nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lý chủ yếu của bệnh dịch tả lợn và ứng dụng kỹ thuật hoá mô miễn dịch (immunohistochemistry) trong chẩn đoán bệnh

Bộ giáo dục đào tạo Trờng đại học nông nghiệp Hà Nội Nguyễn phơng nhung NGHIấN CU MT S C IM BNH Lí CH YU CA BNH DCH T LN V NG DNG K THUT HO Mễ MIN DCH (IMMUNOHISTOCHEMISTRY) TRONG CHN ON BNH Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Chuyên ngành : thú y Mã số : 60.62.50 Ngời hớng dẫn : T.S bùi trần anh đào H NI - 2009 Lời cam đoan - Tôi xin cam đoan rằng, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực cha đợc sử dụng để bảo vệ học vị - Tôi xin cam đoan thông tin trích dẫn luận văn đợc rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 06 tháng 09 năm 2009 Tác giả Nguyễn Phơng Nhung Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip i Lời cảm ơn Để hoàn thành đợc luận văn tốt nghiệp này, xin bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc đến TS Bùi Trần Anh Đào, Thầy giáo tận tình hớng dẫn, giúp đỡ suốt trình học tập thực đề tài luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ thầy cô giáo Bộ môn Bệnh lý; thầy cô giáo Khoa Thú y; thầy cô giáo Viện sau Đại học, Trờng Đại học Nông nghiệp Hà Nội, toàn thể thầy cô giáo giảng dạy thời gian học Cao học nhà trờng Tôi xin chân thành cảm ơn Bộ môn bệnh lý khoa Thú y tạo điều kiện cho thực tập phòng thí nghiệm bệnh lý, phòng thí nghiệm trung tâm khoa Cuối xin bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc đến ngời thân gia đình bạn bè hỗ trợ, giúp đỡ động viên suốt thời gian qua Hà Nội, ngày 06 tháng năm 2009 Tác giả Nguyễn Phơng Nhung Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip ii MC LC Li cam ủoan i Li cm n ii Mc lc iii Danh mc cỏc ch vit tt v Danh mc cỏc bng vi Danh mc cỏc hỡnh nh vii M U 1.1 Tớnh cp thit ca ủ ti 1.2 Mc ủớch nghiờn cu ca ủ ti 2 TNG QUAN TI LIU 2.1 Lch s v tỡnh hỡnh bnh dch t ln trờn th gii v vit nam 2.2 Virus dch t ln 2.3 Mt s ủc ủim dch t ca bnh DTL 11 2.4 Triu chng, bnh tớch 18 2.5 Cỏc phng phỏp chn ủoỏn 21 2.6 Phũng chng bnh DTL 25 I TNG, NI DUNG, NGUYấN LIU V PHNG PHP NGHIấN CU 28 3.1 i tng nghiờn cu 28 3.2 Ni dung nghiờn cu 28 3.3 Nguyờn liu, thit b v húa cht dựng nghiờn cu 28 3.4 Phng phỏp nghiờn cu 29 KT QU V THO LUN 38 4.1 Kt qu kho sỏt triu chng lõm sng ca ln mc bnh dch t 38 4.2 Cỏc tn thng ủi th ln mc bnh dch t 40 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip iii 4.3 Cỏc tn thng vi th mt s c quan ca ln mc bnh dch t 4.4 Kt qu kho sỏt mt s ch tiờu huyt hc c bn ca ln mc bnh dch t 4.4 49 Kt qu kho sỏt mt s ch tiờu huyt hc c bn ca ln mc bnh dch t 4.4 46 50 Kt qu kho sỏt mt s ch tiờu huyt hc c bn ca ln mc bnh dch t 51 4.4.1 Ch s sinh lý mỏu 51 4.4.2 Ch s sinh hoỏ mỏu 61 4.5 Kt qu ng dng k thut hoỏ mụ dch vo chn ủoỏn bnh dch t ln 64 KT LUN V NGH 74 5.1 Kt lun 74 5.2 ngh 75 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip iv DANH MC CC CH VIT TT V Kí HIU Ting Anh Ký hiu cDNA Ting Vit Complementary Deoxyribonucleic Acid DAB 2,3- Diaminobenzidin DNA Deoxyribonucleic Acid DTL Axit deoxyribonucleic Dch t ln EC European Community Cng ủng chõu u ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Phn ng dch ủỏnh du Assay enzyme European Union Liờn minh chõu u EU HMMD Húa mụ dch IHC Immunohistochemistry