mắc PRRS
* Bệnh tắch trên lách:
Lách sung huyết, thoái hoá, hoại tử. đôi khi lách có hiện tượng nhồi huyết rõ rệt. Trên tiêu bản lách, tuỷ trắng teo lại, vách ựứt nát, các tế bào thoái hoá xen kẽ với các tế bào lành.
* Bệnh tắch trên gan:
Gan có vị trắ xung yếu và có chức năng rất phức tạp nên rất dễ bị tổn thương, diễn biến quá trình bệnh lý của gan phụ thuộc vào thời gian các tác nhân gây bệnh tấn công vào cơ thể. Ở tiêu bản gan của lợn bị mắc PRRS chúng tôi quan sát thấy thâm nhiễm nhiều tế bào viêm ở quãng cửạ Các tế bào gan bị thoái hoá không bào, thoái hoá mỡ. Gan bị xuất huyết nặng, vẫn nhìn thấy rõ quãng cửạ
* Bệnh tắch trên thận:
Ở thận chủ yếu thấy cầu thận bị viêm chứa nhiều dịch rỉ viêm, ngoài những biến ựổi bệnh lý như thâm nhiễm tế bào viêm, tế bào thận bị thoái hoá, hoại tử còn có những biến ựổi ở kẽ thận như xuất huyết tập trung nhiều hồng cầu và các lymphocyte, monocyte, tế bào ống thận teo nhỏ, lòng ống rộng, có trụ trongẦnếu quá trình viêm kéo dài sẽ tăng sinh nhiều fibroblast. Ở các vùng lành có hoạt ựộng bù, mạch quản giãn rộng, phân nhiều nhánh.
* Bệnh tắch trên hạch lâm ba:
Quan sát bệnh tắch hạch lâm ba chúng tôi thấy ựa số các hạch lâm ba ựều sung huyết, xuất huyết vùng rìa hạch, suy giảm các tế bào lymphọ
* Bệnh tắch trên ruột:
Trên tiêu bản vi thể ruột thấy lớp lông nhung ruột nhăn nheo, ựứt nát, lớp niêm mạc ruột bong tróc nhiều, ựặc biệt ở ruột của nhóm lợn con theo mẹ có nhiều vùng bị xuất huyết, hoại tử, các túi tuyến và lớp cơ bị biến dạng.
47 Bảng 4.4. Bệnh tắch vi thể chủ yếu của lợn nghi mắc PRRS Cơ quan STT Nhóm lợn Phổi Hạch lâm ba Ruột Thận Các cơ quan khác 1 Lợn con theo mẹ (n=15) - Sung huyết. - Có nhiều dịch rỉ viêm trong lòng phế quản. - Phế quản phế viêm. - Sung huyết. - Xuất huyết.
- Thâm nhiễm tế bào viêm
- Nhiều vùng bị xuất huyết, hoại tử.
- Thâm nhiễm tế bào viêm, tế bào thận bị thoái hoá, hoại tử.
- Kẽ thận xuất huyết, tập trung nhiều hồng cầu , bạch cầụ
- Não sung huyết. - Gan: thâm nhiễm tế bào viêm quãng cửạ
2
Lợn sau cai sữa (n=15)
- Sung huyết, xuất huyết. - Viêm phổi thuỳ.
- Thâm nhiễm dịch rỉ viêm, tế bào viêm ở kẽ phổị
- Số lượng lâm ba cầu giảm.
