Nghiên cứu xác định hàm lượng Axit Folic trong dược phẩm bằng phương pháp Von-Ampe hòa tan hấp thụ trên điện cực giọt Hg treo

NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG AXIT FOLIC TRONG DƯỢC PHẨM BANG PHƯƠNG PHÁP VON-AMPE HÒA TAN HẤP PHỤ TRÊN ĐIỆN c ự c GIỌT Hg TREO I.. Phương pháp von-ampe hoà tan hấp phụ xác định các vita

Đại học Q uốc gia Hà nội Trường Đại học Khoa học Tự nhiên

Hà nội - 2007

Báo cáo tóm tắt

1 T ên đ ề tài: “ N g h iê n cứ u x á c đ ịn h h à m lư ợ n g a x it F o lic tr o n g dược

p h ẩ m b ằ n g p h ư ơ n g p h á p v o n -a m p e hòa tan h ấ p p h ụ trên đ iện cực

D e te r m in a tio n o f F o lic a c id in d r u g u sin g A d s o r p tiv e s tr ip p in g

v o lta m m e tr ic

Folic acid N|4| [(2- amino- 1.4-dihydro-4-oxo-6-pteridinyl)methyl]amino]benzoylJ- glutamic acid, has long been recognized as a part of the vitamin B complex and is administered in the prophylaxis and treatment o f megaloblastic anaemia and other diseases

Voltammetric measurements o f analytes previously preconcentrated by adsorption on the electrode surface provides a suitable technique for quantitation o f a large variety o f organic molecules at ultratrace levels |1| The extremely high sensitivity and good precision attained by this technique, touether with its instrumental simplicity, make it an attractive analytical tool for therapeutic monitoring purposes The development o f this kind of application needs to overcome problems arising from the presence o f large excesses o f naturally occurring surfactants in biological matrices such as serum Competitive coverage o f the electrode surface by matrix surfactants can hinder the adsorptive preconcentration process and even suppress the stripping signal Recently, these problems have received important attention, and some methods have been proposed Cor trace drug monitorirm in serum and urine samples

In this research Folic acid was voltammetrically measured after preconcentration by adsorption at the static mercury drop electrode Squavvave voltammetrv provided the most sensitive strippiim simial The opptimized conditions arc pH 8.5 (borratc buffer), deposition potential -0.2V The inflect of some metals, vitamins, surface active compounds was in\estiaatcd The detection limit o f the method was 0.0155ppb the coefficient o f variation is 0.58%: 0.18%: 1.24% at the Folic concentration 0.882: 2.646: 4.41 ppb respect!veil) The linear rarmc is 0.882-4.41 pph and 8.82-44.1 ppb

Báo cáo tóm tắt

NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG AXIT FOLIC TRONG DƯỢC PHẨM BANG PHƯƠNG PHÁP VON-AMPE

HÒA TAN HẤP PHỤ TRÊN ĐIỆN c ự c GIỌT Hg TREO

I Mử đầu

Axit folic còn dược gọi là vitamin I3r B4 vitamin M folacin folat là một sinh

tố tan trong nước, thuộc nhóm B [1,2]

Trong cơ thổ Axit folic dược khử thành tetrahvdrofolat là coenzim của nhiéu quá trình chuyển hoá trong đó có tổng hợp các nucleotid có nhân purin hoặc pyrimidin: do vậy ảnh hướng lên tống hợp DNA Khi có vitamin c axit folic được chuvên thành leucovorin là chất cần thiết cho sự long hợp DNA và RNA Axit folic

là yếu tố không the thiếu dược cho lổng hợp nucleoprotein và tạo hồng cầu bình thường Axit folic còn giúp cho con người giám hớt ti lệ u nang và giám nguy cơ bệnh lật bệnh não SUV, báo vệ ngăn ngừa quái thai, gia tăng sự sinh sữa cho phụ nữ vừa sinh con, háo vệ ngăn ngừa những kí sinh trùng dường ruột và ngộ độc thực phấin ngoài ra nỏ còn giúp cho da tươi mịn klioc dẹp , có tác dụng như một chất giam đau chống một mỏi Có thê làm chậm quá trình hạc tóc khi dược sử dụng kết hợp axil Folic với axit pantothenic và axil paraaminobenzoic, giúp ngăn ngừa bệnh viêm loét miệng và bệnh thiếu máu ớ người