KD Kilo Dalton Húa mụ dch KN Khỏng nguyờn KT Khỏng th MAb Monoclonal antibody Khỏng th ủn dũng OIE Organisation of International T chc Dch t hc Th gii Epidemiology PBS Phosphate buffer saline PCR Polymerase chain reaction Phn ng trựng hp chui gen RNA Ribonucleic acid Axit ribonucleic RT-PCR Revese transcription polymerase Phn ng PCR ngc chain reaction Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip v DANH MC BNG Bng 2.1 Phõn loi ủc lc ca virus DTL Bng 3.1 Qui trỡnh chuyn ủỳc mu t ủng 31 Bng 4.1 Kt qu theo dừi triu chng lõm sng ca ln mc bnh dch t 39 Bng 4.2 Kt qu kho sỏt tn thng ủi th ln mc bnh dch t 42 Bng 4.3 Tn thng vi th mt s c quan ca ln mc bnh dch t 47 Bng 4.4 Cỏc ch s hng cu ln mc bnh dch t (12 tun tui) 52 Bng 4.5 Cỏc ch s bch cu ln mc bnh dch t (12 tun tui) 59 Bng 4.6 Hm lng protein huyt ca ln mc bnh dch t (12 tun tui) 62 Bng 4.7 Kt qu ng dng k thut hoỏ mụ dch vo chn ủoỏn bnh dch t ln 65 Bng 4.8 S phõn b v mt ủ ca virus DTL cỏc c quan ca ln mc bnh dch t 68 Bng 4.9 So sỏnh kt qu chn ủoỏn bnh DTL bng k thut hoỏ mụ dch (IHC) vi k thut RT-PCR Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip vi 70 DANH MC CC HèNH NH V BIU Trang Hỡnh (1 - 12): Mt s hỡnh nh v triu chng lõm sng v bnh tớch ủi th ca ln mc bnh dch t 44 Hỡnh ( 13 - 24): Mt s hỡnh nh minh ho tn thng vi th ca ln mc bnh dch t Hỡnh (25 - 36): 49 Hỡnh nh v s phõn b Virus DTL mt s mụ ca ln mc bnh nhum hoỏ mụ dch (IHC) 72 Biu ủ 4.1 S lng hng cu ca ln mc bnh dch t 53 Biu ủ 4.2 Hm lng hemoglobin ca ln mc bnh dch t 54 biu ủ 4.3 T huyt cu ca ln mc bnh dch t 55 Biu ủ 4.4 Biu ủ 4.5 Biu ủ 4.6 Th tớch bỡnh quõn ca hng cu ln mc bnh dch t 56 Nng ủ huyt sc t ca ln mc bnh dch t 57 Lng huyt sc t bỡnh quõn mt hng cu ca ln mc bnh dch t 58 Biu ủ 4.7 S lng bch cu ca ln mc bnh dch t 60 Biu ủ 4.8 Cụng thc bch cu ca ln mc bnh dch t 61 Biu ủ 4.9 T l cỏc tiu phn protein ca ln mc bnh dch t 63 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip vii M U 1.1 Tớnh cp thit ca ủ ti Dch t ln (pestis suum) l mt bnh truyn nhim nguy him virus thuc nhúm pestisvirus - h Flaviridae gõy trờn ln Bnh xut hin mi la tui ca ln vi tc ủ lõy lan nhanh v mnh, th cp tớnh bnh gõy cht nhiu ln vi t l t vong cao t 90- 100%, cỏc th khỏc t l t vong thp hn nhng cng khin ln st cõn, gy mũn v l ngun phỏt tỏn dch bnh ngoi mụi trng Bnh cú khp ni trờn th gii v ủc bit ủn ln ủu tiờn Bc M vo nm 1833 Cho ủn nay, bnh cũn tn ti v phỏt trin mnh nhiu khu vc trờn th gii T xut hin ti bnh ủó gõy khụng ớt thit hi kinh t cho ngnh chn nuụi ln ca th gii Vit Nam, bnh dch t ln ủc phỏt hin vo cỏc nm 1923 - 1924 bi Houdenner [10], v ủn bnh l mt "4 bnh ủ" gõy thit hi ln cho ngnh chn nuụi ln nc ta Tuy khụng phi l bnh mi, song thc t hin bnh xy v din bin khỏ phc vi nhiu bin th c bit th n tớnh, ln khụng biu hin rừ triu chng nhng li l ngun lõy lan mm bnh rt nguy him Cho ti nay, nc ta ủó cú rt nhiu cụng trỡnh nghiờn cu v bnh dch t ln nhng cha cú cụng trỡnh no nghiờn cu sõu v cỏc bin ủi bnh lý ca ln b dch t Vỡ vy, ủ gúp phn cụng tỏc chn ủoỏn bnh nhanh, chớnh xỏc thỡ vic tip tc nghiờn cu sõu v cỏc bin ủi bnh lý ca ln mc bnh dch t l ủ cp thit hin Ngoi nghiờn cu ny cũn l c s ủ xõy dng mt quy trỡnh chn ủoỏn da trờn k thut hoỏ mụ dch (Immunohistochemistry) - mt phng phỏp chn ủoỏn tng ủi nhanh, chớnh xỏc v cũn rt