nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lý của lợn được gây bệnh thực nghiệm bằng chủng virus gây hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản (prrsvbn10)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM - - NGUYỄN THỊ NGỌC ANH NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM BỆNH LÝ CỦA LỢN ĐƯỢC GÂY BỆNH THỰC NGHIỆM BẰNG CHỦNG VIRUS GÂY HỘI CHỨNG RỐI LOẠN HÔ HẤP VÀ SINH SẢN (PRRSV-BN-10) CHUYÊN NGÀNH : THÚ Y MÃ SỐ : 60.64.01.01 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC : PGS.TS NGUYỄN HỮU NAM HÀ NỘI – 2014 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan, giúp đỡ cho việc thực luận văn cám ơn thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 16 tháng 10 năm 2014 Tác giả Nguyễn Thị Ngọc Anh Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page i LỜI CẢM ƠN Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép bày tỏ lời cảm ơn chân thành đến PGS.TS – Nguyễn Hữu Nam, người hướng dẫn khoa học, giúp đỡ nhiệt tình có trách nhiệm trình thực đề tài hoàn thành luận văn Lời cảm ơn chân thành xin gửi tới Bộ môn Bệnh lý, Khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam nhiều bạn bè đồng nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn tới gia đình, bạn bè đồng nghiệp động viên, giúp đỡ trình hoàn thành luận văn Nhân dịp này, xin bày tỏ lòng cám ơn chân thành sâu sắc tới tất giúp đỡ quý báu đó! Hà Nội, ngày 16 tháng 10 năm 2014 Tác giả Nguyễn Thị Ngọc Anh Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục v Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng viii DBảng 1anh mục hình ix MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục đích nghiên cứu yêu cầu đề tài Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình nghiên cứu tình hình dịch bệnh PRRSV gây Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn 1.1.1 Tình hình Hội chứng PRRS giới 1.1.2 Tình hình hội chứng PRRS Việt Nam 1.2 Virus PRRSV 1.2.1 Hình thái, cấu tạo 1.2.2 Phân loại virus PRRS 11 1.2.3 Sức đề kháng virus PRRS 12 1.2.4 Khả gây bệnh 13 1.3 Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản 13 1.3.1 Đặc điểm chung 13 1.3.2 Động vật cảm nhiễm 13 1.3.3 Cơ chế sinh bệnh phương thức truyền lây 13 1.3.4 Triệu chứng lâm sàng lợn mắc PRRS 16 1.3.5 Bệnh tích lợn mắc PRRS 17 1.3.6 Các phương pháp chẩn đoán PRRS 18 1.4 Các biện pháp phòng chống dịch 20 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iii Chương NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Đối tượng nghiên cứu 23 2.2 Nội dung nghiên cứu 23 2.3 Địa điểm, thời gian nghiên cứu 23 2.4 Nguyên liệu 23 2.4.1 Virus 23 2.4.2 Động vật thí nghiệm 23 2.4.3 Hóa chất 24 2.4.4 Dụng cụ 24 2.5 Phương pháp nghiên cứu 24 2.5.1 Phương pháp gây bệnh thực nghiệm 24 2.5.2 Phương pháp ELISA 25 2.5.3 Phương pháp RT – PCR 27 2.5.4 Phương pháp quan sát, mô tả 29 2.5.5 Phương pháp mổ khám kiểm tra bệnh tích đại thể 29 2.5.6 Phương pháp làm tiêu kiểm tra bệnh tích vi thể 29 2.5.7 Phương pháp thống kê, xử lý số liệu 32 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 3.1 Kết trước gây bệnh thực nghiệm cho lợn 33 3.1.1 Kết theo dõi thân nhiệt lợn trước gây bệnh thực nghiệm 33 3.1.2 Kết xét nghiệm kháng thể kháng virus PRRS phương pháp Elisa 3.1.3 34 Kết xét nghiệm có mặt virus PRRS số virus khác phương pháp RT – PCR 35 3.2 Kết sau gây bệnh thực nghiệm chủng virus PRRSV-BN-10 37 3.2.1 Triệu chứng lâm sàng lợn gây bệnh thực nghiệm chủng virus PRRSV-BN-10 3.2.2 37 Bệnh tích đại thể lợn gây bệnh thực nghiệm chủng virus PRRSV-BN -10 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 51 Page iv 3.2.3 Một số bệnh tích