Thiếu axit folic gây ra thiếu máu nguyên hồng cầu khống lổ giống như thiếu máu do thiếu vitamin B|, Axil Folic cũng tham gia vào một số biến dổi axit amin; vào sự tạo thành và sử dụng format Ngoài ra nêu thiếu axit folic thì nồng dộ homocysterin trong máu sẽ tăng cao và dó là chất gây ra chứng não suv Thiếu axit folic cũng dề “ ày ra xơ vữa dộng mạch và hênh lim

Uống axit Folic lieu cao làm lượng vitamin đào thải qua nước tiêu tãng lên ti lệ thuận: liổu lớn axit folic có thê gây ra chứng co giật ớ những người bệnh dông kinhl 1.2|

I liộn nay dã có rất nhiều phương pháp nghiên cứu và xác định axit Folic như xác định bằng phương pháp sác kí lỏng hiệu năng cao (HPLC)[3 4 5 6 7 9 10 11 12 13] phương pháp diộn di mao quán (CK)|8| : pliưong pháp huỳnh quang [14] : phương pháp dicn hoá (cực phổ và Von-Ampe hoà tun hấp phụ)I 15 16 17 IX 19 20 21 22] Viôc phân lích axit I;olic thường gặp khó khăn vổ dỏ nhạv dó lăp lại và thời gian phân

tích kéo dài Phương pháp von-ampe hoà tan hấp phụ xác định các vitamin nói riêng và các chất hữu cơ nói chung đã và đang là hướng phát triển mới trong nhóm các phương pháp điện hoá Trong đề tài này, chúng tôi nghiên cứu tính chất điện hoá của axil Folic và từ đó ứng dụng xác định axit Folic bàng phương pháp von-ampe hoà tan catot (CSV) trên diện cực giọt thuỷ ngân treo (IIMDE)

I Cấu tạo, tính chất của axit Folic

1.1 Công thức câu tạo của axit folic

T.B <Hhydrof oểic acid

Axil I'olic là hợp chất hữu cơ dược tạo ra tù liên kết cúa vòng pteridinc kết nối với para-aminoben/.oic axil tạo thành axit pteroic ( pABy\) Axit I-'olic lự bán thân nó dược tao ra từ liên kết cua gốc cúa axit Glutamic với axit ptcroic Động vật không cổ khá I i i i n g tổng họp PABA cũng nhu găn gốc cúa glutamat với PABA do đó c n bổ xung I;olate

Trong tự nhiên, nguồn axit Folic chú yếu có trong các loại rau lá xanh, đậu hạt sữa chua sữa trứng

1.2 Tính chất điện hoá của axit Folic

rinh chất điện hoá của axit Folic được Van den Berg nghiên cứu kĩ trongỊ 19) Khighi dường von-ampe vòng của axit folic trong nền pH 5 tác giả đã quan sát dược 3 pic k hửc a to t ớ -0.5; -0.8; và -1.2V và khống có pic anot Còn ớ plỉ 8.5, tác giả chí quan sát được 1 pic ở -0.8V, tuv nhiên pic anot ở plỉ này lại xuất hiện Các pic nàytương ứng với các quá trình khử sau:

pH=5:

Foềc taứ (I) M 5,0<Hhydrctollc »ckJ (II)

Sau dỏ trong mỏi trường có l ỉ \ sẽ cỏ cân bằng:

pl 1=8.3: sóne khử trong trường hop này tương tự sóng khử ớ -0.5V trong trường liợp

p l l = x tuy nhiên có sự dịch chuyên pic dốn -0.8V do anh hướng của plỉ

1.3 Dược lý, cơ chc tác dun« và sử dụng axit Folic

Trong cơ the Axil folic được khử thành tctrahyđrololat là coen/ i m cua nhiêu quá trình chuvcn hoá irons: dó cỏ lổng hợp các nuclcotid có nhân purin hoặc pvriíiiidin; do vậy anh hưỡiiíi len lõng hạp D \ A Kill có viiamin c axil lolic dược chuyến thành leucovorin là chất cán thiết cho sự tong hợp DNA và RNA Axil folic

