Nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lý bệnh của lợn con theo mẹ, lợn sau cai sữa mắc hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản (PRRS), ứng dụng phương pháp hoá mô miễn dịch để chẩn đoán

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI NGUYỄN BÁ PHỤNG “NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ðẶC ðIỂM BỆNH LÝ CỦA LỢN CON THEO MẸ , LỢN SAU CAI SỮA MẮC HỘI CHỨNG RỐI LOẠN HÔ HẤP VÀ SINH SẢN (PRRS), ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP HÓA MÔ MIỄN DỊCH ðỂ CHẨN ðOÁN.” LUẬN VĂN THẠC SI HÀ NỘI - 2013 2 BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI NGUYỄN BÁ PHỤNG “NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ðẶC ðIỂM BỆNH LÝ CỦA LỢN CON THEO MẸ , LỢN SAU CAI SỮA MẮC HỘI CHỨNG RỐI LOẠN HÔ HẤP VÀ SINH SẢN (PRRS), ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP HÓA MÔ MIỄN DỊCH ðỂ CHẨN ðOÁN.” CHUYÊN NGÀNH : THÚ Y Mà SỐ : 60.64.01.01 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS. NGUYỄN THỊ LAN HÀ NỘI - 2013 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan công trình nghiên cứu này là của riêng cá nhân tôi. Các số liệu, kết quả nghiên cứu trong luận văn này mà tôi sử dụng chưa từng ñược công bố trong bất kỳ công trình nghiên cứu nào khác. Tác giả luận văn Nguyễn Bá Phụng Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… ii LỜI CẢM ƠN Trong thời gian thực hiện ñề tài, ngoài sự nỗ lực của bản thân, tôi ñã nhận ñược rất nhiều sự giúp ñỡ, hướng dẫn tận tình của các thầy giáo, cô giáo, các tập thể, cá nhân, bạn bè ñồng nghiệp trong và ngoài trường. Nhân dịp này tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc nhất ñến cô giáo PGS. TS. Nguyễn Thị Lan, người ñã trực tiếp hướng dẫn, tận tình chỉ bảo và tạo mọi ñiều kiện tốt nhất cho tôi trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu khoa học. Tôi xin trân trọng cảm ơn: - Các thầy cô giáo khoa thú y ñặc biệt là các thây cô Bộ môn Bệnh lý, Khoa Thú y, ñã giúp tôi hoàn thành khóa học và nâng cao chất lượng luận văn. - Các cán bộ phòng thí nghiệm Trọng ñiểm công nghệ sinh học khoa Thú Y, phòng thí nghiệm bộ môn bệnh lý Thú Y - Lãnh ñạo và các ñồng nghiệp công ty VEMEDIM Việt Nam nơi tôi công tác ñã tạo ñiều kiện ñể tôi yên tâm học tập và thực hiện luận văn tốt nghiệp. Cuối cùng tôi xin bày tỏ lòng biết ơn ñến những người thân, gia ñình ñã ñộng viên, giúp ñỡ tôi hoàn thành luận văn này. Hà Nội, tháng 9 năm 2013 Tác giả luận văn Nguyễn Bá Phụng Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iii MỤC LỤC LỜI CAM ðOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH vii PHẦN I: MỞ ðẦU 1 1.1. ðẶT VẤN ðỀ 1 1.2. MỤC ðÍCH CỦA ðỀ TÀI 3 PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4 2.1. MỘT SỐ HIỂU BIẾT VỀ BỆNH 4 2.1.1. Lịch sử phát hiện bệnh 4 2.1.2. Cấu trúc của virus 6 2.1.3. Khả năng gây bệnh 9 2.1.4. Sức ñề kháng của virus 9 2.1.5. Cơ chế sinh bệnh và phương thức truyền lây 12 2.1.6. Triệu chứng lâm sàng 13 2.1.7. Bệnh tích 14 2.1.8. Các