nghiên cứu xác định hàm lượng một số chất hữu cơ trong dược phẩm và nước tiểu bằng phương pháp von-ampe

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Trần Quang Hải NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG MỘT SỐ CHẤT HỮU CƠ TRONG DƯỢC PHẨM VÀ TRONG NƯỚC TIỂU BẰNG PHƯƠNG PHÁP VON - AMPE Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã số: 62 44 29 01 LUẬN ÁN TIẾN SỸ HÓA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: 1. GS.TS Từ Vọng Nghi 2. PGS.TS Dương Quang Phùng HÀ NỘI - 2014 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu, kết quả nêu trong luận án là trung thực và chưa từng được ai công bố trong bất kỳ công trình nào khác. Hà Nội, ngày 16 tháng 5 năm 2014 TÁC GIẢ LUẬN ÁN TRẦN QUANG HẢI ii LỜI CẢM ƠN Với lòng biết ơn chân thành, sâu sắc nhất, tôi xin trân trọng cảm ơn GS.TS Từ Vọng Nghi, cố PGS.TS Dương Quang Phùng đã tận tình hướng dẫn, khích lệ, động viên, giúp đỡ tôi trong suốt thời gian thực hiện luận án. Tôi xin trân trọng cảm ơn PGS.TS Nguyễn Văn Ri, PGS.TS Tạ Thị Thảo và các quý thầy cô thuộc Bộ môn Hóa Phân tích – Khoa Hóa học trường Đại học Khoa học Tự nhiên – ĐHQG HN đã tạo điều kiện, giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện luận án. Tôi xin trân trọng cảm ơn PGS. TS ĐàoThị Phương Diệp, TS. Trần Công Việt và các quý thầy cô thuộc Bộ môn Hóa Phân tích – Khoa Hóa học trường Đại học Sư Phạm Hà Nội đã tạo điều kiện, giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện luận án. Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu, Phòng Tổ chức – Hành chính, Khoa Công nghệ Hóa học - Trường Đại học Công nghiệp Hà Nội và các đồng nghiệp đã tạo mọi điều kiện, giúp đỡ, động viên tôi trong quá trình thực hiện luận án. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc với bố, mẹ, gia đình và các bạn gần xa đã động viên, giúp đỡ tôi hoàn thành luận án này. Hà Nội, ngày 16 tháng 5 năm 2014 TRẦN QUANG HẢI iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG viii DANH MỤC CÁC HÌNH xii MỞ ĐẦU 1 CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN 4 1.1. ĐẠI CƯƠNG VỀ OFLOXACIN, METRONIDAZOL, CLOPHENIRAMIN MALEAT VÀ CEFADROXIL 4 1.1.1. Ofloxacin 4 1.1.2. Metronidazol 5 1.1.3. Clorpheniramin maleat 7 1.1.4. Cefadroxil 9 1.2. CÁC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH OFLOXACIN, METRONIDAZOL VÀ CLORPHENIRAMIN MALEAT VÀ CEFADROXIL. 11 1.2.1. Các phương pháp xác định ofloxacin 11 1.2.2. Các phương pháp xác định metronidazol 13 1.2.3. Các phương pháp xác định clorpheniramin maleat 14 1.2.4. Các phương pháp xác định cefadroxil 15 1.3. PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH CỰC PHỔ VÀ VON-AMPE 16 1.3.1. Cực phổ xung vi phân (Diffrerential Pulse Polarography – DPP) 17 1.3.2. Phương pháp Von-ampe hòa tan hấp phụ (AdSV) 18 1.4. XỬ LÝ MẪU 21 1.4.1. Mẫu thuốc 21 1.4.2. Mẫu nước tiểu 21 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1. THIẾT BỊ DỤNG CỤ VÀ HÓA CHẤT 24 iv 2.1.1. Thiết bị, dụng cụ 24 2.1.2. Hóa chất 25 2.2. ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 27 2.2.1. Phân tích hàm lượng hoạt chất trong chế phẩm thuốc 27 2.2.2. Phân tích hàm lượng các thuốc trong nước tiểu bệnh nhân 28 2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.3.1. Tiến hành thí nghiệm theo phương pháp von-ampe vòng (CV) 28 2.3.2. Tiến hành thí nghiệm theo phương pháp von-ampe xung vi phân (DP) . 29 2.3.3. Tiến hành thí nghiệm theo phương pháp xung vi phân hòa tan – hấp phụ (DP – AdSV) 30 2.3.4. Tiến hành thí nghiệm theo kỹ thuật chiết pha rắn (SPE) 30 2.3.5. Phương pháp định lượng các hoạt chất trong thuốc 30 2.3.6. Các bước khảo sát 31 2.3.7. Xử lý mẫu 34 2.3.8. Xử lý số liệu 35 CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 38 3.1. NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUI TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG OFLOXACIN 38 3.1.1. Khảo sát các điều kiện cơ bản xác định ofloxacin 38 3.1.2. Khảo sát khoảng tuyến tính và đánh giá phương pháp 45 3.1.3. Xây dựng qui trình định lượng ofloxacin trong mẫu thuốc. 48 3.1.4. Áp dụng thực tế phân tích hàm lượng ofloxacin trong các mẫu thuốc 50 3.1.5. Nghiên cứu qui trình định lượng ofloxacin trong các mẫu nước tiểu . 51 3.1.6. Áp dụng thực tế phân tích hàm lượng ofloxacin trong các mẫu nước tiểu 63 3.2. NGHIÊN CỨU QUI TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG METRONIDAZOL 65 3.2.1. Khảo sát các điều kiện thích hợp 65 3.2.2. Khảo sát khoảng tuyến tính và đánh giá phương pháp 71 v 3.2.3. Xây dựng qui trình định lượng metronidazol trong các mẫu thuốc 75 3.2.4. Áp dụng thực tế phân tích hàm lượng metronidazol trong các mẫu thuốc 75 3.2.5. Nghiên cứu định lượng metronidazol trong mẫu nước tiểu 77 3.3. NGHIÊN CỨU QUI TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG CLORPHENIRAMIN MALEAT 79 3.3.1. Khảo sát các điều kiện thích hợp 79 3.3.2. Khảo sát khoảng tuyến tính và đánh giá phương pháp 84 3.3.3. Xây dựng qui trình định lượng clorpheniramin maleat trong mẫu thuốc. 88 3.3.4. Áp dụng thực tế phân tích trong các mẫu thuốc 89 3.4. NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG CEFADROXIL 92 3.4.1. Nghiên cứu định lượng cefadroxil bằng phương pháp von – ampe xung vi phân 92 3.4.2. Nghiên cứu định lượng cefadroxil bằng phương pháp von – ampe hòa tan hấp phụ 105 KẾT LUẬN 130 TÀI LIỆU THAM KHẢO 134 PHỤ LỤC vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT TT Vi ết tắt, ký hiệu Tiếng Việt Tiếng Anh 1 ΔE Biên đ ộ xung Pulse amplitude 2 SPE Chi ết pha rắn Solid Phase Extraction 3 I p Cư ờng độ d òng pic Peak current 4 DC Dòng m ột chiều Direct current 5 BR Đ ệm vạn năng Britton - Robinson buffer 6 HMDE Đi ệ n c ực giọt thủy ngân treo Hanging Mercury Drop Electrode 7 RSD Đ ộ lệch chuẩn t ương đ ối Relative Standard Deviation 8 R ev Đ ộ thu hồi Recovery 9 LOQ Gi ới hạn định l ư ợng Limit of Quantification 10 LOD Gi ới hạn phá hiện Limit of Detection 11 HPLC S ắc kí l ỏng hiệu năng cao High Performance Liqid Chromatography 12 LLC S ắc kí lỏng – l ỏng Liq u id – Liq u id