-Ị

là yếu tố không thể thiếu được cho tổng hợp nucleoprotein và lạo hồng cầu bình thường Axit folic còn giúp cho con người giảm bớt tỉ lệ u nang và giảm nguy cơ bệnh tật, bệnh não suy, bảo vệ ngăn ngừa quái thai, gia tăng sự sinh sữa cho phụ nữ vừa sinh con, hảo vệ ngãn ngừa những kí sinh trùng đường ruột và ngộ dộc thực phấm, ngoài ra nó còn giúp cho da tươi mịn, khoẻ đẹp , có tác dụng như một chất giảm dau chống mệt mỏi Có thế làm chậm quá trình bạc tóc khi được sử dụng kết hợp axit Folic với axit pantothenic và a.xit paraaminobenzoic giúp ngăn ngừa bệnh viêm loét miệng và bệnh thiếu máu ớ người.

Thiếu axit folic gáy ra thiếu máu nguyên hồng cầu khổng lồgiống như thiếu máu do thiếu vitamin Bl2 Axit Folic cũng tham gia vào một số biến dổi a.xit amin; vào sự tạo thành và sử dụng format Ngoài ra nếu thiếu a.xit folic thì nồng độ homocvstcrin trong máu sẽ tăng cao và dó là chất gâv ra chứng não suy Thiếu axit folic cũng de gãy ra xư vữa dộng mạch và bệnh tim

Uổng axit l;olic lieu cao làm lượng vitamin dào thải qua nước tiêu tăng lên tí lệ Ihuận: lieu lớn axit folic có the gây ra chứng co giật ở những người bệnh dộng kinh [ 1,2]

Trên thực tố axit Folic thường dưực bố xung cho những người thiếu axit Folic trong chế độ ãn: thiếu máu nguvên hồng cầu khổng lổ; Iiíỉưừi dang mang thai; ngưừi bệnh dang diéu trị băng các thuốc kháng axi Folic như methotrexat: người dang diổu trị dộng kinh hãng hydantoin

Tuy nhiên không dược dùng axit Folic riêng biệt hay dùng phôi hợp với vitamin B|2

\’ứi lieu không dù dê diéu trị thiếu máu nguyên hổng cầu khổng lồ chưa chán đoán dược chắc chán Các c h ế phẩm da vitamin có chứa axit Folic có thế gây nguy hiểm

vì che lãp mức độ thiêu thực sự vitamin Bịi tronc hênh thiếu máu nguyên hổng cáu

do thiêu vitamin B 12 Trong trường hợp cơ thê thiếu vitamin Iỉ|2 tránh không sứ dụng chi axit Folic do cỏ thế thúc đẩv thoái lioá tuý sống bán cấp

Đối với những người dang mang thai, nhất là những người dang đicu trị động kinh hay sốt rét cần bổ xung axit Folic (200 đến 400|ug mỗi ngày)

II T ổ n g q u a n tìn h h ìn h n g h icn cứu tr o n g và n g o à i nước

/ / / Tóm tăt các CÓHỊỈ trình xác dinh axit Ịù tỉic Ịỉ5-23Ị

H.Jacopsen và cộng sự xác định axit I;olic tron Si được phain sứ dụng phưưng pháp cực phổ xoay chiều chọn pha Cực phổ dược ghi vó'] dung dịch có pH 5.5 từ 0.4 iióc pha ()" biên độ xoay chiêu 28mV Khoáng tuyốn tính từ 2.10 XM đen 2 1 0 r’M

Mẫu thuốc được xử lý hằng dung dịch DTPA (lOnil DTPA 0 15M pH 8 với khoảng 30-60fig axit Polic>[22]

C.M.G Van den Berg và cộng sự xác dịnh hàm lượng axit F;oIic trong nước hién bằng phương pháp von-ampc hoà tan hấp phụ theo pic khứ ớ -0.75V Các điếu kiện tối ưu gồm: thế diện phân -0.25V; plỉ dung dịch do 8.5 hoà tan theo c hế dợ sóng vuóng với tần số 2 5 - 10()Hz Khoảng tuyến tính cúa phương pháp 0 0 9 õ 0 0 n M (với tliừi gian diện phân 60s)Ị 19]

Dcn-Bai Luo 118J xác dịnh axit folic băng phương pháp von-ampe hoà tan hấp phụ irên diện cực giọt Hg tĩnh Điều kiện tối ưu gồm: non axit H,S()j 0.1 M thố diện phân -0.3V xác định theo pic khứ ớ -0.75V Ghi dường hoà tan theo kỹ thuật xung

vi phân cho dộ nhạy cao hơn xung thường Với thời gian làm giàu 5 phút, giới hạn

phát hiện cúa phương pháp là 10 "'M; RSD là 1.217( với nồng dộ 5.10 XM Gielatin và