phương pháp chẩn ñoán 14 2.1.9. Các biện pháp phòng chống dịch 16 2.1.10. Một số chế phẩm vacxin PRRS ñược dùng ñể phòng bệnh hiện nay 17 2.2. TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC VỀ HỘI CHỨNG RỐI LOẠN HÔ HẤP VÀ SINH SẢN Ở LỢN 18 2.2.1. Tình hình nghiên cứu ngoài nước 18 2.2.2. Tình hình nghiên cứu trong nước 19 2.3. MỘT SỐ HIỂU BIẾT CƠ BẢN VỀ HOÁ MÔ MIỄN DỊCH 20 2.3.1. Lịch sử phát triển của kỹ thuật hoá mô miễn dịch 20 2.3.2. Nội dung của kỹ thuật hoá mô miễn dịch 21 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… iv 2.3.3. Ứng dụng của hoá mô miễn dịch trong chẩn ñoán giải phẫu bệnh 24 PHẦN III: ðỐI TƯỢNG - NỘI DUNG - NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 3.1. ðỐI TƯỢNG 25 3.2. NỘI DUNG 25 3.3. NGUYÊN LIỆU 25 3.3.1. Nguyên liệu 25 3.3.2. Dụng cụ, hoá chất 25 3.4. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 3.4.1. Phương pháp quan sát, thống kê 26 3.4.2. Phương pháp mổ khám …………………………………………… 23 3.4.3. Phương pháp làm tiêu bản vi thể 27 3.4.4. Phương pháp nhuộm hoá mô miễn dịch (Immunohistochemistry-IHC) 30 PHẦN IV: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 4.1. Triệu chứng lâm sàng chủ yếu của lợn nghi mắc PRRS 32 4.2. Bệnh tích ñại thể của lợn nghi mắc PRRS 39 4.3. Bệnh tích vi thể của lợn nghi mắc PRRS 44 4.3.1. Bệnh tích vi thể ở phổi của lợn nghi mắc PRRS 44 4.3.2. Bệnh tích vi thể trên một số cơ quan, tổ chức khác của lợn nghi mắc PRRS 46 4.4. Kết quả nhuộm hóa miễn dịch chẩn ñoán lợn mắc PRRS 50 PHẦN V: KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 58 5.1. KẾT LUẬN 58 5.2. TỒN TẠI VÀ ðỀ NGHỊ 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT CPE Cytopathogenic Effect (Bệnh tích tế bào) ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay FBS Fetal Bovine Serum IPMA Immuno - Peroxidase Monolayer Assay IHC Immunohistochemistry PBS Phosphate Buffer Saline PCR Polymerase Chain Reaction PRRS Porcine Reproductive and Resiratory Syndrome PRRSV Porcine Reproductive and Resiratory Syndrome Virus RT - PCR Reverse Transcriptase - Polymerace Chain Reaction VNT Virus Neutralization Test: phản ứng trung hòa virus Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vi DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1. Lịch sử phát hiện bệnh 5 Bảng 2.2. Một số tên thường gặp trong các tài liệu 6 Bảng 2.3. Protein cấu trúc của PRRSV 8 Bảng 3.1. Hệ thống chuyển ñúc mẫu tự ñộng 28 Bảng 4.1. Hồ sơ lợn nghi mắc PRRS dùng cho nghiên cứu 34 Bảng 4.2. Triệu chứng lâm sàng chủ yếu của lợn nghi mắc PRRS 35 Bảng 4.3. Bệnh tích ñại thể chủ yếu của lợn nghi mắc PRRS 42 Bảng 4.4. Bệnh tích vi thể chủ yếu của lợn nghi mắc PRRS 47 Bảng 4.5.Kết quả nhuộm hoá miễn dịch chẩn ñoán lợn mắc PRRS 51 Bảng 4.6. Kết quả nhuộm hoá miễn dịch chẩn ñoán lợn mắc PRRS ở các cơ quan khác nhau 52 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… vii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1. Cấu trúc gen của PRRSV 11 Ảnh 4.1. Lợn bị sưng mí mắt 38 