vi thể lợn gây bệnh thực nghiệm chủng virus PRRSV-BN-10 52 3.2.4 Kết xét nghiệm có mặt PRRSV quan 56 3.2.5 Hàm lượng kháng thể kháng PRRSV phương pháp ELISA 59 3.2.6 Sự phân bố virus chủng PRRSV- BN-10 quan lợn sau gây bệnh thực nghiệm 61 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 65 Kết luận 65 Đề nghị 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 MỘT SỐ HÌNH ẢNH MINH HỌA TRONG ĐỀ TÀI 70 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT TN Thí nghiệm BED Blue Ear Disease cs Cộng ĐTB Đại thực bào ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay HLB Hạch lâm ba HE Hematoxylin & Eosin IPMA Immuno – Peroxidase Monolayer Assay NXB Nhà xuất OIE Organisation of International Epidemiology (Tổ chức Dịch tễ học Thế giới) OD Optical Density (Mật độ quang) PBS Phosphate Buffer Saline PCR Polymerase Chain Reaction PRRS Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome PRRSV Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus RNA Ribonucleic Acid RT – PCR Reverse Transcriptase – Polymerase Chain Reaction BCĐNTT Bạch cầu đa nhân trung tính Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vi DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng 1.1 Protein cấu trúc PRRSV 1.2 Sự tương đồng nucleotide chủng PRRS so sánh với Trang 10 chủng Bắc Mỹ VR2332 11 1.3 Sức đề kháng virus với điều kiện ngoại cảnh 12 3.1 Bảng đo thân nhiệt lợn trước gây bệnh thực nghiệm (0C) 33 3.2 Kết xét nghiệm kháng thể kháng PRRSV phương pháp ELISA 3.3 34 Kết xét nghiệm có mặt virus PRRS số virus khác phương pháp RT – PCR 3.4 36 Thân nhiệt lợn sau gây bệnh thực nghiệm chủng virus PRRSV-BN -10 (0C) 3.5 38 Tần số hô hấp lợn trước sau gây bệnh thực nghiệm cho lợn chủng virus PRRSV-BN-10 (lần/phút) 3.6 41 Tần số tim lợn trước sau gây bệnh thực nghiệm chủng virus PRRSV-BN-10 (lần/phút) 43 3.7 Triệu chứng lâm sàng chủ yếu lợn gây bệnh thực nghiệm 45 3.8 Bệnh tích đại thể chủ yếu lợn gây bệnh thực nghiệm chủng virus PRRSV-BN10 Kết nghiên cứu bệnh tích vi thể phổi lợn gây bệnh thực nghiệm chủng PRRSV-BN-10 3.10 53 Bệnh tích vi thể số quan lợn gây bệnh thực nghiệm chủng virus PRRSV-BN-10 3.11 51 53 Kết xét nghiệm PRRSV phương pháp RT-PCR sau gây bệnh thực nghiệm Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 57 Page vii 3.12 Hàm lượng kháng thể kháng PRRSV phương pháp ELISA sau gây bệnh thực nghiệm cho lợn 3.13 59 Sự phân bố virus quan lợn gây bệnh thực nghiệm chủng virus PRRSV-BN-10 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 62 Page viii DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 1.1 Bản đồ lịch sử xuất PRRS giới 1.2 Cấu trúc hạt PRRS virus 1.3 Cấu trúc gen PRRS virus 1.4 Bộ gen virus PRRS 10 1.5 Virus PRRS xâm nhập phá hủy tế bào đại thực bào 14 3.1 Đồ thị biểu diễn thân nhiệt lợn trước gây bệnh thực nghiệm 34 3.2 Đồ thị biểu diễn hàm lượng kháng thể kháng PRRSV trước gây bệnh thực nghiệm 3.3 35 Kết phản ứng RT – PCR với mồi ORF5 trước gây bệnh thực nghiệm 36 3.4 Gây bệnh thực nghiệm cho lợn thí nghiệm 37 3.5 Đồ thị thân nhiệt độ lợn trước sau gây bệnh thực nghiệm chủng virus PRRSV-BN-10 3.6 39 Biểu đồ tần số hô hấp lợn trước sau gây bệnh thực nghiệm chủng virus PRRSV- BN-10 3.7 42 Đồ thị biểu diễn nhịp tim lợn sau gây bệnh thực nghiệm chủng virus PRRSV-BN-10 44 3.8 Kết phản ứng RT- PCR với mồi ORF5 58 3.9 Đồ thị biểu diễn hàm lượng kháng thể kháng PRRSV sau gây bệnh thực nghiệm cho lợn Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 61 Page ix Ngày lấy máu 11 13 15 21 Lợn TN2 TN3 ĐC1 ĐC2 TN1 TN2 TN3 ĐC1 ĐC2 TN1 TN2 TN3 ĐC1 ĐC2 TN1 TN2 TN3 ĐC1 ĐC2 TN1 TN2 TN3 ĐC1 ĐC2 TN1 TN2 TN3 ĐC1 ĐC2 TN1 