Chromatography 13 LC – MS S ắc kí lỏng – kh ối phổ Liq u id Chromatography - Mass Spectrometry 14 E p Th ế đỉnh pic Peak potential 15 E acc Th ế tích lũy Accumulati on potential 16 T acc Th ời gian tích lũy Accumulation time 17 T cb Th ời gian cân bằng Equilibration time 18 ν T ốc độ quét thế Sweep rate 19 ASV Von - ampe hòa tan anot Anodic Stripping Voltammetry 20 CSV Von - ampe hòa tan catot Cathodic Stripping Voltamme try 21 AdSV Von - ampe hòa tan h ấp phụ Adsor p tive Stripping Voltammetry 22 CV Von - ampe vòng Cyclic Voltammetry 23 DP Xung vi phân D i fferential Pulse vii TT Vi ết tắt, ký hiệu Tiếng Việt Tiếng Anh 24 DPP C ực phổ xung vi phân D i fferential Pulse Polarography 25 GCE Đi ện cực than g ương Glassy Carbon Ele ctrode 26 CPE Đi ện cực than mềm Carbon Past Electrode 27 WE Đi ện cực l àm vi ệc Working Electrode 28 AE Đi ện cực ph ù tr ợ Auxiliary Electrode 29 RE Đi ện cực so sánh Reference Electrode 30 SMDE Đi ện cực giọt thủy ngân tĩnh Stationary Mercury Drop Electrode 31 GMP- WHO Thực hành sản xuất tốt- Tổ chức Y tế thế giới Good Manufacturing Practices – World Health Oganization viii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1: Pha dung dịch đệm photphat theo Dược điển Việt Nam 26 Bảng 3.1: Sự phụ thuộc I p và E p của ofloxacin vào pH dung dịch nền 40 Bảng 3.2: Sự phụ thuộc I p và E p của ofloxacin vào biên độ xung 41 Bảng 3.3: Sự phụ thuộc I p vào thời gian đặt xung 42 Bảng 3.4: Sự phụ thuộc I p và E p của ofloxacin vào tốc độ quét thế 43 Bảng 3.5: Các điều kiện ghi đo dòng DP với dung dịch ofloxacin 45 Bảng 3.6: Sự phụ thuộc tuyến tính cường độ dòng pic vào nồng độ ofloxacin 45 Bảng 3.7: Độ thu hồi của ofloxacin 47 Bảng 3.8: Độ lặp lại của ofloxacin 48 Bảng 3.9: Kết quả định lượng ofloxacin trong thuốc nhỏ mắt Ofloxacin 0,3% (15mg/5ml) sản xuất tại Công ty Cổ phần Dược phẩm Traphaco 50 Bảng 3.10: Kết quả định lượng ofloxacin trong viên nén Ofloxacin 200mg sản xuất tại Công ty Cổ phần Dược phẩm Imexpharm; 51 Bảng 3.11: Hiệu suất chiết của các hệ dung môi 55 Bảng 3.12: Sự phụ thuộc I p vào thể tích dung môi 56 Bảng 3.13: Sự phụ thuộc hiệu suất chiết vào thể tích dung môi 56 Bảng 3.14: Sự phụ thuộc hiệu suất chiết vào tốc độ nạp mẫu 57 Bảng 3.15: Sự phụ thuộc hiệu suất chiết vào thể tích dung môi 59 Bảng 3.16: Sự phụ thuộc nồng độ ofloxacin trong mẫu nước tiểu vào I p . 61 Bảng 3.17: Kết quả xác định ofloxacin trong mẫu nước tiểu tự tạo 62 Bảng 3.18: Kết quả xác định hàm hàm lượng ofloxacin trong mẫu nước tiểu của bệnh nhân uống 2 viên thuốc hàm lượng 200mg. 64 Bảng 3.19: Sự phụ thuộc I p và E p của metronidazol vào pH dung dịch nền 67 Bảng 3.20: Sự phụ thuộc I p và E p của metronidazol vào biên độ xung 67 Bảng 3.21: Sự phụ thuộc I p vào thời gian đặt xung 68 ix Bảng 3.22: Sự phụ thuộc I p và E p của metronidazol vào tốc độ quét thế 69 Bảng 3.23: Các điều kiện ghi đo dòng DP với dung dịch metronidazol 71 Bảng 3.24: Sự phụ thuộc tuyến tính cường độ dòng pic vào nồng độ metronidazol 71 Bảng 3.25: Độ thu hồi của