mi nc ta hin Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip Xut phỏt t thc t ủú chỳng tụi tin hnh ủ ti: "Nghiờn cu mt s ủc ủim bnh lý ch yu ca bnh dch t ln v ng dng k thut hoỏ mụ dch (Immunohistochemistry) chn ủoỏn bnh" 1.2 Mc ủớch nghiờn cu ca ủ ti Xỏc ủnh triu chng lõm sng, kho sỏt mt s ch tiờu huyt hc v nghiờn cu cỏc bin ủi bnh lý ủi th, vi th ca bnh Dch t ln nhm gúp phn hon thin hn nhng thụng tin v bnh, cung cp cỏc thụng tin cn thit ủ xõy dng quy trỡnh chn ủoỏn bnh ng dng k thut hoỏ mụ dch (Immunohistochemistry) vo chn ủoỏn bnh dch t ln Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc Nụng nghip Bng 4.8 S phõn b v mt ủ ca virus DTL cỏc c quan ca ln mc bnh dch t Mụ H ch H ch Amygdale lympho L1 +++ L2 NC Lỏch Gan +++ +++ ++ +++ ++ +++ L3 ++ + L4 +++ L5 Rut Rut Thn Phi Nóo Tim ++ ++ ++ + + + ++ ++ + + + + + + + + - - - - - ++ ++ + + - - - - - ++ ++ ++ + + ++ + + + - L6 +++ ++ ++ + + + - - - - L7 + + + - - - - - - - L8 ++ + + - - - - - - - L9 +++ ++ ++ ++ + + + - - - L10 +++ +++ ++ ++ ++ ++ + + + + non gi Mu ln * Ghi chỳ: (+++): Mt ủ virus trung cao; (++): Mt ủ virus trung va phi; (+): Mt ủ virus trung ớt; (-) : Phn ng õm tớnh khụng cú mt ca virus 68 ủỏnh giỏ ủ nhy ca k thut hoỏ mụ dch, chỳng tụi so sỏnh kt qu lm hoỏ mụ dch vi kt qu chn ủoỏn bng k thut RT PCR qua bng 4.9 K thut RT PCR ủ chn ủoỏn bnh dch t ln cú nguyờn lý chung l: s dng cỏc cp mi ủc hiu cho nhng ủon RNA ủc trng ca virus DTL ủ nhõn ủon gen ủú lờn vi s lng ln nh mỏy PCR Sn phm thu ủc ủem ủin di mụi trng agarose v ủc so sỏnh vi mt marker chun Phn ng dng tớnh vch ủin di ca mu trờn mụi trng agarose trựng vi vch ca marker chun Trong nghiờn cu ca chỳng tụi 10 mu ln ban ủu ủó ủc ly mỏu xột nghim xỏc ủnh dng tớnh vi DTL bng k thut RT-PCR Qua bng 4.9 cho thy, kt qu lm hoỏ mụ dch cỏc loi mụ khỏc cho t l rt khỏc t 30-100% hch Amygdale, hch lympho v lỏch, 100% mu nghiờn cu ủu cho kt qu dng tớnh vi virus DTL trựng vi kt qu lm RT-PCR Trong ủú nóo, tim v rut gi ch phỏt hin 30-40% mu cú virus iu ny ủc gii thớch l s phõn b khụng ủng ủu ca virus c th ln bnh cỏc t chc thớch hp cho virus nhõn lờn v phỏt trin hoc l ủớch tn cụng ca virus thỡ virus s trung nhiu ủú vi tn sut ln, ngc li vi cỏc t chc ớt tng thớch virus s xut hin ớt vi tn sut nh Nh vy cú th kt lun, ủ nhy ca k thut hoỏ mụ dch ph thuc rt ln vo vic chn t chc mụ ủem chn ủoỏn Nghiờn cu ca chỳng tụi cng cho thy, lm hoỏ mụ dch ngoi u ủim quan sỏt ủc s phõn b ca virus cỏc mụ ca ln bnh, kt qu lm hoỏ mụ dch hch Amygdale, hch lympho v lỏch cng chớnh xỏc tng ủng vi kt qu lm RT-PCR 69 Bng 4.9 So sỏnh kt qu chn ủoỏn bnh DTL bng k thut hoỏ mụ dch (IHC) vi k thut RT-PCR Chn ủoỏn bng IHC chn ủoỏn bng RT-PCR H ch Amygdale H ch lympho Lỏch Gan Thn Rut non Rut gi Phi Nóo Tim L1 + + + + + + + + + + + L2 + + + + + + + + + + + L3 + + + + + - + - - - - L4 + + + + + - + - - - - L5 + + + + + + + - + + + L6 + + + + + + + - - - - L7 + + + + - - - - - - - L8 + + + + - - - - - - - L9 + + + + + + + - + - - L10 + + + + + + + + + + + T l % (+) 100% 100% 100% 100% 80% 60% 80% 30% 50% 40% 40% Ghi chỳ:( +): dng tớnh; ( -): õm tớnh 70 Nh vy ủ nhy ca phng phỏp chn ủoỏn trờn l tng ủng Nhng ủiu cn chỳ ý l ủ nhy ca k thut hoỏ mụ dch ph thuc rt ln vo vic chn t chc mụ ủem nhum Nờn ỏp dng IHC vo chn ủoỏn mi bnh phi bit chn