- Xuất huyết, nang lâm ba teọ - Lông nhung ruột ựứt nát. - Xuất huyết. - Cầu thận viêm, chứa dịch rỉ viêm. Ở các vùng lành có hoạt ựộng bù, mạch quản giãn rộng, phân nhánh nhiềụ - Lách sung huyết, thoái hoá. - Gan tụ huyết.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ 48
MỘT SỐ HÌNH ẢNH MINH HỌA BỆNH TÍCH VI THỂ CỦA LỢN NGHI MẮC PRRS
Ảnh 4.13. Phế nang viêm (HEx10) Ảnh 4.14. Thâm nhiễm tế bào viêm, dịch phù ở phế nang (HEx40)
Ảnh 4.15. Phổi xuất huyết (HEx10) Ảnh 4.16. Phế nang viêm (HEx40)
Ảnh 4.17. Gan xuất huyết (HEx10) Ảnh4.18. Gan thâm nhiễm tế bào viêm (HEx40)
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ 49 Ảnh 4.19. Hạch lâm ba viêm (HEx10) Ảnh 4.20. Hạch lâm ba viêm, hoại tử (HEx40) Ảnh 4.21. Lách xuất huyết, hoại tử (HEx10) Ảnh 4.22. Lách xuất huyết (HEx40)
Ảnh 4.23. Ruột viêm, lông nhung ruột ựứt nát (HEx10)
Ảnh 4.24. Thâm nhiêm tế bào viêm
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ 50
4.4. Kết quả nhuộm hóa miễn dịch (IHC) chẩn ựoán lợn mắc PRRS
Sau khi quan sát các biến ựổi bệnh lý ựại thể, vi thể trên một số cơ quan, tổ chức của lợn nghi mắc PRRS, chúng tôi lấy mẫu bệnh phẩm của 30 con lợn ựã sử dụng ựể nghiên cứu biến ựổi ựại thể, vi thể ở trên ựể làm tiêu bản nhuộm hóa miễn dịch, ựồng thời chúng tôi tiến hành so sánh kết quả chẩn ựoán của phương pháp này với kết quả chẩn ựoán của phương pháp RT-PCR. Kết quả ựược chúng tôi trình bày ở bảng 4.5. Từ bảng kết quả cho thấy trong 30 lợn nghi mắc PRRS mà chúng tôi nghiên cứu thì có 29 con ựược chẩn ựoán là dương tắnh với virus PRRS bằng kỹ thuật hóa mô miễn dịch.Theo Boenisch, khi có mặt của virus trong tổ chức ựem làm hóa miễn dịch sẽ cho kết quả dương tắnh với sự xuất hiện màu nâu vàng trên lát cắt tổ chức (màu của DAB). Như vậy, dựa vào sự xuất hiện màu nâu vàng của tiêu bản chúng tôi có thể xác ựịnh ựược sự có mặt của kháng nguyên virus PRRS trong mẫu chẩn ựoán. So sánh kết quả chẩn ựoán virus PRRS bằng kỹ thuật RT-PCR chúng tôi thấy rằng hai phương pháp chẩn ựoán này có ựộ chắnh xác tương ựương nhaụ
51
Bảng 4.5.Kết quả nhuộm hoá miễn dịch chẩn ựoán lợn mắc PRRS
Phương pháp IHC Phương pháp RT-PCR
STT Nhóm lợn Số con chẩn ựoán Số con dương tắnh Tỉ lệ (%) Số con chẩn ựoán Số con dương tắnh Tỉ lệ (%) 1 Lợn con theo mẹ 15 15 100 15 15 100 2 Lợn sau cai sữa 15 14 93,3 15 14 93,3
52
Bảng 4.6. Kết quả nhuộm hoá miễn dịch chẩn ựoán lợn mắc PRRS ở các cơ quan khác nhau
Lợn con theo mẹ Lợn sau cai sữa
Lợn 1 Lợn 2 Lợn 1 Lợn 2
Nhóm lợn
Cơ quan
Block 1 Block 2 Block 1 Block 2 Block 1 Block 2 Block 1 Block 2
Phổi +++ +++ ++ ++ +++ +++ ++ ++ Hạch phổi +++ +++ ++ ++ +++ +++ ++ ++ Lách ++ ++ + + + + + + Gan ++ + + + + + - + Thận + ++ + + + + + + Ruột ++ ++ + + - + + + Não + + + - + + + + Tim + + - - + + + +
Ghi chú: + đám, hạt bắt màu nâu vàng ắt +++ đám, hạt bắt màu nâu vàng nhiều ++ đám, hạt bắt màu nâu vàng trung bình - Không có ựám, hạt bắt màu nâu vàng
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ 53 để nghiên cứu hoàn thiện hơn sau khi chẩn ựoán 29 lợn dương tắnh với virus PRRS bằng kỹ thuật hóa mô miễn dịch chúng tôi lựa chọn 4 lợn dương tắnh ở 2 nhóm nghiêm cứu (mỗi nhóm 2 con, mỗi con lựa chon 2 block bệnh phẩm của mỗi cơ quan) tiến hành nhuộm hóa mô miễn dịch ở tất cả các cơ quan ựể nghiên cứu sự phân bố của virus ở các cơ quan khác nhau ựồng thời ựịnh hướng cho các nghiên cứu sau lựa chọn ựược mẫu cơ quan thắch hợp nhất cho chẩn ựoán.
