Nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lý chủ yếu của bệnh newcastle ở gà và ứng dụng kỹ thuật hoá mô miễn dịch trong chẩn đoán bệnh

luận văn

Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun vn thc s khoa hc nụng nghip i Bộ giáo dục và đào tạo trờng đại học nông nghiệp hà nội ------------------ Nguyễn thị hơng giang NGHIấN CU MT S C IM BNH Lí CH YU CA BNH NEWCASTLE G V NG DNG K THUT HO Mễ MIN DCH TRONG CHN ON BNH Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Chuyên ngành : Thú y Mã số : 60.62.50 Ngời hớng dẫn khoa học : TS. NGUYễN THị LAN H NI, 2009 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan ñây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu và kết quả trình bày trong luận văn là trung thực và chưa từng ñược ai công bố trong bất cứ công trình nào khác. Tôi xin cam ñoan rằng các thông tin trích dẫn trong luận văn ñều ñược chỉ rõ nguồn gốc. Hà Nội, tháng 12 năm 2009 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Hương Giang Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun vn thc s khoa hc nụng nghip ii Lời cảm ơn Lời cảm ơnLời cảm ơn Lời cảm ơn Trong quá trình học tập và thực hiện đề tài tốt nghiệp, ngoài sự nỗ lực của bản thân, tôi còn nhận đợc rất nhiều sự giúp đỡ của các tập thể cá nhân trong và ngoài trờng. Nhân dịp này, Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc của mình đối với TS. Nguyễn Thị Lan, cô giáo đã trực tiếp hớng dẫn và chỉ bảo tận tình trong suốt quá trình tôi học tập và hoàn thành luận văn tốt nghiệp này. Tôi xin chân thành cảm ơn các Thầy Cô giáo trong Bộ môn Bệnh lý, Khoa Thú y và Viện đào tạo sau đại học, Trờng Đại học Nông nghiệp Hà Nội. Đồng thời đợc gửi lời cảm ơn chân thành đến các Giáo s và bạn bè của tôi tại Lab nghiên cứu của Trờng Đại học Miyazaki Nhật Bản đã tận tình giúp đỡ tôi trong suốt quá trình nghiên cứu tại đây. Để hoàn thành luận văn này tôi còn nhận đợc sự động viên, khích lệ của gia đình, ngời thân và bạn bè đồng nghiệp. Tôi xin chân thành cảm ơn những tình cảm cao quý đó! Hà Nội, Ngày 15 tháng 12 năm 2009 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Hơng Giang Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… iii MỤC LỤC PHẦN I MỞ ðẦU .1 1.1. TÍNH CẤP THIẾT CỦA ðỀ TÀI .1 1.2 MỤC TIÊU CỦA ðỀ TÀI 2 PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 2.1. LỊCH SỬ NGHIÊN CỨU BỆNH NEWCASTLE 3 2.1.1. Lịch sử bệnh. 3 2.1.2. Tình hình nghiên cứu bệnh Newcastle trên thế giới. .5 2.1.3. Tình hình nghiên cứu bệnh Newcastle trong nước 9 2.2. MỘT SỐ ðẶC ðIỂM CỦA VIRUS NEWCASTLE VÀ BỆNH NEWCASTLE 12 2.2.1. Một số ñặc ñiểm của virus Newcastle 12 2.2.2. Một số ñặc ñiểm bệnh Newcastle 20 2.3. MỘT SỐ HIỂU BIẾT CƠ BẢN VỀ HOÁ MÔ MIỄN DỊCH 28 2.3.1. Lịch sử phát triển của kỹ thuật hoá mô miễn dịch .28 2.3.2. Nội dung của kỹ thuật hoá mô miễn dịch 29 2.3.3. Ứng dụng của hoá mô miễn dịch trong chẩn ñoán giải phẫu bệnh 31 PHẦN III. ðỐI TƯỢNG, ðỊA ðIỂM, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .32 3.1. ðỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU .32 3.2. THỜI GIAN VÀ ðỊA ðIỂM NGHIÊN CỨU 32 3.3. NGUYÊN LIỆU, DỤNG CỤ, HOÁ CHẤT .32 3.3.1. Nguyên liệu 32 3.3.2. Dụng cụ, hoá chất .32 3.4. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 33 3.5. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 3.5.1. Phương pháp quan sát, thống kê sinh học .33 3.5.2. Phương pháp mổ khám .34 3.5.3. Phương pháp làm tiêu bản bệnh lý 34 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… iv 3.5.4.Phương pháp ñếm hồng cầu, bạch cầu bằng buồng ñếm Newbauer: 37 3.5.5. Phương pháp làm huyết sắc tố Shalli 38 3.5.6 Phương pháp Hematocrit .39 3.5.7. Phương pháp chẩn ñoán huyết thanh học: HI 40 3.5.8. Phương pháp nhuộm hoá mô miễn dịch (Immunohistochemistry-IHC) 40 3.5.9 Phương pháp xử lý số liệu .42 PHẦN IV. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 43 4.1. KẾT QUẢ KHẢO SÁT TRIỆU CHỨNG, BỆNH TÍCH ðẠI THỂ CỦA BỆNH NEWCASTLE Ở GÀ ISA BROWN (20 – 22 TUẦN TUỔI) 43 4.1.1 Kết quả khảo sát triệu chứng lâm sàng gà mắc bệnh Newcastle 43 4.1.2. Kết quả khảo sát bệnh tích ñại thể ở gà mắc bệnh Newcastle 45 4.2. MỘT SỐ ðẶC ðIỂM BỆNH LÝ CHỦ YẾU CỦA BỆNH NEWCASTLE Ở GÀ GÂY NHIỄM THỰC NGHIỆM .49 4.2.1. Kết quả nghiên cứu triệu chứng lâm sàng của bệnh Newcastle ở gà gây nhiễm thực nghiệm .52 4.2.2. Kết quả nghiên cứu bệnh tích ñại thể chủ yếu của gà thí nghiệm mắc bệnh newcastle .55 4.2.3. Kết quả so sánh triệu chứng, bệnh tích của bệnh Newcastle ở gà gây nhiễm và gà mắc bệnh tự nhiên. .58 4.2.4. Kết quả nghiên cứu bệnh tích vi thể chủ yếu ở một số cơ quan của gà mắc bệnh Newcastle .64 4.2.5. Kết quả nghiên cứu một số chỉ tiêu huyết học của gà mắc bệnh Newcastle 68 4. 3. KẾT QUẢ NHUỘM HÓA MÔ MIỄN DỊCH .74 4.4. MỐI TƯƠNG QUAN GIỮA BIẾN ðỔI ðẠI THỂ, VI THỂ, HOÁ MÔ MIỄN DỊCH TRONG SỰ PHÂN BỐ VIRUS TRÊN MỘT SỐ CƠ QUAN CỦA GÀ MẮC BỆNH NEWCASTLE 77 4.5. SO SÁNH HIỆU QUẢ CHẨN ðOÁN BỆNH NEWCASTLE BẰNG IHC VỚI CÁC PHƯƠNG PHÁP KHÁC. 80 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… v PHẦN V. KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 82 5.1 KẾT LUẬN 82 PHẦN VI: TÀI LIỆU THAM KHẢO 84 1. Tài liệu Tiếng Việt 84 2. Tài liệu Tiếng Anh 87 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT CPE: (Cytopathic effect): Phá huỷ tế bào. EID 50 : (Egg infective dose): Liều gây nhiễm 50% phôi. ELD 50 : (Egg lethal dose): Liều gây chết 50% phôi. F : Fusion protein. FAO: (Food and Agriculture Organization): Tổ chức lương thực và Nông nghiệp của Liên hiệp quốc. GMT: Geometic Mean Titer: Hiệu giá kháng thể trung bình HA : (Hemagglutination test): Phản ứng ngưng kết hồng cầu. Hb: Hemoglobin HE: (Haematoxylin – Eosin): HI: (Hemagglutination Inhibition test): Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu. HN: (Haemagglutinin – Neuraminidase): Cấu trúc kháng nguyên của virus Newcastle ICPI: Intracerebral pathogennicity Index: Chỉ số gây bệnh trên não gà 1 ngày tuổi IHC: Immunohistochemistry ILT: (Infectious laryngotrachetis): Bệnh viêm thanh khí quản truyền nhiễm L: Large polymerazase protein. LD 50 : (50 Percent Lethal Dose) : Liều gây chết 50% ñộng vật thí nghiệm LHbBQ: Lượng huyết sắc tố (Hemoglobin) bình quân hồng cầu. M: Matric protein. MAB: (Monoclonal antibody): Kháng thể ñơn dòng NðHbBQ: Nồng ñộ huyết sắc tố bình quân hồng cầu. N: Nucleoprotein. NP: Nucleoprotein Phospho. RT-PCR: Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction OIE : (Office International des Epizooties): Tổ chức dịch tễ thế giới V bq : Thể tích bình quân của hồng cầu. Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… vii DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1. Hệ thống chuyển ñúc mẫu tự ñộng .36 Bảng 4.1. Kết quả nghiên cứu triệu chứng lâm sàng của bệnh Newcastle ở gà mắc bệnh tự nhiên 44 Bảng 4. 2 .Kết quả nghiên cứu bệnh tích ñại thể của gà mắc bệnh Newcastle 46 Bảng 4.3. Kết quả theo dõi thời gian tiến triển của bệnh Newcastle ở gà gây nhiễm thực nghiệm .51 Bảng 4.4. Kết quả theo dõi các triệu chứng lâm sàng của bệnh Newcastle ở gà gây nhiễm thực nghiệm 53 Bảng 4.5. Kết quả nghiên cứu triệu chứng lâm sàng của bệnh Newcastle ở gà gây nhiễm thực nghiệm 54 Bảng 4.6. Kết quả mổ khám và quan sát các các biến ñổi ñại thể chủ yếu của bệnh Newcastle ở gà gây nhiễm thực nghiệm .56 Bảng 4.7. Kết quả nghiên cứu bệnh tích ñại thể chủ yếu của bệnh Newcastle ở gà gây nhiễm thực nghiệm 57 Bảng 4.8. Kết quả so sánh triệu chứng lâm sàng của bệnh Newcastle ở gà gây nhiễm thực nghiệm và gà mắc bệnh tự nhiên 59 Bảng 4.9. Kết quả so sánh bệnh tích ñại thể của bệnh Newcastle ở gà gây nhiễm thực nghiệm và gà mắc bệnh tự nhiên 62 Bảng 4.10. Kết quả kiểm tra bệnh tích vi thể ở một số cơ quan của gà mắc bệnh Newcastle 65 Bảng 4.11. Kết quả nghiên cứu một số chỉ tiêu hệ hồng cầu của gà mắc bệnh Newcastle .69 Bảng 4.12. Kết quả nghiên cứu một số chỉ tiêu bạch cầu của gà mắc bệnh Newcastle .72 Bảng 4. 13. Kết quả nhuộm hoá mô miễn dịch .75 Bảng 4.14. Mối tương quan giữa biến ñổi ñại thể, vi thể, hoá mô miễn dịch trong sự phân bố virus trên một số cơ quan của gà mắc bệnh Newcastle 78 Bảng 4.15. So sánh hiệu quả chẩn ñoán bệnh Newcastle ở các lô gà bằng các phương pháp khác nhau 80 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… viii DANH MỤC ðỒ THỊ ðồ thị 4.1. Kết quả so sánh triệu chứng lâm sàng chủ yếu của bệnh Newcastle ở gà gây nhiễm và gà mắc bệnh tự nhiên 60 ðồ thị 4.2. Kết quả so sánh bệnh tích ñại thể chủ yếu của bệnh Newcastle ở gà gây nhiễm và gà mắc bệnh tự nhiên 63 Biểu ñồ 4.3a. Công thức bạch cầu của gà ISA Brown mắc bệnh Newcastle .73 Biểu ñồ 4.3b. Công thức bạch cầu của gà ISA Brown (20 tuần tuổi) 73 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp…………… ix DANH MỤC HÌNH ẢNH MINH HOẠ Ảnh 4.1: Gà ISA Brown 20 tuần bị bệnh Newcastle; ủ rũ, kém ăn. Ảnh 4.2:Gà ISA Brown 20 tuần ủ rũ, ñuôi cụp. Bệnh Newcastle Ảnh 4.3: Gà co giật, mắt ngưỡng thiên. Bệnh Newcastle Ảnh 4.4: Gà ủ rũ. Bệnh Newcastle Ảnh 4.5: Triệu chứng thần kinh. Bệnh Newcastle Ảnh 4.6: Triệu chứng thần kinh. Gà mắc bệnh Newcastle Ảnh 4.7: Gà ñẻ trứng non. Bệnh Newcastle Ảnh 4.8:Trứng non, trứng dính máu. Bệnh Newcastle Ảnh 4.9: Phổi viêm , xuất huyết. Bệnh Newcastle Ảnh 4.10: Xuất huyết mỡ vành tim. Bệnh Newcastle Ảnh 4.11: Xuất huyết dạ dầy tuyến. Bệnh Newcastle Ảnh 4.12: Xuất huyết dạ dầy tuyến. Bệnh Newcastle Ảnh 4.13: Xuất huyết dạ dầy tuyến.Bệnh Newcastle Ảnh 4.14: Loét, xuất huyết ruột non. Bệnh Newcastle Ảnh 4.15: Loét, xuất huyết ruột non. Bệnh Newcastle Ảnh 4.16: Xuất huyết lỗ huyệt. Bệnh Newcastle Ảnh 4.17: Gà uống nước nhiều. Bệnh Newcastle Ảnh 4.18: Gà gây nhiễm 8 tuần: Chân khô, co quắp. Bệnh Newcastle Ảnh 4.19: Diều chứa thức ăn không tiêu. Bệnh Newcastle Ảnh 4.20: Phân nhớt, trắng xanh Bệnh Newcastle Ảnh 4.21: Gà chảy nước nhớt ở miệng. Bệnh Newcastle Ảnh 4.22: Gà có triệu chứng thần kinh. Bệnh Newcastle Ảnh 4.23: Ngoại tâm mạc xuất huyết, Phù. Bệnh Newca stle Ảnh 4.24: Khí quản có dịch nhày xuất huyết. Bệnh Newcastle Ảnh 4.25: Loét, xuất huyết ruột non. Bệnh Newcastle Ảnh 4.26: Phổi viêm, tụ máu. Bệnh Newcastle Ảnh 4.27: Xuất huyết dạ dày tuyến. Bệnh Newcastle Ảnh 4.28: Loét, xuất huyết hạch ruột. Bệnh Newcastle Ảnh 4.29: Xuất huyết dạ dày tuyến. Bệnh Newcastle Ảnh 4.30: Xuất huyết túi Fabricius. Bệnh Newcastle [...]... ng c a ngành Thú y nói chung, công tác ch n ñoán b nh Newcastle nói riêng, chúng tôi ti n hành th c hi n ñ tài: “ Nghiên c u m t s ñ c ñi m b nh lý ch y u c a b nh Newcastle gà và ng d ng k thu t hóa mô mi n d ch trong ch n ñoán b nh” 1.2 M C TIÊU C A ð TÀI - Xác ñ nh ñư c các ñ c ñi m b nh lý ch y u gà m c b nh Newcastle - Thi t l p ñư c quy trình ch n ñoán b nh Newcastle gà b ng k thu t hóa mô mi n... n li t chân, cánh và không có tri u ch ng hô h p T l nhi m c a ng ng ngan và v t kho ng 10% ho c ít hơn T l ch t ch có v t và ng ng kho ng 10% Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c nông nghi p…………… 7 * B nh Newcastle gà ðài Loan trong 16 năm (t Newcastle trong ñó 93% là năm 1970 - 1985) có 396 gà, còn l i là d ch gà lôi, b câu, gà tây, ng ng và chim cút 82% gà m c b nh dư i 2... tiên Vi t Nam vào năm 1933 và g i là b nh d ch t gà ðông Dương Năm 1938, m t d ch v gà Nam B ñư c Vitor mô t có tri u ch ng gi ng b nh Newcastle T i Nha Trang năm 1949, Jacottot và Lelouet ñã phân nh p ñư c virus Newcastle, sau dùng ch ng này ñ gây b nh cho gà và tiêm truy n trên phôi tr ng, b ng ph n ng ngưng k t h ng c u và c ch ngưng k t h ng c u tác gi ñã xác ñ nh s có m t c a virus