TN2 TN3 ĐC1 ĐC2 SP 0,62 0,79 0,21 0,23 0,78 0,97 0,95 0,22 0,25 0,86 1,08 1,19 0,27 0,27 0,65 0,89 0,95 0,20 0,19 * 0,49 0,58 0,21 0,24 * 0,56 0,62 0,23 0,27 * 0,67 0,85 0,23 0,22 Kết + + + + + + + + + + + * + + * + + * + + - Ghi chú: (*) lợn chết, số liệu Nếu SP ≥ 0,4 dương tính Nếu 0,3 ≤ SP ≤ 0,4 nghi ngờ Nếu SP ≤ 0,3 âm tính Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 60 Hình 3.9: Đồ thị biểu diễn hàm lượng kháng thể kháng PRRSV sau gây bệnh thực nghiệm cho lợn Nhìn vào đồ thị ta thấy hàm lượng kháng thể máu sau gây bệnh thực nghiệm có biến động chứng tỏ gây bệnh thực nghiệm thành công cho lợn Từ ngày thứ thấy xuất virus thể lợn, kháng thể tạo để kháng lại chủng virus PRRSV-BN-10 Hàm lượng kháng thể đạt cao vào ngày thứ sau gây bệnh thực nghiệm lợn, lợn TN1 số SP đạt mức 0,86, lợn TN2 số SP 1,08 lợn TN3 số SP vào ngày thứ lên đến 1,19 sau giảm mạnh, điều cho thấy độc lực virus ngày tăng, trung hòa kháng thể máu làm hàm lượng kháng thể máu lợn giảm xuống, lợn TN1 giảm xuống thấp nhất, ngày thứ 11 số SP giảm xuống 0,65 đến ngày 12 lợn chết Lợn TN2, TN3 số SP giảm không giảm mạnh lợn TN1 lợn qua khỏi thời gian hình thành miễn dịch với PRRSV, hàm lượng kháng thể tăng trở lại 3.2.6 Sự phân bố virus chủng PRRSV- BN-10 quan lợn sau gây bệnh thực nghiệm Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 61 Phương pháp nhuộm hoá miễn dịch tổ chức (Immunohistochemistry – IHC) thực nguyên tắc kết hợp kháng nguyên kháng thể, phương pháp cho phép xác định có mặt virus tổ chức bệnh lý việc tạo phức màu nâu đỏ lát cắt tổ chức nhuộm hoá miễn dịch Để hiểu phân bố virus quan tổ chức lợn sau gây bệnh thực nghiệm chủng virus PRRSV-BN-10, đồng thời làm sở cho việc chọn mẫu bệnh phẩm tiến hành phân lập virus, tiến hành nhuộm hoá miễn dịch tổ chức với mẫu phổi, hạch phổi, lách, thận, ruột lợn thí nghiệm Kết trình bày bảng 3.13 Bảng 3.13 Sự phân bố virus quan lợn gây bệnh thực nghiệm chủng virus PRRSV-BN-10 TT Cơ quan Lợn TN Lợn TN Lợn TN ĐC1 ĐC2 Phổi +++ +++ ++ - - Hạch phổi +++ +++ ++ - - Lách ++ ++ + - - Gan ++ + + - - Thận + ++ + - - Ruột ++ ++ + - - Não + + + - - Tim + + - - - Ghi chú: + Đám, hạt bắt màu nâu vàng ++ Đám, hạt bắt màu nâu vàng trung bình +++ Đám, hạt bắt màu nâu vàng nhiều - Không có đám, hạt bắt màu nâu vàng Sau làm hóa miễn dịch quan nhận thấy mức độ dương tính tiêu phổi hạch phổi hẳn so với tiêu quan khác Theo chúng tôi, điều giải thích phổi quan tiếp xúc với mầm bệnh sớm nhất, số lượng nhiều đồng thời virus có lực cao với đại thực bào đặc biệt đại thực bào phế nang mà virus cư trú nhiều hạch phổi Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 62 Quan sát tiêu hóa miễn dịch qua kính hiển vi nhận thấy: Ở phổi, kháng nguyên virus tập trung nhiều đại thực bào vùng phổi, tế bào biểu mô vách phế nang, phế quản Điều lý giải biến đổi bệnh lý vi thể đặc trưng vùng phổi: viêm kẽ phổi lan toả với dày lên tăng sinh biểu mô vách phế nang Tại hạch lympho: virus phân bố lan tràn toàn tổ chức hạch lympho Virus nằm tế bào bạch cầu, lympho cầu, tế bào lymphocyte Virus công làm cho nang lympho bị teo giảm bớt Tại ruột: virus tập trung chủ yếu tế bào biểu mô ruột, tuyến ruột có nhiều virus, chỗ lông rung bị đứt nát virus tập trung nhiều Ngoài ra, virus tập trung lớp vòng, dọc Virus công làm hoại tử tế bào biểu mô ruột tăng sinh nang lympho, lông nhung bị đứt nát Tại lách: virus phân bố rải rác, nằm lympho bào Tại gan: virus cư trú nhân lên tế bào Kupfer Tại thận, virus nằm cầu thận Do virus công làm cho cầu thận bị viêm, nang Baoman giãn rộng Ở tim, tim bị thoái hoá, nhão bình thường, viêm ngoại tâm mạc Virus nằm tế bào tim