+ Khử Paraffin: cho tiờu bản qua hệ thống Xylen gồm 3 cốc: Xylen I : 10 phỳt
Xylen II : 10 phỳt Xylen III : 10 phỳt
+ Khử Xylen: cho tiờu bản qua hệ thống cồn gồm 4 cốc: Cồn 1000 : 2 lần (mỗi lần 1 phỳt)
Cồn 950 : 1 lần Cồn 700 : 1 lần Cồn 500 : 1 lần
+ Khử cồn: cho dưới vũi nước chảy 5 - 10 phỳt.
+ Nhuộm Haematoxylin (nhuộm nhõn): lau khụ nước ở tiờu bản, nhỏ Haematoxilin ngập tiờu bản. ðể trong khoảng 3-5 phỳt sau ủú ủổ thuốc nhuộm ủi, rửa qua nước. Lau sạch nước xung quanh tiờu bản. Kiểm tra màu sắc, nếu thấy tiờu bản xanh tớm là ủược.
Nếu nhạt màu, nhỳng tiờu bản qua NaHCO3 1% (30 giõy).
Nếu ủậm, nhỳng tiờu bản vào lọ cồn axit (cồn 960 + HCl 1%) trong 30 giõy. + Rửa sạch tiờu bản bằng nước cất.
+ Nhuộm Eosin (nhuộm bào tương)
Nhỏ Eosin ngập tiờu bản khoảng 3-5 phỳt, tuỳ theo thực tế màu Eosin. Sau ủú rửa nước chảy 5 - 10 phỳt cho hết Eosin thừa.
+ Cho tiờu bản qua hai lọ cồn tuyệt ủối, mỗi lọ 1 phỳt.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………33
+ Gắn Baume canada: nhỏ một giọt Baume canada lờn lamen rồi gắn nhanh lờn tiờu bản khi vẫn cũn Xylen trờn tiờu bản. Ấn nhẹủể dồn hết bọt khớ ra ngoài.
+ ðỏnh giỏ kết quả: ủem soi lờn kớnh hiển vi quang học vật kớnh 10. Nếu thấy nhõn bắt màu xanh tớm, bào tương bắt màu ủỏ tươi, tiờu bản trong sỏng, khụng cú nước, khụng cú bọt khớ là ủược.
3.4.4. Phương phỏp xột nghiệm cỏc chỉ tiờu huyết học
3.4.4.1. Phương phỏp lấy mỏu làm xột nghiệm - Vị trớ lấy: vịnh tĩnh mạch cổ.
- Cỏch lấy: cố ủịnh lợn chắc chắn, dựng cồn 700 sỏt trựng. Nếu chỗ lấy mỏu quỏ bẩn thỡ dựng xà phũng rửa sạch, sau ủú mới tiến hành lấy mỏu.
Chỳng tụi tiến hành lấy mỏu của 30 lợn Yorshire ở giai ủoạn 12 tuần tuổi thuộc một số ủàn mắc bệnh dịch tả (ủó cú kết quả dương tớnh với DTL bằng phản ứng RT - PCR), 10 lợn khoẻ cựng giống, cựng lứa tuổi cũng ủược lấy mẫu dựng làm ủối chứng.
3.4.4.2. Một số chỉ tiờu về sinh lý mỏu
Cỏc chỉ tiờu sinh lý mỏu ủược nghiờn cứu là:
• Số lượng hồng cầu (triệu/ml mỏu)
• Hàm lượng huyết sắc tố (g%) • Tỷ khối huyết cầu (%) • Thể tớch trung bỡnh của hồng cầu (àl) • Nồng ủộ huyết sỏc tố bỡnh quõn của hồng cầu (%) • Số lượng bạch cầu (nghỡn/ml mỏu) • Cụng thức bạch cầu (%)
Cỏc chỉ tiờu này ủược xỏc ủịnh nhờ mỏy ủo huyết học 18 chỉ số.
3.4.4.3. Một số chỉ tiờu sinh húa mỏu
Cỏc chỉ số sinh hoỏ mỏu ủược theo dừi là:
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………34 • Hàm lượng Albumin (%) • Hàm lượng α1 globulin (%) • Hàm lượng α2 globulin (%) • Hàm lưọng β globulin (%) • Hàm lượng γ globulin (%)
* Protein huyết thanh tổng số: ủược xỏc ủịnh bằng khỳc xạ kế Zena.