Bài báo trình bày quy trình phân tích xác định đồng thời hàm lượng ba chất kháng sinh amoxicilin, oxytetracycline, ofloxacin bằng phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC). Kết quả nghiên cứu cho thấy có thể sử dụng phương pháp HPLC để xác định đồng thời hàm lượng ba chất kháng sinh amoxicilin, oxytetracycline, ofloxacin trong thực phẩm với độ chính xác cao.
JOURNAL OF SCIENCE OF HNUE Natural Sci., 2013, Vol 58, No 3, pp 24-32 This paper is available online at http://stdb.hnue.edu.vn NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG MỘT SỐ THUỐC KHÁNG SINH TRONG THỰC PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) Trần Thị Hồng Vân, Đào Nguyễn Thu Hà, Trần Minh Đức Nguyễn Quang Tuyển Khoa Hóa học, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Tóm tắt Bài báo trình bày quy trình phân tích xác định đồng thời hàm lượng ba chất kháng sinh amoxicilin, oxytetracycline, ofloxacin phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) Kết nghiên cứu cho thấy sử dụng phương pháp HPLC để xác định đồng thời hàm lượng ba chất kháng sinh amoxicilin, oxytetracycline, ofloxacin thực phẩm với độ xác cao Dựa điều kiện tối ưu khảo sát, quy trình phân tích ứng dụng để xác định đồng thời hàm lượng amoxicilin, oxytetracycline, ofloxacin số mẫu thực phẩm thịt gà, thịt lợn bán thị trường Kết phân tích cho thấy hàm lượng amoxicilin oxytetracyclin số mẫu thịt gà thịt lợn bán thị trường cao gấp nhiều lần so với tiêu chuẩn cho phép thực phẩm Từ khóa: HPLC, antibiotics, amoxicillin, oxytetracycline, ofloxacin Mở đầu Trong chăn nuôi, kháng sinh (KS) sử dụng với mục đích: điều trị bệnh, phịng bệnh dùng chất kích thích sinh trưởng Tùy theo mục đích sử dụng mà liều lượng phương thức sử dụng KS có khác Việc sử dụng KS không cách chăn nuôi dẫn đến hậu nghiêm trọng làm tăng tượng kháng kháng sinh lồi vi khuẩn gây bệnh người vật ni [1-3] Hiện nay, tình trạng sử dụng thuốc kháng sinh chăn ni Việt Nam khó kiểm sốt Người nơng dân muốn tăng suất sản lượng sử dụng kháng sinh tràn lan, không dẫn, liều lượng, dẫn đến dư lượng thuốc kháng sinh sản phẩm chăn nuôi lớn, vượt giới hạn an toàn cho phép [4, 5] Các chất kháng sinh tồn dư lại sản phẩm chăn nuôi thịt, trứng, sữa, gây tác hại cho người tiêu dùng Lượng kháng sinh tích tụ dần thể người dễ bị “nhờn” thuốc, khả chống chọi với bệnh tật [4-6] Vì vậy, việc phân tích, xác định xác hàm lượng loại thuốc Ngày nhận bài: 22/4/2013 Ngày nhận đăng: 10/6/2013 Tác giả liên lạc: Trần Thị Hồng Vân, địa e-mail: hongvan0505@yahoo.com 24 Nghiên cứu xác định hàm lượng số thuốc kháng sinh thực phẩm kháng sinh sản phẩm chăn nuôi vô quan trọng có ý nghĩa lớn vấn đề an tồn thực phẩm Trong báo chúng tơi trình bày quy trình phân tích định lượng số thuốc kháng sinh (amoxicilin, oxytetracyclin, ofloxacin) thường sử dụng thức ăn chăn ni phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) [7-9] ứng dụng để xác định hàm lượng thuốc kháng sinh thực phẩm, chủ yếu thịt gia súc gia cầm 2.1 Nội dung nghiên cứu Thực nghiệm * Hóa chất - Các chất chuẩn: amoxicilin, oxytetracyclin, ofloxacin chất chuẩn tinh khiết Viện kiểm nghiệm - Bộ Y tế - Tất hoá chất dung môi sử dụng nghiên cứu đạt độ tinh khiết phân tích * Thiết bị - Máy sắc kí lỏng hiệu cao hãng Shimadzu (Nhật Bản), cột ODS C18, detector hấp thụ tử ngoại UV-VIS, bơm cao áp SPD 20A - Bộ lọc dung môi lọc mẫu với đường kính lỗ màng lọc 0,45 