Với mỗi lô hóa miễn dịch chúng tôi cũng có ựối chứng dương (lát cắt tổ chức của lợn mắc PRRS) và ựối chứng âm (lát cắt tổ chức của lợn không mắc PRRS) ựể ựối chiếụ Sau khi làm hóa miễn dịch các cơ quan chúng tôi nhận thấy mức ựộ dương tắnh ở tiêu bản phổi và hạch lâm ba là hơn hẳn so với các tiêu bản ở các cơ quan khác.
Quan sát tiêu bản hóa miễn dịch qua kắnh hiển vi chúng tôi nhận thấy:
Ở phổi, kháng nguyên virus tập trung nhiều nhất là trong ựại thực bào vùng phổi, tế bào biểu mô vách phế nang, phế quản. điều này lý giải các biến ựổi bệnh lý vi thể ựặc trưng ở vùng phổi: viêm kẽ phổi lan toả với sự dày lên và tăng sinh của biểu mô vách phế nang. Theo chúng tôi, có thể là do phổi là cơ quan tiếp xúc với mầm bệnh sớm nhất, số lượng nhiều nhất (ựiều này liên quan tới ựường xâm nhập của virus vào cơ thể qua ựường hô hấp tới phổi) ựồng thời virus có ái lực cao với ựại thực bào ựặc biệt là ựại thực bào phế nang vì vậy mà virus cư trú nhiều ở phổị
Tại hạch lâm ba: virus phân bố lan tràn trên toàn bộ tổ chức hạch lâm bạ Virus nằm trong tế bào bạch cầu, lâm ba cầu, tế bào lymphocytẹ Virus tấn công làm cho nang lâm ba bị teo và giảm bớt.
Tại ruột: virus tập trung chủ yếu ở tế bào biểu mô ruột, các tuyến ruột cũng có nhiều virus, những chỗ lông rung bị ựứt nát virus tập trung nhiềụ
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ 54 Ngoài ra, virus còn tập trung ở lớp cơ vòng, cơ dọc. Virus tấn công làm hoại tử tế bào biểu mô ruột và tăng sinh nang lympho, lông nhung bị ựứt nát.
Tại lách: virus phân bố rải rác, nằm trong lympho bàọ Tại gan: virus cư trú và nhân lên trong các tế bào Kupfer.
Tại thận, virus nằm trong cầu thận. Do virus tấn công làm cho cầu thận bị viêm, nang Baoman giãn rộng.
Ở tim, cơ tim bị thoái hoá, nhão hơn bình thường, viêm ngoại tâm mạc. Virus nằm trong các tế bào cơ tim.
Kháng nguyên PRRSV trên tổ chức não của lợn phân bố nhiều nơi, không tập trung ở một chỗ nàọ Khi nhuộm hoá miễn dịch chúng tôi thấy não là tổ chức thường cho kết quả dương tắnh nhẹ nhất.
Như vậy, virus tấn công vào các tế bào thực bào tại các cơ quan, gây suy giảm miễn dịch và mở ựường cho virus và vi khuẩn khác tấn công làm cho triệu chứng, bệnh tắch của lợn thêm trầm trọng.