metronidazol 73 Bảng 3.26: Độ lặp lại của metronidazol 74 Bảng 3.27: Kết quả định lượng metronidazol trong thuốc Flagyl 250mg viên nén bao film sản xuất tại Công ty TNHH Sanofi – Avantis Việt Nam. 76 Bảng 3.28: Kết quả định lượng metronidazol trong thuốc Metronidazole 250mg viên nén sản xuất tại Công ty Cổ phần Dược phẩm Hà Tây. 76 Bảng 3.29: Sự phụ thuộc I p và E p của clorpheniramin maleat vào biên độ xung 80 Bảng 3.30: Sự phụ thuộc I p vào thời gian đặt xung 81 Bảng 3.31: Sự phụ thuộc Ip và Ep của clorpheniramin maleat vào tốc độ quét thế 82 Bảng 3.32: Sự phụ thuộc I p vào thời gian sục khí nitơ 83 Bảng 3.33: Các điều kiện ghi đo dòng DP với dung dịch clorpheniramin maleat . 84 Bảng 3.34: Sự phụ thuộc tuyến tính cường độ dòng pic vào nồng độ clorpheniramin maleat 85 Bảng 3.35: Độ thu hồi của clorpheniramin maleat 86 Bảng 3.36: Độ lặp lại của clorpheniramin maleat 87 Bảng 3.37: Kết quả định lượng CPM trong viên nén Clorpheniramin 4 (4mg) sản xuất tại Công ty Cổ phần Dược phẩm Hậu Giang 89 Bảng 3.38: Kết quả định lượng CPM trong viên nang Pacemine (4mg clorpheniramin maleat) sản xuất tại Công ty Cổ phần Dược phẩm Hà Tây 89 Bảng 3.39: Sự phụ thuộc I p vào nồng độ dung dịch nền NaOH 94 [...]... Hùng và các cộng sự đã chế tạo được máy phân tích điện hóa đa chức năng có độ chính xác không kém máy nhập ngoại mà giá thành rẻ hơn rất nhiều Tuy nhiên, ở Việt Nam phương pháp von-ampe còn ít được nghiên cứu ứng dụng trong phân tích các hợp chất hữu cơ đặc biệt là trong lĩnh vực phân tích dược phẩm Thực hiện đề tài "Nghiên cứu xác định hàm lượng một số chất hữu cơ trong dược phẩm và nước tiểu bằng phương. .. Jacobsen và Knut Hbgberg đã nghiên cứu định lượng clorpheniramin maleat trong chế phẩm bằng phương pháp cực phổ trong nền H2SO4 0,25M cho sóng cực phổ tại -0,7V [45] Leena Suntornsuk và các cộng sự đã nghiên cứu định lượng clorpheniramin maleat và paracetamol bằng phương pháp HPLC, giới hạn định lượng là 4 µg/ml [76] Abdolraouf Samadi – Maybodi đã nghiên cứu xác định clorpheniramin maleat bằng phương pháp. .. Một số tác giả khác: Indrayanto Gunawan [45], García A [39], Nevin Erk [37] tiến hành nghiên cứu định lượng clorpheniramin bằng phương pháp HPLC trong một số chế phẩm thuốc đạt giới hạn định lượng từ 0,16 đến 2,9 µg/ml Bùi Tùng Hiệp, Vũ Khanh đã định lượng chất chuyển hóa của clorpheniramin trong nước tiểu bằng phương pháp HPLC [43] Theo một nghiên cứu mới được công bố năm 2012, Amiri M đã nghiên cứu. .. thuộc nồng độ cefadroxil trong mẫu nước tiểu vào Ip 124 Bảng 3.62: Kết quả xác định cefadroxil trong mẫu nước tiểu tự tạo 126 Bảng 3.63: Kết quả xác định hàm hàm lượng cefadroxil trong mẫu nước tiểu của bệnh nhân uống 1 gói thuốc Tytdroxil hàm lượng 250mg 127 Bảng 3.64: Kết quả xác định hàm hàm lượng cefadroxil trong mẫu nước tiểu của bệnh nhân uống 2 viên thuốc hàm lượng 500mg 128 xi DANH MỤC CÁC... hạn định lượng cỡ 10-7 – n.10-8M [9, 10, 13] Đối với các hợp chất hữu cơ, thường có đặc tính điện hóa bất thuận nghịch Trên thế giới và Việt