Newcastle t i... 5 v d ch Newcastle Trong s các v d ch này, có 4 v gà nh , 1 v gà trư ng thành, d ch x y ra vào các v ñông xuân (t tháng 10 ñ n tháng 3 năm sau) Do ñó, tác gi ñã ñ xu t l ch s d ng vacxin thích h p là: 7 ngày, 21 - 28 ngày, 50 - 58 ngày và 133 - 140 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c nông nghi p…………… 11 ngày; Vacxin s d ng là Lasota và H 1, b ng phương pháp nh mũi và tiêm dư... ng và chân - Trên t bào phôi gà Các ch ng virus Newcastle ñ u phát tri n trên môi trư ng t bào và gây hi n tư ng b nh lý t bào (CPE) H th ng t bào thư ng dùng là t bào phôi gà, th n gà m t l p (Beard và cs , 1984)[45] Chandra và cs (1972)[52], ñã nhân virus Newcastle trên t bào phôi gà th y hi n tư ng k t dính, sau 1- 2 gi t bào co l i, ñ n 48 gi b thoái hoá cu i cùng t bào m t l p hoàn toàn b phá hu... virus bài xu t ñ n 20 ngày, có b nh tích viêm ru t d dày và ho i t tuy n tu N u gây b nh cho gà qua l huy t, mũi ho c tiêm vào túi khí ñ t ng c thì gà v n kho m nh; tiêm vào não gà con chúng có ch s ICPI gi ng nhóm Velogen và 4 trong 6 ch ng virus phân l p có kh năng gây b nh theo hư ng tác ñ ng th n kinh cho gà 6 tu n tu i Nghiên c u b nh Newcastle chim b câu th y t l m c chi m t 30% -70%, t l ch... ñã ñóng m t v trí quan tr ng trong ngành chăn nuôi c a nư c ta, trong nh ng năm g n ñây ngành chăn nuôi ñã có nh ng thay ñ i ñáng k và góp ph n không nh trong quá trình phát tri n c a ngành Nông nghi p Vi t Nam, góp ph n nâng cao m c s ng cho ngư i dân nông thôn cũng như thành th V i vai trò không nh ñó, ð ng và nhà nư c ta ñã ti p t c ñ u tư và ngày càng quan tâm t i ngành chăn nuôi, nh t là chăn... i vacxin Trong thí nghi m so sánh hi u qu dùng vacxin Lasota b ng phun sương, cho u ng và nh mũi; tác gi nh n th y, phương pháp phung sương có hi u qu hơn nh và u ng, s c mi n d ch ch ng virus cư ng ñ c Newcastle thu ñư c do phương pháp phun sương và nh mũi cao hơn phương pháp u ng (Phan L c và cs, 1996)[20] K t qu nghiên c u b nh Newcastle, vacxin và s d ng vacxin c a các tác gi trong nư c và trên... ho i t , các t bào lympho gi m; ñã phân l p ñư c virus Newcastle t b nh ph m Biswal G, và Morrill C.C (1954)[47], nghiên c u nh hư ng b nh Newcastle ñ n kh năng sinh s n c a gà b ng ch ng 11914 Califonia gây nhi m vào xoang mũi gà mái tơ, th y s n lư ng tr ng b gi m t 2 - 3 tu n, th i gian nh hư ng kéo dài ñ n 56 ngày, 27% gà b nhi m có thoái hoá nh ng nang tr ng, bi u hi n b ngoài nang g gh , nang... Index): Ch s gây b nh khi tiêm não gà con 1 ngày tu i IVPI (Intravenous Pathogenicity Index): Ch s gây b nh khi tiêm tĩnh m ch gà 6 tu n tu i 2.2.1.7 Cơ ch gây b nh Virus có th xâm nh p vào cơ th qua ñư ng tiêu hoá, qua niêm m c h u, h ng vào máu, gây nhi m trùng huy t và gây viêm ho i t n i mô các cơ quan, gây xu t huy t do thành huy t qu n b phá hu và xu t d ch vào các xoang trong cơ th Trư ng ð i h c