Br ánh hướng đốn phép xác dinh

M.J.F Villamil và cộng sự xác dịnli dồng thời ribollavin và axit folic khi chuán hị niulli vitamin bằng phương pháp von-ampe hấp phụ xoav chiều chọn pha Trong nén tlộm acctal 0.1M (pH =5), pic hoà tan cúa axit lolic xuất hiện ớ-().55V(so với diện cực Ag/AgCI) Các diêu kiện tối ưu khi xác dịnh axit l-olic trong nền này là thô diện phân -0 IV; gill đường hoà tan theo kv thuật xoav chiều với tán sô 7511/, thê xoay chiếu 20mV; tốc dộ quét thế 10mV/s Độ lệch chuán 0.74% ứ nồng dộ axit Folic1.10 XM Các kết quả dược phán tích so sánh với phưưng pháp sắc kí lỏng pha dáo cho kết qú phù hợp [ 2 3 1

Cũng sử dụng phương pháp von-ampe hoà tan hấp phụ dòng xoay chiéu trong 116) Jilin Hail và cộng sự áp dụng vào hệ dòng cháy xác định hàm lượng axit Folic trong khoáng nồng dộ 10 *-10 " M với hệ số tương quan 0.998

J.Aime/ del Pozo I 15 20] xác dinh axit Folic trên VI diện cực màng Hg trôn nen than Các diều kiên lao lối ưu dê tạo màng tliuý ngân cũng nhu dế phán tích axil folic dã dược ntihicii cứu Khoáng tuyến tính cua phương pháp 1.10 "M clẽn 5.0 XM giới hạn pliál hiện 9.10 "'M RSD 1.44r/r ứ nồng độ 4 1 0 XM (n=10)

III Lựa ch ọn dối tượng ngh icn cứu

Qua tham kháo tài liệu C Ũ I12 như nhu cẩu lliực tế với V tướng xây dựng phương pháp mới làm pinion” pháp dối clúrniỉ phán lícli hàm lương axit ỉ-olic trong dược phấm

ch lì nil lôi imliiôn cún xác dịnli hàm lượniỉ axil l-olic tronti một số mẫu llniốc hăng plnrơim pỉuíp von-ampe hòa tail calol IICII diC'11 cực tiiol ill! treo

5

IV N ội d u n g n ghiên cứu

I V ỉ N guyên tắc chu n g của phương ph áp von-am pe hồ tan

Quá trình phân tích theo phương pháp von-ampe gồm 3 giai đoạn: Giai đoạn làm giàu, giai đoạn dừng và giai đoạn hồ tan

Giai cĩoạn làm giùir Là quá trình điện phân đế làm giàu chất phân tích lên bề

mặt điện cực hoạt động dưới dạng kim loại hoặc hợp chất khỏ tan Điện cực làm việc thường là điẹn cực lỉg treo ( I IMD h) cĩ kích thước nhỏ cực đĩa quav bằng vật liệu trơ (như than thuý tinh, than nhão , than ngâm tám, platin ): cực màng Ilg trên

bề mặt cực rắn trơ; điện cực màng Bi (điểu chế tại chỗ hay diều chê trước) Quá trình điện phân thường được tiến hành trên các máv cực phổ thịng thường tại thế khơng dổi và khuấv dung dịch với tốc độ đều Nếu dùng cực dạng đĩa thì dùng các cực quay quanh trục của nĩ, nếu dùng cực thuy ngân tĩnh thì khuấy dung dịch bang máy khuấy từ

Cỉiưi doạn củỉì hảỉìỊị' Thường 15-30 giây, dung dịch được dê vên đê phân bố

deu chất phân tích trên bé mặt diện cực

Giai doạiì ỈÌÓ ỉan: Là quá trinh hồ tan chất phân tích irên bề mặt điện cực

làm việc bàng cách quét thế theo một chicu xấc định (anot hoặc catot) sau dỏ ghi dường von-ampe hồ lan băng mội kĩ thuật diện hố nào dỏ Nêu quá trình liồ tan

là quá trình anot thì phương pháp này dược gọi là von-ampe hồ tan anot (ASV) ngược lại nếu quá trình hồ tan là quấ trình catot thì phương pháp này dược gọi là von-ampe hồ tan catot (CSV)