loi mụ thớch hp nht ni cú t l trung khỏng nguyờn (virus, vi khun ) cao Vi bnh dch t ln, cỏc mụ cú t l virus trung cao nh: hch Amygdale, hch lympho v lỏch Vỡ vy ng dng k thut hoỏ mụ dch vo chn ủoỏn bnh dch t ln ủ cú kt qu chớnh xỏc ta nờn chn mu mụ l: hch Amygdale, hch lympho v lỏch Cn c vo nhng kt qu trờn, cỏc phũng thớ nghim cú th ỏp dng k thut hoỏ mụ dch vo chn ủoỏn bnh DTL vi u ủim l ủ nhy cao, d lm, chi phớ thp v khụng cn trang thit b hin ủi 71 HèNH NH V S PHN B VIRUS DTL TRONG MT S Mễ CA LN MC BNH KHI NHUM HO Mễ MIN DCH (IHC) Hỡnh 25: Virus phõn b lỏch (x 60) Hỡnh 26: Virus trung ủng mch bỳt lụng (x 60) Hỡnh 27: Virus phõn b hch mng treo rut (x 150) Hỡnh 28: Virus t bo bch cu (x 600) Hỡnh 29: Virus phõn b hch amygdale (x 150) Hỡnh 30: Virus t bo bch cu (x 600) 72 Hỡnh 31: Virus phõn b rut (x 150) Hỡnh 32: Virus t bo niờm mc rut (x 600) Hỡnh 33: Virus phõn b gan (x 150) Hỡnh 34: Virus phõn b thn (x 150) Hỡnh 35: Virus phõn b phi (x 150) Hỡnh 36: Virus ủi thc bo ph nang (x 600) 73 KT LUN V NGH 5.1 Kt lun T nhng kt qu nghiờn cu ủó ủt ủc, chỳng tụi cú mt s kt lun sau: Ln mc bnh dch t cú mt s triu chng lõm sng ủin hỡnh nh: ln st cao, cú d mt, th khú, tỏo bún, xut huyt ủim bn chõn Ngoi cũn mt s triu chng khỏc nh: r, kộm n, b n, xut huyt cỏc vựng da khỏc, a chy, tớm tai, tớm da, rột run, ln nm dn ủng Nu bnh nng, ln cú triu chng thn kinh, lit hai chõn sau Cỏc tn thng ủi th: xut huyt hch mng treo rut, xut huyt cỏc hch lympho, tớch nc xoang ngc, xoang bao tim v xoang bng vi t l rt cao (100%) Xut huyt ủim thn, nhi huyt lỏch, sung huyt d dy - rut, xut huyt hch lõm ba l cỏc bnh tớch ủi th ủc trng cho bnh DTL Cỏc tn thng ủi th khỏc nh: loột ming, loột hch amygdale, loột rut gi v viờm ph qun phi, viờm phi thu cng xut hin bnh DTL Cỏc tn thng vi th ch yu cỏc c quan rut non, rut gi, phi, hch lympho, gan, thn, lỏch, tim v nóo ca ln mc bnh dch t: sung huyt, xut huyt, hoi t t bo, thoỏi húa t bo v thõm nhim t bo viờm Mt s ch tiờu huyt hc c bn ca ln mc bnh dch t: - S lng hng cu, hm lng huyt sc t, t huyt cu, s lng bch cu gim so vi ln khe - T l bch cu nhõn trung tớnh cụng thc bch cu tng cao, ủú bch cu ủn nhõn ln v t bo lympho gim - Hm lng protein tng s, t s A/G gia ln mc bnh dch t v ln khe khụng cú s khỏc Hm lng Albumin v globulin ln mc bnh dch t thp hn so vi ln khe 74 Kt qu nhum húa dch cho t l dng tớnh cao cỏc c quan: lỏch, hch mng treo rut hch amygdale, rut non v gan ca ln mc bnh dch t Cú th ỏp dng k thut hoỏ mụ dch chn ủoỏn bnh dch t ln vỡ phng phỏp cú ủ nhy cao v cú th thc hin cỏc phũng thớ nghim bnh lý m khụng cn cỏc trang thit b hin ủi 5.2 ngh Tin hnh ỏp dng k thut hoỏ mụ dch vo chn ủoỏn bnh DTL ti cỏc phũng thớ nghim bnh lý vỡ ủõy l mt phng phỏp cú ủ nhy cao, d lm v chi phớ thp 75 TI LIU THAM KHO A TI LIU TING VIT V Triu An (1978), i cng sinh lý bnh hc, NXB Y hc, tr.177- 198 Bựi Quang Anh (2001), Nghiờn cu dch t hc bnh dch t ln v cỏc bin phỏp phũng chng mt s tnh thuc vựng Bc trung b, Lun ỏn Tin s Nụng nghip, Vin Thỳ Y Quc gia, H Ni Nguyn Xuõn Bỡnh (1998), Mt s kt qu xột nghim bnh dch t ln tớnh Long An, Tp Khoa hc k thut Thỳ y, s 1-1998, tr 96-98 Nguyn Th Hnh Chi v Trn ỡnh T (2005), Xỏc ủnh vai trũ ca dch t heo hi chng tiờu chy kộo di heo ti mt s tri chn nuụi trung An Giang, Tp Khoa hc k thut Thỳ y, s 2-2005, tr 