- Dụng cụ:
Mỏy ly tõm TH - 12, ống ly tõm, thước ủọc kết quả, sỏp ong bịt ống ly tõm.
- Cỏch làm:
Lấy mỏu chống ủụng vào ống Hematocrit cho ủầy ống sao cho khụng cú lẫn bọt khớ ở trong, bịt kớn một ủầu ống bằng sỏp ong khoảng 1 - 2mm ủem
ủặt vào mỏy ly tõm sao cho ủối xứng nhau (ủặt cỏc ủầu bịt sỏp ong hướng ra ngoài), ly tõm với vận tốc 3000 vũng /phỳt trong vũng 10 - 15 phỳt. Sau ủú lấy ra ủem so trờn thước ủểủọc kết quả.
- đơn vị tớnh: %.
- Thể tớch bỡnh quõn hồng cầu: ủược tớnh theo cụng thức sau:
Tỷ khối hồng cầu (%) Vtb =
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệpẦẦẦ 40
- Lượng huyết sắc tố (Hemoglobin) bỡnh quõn hồng cầu: (LHbBQ)
Biểu thị lượng huyết sắc tố trong mỗi hồng cầu, ủược tớnh theo cụng thức: Hb (%) x 10
LHbBQ =
Số lượng hồng cầu (triệu/mm3) Pg Nồng ủộ huyết sắc tố bỡnh quõn hồng cầu: (NđHbBQ)
Biểu thị tỷ lệ % huyết sắc tố chứa trong 100ml hồng cầu hoặc tỷ lệ % huyết sắc tố so với thể tớch mỗi hồng cầu
Hb (%) x 100 NđHbBQ =
Tỷ khối hồng cầu (%) (%)
- Cụng thức bạch cầu theo phương phỏp Macgregor trờn tiờu bản mỏu nhuộm giemsa.
3.5.7. Phương phỏp chẩn ủoỏn Huyết thanh học: HA. HI
- Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà hay phản ứng HI (Haemagglutinaion Inhibition Test).
+ Chuẩn bị: huyết thanh Newcastle. Nước trứng chứa virus ở hiệu giỏ HA là 4 HA. Hồng cầu gà 1 %.
+ Chuẩn bị khay nhựa cú 96 giếng ủỏy trũn với cỏc dụng cụ chuyờn dựng nhưống hỳt cú ủịnh khối lượng và que trộn.
+ Dựng 8 giếng thớ nghiệm và 1 giếng ủối chứng dương và 1 giếng ủối chứng õm.
+ Cho huyết thanh Newcastle vào mỗi giếng một lượng là 0,25ml, nhưng ở
cỏc hiệu giỏ pha loóng khỏc nhau lần lượt từ giếng 1 ủến giếng 8 là 1/10, 1/20, 1/40, 1/160, 1/320, 1/640, 1/1280.
+ Cho vào tất cả 8 giếng thớ nghiệm mỗi giếng 0,25ml nước trứng cú chứa virus ở hiệu giỏ là 4 ủơn vị ngưng kết hồng cầu.
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệpẦẦẦ 41
Lắc ủều ủể cho virus và huyết thanh trộn lẫn vào nhau, ủể yờn 5 Ờ 10 phỳt. + Cho vào tất 8 giếng 0,5ml hồng cầu gà 1%
Ở giếng ủối chứng dương cho 0,25ml nước trứng; 0,5ml hồng cầu và 0,25ml nước sinh lý.
Ở giếng ủối chứng õm cho 0,5ml hồng cầu gà 1% và 0,5ml nước sinh lý. Tất cả cỏc giếng thớ nghiệm ủều cú thể tớch là 1ml.
Lắc ủều tất cả cỏc giếng và ủể yờn trong vũng 15 Ờ 20 phỳt rồi ủọc kết quả.
+ đọc kết quả: Phản ứng dương tớnh là hồng cầu ngưng kết thành cừng hạt lấm tấm màu ủỏ (quầng ủỏ rạn nứt dưới ủỏy ống nghiệm).
3.5.8. Phương phỏp nhuộm hoỏ mụ miễn dịch (Immunohistochemistry-IHC)
Phương phỏp nhuộm hoỏ mụ miễn dịch (IHC) cú quy trỡnh tẩm ủỳc bằng parafin giống phương phỏp làm tiờu bản vi thể.
