Phương phỏp nhuộm hoỏ mụ miễn dịch (IHC) cú quy trỡnh tẩm ủỳc bằng parafin giống phương phỏp làm tiờu bản vi thể.
* Cỏc bước nhuộm:
Bước 1: Làm sạch tiờu bản
Khử parafin, khử xylen, khử cồn giống phương phỏp làm tiờu bản vi thể. Sau khi cho chảy dưới vũi nước rửa lại tiờu bản bằng nước cất.
Bước 2: Hoạt hoỏ enzym
Ngõm ngập tiờu bản trong dung dịch PBS và hấp ướt ở 1210C/5 phỳt.
Bước 3: Khử peroxydase nội sinh
Dựng H2O2 trong dung mụi Methanol (1H2O2 30%:9Methanol). Ngõm tiờu bản trong 10 phỳt.
Bước 4: Gắn khỏng thể (KT)
Nhỏ 105 àl KT khỏng ND chuẩn lờn tiờu bản, cho tiờu bản vào khay
ủựng giấy thấm cú PBS.
ðể tủấm 370C/1h hoặc 40C/qua ủờm.
Rửa tiờu bản bằng dung dịch PBS 3 lần (5 phỳt/lần).
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nụng nghiệp……… 42
Nhỏ 3 giọt = 105 àl khỏng khỏng thể lờn tiờu bản, cho tiờu bản vào khay ủựng giấy thấm cú PBS.
ðể tủấm 370C/30 phỳt - 1h. Rửa PBS 3 lần (5phỳt/lần).
Bước 6: Cho cơ chất
Nhỏ 3 – 4 giọt dung dịch DAB lờn tiờu bản trong khoảng 1 phỳt. Quan sỏt sự chuyển biến màu sắc và ủọc kết quả.
Rửa tiờu bản bằng nước trong 2 – 3 phỳt
Bước 7: Nhuộm nhõn tế bào bằng Hematoxylin (trong 20 giõy), làm sạch tiờu bản bằng cồn và xylen. Cồn 700: 1 lần; Cồn 800: 1 lần; Cồn 900: 2 lần; Cồn 950: 2 lần; Cồn 1000: 2 lần; Xylen: 3 lần
Gắn Baume canada: Nhỏ một giọt Baume canada lờn lamen rồi gắn nhanh lờn tiờu bản khi vẫn cũn xylen trờn tiờu bản. Kiểm tra tiờu bản trờn kớnh hiển vi quang học.