40-45 Trn Vn Chng (2007), Nghiờn cu mt s ủc ủim dch t hc bnh dch t ln c ủin v mt s bin phỏp phũng chng trờn bn tnh Kontum, Lun thc s Nụng nghip, HNN H Ni Cc Thỳ y (1990), Bnh dch t ln v phng phỏp xỏc ủnh, TCVN 5273-90 Nguyn Tin Dng (2002), Tp hun v hi tho v phng phỏp khng ch v chn ủoỏn bnh DTL Vit Nam, Hi tho Tp hun Chn ủoỏn bnh dch t ln, Vin Thỳ Y Quc gia, H Ni, ngy 7-11/10/2002 Nguyn Tin Dng, H Thu Hng, Nguyn Th Vinh v Bựi Ngha Vng (2004), Phõn b hm lng khỏng th khỏng bnh dch t ln ti c s chn nuụi, Tuyn Bỏo cỏo khoa hc 2001-2004, Vin Thỳ Y 35 nm xõy dng v phỏt trin 1969-2004, NXB Nụng Nghip, H Ni, tr 47-52 76 Nguyn Th Phng Duyờn, Vn khiờn, Thõn Th Hnh v D ỡnh Quõn (1999), Xỏc ủnh vai trũ ca virus DTL hi chng st, b n, tỏo bún ln ti mt s tnh trung Tp Khoa hc k thut Thỳ y, VI, s 2-1999, tr 6-12 10 o Trng t, Nguyn Tin Dng, ng Vit Tin v Phm Ngc Tờ (1989), Min dch th ủng v nh hng ca nú ủn phn ng dch ca ln chng virus DTL, Kt qu nghiờn cu Khoa hc k thut Thỳ y 1985-1989, Vin Thỳ y Quc gia 11 o Trng t v Trn Th T Liờn (1989), Mt s nột ủc trng v dch t hc v bnh lý lõm sng DTL Vit Nam hin nay, Kt qu nghiờn cu Khoa hc k thut Thỳ y 1985-1989, NXB Nụng nghip, H Ni, tr 9-15 12 o Trng t, Phan Thanh Phng, Lờ Ngc M v Hunh Vn Khỏng (2000), Bnh ln nỏi v ln con, NXB Nụng nghip, H Ni 13 Lờ (1981), Bnh dch t ln Bc Vit Nam 20 nm qua (1960-1980), Khoa hc k thut Thỳ y, s 2, tr 1-9 14 Thỏi Quc Hiu, Nguyn Vit Nga, Lờ Minh Khỏnh, H Qunh Mai, Nguyn Ngc Tuõn v Trn Th Dõn (2006), Cỏc yu t nguy c ủi vi bnh dch t heo t cỏc h chn nuụi gia ủỡnh ti Tin Giang, Tp khoa hc k thut thỳ y, XIII, s 1-2006, tr 5-11 15 Phm Hựng, Vn Khiờn, D ỡnh Quõn, Vừ Thnh Thỡn, Th Thanh Tõm v Lờ Th Sng (2004), ỏp ng dch ca ln sau tiờm phũng vacxin nhc ủc dch t ln chng C nuụi cy trờn t bo, Tuyn Bỏo cỏo khoa hc 2001-2004, Vin Thỳ Y 35 nm xõy dng v phỏt trin 1969-2004, NXB Nụng Nghip, H Ni, tr 90-92 16 H Thu Hng, Ken Inui, Bựi Ngha Vng, o Thanh Võn, Nguyn Thuý Duyờn, Kenji Kawashima v Nguyn Tin Dng (2004), So sỏnh phng phỏp chn ủoỏn virus dch t ln t mu ủc bỏo qun cỏc ủiu kin khỏc nhau, Tuyn Bỏo cỏo khoa hc 2001-2004, Vin Thỳ Y 35 nm xõy dng v phỏt trin 1969-2004, NXB Nụng Nghip, H Ni, tr 66-69 77 17 Phm S Lng (2004), Bnh thng gp ln v k thut phũng tr, NXB Lao ủng Xó hi 18 Phm S Lng, Phựng Quc Chng, Nguyn Hu Nam, Nguyn Vn Th v Bch Quc Thng (2007), Mt s bnh quan trng gõy hi cho ln, NXB Nụng nghip, H Ni 19 Nguyn Lng (1997), Dch t hc Thỳ y, NXB Nụng nghip, H Ni 20 Mesplede A., Albina E v Madec F., (bn dch - Nguyn Tin Dng) (1999), Dch t ln c ủin luụn l ủ thi s, tỡnh hỡnh hin ti v bnh ủỏng s ny, Tp khoa hc k thut Thỳ y, s 2-1999, tr 25-34 21 H Vn Nam, Nguyn Th o Nguyờn v Phm Ngc Thch (1997), Giỏo trỡnh chn ủoỏn lõm sng thỳ y, NXB Nụng nghip H Ni 22 Mai Th Phong v Trng Quang (2007), Kho sỏt tỡnh trng mang trựng virus dch t ln v ủỏp ng dch sau tiờm vacxin phũng bnh ca ủn ln tnh Qung Tr Tp khoa hc k thut thỳ y, XIV, s 3-2007, tr 5-9 23 Nguyn Vnh Phc (1970), Giỏo trỡnh Vi sinh vt thỳ y II-III, NXB i hc v Trung hc chuyờn nghip H Ni, tr 175-191 v 346-361 24 Nguyn Vnh Phc (1978), Giỏo trỡnh bnh truyn nhim gia sỳc, NXB Nụng nghip, H Ni, tr 270-286 25 Phan Thanh Phng, Trn Th Hnh v Phm Cụng Hot (2006), Bn bnh ủ ca ln v bin phỏp phũng tr, NXB Nụng Nghip, H Ni 26 Nguyn Nh Thanh (1997), Giỏo trỡnh dch hc, NXB Nụng thụn, H Ni 27 Nguyn Nh Thanh, Nguyn Bỏ Hiờn v Trn Th Lan Hng (1997), Giỏo trỡnh vi sinh vt Thỳ y, NXB Nụng nghip, H Ni 28 Nguyn Nh Thanh v Phựng Quc Chng (2006), Phng phỏp thc hnh vi sinh vt Thỳ y, NXB Nụng nghip, H Ni 78 29 Nguyn Xuõn Tnh, Tit Hng Ngõn, Nguyn Bỏ Mựi v Lờ Mng Loan (1996), Sinh lý hc gia sỳc, NXB Nụng nghip, H Ni 30 Trn ỡnh T (1990), Bnh dch t ln, Ti liu ging dy, Trung tõm nghiờn cu Cụng ty thuc thỳ y TW II 31 Nguyn Vn Ty (1975), Virus hc, NXB Giỏo dc, 1975 32 Vin Thỳ y quc gia (2003), Cm nang chn ủoỏn tiờu chun v cỏc bnh gia sỳc Vit Nam, D ỏn tng cng nng lc nghiờn cu Vin Thỳ y quc gia (JICA SNIVR) B TI LIU TING NC NGOI 33 Bautista M.J., Ruiz-Villamor E., Salguero F.J., Sỏnchez-Cordún P.J., Carrasco L and Gúmez-Villamandos J.C (2002), Early platelet aggregation as a cause of thrombocytopenia in classical swine fever, Vet Patho 39:1, 2002, pp 84-91 34 Bin Hashim H (1991), program for the eradication of Classical Swine Fever in Malyasia, OIE-FAVA Symposium on the Control of Major Livestock Disease in Asia, OIE publications, pp 36-43 35 Bush J.A., Berlin N.I., Jensen W.N., Bill A.B and Witrobe M (1995), Erythocyte life span in growing swine as determined by glycine, J.Exp.Med 36 Dahle J and Liess B (1992), A review on Classical swine fever infection in pigs: Epidemiology, clinical disease and pathology Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases 1992, 15 pp 203-211 37 Dewulf J (2002), Epidemiology and control of classical swine fever: experimental assessement of virus transmission ans potential benefits of emergency vaccianation, University Ghent, November/2002 38 Dunne H.W (2000), Hog cholera Disease of swine, Fourth Edition, pp.189-225 79 39 Edwards S., Moennig V and Wensvoort G (1991), The development of an international reference panel of monoclonal antibodies for the differentiation of hog cholera virus from other pestiviruses, Vet Microbiol 29, pp 101-108 40 Edwards S (1998), The current world situation on Classical swine fever, OIE- France-sympovirus, Arch virae, pp.339 41 Fuschs F (1968), Overview of classical swine fever situation in Japan and South-East Asia and control measures, OIE-France Symposium on classical swine fever, pp 10-12 42 Henry Too (2002), CSF a handbook for swine practitioners, Copyright by Merial Asia Private Limited 57 A Science Park Drive, Singapore 43 Jung T., Choi C., Chae C (2002), Localization of swine influenza virus in naturally infected pigs, Vet Pathol 39, pp 10-16 44 Ken Inui and Nguyen Tien Dung (2003), Molecular epidemiology of classical swine fever in South East Asia, Worshop on tho control of classical swine fever in Southeast ASIA, 25-26/Sep/2003, Hanoi-Vietnam 45 Jubb Kennedy and Palmer (2006), Pathology of Domestic Animals, Volume 3, pp 79-85 46 Koenen F., Van Canenegem G., Vermeersch J.P., Vandenheede K And Deluyker H.,(1996), Epidemiological characteristics of an outbreak of classical swine fever in an area of high pig desity, Vet Rec 139 (15), pp 367-371 47 Luke D (1993), The differene Leukocyte Count in the normal pig, J Comp path and Thearp, pp 63 48 Meyling A and Schjerning-Thiesen K (1968), Study of the practicability of various diagnostic methods in the demonstration of swine fever virus