Ảnh 4.2. Lợn bị viêm khớp 38 Ảnh 4.3. Lợn bị tím tai 38 Ảnh 4.4. Lợn bị phát ban 38 Ảnh 4.5. Lợn mệt mỏi, bỏ ăn 38 Ảnh 4.6. Lợn bị viêm kết mạc 38 Ảnh 4.7. Phù kẽ phổi 43 Ảnh 4.8. Phổi sưng to, rìa tù 43 Ảnh 4.9. Hạch lâm ba sưng to 43 Ảnh 4.10. Xoang bao tim tích nước 43 Ảnh 4.11.Thận xuất huyết ñiểm 43 Ảnh 4.12. Ruột già phủ tơ huyết 43 Ảnh 4.13. Phế nang viêm (HEx10) 48 Ảnh 4.14. Thâm nhiễm tế bào viêm, dịch phù ở phế nang (HEx40) 48 Ảnh 4.15. Phổi xuất huyết (HEx10) 48 Ảnh 4.16. Phế nang viêm (HEx40) 48 Ảnh 4.17. Gan xuất huyết (HEx10) 48 Ảnh 4.18. Gan thâm nhiễm tế bào viêm (HEx40) 48 Ảnh 4.19. Hạch lâm ba viêm (HEx10) 49 Ảnh 4.20. Hạch lâm ba viêm, hoại tử (HEx40) 49 Ảnh 4.21. Lách xuất huyết, hoại tử (HEx10) 49 Ảnh 4.22. Lách xuất huyết (HEx40) 49 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… viii Ảnh 4.23. Ruột viêm, lông nhung ruột ñứt nát (HEx10) 49 Ảnh 4.24. Thâm nhiêm tế bào viêm ở ruột (HEx40) 49 Ảnh 4.25. Virus tập trung ở phổi (IHCx10) 56 Ảnh 4.26. Virus tập trung ở phổi (IHCx40) 56 Ảnh 4.27. Virus tập trung ở gan (IHCx10) 56 Ảnh 4.28. Virus tập trung ở gan (IHCx40) 56 Ảnh 4.29. Virus phân bố ở thận (IHCx10) 56 Ảnh 4.30. Virus phân bố ở thận (IHCx40) 56 [...]... ti n hành nghiên c u ñ tài: Nghiên c u m t s ñ c ñi m b nh lý c a l n con theo m , l n sau cai s a m c h i ch ng r i lo n hô h p và sinh s n (PRRS), ng d ng phương pháp hóa mô mi n d ch ñ ch n ñoán” Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 2 1.2 M C ðÍCH C A ð TÀI - Nh m xác ñ nh ñư c tri u ch ng lâm sàng ch y u c a c a l n con theo m , l n sau cai s a m c... 1%-20%, l n con ñ ra ñã ch t ho c ch t y u sau vài gi , m t s trư ng h p thai g T l ñ gi m, không ñ ng d c tr l i và khó có ch a (Murtaugh) *L nñ c S t trong th i gian ng n, b ăn L n hôn mê, có tri u ch ng lâm sàng ñư ng hô h p L n không còn sinh l c và ch t lư ng tinh trùng kém *L n con theo m H u như l n con sinh ra ch t trong vòng vài gi , s s ng sót ti p t c ch t vào tu n th nh t sau khi sinh, m t... 7-14 ngày sau khi l n nhi m virus Hàm lư ng kháng th ñ t m c t i ña vào ngày 30-50 sau khi nhi m, sau ñó gi m d n và không phát hi n ñư c n a vào kho ng 4-6 tháng sau khi nhi m + Phân l p virus trên m t s t bào: t bào ph nang c a l n, t bào MA- 104, CL 2621, CRL-17171 + Phương pháp b nh lý mi n d ch + Phương pháp huỳnh quang gián ti p phát hi n kháng nguyên + Phương pháp nhân gen (PCR) + Phương pháp lai... nguyên b nh, ñ c tính sinh lý, sinh hoá c a virus, cơ ch sinh b nh, phương th c truy n lây, tri u ch ng lâm sàng, b nh tích, các phương pháp ch n ñoán và các bi n pháp phòng ch ng H i ch ng r i lo n hô h p và sinh s n l n Wensvoort và cs ñã nghiên c u ph n ng mi n d ch g n enzyme trên t bào ñơn l p là test huy t thanh h c ñ u tiên ñư c phát tri n và s d ng r ng rãi Châu Âu Pol và cs nghiên c u cho th y r... nâu vàng M c dù nguyên lý c a ph n ng ñơn gi n nhưng phương pháp hoá mô mi n d ch ñã tr nên ph c t p hơn b i tính ch t ch , ñ nh y và ñ c trưng c a ph n ng