Chúng tôi ựánh giá mức ựộ dương tắnh của tiêu bản hóa miễn dịch chủ yếu dựa trên cảm quan bằng mắt. Nó biểu hiện ở số lượng các hạt, ựám bắt màu nâu vàng. Màu nâu vàng càng nhiều, rõ thì mức ựộ dương tắnh càng caọ Nơi hóa miễn dịch dương tắnh rõ chắnh là nơi tập trung nhiều virus.
Phổi và hạch lâm ba phổi là hai cơ quan có tiêu bản bắt màu hóa miễn dịch nhiều nhất do ựó lượng virus tồn tại ở 2 cơ quan này là cao nhất. điều này có thể giải thắch là do PRRSV thắch ứng nhất với các ựại thực bào phế nang nên sau khi xâm nhập vào cơ thể nó ựến tấn công ựầu tiên vào các ựại thực bào này sau ựó mới tấn công ựến các ựại thực bào ở các cơ quan khác.
đa số các tiêu bản có kết quả IHC ở block 1, 2 của cùng 1 con lợn là giống nhaụ Ngoài ra chúng tôi còn quan sát thấy sự khác biệt về kết quả IHC ở trên cùng một cơ quan nhưng cắt và ựúc block tại hai vị trắ khác nhaụ Ở lợn con theo mẹ 1, tiêu bản gan block 1 có IHC (++), block 2 có IHC (+). Còn
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ 55 trên tiêu bản thận, block 1 có IHC (+) tiêu bản block 2 có IHC (++). Ở lợn sau cai sữa, trên tiêu bản ruột, block 1(-), tiêu bản block 2 (+). Ở lợn sau cai sữa 2, trên tiêu bản gan bock 1 có IHC (-), bock 2 có IHC (+). điều này cho thấy virus tồn tại với số lượng khác nhau ở từng vùng. Nếu theo dõi ựược từng thời ựiểm virus tấn công vào các cơ quan thì ta có thể ựưa ra ựược cơ chế sinh bệnh cụ thể của PRRSV. Nó sẽ có ý nghĩa rất quan trọng trong sản xuất và sử dụng thuốc phòng chống PRRS do ta biết ựược vị trắ virus tấn công tại thời ựiểm ựó ựể tập trung thuốc vào cơ quan, tổ chức có virus nhằm hạn chế sự nhiễm khuẩn kế phát.
Kết quả IHC của lợn 1 và 2 trong cùng một nhóm lợn có sự khác nhau do mức ựộ biểu hiện bệnh của các con lợn này không ựồng ựềụ điều này có thể giải thắch là do các cá thể có sức ựề kháng với bệnh và ựiều kiện ngoại cảnh khác nhau cho nên mức ựộ trầm trọng của bệnh là khác nhaụ Mặt khác, do các con lợn này ựược chúng tôi lấy ở 3 trại có chế ựộ chăm sóc nuôi dưỡng, vệ sinh chuồng trại, khả năng và ựiều kiện tiếp xúc với mầm bệnh của lợn không tương ựồng. Mức ựộ biểu hiện bệnh nặng hay nhẹ còn phụ thuộc vào số lượng, ựộc lực của các chủng virus, ựường xâm nhập và thời gian virus xâm nhập vào cơ thể lợn.