Đại lượng điên hố ghi được trong quá trình hồ tan trong những điểu kiện thích hợp tỉ lệ thuận với lượng chất dà kết tủa trên bể mặt điên cưc cũng như nồng

dộ chất phân lích trong dung dịch

IV 2 N guyên ỉý p h ép do

Ghép nối potentiostat với hệ ba điện cực: diên cực hoạt dộng (điện cực HMDIÍ) diện cực so sánh Ag/AgCl diện cực phù trợ Glas\ cacbon

Giai doạn làm giàu: quá trình hấp phu của axit iolic lên điện cực hoạt dộng

Giai đoan hịa tan: quét thố từ -0.2V dốn -IV: LỊIIá trình khử cua axil folic

PoMc actd (iy 5.8-dlhydrofolk: ackJ (II)

6

ỈV.3 Đường von-am pe vòng của axỉt Folic

Trước khi nghicn cứu các tính chất diện hoá của axit Folic và khả năng ứng dụng trong phân tích và đế hiểu rõ cơ chế và các quá trình điện cực chúng tôi tiến hành ghi đường Von- Ampe vòng (CV) của axit Folic Điều kiện ghi dường c v như sau: rốc dộ quét thế 100 mV/s, quét từ -200 dến -1000 mV theo chiều phân cực catoi và -1000 mV dến -200 mV theo chiều phân cực anổt

Qua dường Von-Àmpe vòng (CV) trên ta thấy:

Khi ghi dường von-ampe vòng ỡ plỉ =8.5: Khỉ phân cực theo chiều catot xuất hiện 1 pic ờ -SOOmV, và khi phân cực theo chiêu anot có xuất hiện I pic ở khoảng -780mV khi ghi lặp lại nhiều vòng thì cường dộ dòng giảm dẩn do có

sự chc phủ bề mặt diện cực 11MDH

Qua dường von-ampc vòng, giá trị cường

độ dòng khi phân cực theo chiêu catot và anot, ta nhận thấy quá trình khứ diện cực cùa axil Folic Irong ncn pỉl 8.5 thuán nghịch, dicu này cũng phù hợp với kết quã kháo sát ánh hướng của kv thuật £hi dường von-ampe

Hình 1 Đường von-am pe vòng

IV 4 Sụ xuất hiện pic hoà tan của axỉt Folic

Đê xác định pic hòa tan của axit folic dầu tiên chúng tôi diện phân dung dịch cỏ thành phẩn:

ampe đường nén trong khoảng từ ÕOOmV dến - lOOOmV, thu được đường nền phảng Khi thêm a.xit folic, xuất hiện l pic ở -0.73V giá trị cường dộ dòng pic tăng khi tăng nống dộ axil Folic Pic hoà tan này dược sứ dụng trong nghiên cứu tiếp sau.

IV 5 K hao sát ảnh hướng của kỹ thuật đo

Chúng tôi kháo sát 3 kỹ thuậl ghi dường hòa tan là sóng vuông (SqW) xung vi phân (DPI1), dòng mộl cliicu DC với dung dịch có nống dộ axil folic x.82ppb trong nén đệm borat pll 8.5, thu dược các két quá sau

Hình 3 Anh hướng c ủa kv thuật đo

"1

2 0 O nH - 2 Sóng D IT

-51.1 J ’ > 3 Sóng SlịVV

Qua kluu) sál chúng lõi nhạn l h ã \ kill g ill dươnịi hoa tail

•30 ■>, theo k\ thuật sóiii! vuông, cường độ dong Ihu dược lá lớn

-y o ũ m - 7 0 0 rr * 0 0 rr 9 0 Crr,

11 <«1 d ườn II von-umpe \ ÒI111

IV 6 K hảo sát ánh hướng của t ì 2 htìà tan

Nổim dộ oxy hoà tan trong dung dịch phân tích thường có từ 10 'M - 2.10 ‘M Oxy liơà tan trong dung dịch phân tích sẽ ảnh hướng đến píc hoà tan trC*n cả 2 phương diện: làm biến dang pic và làm giảm độ nhạy cúa phép đo