* Cỏc bước nhuộm:
Bước 1: Làm sạch tiờu bản
Khử parafin, khử xylen, khử cồn giống phương phỏp làm tiờu bản vi thể. Sau khi cho chảy dưới vũi nước rửa lại tiờu bản bằng nước cất.
Bước 2: Hoạt hoỏ enzym
Ngõm ngập tiờu bản trong dung dịch PBS và hấp ướt ở 1210C/5 phỳt.
Bước 3: Khử peroxydase nội sinh
Dựng H2O2 trong dung mụi Methanol (1H2O2 30%:9Methanol). Ngõm tiờu bản trong 10 phỳt.
Bước 4: Gắn khỏng thể (KT)
Nhỏ 105 àl KT khỏng ND chuẩn lờn tiờu bản, cho tiờu bản vào khay
ủựng giấy thấm cú PBS.
để tủấm 370C/1h hoặc 40C/qua ủờm.
Rửa tiờu bản bằng dung dịch PBS 3 lần (5 phỳt/lần).
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệpẦẦẦ 42
Nhỏ 3 giọt = 105 àl khỏng khỏng thể lờn tiờu bản, cho tiờu bản vào khay ủựng giấy thấm cú PBS.
để tủấm 370C/30 phỳt - 1h. Rửa PBS 3 lần (5phỳt/lần).
Bước 6: Cho cơ chất
Nhỏ 3 Ờ 4 giọt dung dịch DAB lờn tiờu bản trong khoảng 1 phỳt. Quan sỏt sự chuyển biến màu sắc và ủọc kết quả.
Rửa tiờu bản bằng nước trong 2 Ờ 3 phỳt
Bước 7: Nhuộm nhõn tế bào bằng Hematoxylin (trong 20 giõy), làm sạch tiờu bản bằng cồn và xylen. Cồn 700: 1 lần; Cồn 800: 1 lần; Cồn 900: 2 lần; Cồn 950: 2 lần; Cồn 1000: 2 lần; Xylen: 3 lần
Gắn Baume canada: Nhỏ một giọt Baume canada lờn lamen rồi gắn nhanh lờn tiờu bản khi vẫn cũn xylen trờn tiờu bản. Kiểm tra tiờu bản trờn kớnh hiển vi quang học.
3.5.9. Phương phỏp xử lý số liệu
Sau khi thu thập số liệu, tổng kết sơ bộ ủược xử lý bằng phương phỏp thống kờ sinh học với cỏc tham số và sử dụng chương trỡnh Excel trờn mỏy vi tớnh.: - Số trung bỡnh: X = n xi ∑ - độ lệch chuẩn: Sx = 1 ) ( − − ∑ n x xi - Sai số của số trung bỡnh 30 n 1 mx ≥ − ổ = n S ; n S ổ = mx n = 30
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệpẦẦẦ 43
PHẦN IV
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1. KẾT QUẢ KHẢO SÁT TRIỆU CHỨNG, BỆNH TÍCH đẠI THỂ CỦA BỆNH NEWCASTLE Ở GÀ ISA BROWN (20 Ờ 22 TUẦN TUỔI) NEWCASTLE Ở GÀ ISA BROWN (20 Ờ 22 TUẦN TUỔI)
4.1.1 Kết quả khảo sỏt triệu chứng lõm sàng gà mắc bệnh Newcastle.
Quan sỏt trờn 348 gà mắc bệnh Newcastle ở cỏc ủàn gà từ 20 ủến 22 tuần tuổi chỳng tụi thấy:
Dấu hiệu ủầu tiờn là cỏc triệu chứng: ủ rũ, mệt mỏi vỡ con vật thường sốt cao, gà thường ủứng tập trung một chỗ ủể giữ nhiệt ủộ cho nhau. Gà xự lụng, cỏnh só, lụng xơ xỏc giống khoỏc ỏo tơi.
Trờn nền chuồng quan sỏt thấy cú một số ủống phõn trắng, phõn xanh, loóng cú nhiều nước, cú bọt.
Khi bắt từng gà lờn, sờ vào diều cảm thấy giống như sờ vào tỳi bột nhóo, phớa trờn của diều tớch hơi do thức ăn khụng tiờu thối rữa lờn men.
Cầm hai chõn gà dốc ngược miệng xuống dưới thấy từ miệng chảy ra một thứ nước nhớt, chua, khắm.
Những gà ốm lõu thường cú dấu hiệu thần kinh. Gà ủi ủứng khụng vững, ủi loạng choạng, xiờu vẹo, ủi vũng trũn, mắt Ộngưỡng thiờnỢ, gà mổ
khụng trỳng thức ănẦ
Tổng hợp kết quả quan sỏt triệu chứng lõm sàng của gà bệnh ủược trỡnh bày ở bảng 4.1
Qua bảng 4.1 cho thấy kết quả theo dừi cỏc triệu chứng ban ủầu của gà bệnh như ủ rũ, só cỏnh; gà bỏ ăn, uống nhiều nước; mào tớch thõm tớm, chõn lạnh, khụ chõn, sốt cao, gà ỉa chảy phõn trắng, phõn xanh, chảy nước nhớt ở
miệng và gà mỏi ngừng ủẻở số gà mà chỳng tụi quan sỏt ủều chiếm tỷ lệ cao từ 71 Ờ 96,8%.
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệpẦẦẦ 44
Bảng 4.1. Kết quả nghiờn cứu triệu chứng lõm sàng của bệnh Newcastle ở
gà mắc bệnh tự nhiờn
STT Chỉ tiờu nghiờn cứu Số con
quan sỏt triệu chứngSố con cú Tỷ lệ (%)
1 Ủ rũ, só cỏnh 348 272 78,2 2 Uống nước nhiều 348 256 73,6 2 Bỏăn 348 247 71,0 3 Mào, tớch thõm tớm 348 337 96,8 4 Chất nhày chảy ở mũi miệng 348 311 89,4 5 Khú thở 348 225 64,7 6 Ỉa chảy, phõn trắng xanh 348 324 93,1 7 Triệu chứng thần kinh 348 251 72,1 8 Loột miệng 348 166 47,7 9 Viờm mớ mắt 348 226 64,9 10 Sốt cao 348 319 91,7 11 Chõn lạnh, khụ chõn 348 328 94,3 12 Gà mỏi ngừng ủẻ 94 68 72,3 13 Gà giảm trọng lượng, xỏc gầy 348 283 81,3
Theo Bựi Quang Anh, Hoàng Văn Năm (2004) [1], Cỏc triệu chứng này rất khú phõn biệt với bệnh cỳm gia cầm, triệu chứng ủiển hỡnh của bệnh Cỳm gia cầm truyền nhiễm cao là: mào tớm tỏi, gà ủứng tụm với nhau, lụng xự, gà mỏi giảm ủẻ.
Tiếp ủến là cỏc triệu chứng khú thở chiếm 64,7%, triệu chứng thần kinh xuất hiện ở gà bệnh chiếm 72,1%. Hiện tượng gà bị loột miệng qua theo dừi chiếm 47,7%. Cựng với triệu chứng giảm trọng lượng và khụ chõn, thường thấy ở cỏc ổ dịch kộo dài. Theo chỳng tụi, do ủàn gà của cỏc trang trại nuụi tập trung ủều cú sử dụng vaccin phũng bệnh Newcastle nờn trong mỏu gà cú
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệpẦẦẦ 45
khỏng thể chống bệnh. Tuy nhiờn do trỡnh ủộ của người chăn nuụi cũn hạn chế nờn cú nhiều sai sút khi dựng vaccin, hàm lượng khỏng thể sinh ra khụng
ủủ bảo hộ nờn ủàn gà vẫn bị bệnh. Tuy nhiờn thể bệnh này khụng gõy chết ồ ạt mà bệnh diễn ra õm thầm dai dẳng, dễ dẫn ủến sai lầm trong chẩn ủoỏn.
đõy là thể bệnh khỏ phổ biến trong cỏc ủàn gà hiện nay.
Cỏc biểu hiện về triệu chứng giỳp chỳng tụi trong quỏ trỡnh chẩn ủoỏn chớnh xỏc hơn về bệnh Newcastle. Cỏc triệu chứng này cú thể xuất hiện trờn cựng một gà bệnh hoặc cũng cú khi trờn gà bệnh chỉ xuất hiện một số triệu chứng trong số cỏc triệu chứng trờn.