of high and low virulence in organs of experimentally infected pigs, Acta Vet Scand 9, pp 50-64 80 49 Merk (1991), value Chapter some physiological, The Merk veterinary manual, 17th editor, pp 966 967 50 Narita M., Kawashima K., Kimura K., Mikami O., Shibahara T., Yamada S., and Sakoda Y (2000), Comparative Immunohistopathology in pigs infected with highly virulent or less virulent strains of hog cholera virus, Vet Patho 37:5, 2000, pp 402-408 51 OIE (1996), Manual of standards for diagnostich tests and vaccines, OIE Manual of standards, pp 145-154 52 Ramos-Vara J A (2005), Technical aspects of Immunohistochemistry, Vet Patho 42:4, 2005, pp 405-426 53 Perk K., Frei F., and Herz A., Osmotic fragility of Red Blood cell of yoang and Mature Domestic and laboratory Awmal, J Vet Res 1964, pp 25 54 Saatkamp H.W and Horst F (1998), The economic effects of classical swine fever and the cost of control OIE France Symposium on Classical swine fever, pp.4 - 55 Sỏnchez-Cordún P.J., Romanini S., Salguero F.J., Ruiz-Villamor E., Carrasco L and Gúmez-villamandos J.C (2003), A Histopathologic, Immunohistochemical and Ultrastructural study of the Intestine in pigs inoculated with classical swine fever virus, Vet Pathol 40:3, 2003, pp 254-262 56 Stewart W.C (1981), Hog cholera in disease of swine, 5th Editon Iowan, pp 224-230 57 Takashi Ogawa (2003), CSF eradicaton program in Japan, Control of CSF in Southest Asia, 25-26/ September 2003, Hanoi Viet nam 58 Van Oirschot J.T (1992), Classical swine disease (Hog Cholera), 8th editor, Chapter 14, W.L Mengeling, pp 159-171 59 Van Oirschot J.T and Terstra C (1997), A congenital persistent swine fever infection Clinical and virological observation, Vet Micro 2, pp 121-132 81 60 Van Oirschot J.T (1998), Description of the virus infection Classical swine fever and related viral infection, Mantinus Nijhoft publising, pp.1-19 61 Williams D.R and Matthews D (1998), Outbreak of classical swine fever in Great, Vet Rec 122 (20), Britain in 1986, pp 479-483 62 Wensvoort G., Boostra J and Bodzinga B.G (1990), Immuno offinity purification and characterization of the envelope protein E1 of Hog cholera virus, Journal of general virology, pp 531-540 C INTERNET 63 http://www.cucthuy.gov.vn/ 64 http://www.oie.int/eng/en_index.htm 65 http://www.actavetscand.com/content/50/1/34 66 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entez/query.fegi 67 http://www.vetpathology.org/misc/terms.shtml 82 [...]... của lợn mắc bệnh dịch tả - Xác ñịnh biến ñổi bệnh lý ñại thể chủ yếu của lợn mắc bệnh dịch tả - Nghiên cứu các tổn thương vi thể của: não, gan, thận, lách, tim, phổi, hạch lympho, hạch amygdale, ruột, của lợn mắc bệnh dịch tả - Khảo sát một số chỉ tiêu huyết học cơ bản của lợn bệnh - Ứng dụng kỹ thuật Hoá mô miễn dịch ñể chẩn ñoán bệnh dịch tả lợn 3.3 Nguyên liệu, thiết bị và hóa chất dùng trong nghiên. .. phản ứng) phản ứng sinh màu sẽ xảy ra (phản ứng âm tính) 2.5.3.6 Hoá mô miễn dịch (IHC) Hoá mô miễn dịch (Immunohistochemistry) là sự kết hợp giữa 2 ngành mô bệnh học và miễn dịch học Kỹ thuật IHC ñược dùng không những chỉ ñể xác dịnh một mô có hoặc không có KN ñặc hiệu mà còn dùng ñể xác ñịnh tính trạng KN của những tế bào ñặc hiệu trong mô và vị trí của KN trong tế bào Nhờ ñó có thể