(), + HịO +2e = + 2 0 H ớ khoáng thế 0 -> -0.3V

11,0 +2c = 2()ll ứ khoang thố - 0 8 —> - ] 1 V

Do \ã \ khao sái anh hưont! cùa 0X1 trong quá trình thí nghiệm là rất cán thiết

X

8.82ppb, đệm borat pH= 8.5, Edp = -0,2V, tlir=60s, kích cỡ giọt: 3 tốc độ quét thê 100mV/s, tốc độ khuấy: 1600 vòng/phút Kết quả khảo sát dược lóm tắt trong báng 1:

B ả n g l Ảnh hưởng của ( ) 2 hoà tan

do, ỡ dâv chúng tỏi sử dung khí trư N 2, thời gian xục khí 180s

IV 7 K háo sáỉ ánh hường của các thông sỏ máy

Các thông sỏ cúa thiết hị cỉo cổ ánh hướng trực tiếp đốn kết quá phân tích (lược the hiện qua đỏ chính xác, dộ lặp lại, độ chọn lọc cũng như độ nhạy của một phương pháp phân tích còng cụ Vì vậy, trước khi phàn tích một mẫu chuẩn hay inảu thực tế, chúng ta cần tối ưu các điổu kiện của máy do dể kết quả thu dược dạt kết quả tốt

I V J Ị K h á o sát anh h iù h iạ n i a thé hấp p hụ

Thố hấp phu là you tỏ quan trọng quyết định đến kết quá cúa phép xác dịnh, vì vậy việc chọn thế hấp phụ thích hợp quyêì định rất nhiều đến quá trình thí nghiệm, dê tiến hành khảo sát ánh hướng cúa thê' điện phán chúng tôi tiến hành kháo sát với dung dịch cỏ thành phẩn: axit folic nồng độ 8,82ppb pỉl cúa dung địch diện phân là 8Õ độm borat các thông số máy do được chọn : ỉdp= 60s phân cực catôl sử dụng

kỹ thuậl sổng vuông với lốc độ quét thế 100 mv/s kích cờ giọt 3, thừi gian sục khí

Ị 80s tốc dỏ khuấy I600vòng/phút Kết quã kháo sái ghi ở báng 2

9

Bảng 2 Khảo sát ảnh hưởng của thế hấp phụ

Hình 5: Đồ thị biếu diễn sự phụ thuộc của cường độ I vào thê hấp phụ

Qua dường hiếu diổn trcn chúng tôi thấy giá trị cường độ dòng tăng nhẹ khi thố hấp phụ thay dối từ ov đến -0.2 V: sau đó cường dộ dòng giảm nhẹ khi thố hấp phụ thav dổi từ -0.2 den -0.7V; giá trị cường dộ dòng giám mạnh khi thế hấp phụ âm hơn thế khứ của axit lolic (từ -0.8V đến -l.OV) Điểu này cổ the giái thích do sản phám phản ứng khứ không hấp phụ dược trcn diên cực giot Hg.Giá tri thê' hấp phụ trong khoảng -0.2 đến -0.4V được chọn cho các khao sát tiếp sau

I V 7.2 Kháo sái áỉih hicờỉiạ của thời í>itỉ/ỉ hấp phụ

Kháo sát ánh hướng cúa thời gian hấp phụ được tiến hành với dung dịch có thành phần: dậm borat pH= 8.5 iiđp = -0,2V, tốc độ quét thế 100mV/s kích cở giọt :3, thời gian sục khí 180s, tốc độ khuấy : 1600 vòng/phút Nồng độ axit folic là 8.82ppb

và 1.22 3 ppb

Kcì quà kháo sál ghi ớ báng dưó’i đây:

Bàng 3 K háo sất thòi gian hấp phu với dung dịch axit folic có nóng đọ 8,82

Hình 6 Đổ thị biêu dic*n sự phụ thuộc của cường dò Ip vào thời gian hâp phu với nỏng độ 8.82ppb axit folic

Ban** 4 Kháo sát thời gian hấp phụ với dung dịch axit folic cỏ nông độ 1.323pph

1115

thực nghiệm khi nồng độ axit Folic trong khoảng 8.82ppb thì thời gian hấp phụ cờ 60giây; còn khi nổng độ axit Folic nhỏ hơn thời gian hấp phụ từ 120-180 giây được chọn.

I V 7.3 K h ả o sát ảnh hương của tấc độ k liitấ y

rốc độ quay cực là điều kiện thưý động lực học quan trọng ảnh hướng đến sự chuyến khối và do đó tác động đến quá trình hấp phụ làm giàu.Theo Bard dòng đỉnh hoà tan Ip sẽ tăng tuvến tính với w l/2 cho đến khi đạt được nồng độ cân hàng của chất trên bé mặt điện cực II MDE (tức là tuân theo quy luật hấp phụ đảng nhiệt langmuir) và sau dó dòng đỉnh hoà tan không lăng khi tiếp tục tãng \v

Tiên hành ihí nghiệm với các điểu kiện tương tụ như II.5.2, thay đối tốc dộ khuấy

cúa que khuấy từ 200 đến 2600 vòng/phút, kết quá ánh hướng của tốc độ khuấy trong quá trình hấp phụ làm giàu chất trên diện cực 1IMDK dược tóm tắt trong báng

lỉán g 5 Kháo sát ảnh hướng của tốc độ khuáv

Hình 7 Kháo sát ánh hướng của tốc đô khuấy

Qua báng kôì qua chúng tói thấy răng khi dung dịch không khuấy ihì pic thấp còn khi tăng tốc độ

khuấy giá trị cưànn độ hầu như khổng thay dối

diều này phù hợp với cơ chế giá thiết trong phẩn(l) Do vậy chúng tỏi chọn tốc độ khuấy là

1600 vòng/phút vì khi dó pic thu dược ốn định

I V 7.4 K h a o sủĩ iin ỉỉ luí(>'nìi cùa ỉôt' iĩộ pha n cực

12

1 rong cực phố, đặc biệi khi ghi theo chê độ SqW tốc độ phân cực có ảnh hương dáng kê dên cường độ dòng pic hoà tan Tăng tốc dô phân cực giá trị cường dộ dòng

sẽ tăng, tuy nhiên cùng với việc tăng cường dộ dòng là sự giảm dộ cân dối cùa pic Điều này dưực thấy rõ đặc biệt khi phân tích hàm lượng rất nhò các chấl Tốc dộ quét thê dược xác dịnh bới bước thế (U„lcp) và thời gian mỗi bước thế ( tvkT) : V =

Như vậy, tăng tốc dộ quét bằng cách giảm thời gian mỗi hước thế ( s) hoặc tăng bước nháy thế lên (mV)

Với kỹ thuật sóng vuông, chúng tôi khảo sát lới tốc độ quét thế với tần sô 50Hz bằng cách thay đối hước nhảy thế với diều kiện do: nồng dộ axil Folic 8.82ppb, dệm borat pl 1= 8.5, Hh|) = -0.2V thp =60s với chê dộ ghi pic hoà tan cùa axil I;olic

là sóng vuông, kích cữ giọl 3 thời gian sực khí 180s, tốc độ khuấv: 1600vòng/ phút Kết quá kháo sát ghi ứ háng dưới dây:

Báng 6 Kháo sát ánh hướng tốc dộ phân cực

Trong các giá trị tốc độ quét thế khảo sát, ớ tốc độ 100 mV/s (tương ứng hước nháy thế là 5 mV và thời gian mỏi bước thố là 0.05s) giá trị cường dộ dòng thu dược là lớn nhất, pic thu dược cũng cân dối, do vậy chúng tôi chọn giá trị nàv cho các khảo sát tiếp theo

IV 8 K háo sát á n h h ư ớ n g của th à n h ph ấ n nén

ỉ \ '.8.1 K h á o sát lính h ư ó lií’ cùa p l l

pi 1 là một trong những yếu tỏ ảnh hướng dến quá trình khử của axil folic Vì thế việc chọn pi ỉ thích hợp là một vấn đo hốt sức quan trọng trong phán tích, dồng thời qua giá trị pi I khác nhau phán nào chúng ta hiếu dược bán e l i c i t và cư chê' cùa quá trình khử cực Chúng tôi tie'll hành khao sát ảnh hướng của pH trong khoáng từ 5.5 dến 9 sứ dụng các hộ đệm khác nhau: dệm acetat và dệm borat Các khảo sát dược tiến hành với dung dịch có nồng độ cùa axil folic là 22.05 ppb Các thông số máy do dược chọn như trong phấn II.5