Ở gà ủẻ cỏc triệu chứng thường khụng ủiển hỡnh như ở gà thịt. Tuy nhiờn ở ủàn gà bố mẹ, chỳng tụi quan sỏt thấy cú những triệu chứng ủiển hỡnh và khụng ủiển hỡnh của bệnh Newcastle, biểu hiện của thể hụ hấp như ho hen
ủột ngột sau ủú lan ra cảủàn, ủõy là những triệu chứng giống với bệnh viờm phế quản truyền nhiễm (IB) nhưng cỏch ho, tiếng hen ho lại giống bệnh hen gà (CRD). Gà bị sốt cao, nước mũi chảy giàn dụa, gà phải hỏ mồm thở dốc, cú con phải ưỡn cổ thật dài ủể hớt khớ, cú những con vẩy mỏ cú ủờm giống bệnh viờm thanh khớ quản truyền nhiễm (ILT). Kốm theo chứng ho hen là gà bị rụt mào, tớch bị thõm tớm, tỏi nhợt. Gà bệnh kộm ăn, uống nước nhiều, ỉa chảy phõn loóng xanh trắng, lười vận ủộng, hay nằm, hầu như ngừng ủẻ hoặc
ủẻ trứng non. Trong ủàn, gà chết rải rỏc qua mỗi ngày. Bệnh kộo dài trong nhiều ngày và tỷ lệ chết tương ủối cao, trờn 20% tổng số gà bệnh.
4.1.2. Kết quả khảo sỏt bệnh tớch ủại thể ở gà mắc bệnh Newcastle.
Mổ khỏm 130 con ở cỏc ủàn gà mắc bệnh từ 20 ủến 22 tuần tuổi. Kết quả mổ khỏm ủược ghi chộp tỉ mỉ, cỏc biến ủổi bệnh tớch ủại thể
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệpẦẦẦ 46
Bảng 4. 2 .Kết quả nghiờn cứu bệnh tớch ủại thể của gà mắc bệnh
Newcastle
Chỉ tiờu nghiờn cứu Số con
mổ khỏm Số con cú bệnh tớch Tỷ lệ (%) Xỏc gầy, lụng xơ xỏc 130 95 73.08 Loột miệng 130 71 54.62 Loột thực quản 130 42 32.31 Họng phủ tơ huyết 130 86 66.15 Xuất huyết khớ quản 130 74 56.92 Diều tớch nước chua 130 95 73.08
Xuất huyết dạ dày tuyến 130 92 70.77
Loột dạ dày cơ 130 35 26.92 Xuất huyết ruột non 130 109 83.85 Loột ruột non 130 44 33.85 Loột hạch ruột ở manh tràng 130 114 87.69 Xuất huyết lỗ huyệt 130 33 25.38 Xuất huyết mỡ vành tim 130 95 73.08
Xuất huyết tỳi fabricius 130 37 28.46
Xuất huyết cơ 130 22 16.92 Xuẩt huyết thận 130 60 46.15 Lỏch sưng to 130 51 39.23 Gan sưng màu vàng 130 86 66.15 Phổi sưng tụ mỏu, màu ủỏ sẫm 130 90 69.23 Vỡ trứng non ở gà mỏi ủẻ 130 55 42,30
Qua bảng 4.2 chỳng tụi nhận thấy trong tổng số 130 gà ủược mổ khỏm thỡ ở ủường tiờu hoỏ cú những biến ủổi rừ rệt và chiếm tỷ lệ tương ủối cao, Trong ủú, hiện tượng loột hạch ruột ở manh tràng biểu hiện ở 114 con, chiếm
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệpẦẦẦ 47
tỷ lệ cao nhất (87,69%); Tiếp ủến là xuất huyết ruột non chiếm 83,85%; 95 gà cú hiện tượng xỏc gầy, lụng xơ xỏc, chiếm 73,08%; 71 gà bị loột miệng chiếm tỷ lệ 54,64%; 42 gà bị loột thực quản chiếm tỷ lệ 32,31%. Họng phủ tơ huyết, tơ huyết cú thể dải theo họng, nhưng cũng cú thể ớt, chỉ cú tại một số vị trớ. Biến ủổi này xuất hiện ở 86 gà chiếm tỷ lệ 66,15%. Thấy 74 gà xuất huyết khớ quản chiếm tỷ lệ 56,92%. Khi mổ khỏm diều thấy cú 95 gà cú hiện tượng tớch nước chua, chiếm tỷ lệ 73,08%, hiện tượng này là do gà ăn thức ăn khụng tiờu, lờn men ụi thiu.
