn Đức, Nguyễn Hữu Hổ (2003), Nghiên cứu hệ thống tái sinh in vitro hông (Paulownia fortuney) ảnh hưởng tác nhân chọn lọc để tạo Formatted: Font: 12 pt, Not Italic chuyển gen, Báo cáo khoa học hội nghị công nghệ sinh học toàn quốc 2003: 866-869 Tài liệu nước Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0" Arakane Y , Muthukrishnan S (2010), "Insect chitinase and chitinase-like proteins", Formatted: Font: 12 pt, Not Bold Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines Cell Mol Life Sci, 67(2), 201-216 Field Code Changed Benhamou N., Joosten M H , De Wit P J (1990), "Subcellular Localization of Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar Chitinase and of Its Potential Substrate in Tomato Root Tissues Infected by Fusarium Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines oxysporum f sp radicis-lycopersici", Plant Physiol, 92(4), 1108-1120 Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar Boller T (1987), "Hydrolytic enzymes in plant disease resistance", In Plant-Microbe Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines Interactions, Molecular and Genetic Perspectives, (Koshuge, T and Nester, E.W., eds) New York: Macmillan, 3, 385-411 65 Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC 10 Boller T., Gehri A., Mauch F , Vagell U (1983), "Chitinase in bean leaves: induction by ethylene, purification, properties, and possible function", Planta, 157, 22-31 11 Broglie K., Chet I., Holliday M , Cressman R (1991), "Transgenic plants with enhanced resistance to the fungal pathogen Rhizoctonia solani", Science, 254, 1194–1197 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar 12 Carstens M., Vivier M A , Pretorius I S (2003), "The Saccharomyces cerevisiae Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar chitinase, encoded by the CTS1-2 gene, confers antifungal activity against Botrytis cinerea Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines to transgenic tobacco", Transgenic Res, 12(4), 497-508 Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar 13 Coutinho P , Henrissat B (1999), "Carbohydrate-active enzymes: an integrated database approach", In: Gilbert HH, Davies GJ, Henrissat H, Svensson B (eds) Recent advances in carbohydrate bioengineering Royal Soc Chemistry, Cambridge, UK, 3–12 Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 14 David B C., Karsten M K., Jsrn D M., Klaus K N., Ulla R , Knud V (1993), "Plant Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar chitinases", Planta, 3(1), 31-40 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 15 Gooday G W (1996), "Aggresive and Defensive Roles for Chitinases", In: Chitin Enzymology, R.A.A Muzzarelli (ed),Atec Edizioni, Italia, 2, 125- 133 Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 16 Guyton B., Lumsden R , Matlick B K (2003), " Strategic plan for sustainable cocoa production", Manufacturing Confectioner, 83, 55-60 17 ISAAA (2011) Executive Summary: Global Status of Commercialized Biotech/GM Crops, International Service for the Acquision of Agri-biotech Application 43-2011 18 Jach G., Gornhardt B., Mundy J., Logemann J., Pinsdorf E., Leah R., Schell J , Maas Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines Formatted: Font: 12 pt, Do not check spelling or grammar Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines C (1995), "Enhanced quantitative resistance against fungal disease by combinatorial expression of different barley antifungal proteins in transgenic tobacco", Plant J, 8(1), 97109 66 Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC 19 Kawase T., Saito A., Sato T., Kanai R., Fujii T., Nikaidou N., Miyashita K , Watanabe Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines T (2004), "Distribution and phylogenetic analysis of family 19 chitinases in Actinobacteria", Appl Environ Microbiol, 70(2), 1135-1144 Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar 20 Keen C L., Holt R R., Oteiza P I., Fraga C G , Schmitz H H (2005), "Cocoa antioxidants and cardiovascular health", Am J Clin Nutr, 81(1 Suppl), 298S-303S Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar 21 Koga D., Hoshika H., Matsushita M., Tanaka A., Ide A , K M (1996), Biosci Biotech Bioch, 60(2) Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar 22 Kramer K J., Corpuz L., Choi H K , Muthukrishnan S (1993), "Sequence of a cDNA Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines and expression of the gene encoding epidermal and gut chitinases of Manduca sexta", Insect Biochem Mol Biol, 23(6), 691-701 Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar 23 Linthorst H J., Van Loon L C., Van Rossum C M., Mayer A., Bol J F., Van Roekel Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines J S., Meulenhoff E J , Cornelissen B J (1990), "Analysis of acidic and basic chitinases from tobacco and petunia and their constitutive expression in transgenic tobacco", Mol Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar Plant Microbe Interact, 3, 252–258 24 Matsumoto K (2006), "Fungal chitinases ", Agricultural and Food Biotechnology, Trivandrum-695 023, Kerala, India, 289-304 Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar 25 Maximova S., Miller C., Antunez de Mayolo G., Pishak S., Young A , Guiltinan M J (2003), "Stable transformation of Theobroma cacao L and influence of matrix attachment regions on GFP expression", Plant Cell Rep, 21(9), 872-883 , Hatfull G F (2000), "Genome organization Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar 26 Mediavilla J., Jain S., Kriakov J., Ford M E., Duda R L., Jacobs W R., Jr., Hendrix R W Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines and characterization Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines of mycobacteriophage Bxb1", Mol Microbiol, 38(5), 955-970 Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar 27 Molano J., Polacheck I., Duran A , Cabib E (1979), "An endochitinase from wheat Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines germ Activity on nascent and preformed chitin", J Biol Chem, 254(11), 4901-4907 Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar 67 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC 28 Morais R C (2005), "The genomes of cocoa", In Forbes(March 14), 110-112 29 Morris D (1882) Cocoa: How to grow and how to cure it, Jamaica Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar 30 Ohno T., Armand S., Hata T., Nikaidou N., Henrissat B., Mitsutomi M , Watanabe T Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines (1996), "A modular family 19 chitinase found in the prokaryotic organism Streptomyces Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines griseus HUT 6037", J Bacteriol, 178, 5065–5070 Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar 31 Rice R A , Greenberg R (2003), "The Chocolate Tree: Growing cacao in the forest", Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines Natural History, 112, 36–43 Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar 32 Sambrook J F., Russell D (2001) Molecular cloning, A Laboratory manual, Cold spring Harbor laboratory press, New York Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar 33 Sanger M., Daubert S , Goodman R M (1990), "Characteristics of a strong promoter Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines from figwort mosaic virus: comparison with the analogous 35S promoter from cauliflower mosaic virus and the regulated mannopine synthase promoter", Plant Mol Biol, 14(3), Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar 433-443 34 Silva T E R., Cidade L C., Alvim F C., Cascardo J C M , Costa M G C (2009), "Studies on genetic transformation of Theobroma cacao L.: Evaluation of different polyamines and antibiotics on somatic embryogenesis and the efficiency of uidA gene transfer by Agrobacterium tumefaciens", Plant Cell Tiss Organ Cult, 99, 287-298 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar 35 Tzfira T , Citovsky V (2006), "Agrobacterium-mediated genetic transformation of Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar plants: biology and biotechnology", Curr Opin Biotechnol, 17(2), 147-154 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 36 Vierheilig H., Alt M., Lange J., Gut-Rella M., Wiemken A , Boller T (1995), "Colonization of Transgenic Tobacco Constitutively Expressing Pathogenesis-Related Proteins by the Vesicular-Arbuscular Mycorrhizal Fungus Glomus mosseae", Appl Environ Microbiol, 61(8), 3031-3034 68 Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC 37 Waterston