Từ kết quả trên chúng tôi cho rằng khi làm hóa miễn dịch ựể chẩn ựoán lợn mắc PRRS chúng ta nên chọn phổi, hạch lâm ba ựặc biệt là hạch lâm ba phổị Ngoài ra, ruột khi làm hóa miễn dịch cũng có giá trị chẩn ựoán. Tất cả những kết quả nghiên cứu của chúng tôi phù hợp với kết quả nghiên cứu của Pol và cs; Hennings và cs.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ 56
MỘT SỐ HÌNH ẢNH MINH HỌA KẾT QUẢ NHUỘM HÓA MIÊN DỊCH CHẨN đOÁN PRRS
Ảnh 4.25. Virus tập trung ở phổi (IHCx10)
Ảnh 4.26. Virus tập trung ở phổi (IHCx40)
Ảnh 4.27. Virus tập trung ở gan (IHCx10)
Ảnh 4.28. Virus tập trung ở gan (IHCx40)
Ảnh 4.29. Virus phân bốở thận (IHCx10)
Ảnh 4.30. Virus phân bốở thận (IHCx40)
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ 58
PHẦN V
KẾT LUẬN VÀ đỀ NGHỊ 5.1.-KẾT LUẬN
Qua kết quả nghiên cứu của ựề tài chúng tôi rút ra một số kết luận sau: - Triệu chứng lâm sàng chủ yếu của lợn con theo mẹ, lợn sau cai sữa mắc PRRS là các rối loạn về hô hấp như: sốt, mệt mỏi, có rử mắt, thở khó, chảy nước mũi, khàn giọng, ho, tai và mõm tắm. Tuy nhiên tần suất xuất hiện các triệu chứng này ở 2 nhóm lợn là khác nhaụ
- Về biến ựổi bệnh tắch ựại thể và vi thể:
+ Về biến ựổi bệnh tắch ựại thể: phổi bị viêm hoại tử, các ựám phổi chắc ựặc lại và thuỳ phổi bị bệnh có màu xám ựỏ. Phổi bị sung huyết, xuất huyết, trong lòng phế quản có chứa nhiều dịch rỉ viêm, ở các cơ quan khác biểu hiện ắt hơn như gan sưng, tim nhão, thận xuất huyết ựiểm, lách nhồi huyết, xuất huyết.
+ Về biến ựổi bệnh tắch vi thể: phổi xuất huyết rõ, lòng phế quản, phế nang và kẽ phổi chứa ựầy hồng cầu màu ựỏ tươi; trong phế nang chứa ựầy dịch viêm và ựại thực bào, hình thành tế bào khổng lồ nhiều nhân. Một bệnh tắch ựặc trưng nữa là vách phế nang nhăn lại do sự thâm nhiễm của tế bào phế nang loại II (Pneumocyte), thường thấy ựại thực bào bị phân huỷ trong phế nang.
- Dùng phương pháp hóa mô miễn dịch ựã xác ựịnh ựược các lợn nghiên cứu mắc PRRS và virus tập trung tại phổi và hạch phổi là nhiều nhất. Các cơ quan khác như: tim, gan, thận, ruột... virus phân bố ắt hơn.
5.2. TỒN TẠI VÀ đỀ NGHỊ
Do thời gian thực tập ngắn, chúng tôi chỉ mới tiến hành nghiên cứu PRRS trên hai nhóm lợn. Chúng tôi ựề nghị ựề tài tiếp tục ựược nghiên cứu trên nhiều lứa tuổi hơn ựể xác ựịnh ựược những biến ựổi bệnh lý ựại thể, vi thể một cách toàn diện.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ 59
TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT
1. Bộ Nông nghiệp và Phát triển Nông thôn (2007), Hướng dẫn phòng chống Hội chứng Rối loạn hô hấp và sinh sản ở lợn (PRRS).
2. Cục Thú y (2007), Quy ựịnh về việc phòng chống Hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn (PRRS-bệnh tai xanh).
3. Cục Thú y (2007), Báo cáo tại Hội thảo khoa học phòng chống Hội chứng Rối loạn hô hấp và sinh sản ở lợn, ngày 21 tháng 5 năm 2008, Hà Nộị
4. Nguyễn Bá Hiên, Huỳnh Thị Mỹ Lệ (2007), ỘMột số hiểu biết về virus gây hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản của lợnỢ, Hội thảo Hội chứng rối loạn hô hấp- sinh sản và bệnh liên cầu khuẩn ở lợn, ngày
11/10/2007, đH Nông Nghiệp Hà Nộị
5. Nguyễn Ngọc Hải, Trần Thị Bắch Liên, Trần Thị Dân, Nguyễn Ngọc Tân (2007),