Ngoài ra khi mổ khỏm chỳng tụi thấy cú một số trường hợp xuất huyết lỗ
huyệt, chiếm tỷ lệ 25,38%, xuất huyết tỳi fabricius, chiếm tỷ lệ 28,46%; một số gà thấy xuất huyết cơ, chiếm tỷ lệ 16,92%, một số xuất huyết thận, tuyến tụy, phổi sưng màu ủỏ sẫm, gan sưng màu vàng.
Qua kết quả mổ khỏm số gà mắc bệnh Newcastle chỳng tụi thấy cú một số biến ủổi bệnh tớch ủại thể tương ủối giống bệnh cỳm gia cầm. Ở
bệnh cỳm gia cầm hầu hết cỏc trường hợp mổ khỏm thỡ phổi và tỳi khớ luụn luụn cú biến ủổi. Tỳi khớ bị phự nề, thành tỳi khớ dày và cú nhiều fibrin bỏm dớnh. Viờm, xuất huyết niờm mạc ủường ruột, ủặc biệt là ở
van hội manh tràng, trực tràng, lỗ huyệt. Dạ dày tuyến và niờm mạc tỏ tràng xuất huyết ủiểm hoặc thành dải, vệt. Hiện tượng xuất huyết ủiểm ở
cơ tim, màng bao tim tớch nước vàng cũng tương ủối phổ biến.
Theo Lõm Trần Khanh (2006) [16], Bệnh tớch ủại thể ở cỳm gia cầm hầu hết cỏc cơ quan của gà ủều bị xuất huyết, ủường ruột, phổi,
ủọng dịch ở khớ quản, tỳi khớ. đõy là những bệnh tớch ủiển hỡnh cho bệnh cỳm gia cầm.
Gà mắc Newcastle lại gõy ra những bệnh tớch khỏc nhau ở cỏc cơ quan khỏc nhau. đặc biệt chỳng tụi quan sỏt ủược bệnh tớch ủiển hỡnh của bệnh là niờm mạc dạ dày tuyến xuất huyết thành những chấm màu ủỏ trũn to bằng
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệpẦẦẦ 48
ủầu ủinh ghim, mỗi ủiểm tương ứng với một lỗủổ ra của tuyến tiờu hoỏ. đõy là ủặc ủiểm ủể phõn biệt với bệnh Cỳm gia cầm.
Kết quả nghiờn cứu của chỳng tụi phự hợp với nhận xột của Trương Quang (2005). Kết quả nghiờn cứu của tỏc giả trờn ủàn gà hướng thịt giống Lương Phượng và ISA trắng cho thấy: bệnh tớch ủặc trưng của bệnh Newcastle là xuất huyết dạ dày tuyến, loột dạ dày cơ và ruột non (Trương Quang, Trương Hà Thỏi, 2005) [26].
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệpẦẦẦ 49
Ảnh 4.1: Gà ISA Brown 20 tuần bị bệnh Newcastle; ủ rũ, kém ăn.
Ảnh 4.2:Gà ISA Brown 20 tuần ủ rũ, đuôi cụp. Bệnh Newcastle Ảnh 4.3: Gà co giật, mắt ng−ỡng thiên. Bệnh Newcastle Ảnh 4.4: Gà ủ rũ Bệnh Newcastle Ảnh 4.5: Triệu chứng thần kinh.
Bệnh Newcastle Ảnh 4.6: Gà mắTric bệệu chnh Newcastle, ứng thần kinh
Ảnh 4.7: Gà ủẻ trứng non. Bệnh Newcastle
Ảnh 4.8:Trứng non, trứng dắnh máu. Bệnh Newcastle
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệpẦẦẦ 50