Kháng nguyên (PRRSV-BN-10) tổ chức não lợn phân bố nhiều nơi, không tập trung chỗ Khi nhuộm hoá miễn dịch thấy não tổ chức thường cho kết dương tính nhẹ Như vậy, virus công vào tế bào thực bào quan, gây suy giảm miễn dịch mở đường cho virus vi khuẩn khác công làm cho triệu chứng, bệnh tích lợn thêm trầm trọng Chúng đánh giá mức độ dương tính tiêu hóa miễn dịch chủ yếu dựa cảm quan mắt Nó biểu số lượng hạt, đám bắt màu nâu vàng Màu nâu vàng nhiều, rõ mức độ dương tính cao Nơi hóa miễn dịch dương tính rõ nơi tập trung nhiều virus Phổi hạch lympho phổi hai quan có tiêu bắt màu hóa miễn dịch nhiều lượng virus tồn quan cao Điều Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 63 giải thích PRRSV thích ứng với đại thực bào phế nang nên sau xâm nhập vào thể đến công vào đại thực bào sau công đến đại thực bào quan khác Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 64 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận Từ kết nghiên cứu, rút số kết luận sau: Chủng virus PRRV –BN-10 gây Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản có độc lực cao, gây bệnh cho lợn với triệu chứng lâm sàng chủ yếu sốt cao, lông xù, thở khó, sưng mí mắt, viêm kết mạc mắt… Bệnh tích đại thể chủ yếu lợn gây bệnh thực nghiệm chủng virus PRRV –BN-10 tập trung chủ yếu phổi, phổi viêm dính sườn, xuất điểm viêm, xuất huyết, hạch lympho sưng, thận bị xuất huyết đinh ghim bề mặt Bệnh tích vi thể chủ yếu lợn quan sát thấy bị viêm kẽ phổinão sung huyết, thận bị thâm nhiễm nhiều tế bào viêm, cầu thận xuất huyết Hàm lượng kháng thể kháng virus chủng PRRSV-BN-10 xuất huyết lợn gây bệnh thực nghiệm từ ngày thứ đạt hàm lượng cao vào ngày thứ Sau gây bệnh thực nghiệm chủng virus PRRV –BN-10 gây Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản virus phân bố nhiều phổi hạch lympho lợn mắc PRRS Đề nghị Để đề tài nghiên cứu hoàn thiện nữa, mong muốn: Tiến hành đề tài tất nhóm lợn khác mở rộng phạm vi nghiên cứu nhiều địa phương Tiếp tục phân lập virus môi trường tế bào khác để tìm môi trường tế bào phân lập virus thích hợp xác định đặc tính sinh học virus Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Bùi Quang Anh, Nguyễn Văn Long (2007), “Một số đặc điểm dịch tễ Hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp (lợn tai xanh) tình hình Việt Nam”, Diễn đàn khuyến nông công nghệ, Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn Bùi Quang Anh, Hoàng Văn Năm, Văn Đăng Kỳ, Nguyễn Văn Long, Nguyễn Ngọc Tiến (2008), “Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn (PRRS)”, NXB Nông nghiệp, tr 7-21 Nguyễn Trọng Cường (2009), “Phân lập giám định virus gây hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp lợn, nghiên cứu số đặc điểm bệnh lý lợn mắc bệnh”, Luận văn thạc sĩ nông nghiệp – ĐHNNI – 2009 Nguyễn Ngọc Hải, Trần Thị Bích Liên, Trần Thị Dân, Nguyễn Ngọc Tân (2007), “Chẩn đoán virus gây hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp đàn heo (PRRS) kỹ thuật RRT-PCR”, Khoa học kỹ thuật Thú y, Tập XIV, Số 2/2007, tr – 12 Nguyễn Bá Hiên, Huỳnh Thị Mỹ Lệ (2007), “Một số hiểu biết virus gây hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn”, Hội thảo Hội chứng rối loạn hô hấp - sinh sản bệnh liên cầu khuẩn lợn, ngày 11/10/2007, Đại học Nông nghiệp Hà Nội, tr 01 – 10 Lê Văn Lãnh cs (2007), “Hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp – (Porcine Reproductive and Respiratory Syndome)”, Hội thảo Hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp bệnh liên cầu gây lợn (10/2007), trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội Phạm Sỹ Lăng, Phan Đăng Kỳ (2007), “Hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp lợn”, Diễn đàn khuyến nông công nghệ, Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn, tháng – 2007 Trần Thị Bích Liên (2008), “Bệnh tai xanh heo”, NXB Nông nghiệp TP Hồ Chí Minh 2008, tr 16 – 17, tr 54 – 56, tr 62 – 63 Hồ Văn Nam, Nguyễn Thị Đào Nguyên, Phạm Ngọc Thạch (1996), Giáo trình chẩn đoán lâm sàng thú y, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 10 Hồ Văn Nam, Nguyễn Thị Đào Nguyên, Phạm Ngọc Thạch (1996), Giáo trình bệnh nội khoa gia súc, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 11 Nguyễn Hữu Nam, Nguyễn Thị Lan (2007), “Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản”, Hội thảo Hội chứng rối loạn hô hấp - sinh sản bệnh liên cầu khuẩn lợn, ngày 11/10/2007, ĐH Nông Nghiệp Hà Nội 12 Lê Văn Năm (2007), “Kết khảo sát bước đầu biểu lâm sàng bệnh tích đại thể bệnh PRRS số địa phương thuộc đồng Bắc Bộ Việt Nam”, Hội thảo Hội chứng rối loạn hô hấp - sinh sản bệnh liên cầu khuẩn lợn, ngày 11/10/2007, Đại học Nông nghiệp Hà Nội 13 Đàm Văn Phải (2008), “Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn – PRRS”, Luận văn thạc sĩ nông nghiệp – ĐHNNI – 2008 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 66 14 Nguyễn Văn Thanh (2007), “Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản (PRRS)”, Hội thảo Hội chứng rối loạn hô hấp - sinh sản bệnh liên cầu khuẩn lợn, ngày 11/10/2007, ĐH Nông Nghiệp Hà Nội 15 Tô Long Thành cs (2008), "Kết chẩn đoán nghiên cứu gây hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp lợn Việt Nam từ tháng 3/2007 đến 5/2008”, Tạp chí KHKT Thú y, 15 (5), tr - 13 16 Phạm Ngọc Thạch, Đàm Văn Phải (2007), “Một số tiêu lâm sàng, tiêu máu lợn mắc hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản (bệnh tai xanh) số đàn lợn tỉnh Hải Dương Hưng Yên”, Hội thảo Hội chứng rối loạn hô hấp - sinh sản bệnh liên cầu khuẩn lợn, ngày 11/10/2007, ĐH Nông Nghiệp Hà Nội 17 William T.Christianson Han Soo Joo (2001), Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản lợn (Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome - PRRS), Tạp chí KHKT Thú y, (tập VIII) số 2- 2001, tr 74 - 86 18 Chu Đức Thắng, Hồ Văn Nam, Phạm Ngọc Thạch (2008), Chẩn đoán bệnh thú y, NXB Nông nghiệp, tr 124 – 159 19 Đỗ Đức Việt, Hoàng Minh Sơn, Trần Thị Đức Tám (2005), Tổ chức – Phôi thai học, Giáo trình giảng dạy, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội Tài liệu tiếng Anh 20 A A.Bưtner, B.Strandbygaard, K.J sứrencen, M.B Oleksiewicz and T Storgaard, (2000), "Distinction between ìnfections with European and American/vaccin type PRRS virus after vaccination with a modified - live PRRS virus vaccin” Vet.Ré (31) 1, pp.72 - 72 21 Anette botner (1997), "Diagnosis of PRRS”, Veterinary Microbiology, 55, pp.295 301 22 Benfield DA, Nelson, E et al (1992), “Characterization of swine infertility and respiratory syndrome (SIRS) virus (isolate ATCC VR2332)”, JouARNl of Veterinary Diagnostic Investigation 4, pp.127 – 133 23 Christianson WT, Collins JE, Benfield DA, Harris L, Gorcyca DE, Chladek DW, …(1992), “Experimental reproduction of swine infertility and respiratory syndrome in pregnant sows”, Am, J, Vet Res 53, pp 485 – 488 24 Collin JE, Benfield DA, Christianson ƯT, Harris L, Hennings JC, Shaw DP, Goyal SM, McCullough S, Morrison RB, Joo HS, Gorcyca D, Chladek D “Isolation of swine infertility and respiratory syndrome virus (isolate ATCC VR - 2332) in North America and experimental reproduction of the disease in gnotobiotic pigs”, J Vet Diagn Invest 4, pp117- 126, 1992 25 D.L.Delputte (2004), "Effect of virus specific antibodies on