xác ñịnh ñược dòng... Nguyên liệu, thiết bị và hóa chất dùng trong nghiên cứu 3.3.1 Nguyên liệu + Mẫu bệnh phẩm: não, gan, thận, lách, tim, phổi, hạch lympho, hạch amygdale, ruột, dạ dày của lợn mắc bệnh dịch tả + Mẫu máu: của 30 lợn Yorshine 12 tuần tuổi thuộc một số ñàn lợn mắc dịch tả và 10 lợn khoẻ ñối chứng + Kháng thể dịch tả lợn chế qua thỏ và kháng thể dịch tả lợn chuẩn + Kháng kháng thể 3.3.2 Thiết bị, máy móc... ñược bệnh tích tế bào 2.5.3 Chẩn ñoán huyết thanh học Hiện nay, ở Việt Nam thường dùng một số phản ứng huyết thanh học sau ñể nghiên cứu, chẩn ñoán và giám sát bệnh DTL như: thí nghiệm trung hoà trên thỏ, phản ứng kết tủa khuếch tán trên thạch, phản ứng ngưng kết gián tiếp hồng cầu, phản ứng miễn dịch huỳnh quang, phản ứng miễn dịch ñánh dấu enzyme (ELISA), hoá mô miễn dịch (IHC) 2.5.3.1 Phản ứng trung... huyện có dịch, số lợn bị huỷ là 161 con, tháng 10/2006 ở Quảng Ngãi có 16 xã có dịch, số lợn bị chết 169 con Tại Quảng Nam có 5 xã có dịch, số lợn chết là 277 con Gia Lai có 6 xã có dịch, số lợn chết là 521 con Tại báo cáo số 01/TTV-BC ngày 15/01/2007 và báo cáo số 11/TYV-BC, ngày 15/02/2007 của cơ quan thú y vùng IV: tại Quảng Ngãi và Bình ðịnh có 20 xã có dịch, số lợn chết là 196 con Như vậy, bệnh DTL... con lợn bệnh Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………27 3 ðỐI TƯỢNG, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 ðối tượng nghiên cứu - ðối tượng nghiên cứu: Lợn bị mắc bệnh dịch tả - ðịa ñiểm nghiên cứu: Phòng thí nghiệm Bệnh lý, Phòng thí nghiệm Trung tâm, Khoa Thú Y, Trường ðHNN Hà Nội 3.2 Nội dung nghiên cứu - Xác ñịnh các triệu chứng lâm sàng của. .. của quần thể tế bào trong cùng một dòng, và chức năng khác nhau của các loại tế bào, thậm chí còn có thể xác ñịnh ñược tác nhân gây bệnh như virus, vi khuẩn Chìa khoá chính trong HMMD là phản ứng ñặc hiệu của KN với KT Mặc dù áp dụng rộng rãi với nhiều nguyên lý khác nhau trong nhiều lĩnh vực khác nhau, nhưng trong giải phẫu bệnh, HMMD có tác dụng rất lớn và sâu sắc trong việc chẩn ñoán giải phẫu bệnh. .. virus trong các sản phẩm thịt ñã ñược chế biến, thịt hôp từ thịt của những lợn bị bệnh Trong thịt, nước tiểu, xác ñộng vật chết thối virus bị chết sau 2-3 ngày Trong phân, rác, virus bị mất hoạt tính trong vòng 24h [30] 2.3 Một số ñặc ñiểm dịch tễ của bệnh DTL 2.3.1 ðộng vật cảm nhiễm Trong tự nhiên chỉ có loài lợn (cả lợn rừng và lợn nhà) mọi lứa tuổi ñều mắc bệnh DTL [23] Bệnh có thể lây từ lợn nhà... dụng các biện pháp vệ sinh ñể tiêu diệt mầm bệnh Theo quy ñịnh của EC, chỉ những lợn và sản phẩm từ lợn từ những nước hoặc vùng an toàn bệnh DTL mới ñược buôn bán tự do trong phạm vi cộng ñồng châu Âu [51] Một số nước thanh toán bệnh DTL bằng các biện pháp sau ñây: - Nghiên cứu và áp dụng các phương pháp chẩn ñoán nhanh, nhạy tại hiện trường cũng như trong phòng thí nghiệm - Củng cố giám sát dịch bệnh. .. ñàn lợn và công bố là quốc gia sạch bệnh [57] Trận dịch tả lợn bùng phát ở Hàn Quốc năm 2003 cũng là một sự cảnh báo về tính chất nghiêm trọng của bệnh DTL Những trận dịch xuất hiện ở các quốc gia châu Á có xu hướng xảy ra sau những thiếu sót trong tiêm phòng, thay ñổi chương trình tiêm phòng hoặc sau những biến ñộng về lượng lợn trong ñàn [40] 2.1.2 Lịch sử và tình hình bệnh dịch tả lợn ở Việt Nam Bệnh