13

Bảng 7 Khảo sát ánh hưởng của pH

Hình 8 Kháo sát ảnh hướng của pH

Qua thực nghiệm khảo sát ảnh hưởng cúa pH, chúng tôi nhận thấy:

Với giá trị pH íừ 4-6 (đệm acetat): xuất hiện 3 pic khử của axil folic

Với giá trị pH từ 7-10 (đêm borat): chỉ xuất hiện 1 pic ở -0.75V giá trị cường độdòng 011 định trong khoáng pH íừ 7.0 đến 8-5, tiếp lục tăng pH giá trị cường đỏ dònggiam

Clíc kết quá này hoàn toàn phù hợp với [ 19] r| rong các khao sál tiêp theo, chúng lỏi chọn pỉ ỉ—8-rS: clệm borat

Ị\ \H.2 K hào sủĩ íitìh hướng của tìồtìg dộ dậm

Với p[ 1=8.5 tiệm borat, chúng tỏi kháo sát ánh hướng nống dộ ciệm horat, với các diều kiện đo như sau: Nồng dộ axit Folic 8.82ppb H(lp = -0.2V Tốc độ quét lOOniv/s kích cờ giọt: 3 thời gian sue khí 180s tốc độ khuấy: 1600 vòng/phút th|)

= 60s

Báng 8 Khảo sát ảnh hưứng cua nồng do dệm Nồng độ đệm borat (M) 1,25.10 1 2.5.10 • 5.10 ' 7.5.10 ’

ly=-0.8V

I hỏng sô máv

Thố diện phàn: -0.2V

Thời gian diện phàn:

60s khi nồng dộ khoáng lOppb

Ảnh hLicVnu cua thòi gian

Anh hướng cua cliât hoạt dộng bẽ mậi

Anh lurớnti ciia một sõ cation (I;c(ll) I' c ( III)) và union ( lìr )

Anh hướng của một sô vitamin (li,, Bi:)

Trong phương pháp von-ampe hoà tan hấp phụ sự có mặt của các chất có khá nãna hấp phu trên bổ mặt giọt Hg dều gây ánh hưởng đốn phép xác định do quá trình háp phụ cạnh tranh Đế kháo sát ánh hướng cúa Gielatin chúng tôi tiến hành do cường

dộ pic khử của 17,64ppb axit íolic khi chưa có Gielalin và có mặt giciatin các kết quả thu được cho ớ bảng sau:

Bảng 10 Khảơ sát ảnh hướng cùa gỉelatỉn

IV 9 ỉ K hảo sút ánh hưởng của chất hoụĩ động bê mật

dộ pic hoà tan của axit folic, và cường dộ này giám dần khi nông cỉộ của Gelatin

tãng dần tù 0,()()2f/ khi nống Gelatin băng 0.012 (( thì cường dỏ píc giám X2{7(

cường dộ pic ban dấu

ỉ \ .9.2 K ìu ìo sát ú ỉỉh ỉìưàììịi cua ỉ : e ị ỉ ỉ ) vù ị Ị I I ì

Hản<> 11 Kháo sát ánh hưón« cua Fe

98

10006796

l í

16

nhiên Fe(III) ờ nồng dộ cờ

[Fc(II)J lại hầu như không sây ảnh hưởng dến cường dộ dòng pìc hoà tan của axit folic Do đổ khi phân tích mảu thực tế cổ nhiều I;e cần loại trừ ảnh hường

i n 1 1 1 1 /IIV ,rỊI bàng cách oxì hoá Fe thànhHình 11 Anh hưởng của nồng độ Fe(ll) và Fe(III)

I e(III) hav dùng các phối tử tạophức với Fe (xitrat, tactrat,DTPA )

ỈV 9.3 Kỉìíio sát âiỉỉi hưàtiỉỊ của Bỉ

Những ion cỏ khả năng tạo phức với lỉg(II) cũng cổ khá năng gây ảnh hướng đốn phép xác dịnh axil I;olic Sứ dụng các đicu kiện tối ưu, chúng tối khảo sát ánh hướng của Br với nồng dộ từ 0 đốn UOOppm Kốt quá thu dưưc ớ hang 12

Bann 12 Khao sát anh hướn« của Br

I V 9.4 Kỉuìo sút ánh hỉứhỉi* cùa vitamin C:

Háng 13 Kháo sát ành hướng của nổng dỏ Vitamin c