attachment internalization and infection of porcine reproductive and respiratory”, Veterinary Immunology and Immunopathology, 142, pp.179 - 188 26 Done SH, Paton DJ, White ME (1996), “ Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome - PRRS”: a revew, with emphasis on pathological, virological and diagnostic aspects Br Vet J 152, pp.153 - 174 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 67 27 E.Weiland (1999), "Monoclonal antibodies to the GP5 of porcine reproductive and respiratory syndrome virus are more effective in virus neutralization than monoclonal antibodies to the GP4”, Veterinary Microbiology, 10, pp.171 - 186 28 Gonnie Nodelijk (1996), "Comparison of commercila ELISA and immunoperoxidase monolayer assay to detect antibodies directed against PRRS”, Veterinary Microbiology, 49, pp.285 - 295 29 Jian Chen (2006), Genetic Variation of Chinese PRRSV Strains Based Biochemical Genetics”, Veterinary Microbiology, 142, pp.425 - 435 30 Keffaber KK (1989), “Reproductive failure etiology.Am.Assos.Swine.Pract”, Newstlett, 1, pp.1 – 10 of unknown 31 Meng XJ, Paul PS, Halbur PG, Lum Ma (1995), “Phylogenetic analyses of the putative M (ORF 6) and N (ORF 7) genes of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV): implication for the existense of two genotypes of PRRSV in the U.S.A and Europe”, Arch Virol 140, pp.745 -755 32 Murakami Y, Kato A, et al (1994), “Isolation and serological characterization of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome (PRRS) virus from pigs with reproductive and respiratory disoders in Jappan”, J Vet Med Sci56, pp.891 – 894 33 Murtaugh MP, Elam MR, et al (1995), “Comparion of the structure protein coding saquences of the VR - 2332 and Lelystad virus strains of the PRRS virus”, Archives of Virology, pp.1451- 1460 34 Nelsen CJ, GenBank, et al, (1998), “ Porcine reproductive and respiratory syndrome virus Resp PRRS MLV”, complete genome, May 15 35 Neumann EJ, et al (2005), “Assessmment of the economic impact of porcine reproductive and respiratory syndrome swine production in the United States”, J.Am.Vet.Med.Assoss, 227,pp.385 – 392 36 Nodejil G, Nielen M, et al (2003), “A revew of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus in Dutch breeding herd; population dynamics and clinical relevance” 37 Paton DJ, Brown IH, et al (1991), “Blue ear” disease of pigs, Vet Ree , 128, pp.617 38 Rossow KD (1998), “Porcine reproductive and respiratory syndrome”, J Vet Pathol,35, pp.1-20 39 Shimuzi M, Yamada S, et al (1994), “Isolation of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome ( PRRS) virus from Heko- Hekeo disease of pigs J Vet Med Sci 56, pp.389 – 391 40 Suazez P (2000), “Utrastructure pathogenesis of PRRS virus”, Vet Res 31, pp.47 – 55 41 Terpstra C, Wensvoort G, Pol JMA, (1991) “Experimental reproduction of porcine epidemic abortion and respiratory syndrome (Mystery swine disease) by infection with Lelystad virus: Koch’s postulates fulfilled”, The Veterinary Quarterly, vol.13, no.3, pp 131 - 136, Jul 42 Tian K, Yu, Zhao, et al(2007), “Emergence of fatal PRRS variants: unparalleled outbreaks of atypical PRRS in China and molecular dissection of the unique Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 68 hallmark”, PloS One (6), e 526.doi: 10.137l/ jouARNl.Pone.0000526 43 Wensvoort G, Terpstra C, Pol JMA, et al (1991), “Mystery swine disease in the Netherlands: the isolation of Lelystad virus”, The Veterinary Quarterly, vol.13, No.3, pp.121 - 130, Jul 44 Yufeng Li, Xinglong Wang, et al (2007), “Emergence of a highly pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus in the Mid - Eastern region of China” 45 Zimmerman JJ., Yoon, KJ., Willis RW., Swenson SL (1997), “General overview of PRRSV: A perspective from the United States”, Veterinary Microbiology 55: 187196 Tài liệu từ Internet 46 http://www.cucthuy.gov.vn/ Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 69 MỘT SỐ HÌNH ẢNH MINH HỌA TRONG ĐỀ TÀI TRIỆU CHỨNG LÂM SÀNG CỦA LỢN ĐƯỢC GÂY BỆNH THỰC NGHIỆM BẰNG CHỦNG VIRUS PRRSV-BN-10 Ảnh Gây nhiễm qua đường mũi Ảnh 2: lợn thí nghiệm bị tím tai Ảnh 3.Lợn khó thở Ảnh 4.Lợn thí nghiệm bị gầy yếu Ảnh Lợn thí nghiệm ngủ li bì Ảnh Lợn thí nghiệm bị chết Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 70 BỆNH TÍCH ĐẠI THỂ CỦA LỢN ĐƯỢC GÂY BỆNH THỰC NGHIỆM BẰNG CHỦNG VIRUS PRRSV-BN-10 Ảnh Phổi viêm, sưng to, rìa tù Ảnh Phổi viêm màu đỏ sẫm, phù kẽ phổi Ảnh Hạch lympho sưng to Ảnh Xoang bao tim tích nước vàng Ảnh 5.Thận xuất huyết điểm Ảnh Ruột già phủ tơ huyết Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 71 BỆNH TÍCH VI THỂ MỘT SỐ CƠ QUAN CỦA LỢN ĐƯỢC GÂY BỆNH THỰC NGHIỆM BẰNG CHỦNG VIRUS PRRSV-BN-10 Ảnh Phổi sung huyết nghiêm trọng, Ảnh Phù phổi, dịch phù phế nang (HE 10x) (HE.40x) Ảnh Huyết khối lòng mạch quản Ảnh Viêm kẽ phổi, tế bào viêm tăng phổi (HE.20x) sinh làm dày kẽ phổi (HE.10x) Ảnh 5.Viêm kẽ phổi, tế bào viêm tăng sinh Ảnh Đại thực bào hoại tử lòng làm dày kẽ phổi (HE.20x phế nang (HE 40x) Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 72 Ảnh Hạch lympho viêm, xuất huyết Ảnh Gan sung huyết, hồng cầu tràn (HE10x) ngập tĩnh mạch tiểu thùy vi quản xuyên tâm(HE.10x) Ảnh Thâm nhiễm tế bào viêm kẽ thận Ảnh 10 Lách sung huyết (HE10x) (HE.20x) Ảnh 11 Ruột viêm, lông nhung ruột đứt Ảnh 12 Sung huyết mạch quản não nát (HE10x) (HE10x) Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 73 KẾT QUẢ NHUỘM HÓA MIỄN DỊCH MỘT SỐ CƠ QUAN CỦA LỢN ĐƯỢC GÂY BỆNH THỰC NGHIỆM BẰNG CHỦNG VIRUS PRRSV-BN-10 Ảnh Virus tập trung phổi (IHC10x) Ảnh Virus tập trung phổi (IHC40x) Ảnh3 Virus tập trung gan (IHC10x) Ảnh Virus tập trung gan (IHC40x) Ảnh Virus phân bố thận (IHC10x) Ảnh Virus phân bố thận (IHC40x) Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 74 [...]... đổi bệnh lý, sự phân bố virus, đặc điểm bệnh lý một số cơ quan của lợn được gây bệnh thực nghiệm là hết sức cần thiết Xuất phát từ yêu cầu trên của thực tiễn, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: Nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lý của lợn được gây bệnh thực nghiệm bằng chủng virus gây Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản (PRRSV-BN-10)” 2 Mục đích nghiên cứu và yêu cầu của đề tài - Đánh giá được. .. gen của chủng virut cường độc gây Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản ở Bắc Mỹ cho biết: ở một số ổ dịch bộ gen của virut Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản tương đồng 93,2 – 94,2% với bộ gen của chủng VR2332 (Bắc Mỹ) nhưng ở một số ổ dịch khác thì bộ gen của virut Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản tương đồng 63,4 – 64,5% với chủng gây bệnh Lelystad (châu Âu) và các virut phân lập được đã... năng gây bệnh trên lợn thực nghiệm của chủng virus PRRSV- BN-10 gây Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản - Làm rõ diễn biến của bệnh do chủng virus PRRSV- BN-10 gây nên Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 1 Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình nghiên cứu và tình hình dịch bệnh do PRRSV gây Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản ở lợn 1.1.1 Tình hình Hội chứng. .. nhiều lợn (Kegong Tian và Yu, 2007); (Tô Long Thành và Nguyễn Văn Long, 2008) 