R (1998), "Genome sequence of the nematode C elegans: a platform for investigating biology", Science, 282, 2012–2018 38 You M., Xuan X., Tsuji N., Kamio T., Taylor D., Suzuki N , Fujisaki K (2003), Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines "Identification and molecular characterization of a chitinase from the hard tick Haemaphysalis longicornis", J Biol Chem, 278(10), 8556-8563 Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar 39 Zamir K., Puna , Zhang Y Y (1993), "Plant Chitinases and Their Roles in Resistance Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines to Fungal Diseases", Journal of Nematology, 25(4), 526-540 Formatted: Font: 12 pt, Italic, Do not check spelling or grammar Arakane, Y, and S Muthukrishnan S (2010), "Insect chitinase and chitinase-like Formatted: Font: 12 pt proteins", Cell Mol Life Sci, 67(2), 201-216 Formatted: Line spacing: 1.5 lines Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines Benhamou, N., M H Joosten MH, et al (1990), "Subcellular Localization localization of Formatted: Line spacing: 1.5 lines Chitinase chitinase and of Its its Potential potential Substrate substrate in Tomato tomato Root root tTissues Infected infected by Fusarium oxysporum f sp radicis-lycopersici", Plant Physiol, 92(4), 1108-1120 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines Boller, T (1987), "Hydrolytic enzymes in plant disease resistance", In Plant-Microbe Formatted: Line spacing: 1.5 lines Interactions, Molecular and Genetic Perspectives, (Koshuge, T and Nester, E.W., eds) New York: Macmillan, 3, 385-411 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 10 Boller, T., A Gehri, et al (1983), "Chitinase in bean leaves: induction by ethylene, Formatted: Line spacing: 1.5 lines purification, properties, and possible function", Planta, 157, 22-31 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 11 Broglie, K., I Chet, et al (1991), "Transgenic plants with enhanced resistance to the Formatted: Line spacing: 1.5 lines fungal pathogen Rhizoctonia solani", Science, 254, 1194–1197 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 69 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC 12 Carstens, M., M A Vivier, et al (2003), "The Saccharomyces cerevisiae chitinase, Formatted: Font: 12 pt, Italic encoded by the CTS1-2 gene, confers antifungal activity against Botrytis cinerea to Formatted: Line spacing: 1.5 lines Formatted: Font: 12 pt transgenic tobacco", Transgenic Res, 12(4), 497-508 Formatted: Font: 12 pt, Italic Formatted: Font: 12 pt 13 Coutinho, P and B Henrissat (1999), "Carbohydrate-active enzymes: an integrated Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines database approach", In: Gilbert HH, Davies GJ, Henrissat H, Svensson B (eds) Recent Formatted: Line spacing: 1.5 lines advances in carbohydrate bioengineering Royal Soc Chemistry, Cambridge, UK, 3–12 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 14 David, B C., M K Karsten, et al (1993), "Plant chitinases", Planta, 3(1), 31-40 Formatted: Line spacing: 1.5 lines Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 15 Gooday, G W (1996), "Aggresive and Defensive Roles for Chitinases", In: Chitin Formatted: Line spacing: 1.5 lines Enzymology, R.A.A Muzzarelli (ed),Atec Edizioni, Italia, 2, 125- 133 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 16 Guyton, B., R Lumsden, et al(2003), " Strategic plan for sustainable cocoa Formatted: Line spacing: 1.5 lines production", Manufacturing Confectioner, 83, 55-60 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 17 Jach, G., B Gornhardt, et al (1995), "Enhanced quantitative resistance against fungal Formatted: Line spacing: 1.5 lines disease by combinatorial expression of different barley antifungal proteins in transgenic tobacco", Plant J, 8(1), 97-109 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 18 James, C (2010) Global status of commercialized biotech/GM crops: 2010 Executive Formatted: Line spacing: 1.5 lines summary Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 19 Kawase, T., A Saito, et al (2004), "Distribution and phylogenetic analysis of family Formatted: Line spacing: 1.5 lines 19 chitinases in Actinobacteria", Appl Environ Microbiol, 70(2), 1135-1144 Formatted: Font: 12 pt, Italic Formatted: Font: 12 pt 20 Keen, C L., R R Holt, et al (2005), "Cocoa antioxidants and cardiovascular health", Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines Formatted: Line spacing: 1.5 lines Am J Clin Nutr, 81(1 Suppl), 298S-303S Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 21 Koga D, Hoshika H, et al (1996), Biosci Biotech Bioch 60 (2), 194-199 Formatted: Line spacing: 1.5 lines Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 70 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC 22 Kramer, K J., L Corpuz, et al (1993), "Sequence of a cDNA and expression of the Formatted: Line spacing: 1.5 lines gene encoding epidermal and gut chitinases of Manduca sexta", Insect Biochem Mol Biol, 23(6), 691-701 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 23 Linthorst, H J., L C Van Loon, et al (1990), "Analysis of acidic and basic chitinases Formatted: Line spacing: 1.5 lines from tobacco and petunia and their constitutive expression in transgenic tobacco", Mol Plant Microbe Interact, 3, 252–258 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 24 Luria, S E., J N Adams, et al.(1960), "Transduction of lactose-utilizing ability among Formatted: Line spacing: 1.5 lines strains of E coli and S dysenteriae and the properties of the transducing phage particles", Virology, 12, 348-390 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 25 Matsumoto, K (2006), "Fungal chitinases", Agricultural and Food Biotechnology, Formatted: Line spacing: 1.5 lines Trivandrum-695 023, Kerala, India, 289-304 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 26 Maximova, S., C Miller, et al (2003), "Stable transformation of Theobroma cacao L Formatted: Line spacing: 1.5 lines and influence of matrix attachment regions on GFP expression", Plant Cell Rep, 21(9), Formatted: Font: 12 pt, Italic Formatted: Font: 12 pt 872-883 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 27 Mediavilla, J., S Jain, et al (2000), "Genome organization and characterization of Formatted: Line spacing: 1.5 lines mycobacteriophage Bxb1", Mol Microbiol, 38(5), 955-970 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 28 Molano, J., I Polacheck, et al (1979), "An endochitinase from wheat germ Activity on Formatted: Line spacing: 1.5 lines nascent and preformed chitin", J Biol Chem, 254(11), 4901-4907 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 29 Morais, R C (2005), "The genomes of cocoa", In Forbes (March 14), 110-112 Formatted: Line spacing: 1.5 lines Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 30 Morris, D.(1882) Cocoa: How to grow and how to cure it, Jamaica Formatted: Line spacing: 1.5 lines Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 31 Ohno, T., S Armand, et al (1996), "A modular family 19 chitinase found in the Formatted: Line spacing: 1.5 lines prokaryotic organism Streptomyces griseus HUT 6037", J Bacteriol, 178, 5065–5070 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 71 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC 32 Paul, H M and M Ray, Eds (2008), Genomics of Tropical Crop Plants, Springer Formatted: Line spacing: 1.5 lines Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 33 Rice, R A and R Greenberg (2003), "The Chocolate Tree: Growing cacao in the Formatted: Line spacing: 1.5 lines forest", Natural History, 112, 36–43 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 34 Sanger, M., S Daubert, et al.(1990), "Characteristics of a strong promoter from figwort Formatted: Line spacing: 1.5 lines mosaic virus: comparison with the analogous 35S promoter from cauliflower mosaic virus and the regulated mannopine synthase promoter", Plant Mol Biol, 14(3), 433-443 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 35 Shubeita, H E., J F Sambrook, et al (1987), "Molecular cloning and analysis of Formatted: Line spacing: 1.5 lines functional cDNA and genomic clones encoding bovine cellular retinoic acid-binding protein", Proc Natl Acad Sci U S A, 84(16), 5645-5649 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 36 Silva, T E R., L C Cidade, et al (2009), "Studies on genetic transformation of Formatted: Line spacing: 1.5 lines Theobroma cacao L.: Evaluation of different polyamines and antibiotics on somatic embryogenesis and the efficiency of uidA gene transfer by Agrobacterium tumefaciens", Plant Cell Tiss Organ Cult, 99, 287-298 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 37 Tzfira, T and V Citovsky (2006), "Agrobacterium-mediated genetic transformation of Formatted: Line spacing: 1.5 lines plants: biology and biotechnology", Curr Opin Biotechnol, 17(2), 147-154 Formatted: Font: 12 pt, Italic Formatted: Font: 12 pt 38 Vierheilig, H., M Alt, et al.(1995), "Colonization of Transgenic Tobacco Constitutively Expressing Pathogenesis-Related Proteins by the Vesicular-Arbuscular Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines Formatted: Line spacing: 1.5 lines Mycorrhizal Fungus Glomus mosseae" Appl Environ Microbiol, 61(8), 3031-3034 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 39 Waterston, R (1998), "Genome sequence of the nematode C elegans: a platform for Formatted: Line spacing: 1.5 lines investigating biology", Science, 282, 2012–2018 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 40 You, M., X Xuan, et al (2003), "Identification and molecular characterization of a Formatted: Line spacing: 1.5 lines chitinase from the hard tick Haemaphysalis longicornis", J Biol Chem, 278(10), 85568563 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines 72 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC 41 Zamir, K., Puna, et al (1993), "Plant Chitinases chitinases and Their their Roles roles Formatted: Line spacing: 1.5 lines in Resistance resistance to Fungal fungal Diseasesdiseases", Journal of Nematology, 25(4), 526-540 Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Line spacing: 1.5 lines Tài liệu trang web 42.http://www.baomoi.com/Phat-trien-dien-tich-trong-ca-cao/148/9755298.epi 43 http://www.icco.org 73 Formatted: Tab stops: Not at 0.3" Page 0: [1] Formatted Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:39:00 PM Font: 14 pt Page 0: [2] Formatted Justified Page 0: [3] Formatted Tab stops: 6.02", Centered,Leader: … + 6.1", Centered,Leader: … Page 0: [4] Change Unknown Field Code Changed Page 0: [5] Formatted Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Font: 14 pt Page 0: [6] Change Unknown Field Code Changed Page 0: [7] Formatted Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Font: Bold Page 0: [8] Change Unknown Field Code Changed Page 0: [9] Formatted Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:39:00 PM Font: 14 pt Page 0: [10] Formatted Font: 14 pt Page 0: [11] Formatted Justified, Tab stops: 6.02", Centered,Leader: … + 6.1", Centered,Leader: … + Not at 6.1" Page 0: [12] Formatted Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:39:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:39:00 PM Font: 14 pt Page 0: [13] Formatted Font: 14 pt Page 0: [14] Formatted Tab stops: 6.1", Centered,Leader: … Page 0: [15] Formatted Font: 14 pt Page 0: [16] Formatted Font: 14 pt Page 0: [16] Formatted Font: 14 pt Page 0: [17] Formatted Font: 14 pt Page 0: [18] Formatted Justified, Tab stops: 6.02", Centered,Leader: … + 6.1", Centered,Leader: … + Not at 6.1" Page 0: [19] Formatted Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Font: 14 pt Page 0: [20] Formatted Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:39:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:39:00 PM Font: 14 pt Page 0: [21] Formatted Tab stops: 6.1", Centered,Leader: … Page 0: [22] Formatted Font: 14 pt Page 0: [23] Formatted Font: 14 pt Page 0: [23] Formatted Font: 14 pt Page 0: [24] Formatted Font: 14 pt Page 0: [25] Formatted Justified, Tab stops: 6.02", Centered,Leader: … + 6.1", Centered,Leader: … + Not at 6.1" Page 0: [26] Formatted Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:39:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:39:00 PM Font: 14 pt Page 0: [27] Formatted Font: 14 pt Page 0: [28] Formatted Tab stops: 6.1", Centered,Leader: … Page 0: [29] Formatted Font: 14 pt Page 0: [30] Formatted Font: 14 pt Page 0: [30] Formatted Font: 14 pt Page 0: [31] Formatted Font: 14 pt Page 0: [31] Formatted Font: 14 pt Page 0: [32] Formatted Font: 14 pt Page 0: [32] Formatted Font: 14 pt Page 0: [33] Formatted Tab stops: 6.02", Centered,Leader: … + 6.1", Centered,Leader: … Page 0: [34] Change Field Code Changed Unknown Page 0: [35] Formatted Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Font: Bold Page 0: [36] Change Unknown Field Code Changed Page 0: [37] Formatted Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:39:00 PM Font: 14 pt Page 0: [38] Formatted Font: 14 pt Page 0: [39] Formatted Justified, Tab stops: 6.02", Centered,Leader: … + 6.1", Centered,Leader: … + Not at 6.1" Page 0: [40] Formatted Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:39:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:39:00 PM Font: 14 pt Page 0: [41] Formatted Font: 14 pt Page 0: [42] Formatted Tab stops: 6.1", Centered,Leader: … Page 0: [43] Formatted Font: 14 pt Page 0: [44] Formatted Font: 14 pt Page 0: [44] Formatted Font: 14 pt Page 0: [45] Formatted Font: 14 pt Page 0: [45] Formatted Font: 14 pt Page 0: [46] Formatted Font: 14 pt Page 0: [47] Formatted Justified, Tab stops: 6.02", Centered,Leader: … + 6.1", Centered,Leader: … + Not at 6.1" Page 0: [48] Formatted Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:39:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Font: 14 pt Page 0: [49] Formatted Font: 14 pt Page 0: [50] Formatted Tab stops: 6.1", Centered,Leader: … Page 0: [51] Formatted Font: 14 pt Page 0: [52] Formatted Font: 14 pt Page 0: [53] Formatted Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:39:00 PM Font: 14 pt Page 0: [54] Formatted Font: 14 pt Page 0: [55] Formatted Font: 14 pt Page 0: [56] Formatted Font: 14 pt Page 0: [57] Formatted Font: 14 pt Page 0: [58] Formatted Font: 14 pt Page 0: [59] Formatted Font: 14 pt Page 0: [60] Formatted Font: 14 pt Page 0: [61] Formatted Font: 14 pt Page 0: [62] Formatted Font: 14 pt Page 0: [63] Formatted Font: 14 pt Page 0: [64] Formatted Font: 14 pt Page 0: [65] Formatted Font: 14 pt Page 0: [66] Formatted Tab stops: 6.02", Centered,Leader: … + 6.1", Centered,Leader: … Page 0: [67] Change Unknown Field Code Changed Page 0: [68] Change Unknown Field Code Changed Page 0: [69] Formatted Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:39:00 PM Font: 14 pt Page 0: [70] Formatted Font: 14 pt Page 0: [71] Formatted Justified, Tab stops: 6.02", Centered,Leader: … + 6.1", Centered,Leader: … + Not at 6.1" Page 0: [72] Formatted Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:39:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:39:00 PM Font: 14 pt Page 0: [73] Formatted Font: 14 pt Page 0: [74] Formatted Tab stops: 6.1", Centered,Leader: … Page 0: [75] Formatted Font: 14 pt Page 0: [76] Formatted Font: 14 pt Page 0: [77] Formatted Font: 14 pt Page 0: [78] Formatted Font: 14 pt Page 0: [79] Formatted Font: 14 pt Page 0: [80] Formatted Font: 14 pt, Expanded by 0.6 pt Page 0: [81] Formatted Font: 14 pt, Expanded by 0.6 pt Page 0: [82] Formatted Font: 14 pt Page 0: [83] Formatted Font: 14 pt Page 0: [84] Formatted Font: 14 pt Page 0: [85] Formatted Justified, Tab stops: 6.02", Centered,Leader: … + 6.1", Centered,Leader: … + Not at 6.1" Page 0: [86] Formatted Trung Hieu 2/13/2008 12:14:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:39:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Font: 14 pt Page 0: [87] Formatted Font: 14 pt Page 0: [88] Formatted Tab stops: 6.1", Centered,Leader: … Page 0: [89] Formatted Font: 14 pt Page 0: [90] Formatted Font: 14 pt Page 0: [91] Formatted Font: 14 pt Page 0: [92] Formatted Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Trung Hieu 2/13/2008 12:15:00 PM Font: 14 pt, Condensed by 0.4 pt Page 0: [93] Formatted Font: 14 pt, Condensed by 0.4 pt Page 0: [94] Formatted Font: 14 pt [...]... có Vi t Nam Với mục đích tạo các vật liệu phục vụ vi c chuyển gen kháng nấm có nguồn gốc thực vật vào cây ca cao nói riêng và các cây trồng khác nói chung, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài Tạo chủng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens mang gen mã hóa chitinase từ Theobroma cacao L. ” với những nội dung chính sau: 1 Nhân gen mã hóa chitinase có nguồn gốc từ hệ gen cây ca cao bằng kỹ thuật PCR; 2 Tạo. .. Tạo dòng gen mã hóa chitinase trong vector tạo dòng; 3 Thiết kế và tạo vector biểu hiện thực vật mang gen mã hóa chitinase; 4 Tạo chủng vi khuẩn A tumefaciens mang vector biểu hiện thực vật đã tạo được Đề tài luận văn được tiến hành tại Phòng Công nghệ DNA Ứng dụng và Phòng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ gen, Vi n Công nghệ sinh học; Phòng Đa dạng sinh học hệ gen, Vi n Nghiên cứu hệ gen (thuộc Vi n Khoa... không l n, ít phải tưới, không kén đất nhưng cũng không chịu được các vùng quá khô hạn như đất cát hoàn toàn  Phân loại học Từ năm 1882, loài T cacao L đã được Morris phân loại ra 2 loài phụ: Criollo và Forastero Criollo có hạt dạng tròn, nội nhũ trắng, có hương vị nhẹ 3 Formatted: Font: 15 pt LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC và tương đối dễ nhiễm bệnh Criollo gồm 2 dòng chính l Criollo Mexico và Criollo Lagarto... cây trồng vẫn l những vấn đề cần bàn luận Tuy nhiên, vi c chuyển gen mã hóa chitinase vào thực vật để tăng khả năng kháng nấm đang được quan tâm và l hướng đi rất triển vọng Thuốc l chuyển gen mã hóa chitinase từ thực vật và vi khuẩn đã thu được những kết quả rất khác nhau [12], [18], [23], [36] [12], [17], [23], [38] Cây thuốc l Field Code Changed được chuyển gen mã hóa chitinase từ đậu tương đã... số gen đích vào cây ca cao [25], [34] [26], [36] Các gen mã hóa protein có hoạt tính diệt côn trùng của vi khuẩn Bacillus thuringiensis, gen mã hóa chitinase l các gen đích có giá trị Tương ứng với các gen này, các promoter cơ định như CaMV35S hay promoter đặc hiệu được chọn l a để điều khiển biểu hiện gen ở những mô mong muốn 12 Field Code Changed LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC 1.3 PROTEIN VÀ GEN MÃ HÓA... Enhanced greenflorescent protein EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid EtOH Cồn (Ethanol) Formatted: Indent: Left: 0.5" Formatted: Font: 15 pt Formatted: Centered, Indent: Left: 0" GlcNAC GMOs N-acetylglucosamine Genetically modified organisms GUS ß-Glucuronidase Kan Kb Kanamycin Kilo base (1kb = 1000bp) LB PCR Luria broth Phản ứng chuỗi polymerase (Polymerase chain reaction) RNA RIP Ribonucleic acid Ribosome... Rhizoctonia solani [11] Trên đối tượng cây ca cao, gen mã hóa TcChi1 đã được nghiên cứu biểu hiện thành công để kháng l i nấm Colletotrichum gloeosporioides gây bệnh khô vỏ thân cao cao, một loại bệnh phổ biến thường xảy ra cả mùa khô l n mùa mưa [24][25] 18 Field Code Changed LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC CHƯƠNG 2 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 NGUYÊN LIỆU 2.1.1 Nguyên liệu sinh học Vi khuẩn Escherichia coli chủng. .. cuộn protein, chitinase được chia l m 2 họ l họ chitinase 18 và 19 [13] Họ chitinase 18 có một phổ phân bố rộng ở tất các các giới loài bao gồm cả vi khuẩn, thực vật và động vật Trong khi đó, họ chitinase 19 l i tìm thấy chủ yếu ở thực vật Tuy nhiên, cũng có một vài những báo cáo về họ chitinase 19 từ những nguồn được phân loại như từ vi khuẩn [19], [30] [19], [31], ve bét [38][40], một số virus [26][27]... giàu cysteine được tạo bởi khoảng 40 amino acid Chitinase l p II thiếu miền đầu N giàu cysteine nhưng có trình tự amino acid có tính tương đồng cao với chitinase l p I Chitinase l p III không có trình tự tương đồng nào với chitinase l p I hay II Chitinase l p III có một sự tương đồng nhỏ với chitinase vi khuẩn và vùng hoạt động được cho l chứa 4 amino acid aspartic hoặc glutamic suy ra từ tính kị nước... chitooligosaccharides hay các chất điều hòa sinh trưởng như ethylene [15], [21] [15], [21] Dạng chitinase được nghiên cứu Field Code Changed rộng rãi nhất ở thực vật l endochitinase, một loại enzyme phân cắt bên trong phân tử chitin, giải phóng N-acetylglucosamine (GlcNAC), có trọng l ợng phân tử nhỏ hơn chitinase côn trùng [10] Endochitinase thực vật l loại enzyme có bản chất protein, khối l ợng ... (Ethanol) Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li GlcNAC N-acetylglucosamine Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li GMOs Genetically modified organisms Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li... tài Tạo chủng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens mang gen mã hóa chitinase từ Theobroma cacao L. ” với nội dung sau: Nhân gen mã hóa chitinase có nguồn gốc từ hệ gen ca cao kỹ thuật PCR; Tạo dòng... GUS ß-Glucuronidase Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li Kan Kanamycin Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li Kb Kilo base (1kb = 1000bp) Formatted: Line spacing: Multiple 1.4 li LB Luria