Nam đã có một số nghiên cứu về định lượng các hợp chất hữu cơ bằng phương pháp điện hóa và có nhiều thành công [68, 71, 75, 84] 16 Vì vậy, trong luận án chúng tôi chọn phương pháp cực phổ xung vi phân và von-ampe hòa tan hấp phụ để tiến hành định lượng các dược phẩm. .. CLORPHENIRAMIN MALEAT VÀ CEFADROXIL Ofloxacin, metrodinazol, clorpheniramin maleat và cefadroxil có thể được xác định bằng nhiều phương pháp khác nhau như phương pháp trắc quang, phương pháp sắc ký, phương pháp điện hóa, phương pháp chuẩn độ oxi hóa khử Mỗi phương pháp đều có những ưu điểm riêng 1.2.1 Các phương pháp xác định ofloxacin Theo Dược điển Việt Nam 4, xác định ofloxacin bằng phương pháp HPLC với... Xuân đã định lượng đồng thời metronidazol, cloramphenicol và dexamesanthon acetat bằng phương pháp HPLC [12] Ngoài ra, trên thế giới đã có khá nhiều nghiên cứu tính chất điện hóa và định lượng metronidazol và các dẫn chất của 5-nitroimidazole bằng phương pháp điện hóa [26, 40, 41, 47, 49, 55, 59, 62, 67, 81, 88…] Các nghiên cứu trong nước về định lượng metronidazol ít và chỉ tập trung theo phương pháp. .. cứu tốn kém do phải định lượng nhiều mẫu nên chưa được thực hiện nhiều ở Việt Nam Trong kiểm nghiệm dược phẩm và phân tích dược phẩm trong các mẫu sinh học từ trước đến nay, phương pháp sử dụng để định lượng các hoạt chất trong thuốc chủ yếu là nhóm các phương pháp sắc ký (HPLC, GC, GCMS/MS, LC-MS/MS) và nhóm các phương pháp quang phổ (UV-VIS, IR…) 1 Dược điển Việt Nam sử dụng phương pháp HPLC là phương. .. nhanh [6] Trong một nghiên cứu mới được công bố, nhóm nghiên cứu của PGS.TS Trần Chương Huyến và Nguyễn Thị Kim Thường ở Trường Đại học Khoa học tự nhiên – ĐHQGHN đã định lượng cephalexin- bằng phương pháp von-ampe hòa tan hấp phụ xung vi phân, giới hạn phát hiện 4,8.10-9M [8] 1.3 PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH CỰC PHỔ VÀ VON-AMPE Nhóm các phương pháp phân tích cực phổ và von-ampe là những phương pháp quan... Hefnawy và các cộng sự đã xác định cefadroxil và cefaclor trong dược phẩm và dịch sinh học bằng phương pháp huỳnh quang, giới hạn phát hiện là 5ng/ml [42] Mrestania Yahya đã xác định 9 kháng sinh họ cephalosporin trong nước tiểu bằng phương pháp điện di mao quản vùng với đệm xitrat pH = 6,0, giới hạn phát hiện cefadroxil 5,0 µg/ml; cefaclor 4,0 µg/ml [60] Trên thế giới đã có nghiên cứu định lượng cefadroxil . dược phẩm. Thực hiện đề tài " ;Nghiên cứu xác định hàm lượng một số chất hữu cơ trong dược phẩm và nước tiểu bằng phương pháp von-ampe. " nhằm đánh giá khả năng áp dụng phương pháp von-ampe. Quang Hải NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG MỘT SỐ CHẤT HỮU CƠ TRONG DƯỢC PHẨM VÀ TRONG NƯỚC TIỂU BẰNG PHƯƠNG PHÁP VON - AMPE Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã số: 62 44 29 01 . tích hàm lượng hoạt chất trong chế phẩm thuốc 27 2.2.2. Phân tích hàm lượng các thuốc trong nước tiểu bệnh nhân 28 2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.3.1. Tiến hành thí nghiệm theo phương pháp von-ampe