1.3 Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản 1.3.1 Đặc điểm chung Đây là Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản ở lợn Là bệnh mới và phức tạp, có đặc trưng là gây xẩy thai ở giai đoạn cuối, chết thai và thai khô hoặc lợn con sinh ra yếu Bệnh có triệu chứng đặc trưng ở hệ hô hấp ở lợn con theo mẹ cai sữa lợn thịt và đực giống 1.3.2... NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu 5 lợn 4 tuần tuổi được gây bệnh thực nghiệm bằng chủng virus PRRSV – BN10 được cung cấp bởi phòng thí nghiệm trọng điểm công nghệ sinh học Thú Y 2.2 Nội dung nghiên cứu - Gây bệnh thực nghiệm cho lợn bằng chủng virus PRRSV-BN-10 - Xác định các triệu chứng lâm sàng, hàm lượng kháng thể của lợn được gây bệnh thực nghiệm bằng chủng virus PRRSV-BN-10... virus PRRSV-BN-10 - Nghiên cứu bệnh tích đại thể của lợn được gây bệnh thực nghiệm bằng chủng virus PRRSV-BN-10 - Nghiên cứu bệnh tích vi thể các cơ quan, tổ chức của lợn được gây bệnh thực nghiệm chủng virus PRRSV-BN-10 2.3 Địa điểm, thời gian nghiên cứu - Địa điểm: Phòng thí nghiệm trọng điểm công nghệ sinh học Thú y, phòng thí nghiệm Bộ môn Bệnh lý thú y, phòng nuôi động vật thí nghiệm – Khoa Thú... dịch bệnh: Cho đến nay, trải qua 22 năm kể từ lần đầu tiên phát hiện ra Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản trên đàn lợn tại Mỹ, dịch bệnh này đã lan tràn và lưu hành ở nhiều quốc gia và để lại nhiều hậu quả nghiêm trọng về kinh tế cho ngành chăn nuôi lợn thế giới Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản ở lợn (Porcine respiratory and reproductive syndrome - Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản) được. .. loạn hô hấp và sinh sản) trên lợn, cùng với việc chế vacxin Van Niewstadt và cs, (2002) nêu ra loại kháng nguyên Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản dùng để phát hiện ra chuỗi peptide đồng đẳng của virut Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản dùng trong điều chế vacxin hoặc xét nghiệm chẩn đoán Calvert Jay G và cs, (2007) thuộc khoa Thú y trường Đại học Minesota của Mỹ đã nghiên cứu về những đặc điểm. .. vào tìm hiểu về phương pháp chuẩn bị virut Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản, Protein lây nhiễm và bộ kít để kiểm tra và phát hiện nó Lunney Joan K và cs (2007), X.J.Meng (2000) chỉ ra các thông số miễn dịch giúp giải thích được nguyên nhân tại sao một số lợn trên cùng một đàn lại không bị nhiễm virut Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản Calvert Jay G và cs, (2007) nghiên cứu về trình tự gen của. .. lợn nhập nội đã bị nhiễm virus PRRS hoặc là do các đàn nhập nội mang trùng * Tình hình nghiên cứu : Nhiều nhà khoa học trên thế giới đã đi sâu nghiên cứu về nguyên nhân, cơ chế truyền lây, các phương pháp chẩn đoán và phòng chống Hội chứng rối loạn sinh sản ở lợn Riera Pujadas Pere và cs, (1997) đã nghiên cứu về chủng virut suy yếu mới gây ra Hội chứng rối loạn sinh sản (Hội chứng rối loạn hô hấp và ... thực đề tài: Nghiên cứu số đặc điểm bệnh lý lợn gây bệnh thực nghiệm chủng virus gây Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản (PRRSV-BN-10)” Mục đích nghiên cứu yêu cầu đề tài - Đánh giá khả gây bệnh. .. hiểu chủng virut suy yếu gây Hội chứng rối loạn sinh sản (Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản) lợn, với việc chế vacxin Van Niewstadt cs, (2002) nêu loại kháng nguyên Hội chứng rối loạn hô hấp sinh. .. hấp sinh sản Calvert Jay G cs, (2007) nghiên cứu trình tự gen chủng virut cường độc gây Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản Bắc Mỹ cho biết: số ổ dịch gen virut Hội chứng rối loạn hô hấp sinh sản