Hoá mô mi n d ch ñư c thi t l p như m t phương pháp ñáng tin c y và chính xác cho c ho t ñ ng ch n ñoán và nghiên c u thu c thú y Trong nh ng năm g n ñây hóa mô mi n d ch ñư c s d ng trong các phòng xét nghi m gi i ph u b nh như là m t phương pháp. .. sau: - Nghiên c u m t s bi u hi n tri u ch ng lâm sàng ch y u c a l n m c PRRS - Nghiên c u bi n ñ i b nh lý ñ i th ch y u m t s cơ quan c a l n m c PRRS - Nghiên c u bi n ñ i b nh lý vi th ch y u m t s cơ quan c a l n m c PRRS - Ch n ñoán virus PRRS b ng phương pháp hoá mô mi n d ch 3.3 NGUYÊN LI U 3.3.1 Nguyên li u -L n 2 nhóm tu i: l n con theo m , l n sau cai s a m c H i ch ng r i lo n hô h p và. .. trong m t c t mô ñã m ñ u cho k thu t hoá mô mi n d ch T ñó, hoá mô mi n d ch tr thành công c có giá tr trong ch n ñoán và nghiên c u cơ ch lây nhi m và hình thành b nh c a m t s loài ñ ng v t Các khái ni m cơ b n liên quan ñ n hoá mô mi n d ch là s bi u hi n kháng nguyên trong m t c t các mô b i các kháng th ñ c trưng S k t h p gi a kháng nguyên và kháng th , ñư c th hi n b ng ph n ng màu mô hoá h c có... Thành) 2.1.8 Các phương pháp ch n ñoán Nghiên c u phương pháp ch n ñoán H i ch ng r i lo n hô h p và sinh s n l n nhi u tác gi cho r ng PRRS có th ch n ñoán ñư c b ng hai phương pháp cơ b n ñó là ch n ñoán lâm sàng và ch n ñoán trong phòng thí nghi m Tuy nhiên, trên th c t ñ ñ m b o ñ chính xác cao, vi c ph i h p c hai phương pháp là c n thi t 2.1.8.1 Ch n ñoán lâm sàng Ch n ñoán lâm sàng d a vào hai nhóm... ngay sau khi sinh - B nh ph m tươi: phát hi n virus b ng phương pháp RT - PCR, phân l p virus trên môi trư ng t bào Marc 145 - M u c ñ nh b ng dung d ch focmol 10%: nghiên c u bi n ñ i b nh lý và hoá mi n d ch - Máu: l y máu l n trong ñàn, k c t l n ch t, ch t l y huy t thanh M u huy t thanh ñư c s d ng trong xét nghi m huy t thanh h c * Phương pháp - Nghiên c u bi n ñ i b nh tích ñ i th , vi th và hoá. .. th dương tính) và 85,71% (s tr i và h chăn nuôi l n có m u huy t thanh dương tính) Bùi Quang Anh và cs nghiên c u v m t s ñ c ñi m d ch t c a H i ch ng r i lo n hô h p và sinh s n t i m t s tr i l n Vi t Nam ñã ñi ñ n k t lu n: l n nái và l n con theo m b m c PRRS v i t l cao T l ch t c a các lo i l n m c PRRS cao hơn so v i nh ng nghiên c u, ñánh giá c a qu c t v PRRS Theo Ph m S Lăng và cs, m t s b . hành nghiên cứu ñề tài: Nghiên cứu một số ñặc ñiểm bệnh lý của lợn con theo mẹ , lợn sau cai sữa mắc hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản (PRRS), ứng dụng phương pháp hóa mô miễn dịch ñể chẩn. PHỤNG “NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ðẶC ðIỂM BỆNH LÝ CỦA LỢN CON THEO MẸ , LỢN SAU CAI SỮA MẮC HỘI CHỨNG RỐI LOẠN HÔ HẤP VÀ SINH SẢN (PRRS), ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP HÓA MÔ MIỄN DỊCH ðỂ CHẨN ðOÁN.”. Tai một số lợn có màu xanh Hội chứng hô hấp và sinh sản ở lợn Swine infertility and respiratory syndrome (SIRS) Vô sinh và sảy thai ở lợn nái Hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn