W/1 bằng kỹ thuật PCR
Sau khi gen mã hóa chitinase TcChi1-W được tạo dòng trong vector
pJET 1.2 và được xác định trình tự hoàn chỉnh, chúng tôi đã sử dụng khuôn
mẫu là plasmid tái tổ hợp dòng số 1 (pJET+TcChi1-W/1) và cặp mồi
TcChi1_F và R để nhân đoạn gen mã hóa TcChi1 có kích thước 1159 bp (chỉ
chứa vùng mang mã). Sản phẩm PCR gen mã hóa TcChi1 được trình bày trên
hình 3.2A. Kết quả điện di cho thấy, sản phẩm PCR rất đặc hiệu, có kích thước khoảng 1,1 kb đúng như tính toán lý thuyết.
Hình 3.2. Sản phẩm PCR nhân gen mã hóa TcChi1 và sản phẩm xử lý enzyme hạn chế các plasmid tái tổ hợp pJET+TcChi1 trên gel agarose 0,8% A: M. Thang DNA chuẩn 1 kb; 1. Sản phẩm PCR gen mã hóa TcChi1 B: M. Thang DNA chuẩn 1 kb; 1-2-3. pJET+TcChi1/1, 2, 4/BglII + NotI
1.15 6 3 1 kb M 1 2 3 2.9 1.15 6 3 1 kb A A2 B
Sản phẩm PCR chứa đoạn gen TcChi1 sau đó cũng được tạo dòng trong
vector pJET1.2 để lưu giữ phục vụ các thí nghiệm tiếp theo. Các plasmid tái tổ
hợp được kiểm tra bằng enzyme hạn chế BglII và NotI. Các plasmid mang sản
phẩm PCR mong muốn khi xử lý bằng hai enzyme hạn chế này sẽ xuất hiện 2 băng. Một băng có kích thước ~ 2,9 kb (tương ứng với kích thước của vector pJET1.2) và một băng có kích thước 1,15 kb (tương ứng với kích thước của gen
mã hóa TcChi1 là 1159 bp). Kết quả trên hình 3.2B cho thấy sản phẩm xử lý
enzyme hạn chế các plasmid thu được hoàn toàn phù hợp với tính toán lý thuyết, chứng tỏ chúng tôi đã thành công trong việc tạo các vector tạo dòng pJET1.2 tái
tổ hợp mang TcChi1.