µm - Cân phân tích Startorius có độ xác ±0,1 mg Đức - Máy pH met TOA pH METER HM – 16S Nhật Bản * Quy trình lấy xử lí mẫu thịt gà thịt lợn - Lấy xử lí sơ mẫu Thịt gà thịt lợn mua chợ địa bàn Hà Nội, xay nhuyễn bảo quản tủ lạnh -18 o C - Quy trình xử lí mẫu + Cân xác 10,0 g mẫu xay nhuyễn cho vào bình eclen + Thêm 15 mL dung dịch axetonitril, nghiền lắc Lọc lấy dịch sang cốc thủy tinh Lặp lại bước lần để chiết dư lượng kháng sinh mẫu với hiệu suất tối đa - Làm dịch chiết + Sử dụng cột silica gel để làm dịch chiết Hoạt hóa cột mL metanol mL nước cất Loại bỏ dung dịch chảy qua cột + Cho dịch chiết chảy qua cột Ttrong giai đoạn này, kháng sinh mẫu hấp thị lên bề mặt hạt rắn chứa cột Điều chỉnh cho dịch chảy khỏi cột với tốc độ chậm, giọt + Rửa cột mL nước cất lần, loại bỏ dịch chảy khỏi cột, làm khô cột Tiếp theo rửa giải 10 mL metanol với tốc độ chậm, giọt Thu dịch khỏi 25 Trần Thị Hồng Vân, Đào Nguyễn Thu Hà, Trần Minh Đức Nguyễn Quang Tuyển cột, mL định mức vào bình mL metanol 2.2 Kết thảo luận 2.2.1 Khảo sát điều kiện định lượng đồng thời ba chất kháng sinh phương pháp HPLC Qua nghiên cứu tính chất lí hóa chất kháng sinh (amoxicilin, oxytetracyclin, ofloxacin), kết hợp với điều kiện tài liệu tham khảo điều kiện có sẵn phịng thí nghiệm, chúng tơi lựa chọn kiểu sắc kí phân bố pha đảo, sử dụng cột silica C18 Trong trình thực nghiệm chúng tơi tiến hành khảo sát điều kiện sắc kí như: lựa chọn pha động, vận tốc dịng, bước sóng phát hiện, thể tích tiêm * Khảo sát lựa chọn pha động Chúng tiến hành khảo sát mẫu chuẩn hỗn hợp loại kháng sinh điều kiện sắc kí: tốc độ dịng 0,75 mL/phút, thể tích tiêm 10 µL hệ pha động với thành phần gồm metanol - axit oxalic - acetonitril với tỉ lệ khác nhau, λ = 254 nm Kết khảo sát cho thấy: với pha động metanol - axit oxalic - axetonitril theo tỉ lệ 20: 55: 25 (%), sắc kí đồ cho hình dáng pic gọn, thời gian lưu vừa phải Vì chúng tơi chọn pha động metanol - axit oxalic - axetonitril với tỉ lệ 20: 55: 25 (%) * Khảo sát lựa chọn bước sóng Để lựa chọn bước sóng thích hợp phát đồng thời loại kháng sinh, tiến hành quét phổ UV dung dịch chuẩn riêng rẽ kháng sinh dải sóng 190 - 400 nm (Hình 1, 3) Hình Phổ hấp thụ UV oxytetracyclin tR = 4,928 phút Hình Phổ hấp thụ UV amoxicilin tR = 2,604 phút Kết cho thấy bước sóng hấp thụ cực đại là: amoxicilin - 231 nm; oxytetracyclin - 269 nm ofloxacin - 297 nm Từ kết quét phổ UV, nhận thấy cần phải lựa chọn bước sóng trung gian cho độ hấp thụ loại kháng sinh tương đối lớn để kết phân tích có độ nhạy cao Tại bước sóng λ = 240 nm độ hấp thụ kháng sinh tương đối lớn; đường thẳng, pic xuất với thời gian lưu phù hợp, pic đều, cân xứng (Hình 4) Vì bước sóng chọn để nghiên cứu định lượng hỗn hợp kháng sinh 240 nm 26 Nghiên cứu xác định hàm lượng số thuốc kháng sinh thực phẩm Hình Phổ hấp thụ UV ofloxacin tR = 1,736 phút Hình Sắc kí đồ hỗn hợp ofloxacin, amoxicilin, oxytetracyclin bước sóng 240 nm * Khảo sát lựa chọn tốc độ dịng Chúng tơi tiến hành chạy sắc kí dung dịch mẫu chuẩn hỗn hợp tốc độ khác Kết cho thấy với tốc độ dòng 0,75 mL/phút pic tách tốt, áp suất cột vừa phải thời gian lưu ngắn Vì chúng tơi chọn tốc độ dịng 0,75 mL/phút để nghiên cứu định lượng chất Từ kết khảo sát, chúng tơi xây dựng quy trình sắc kí có khả phân tích tốt kháng sinh sau: Cột tách: cột silica C18 (5 µm, 4,6 cm x 150 cm); Pha động: metanol - axit oxalic - axetonitril theo tỉ lệ 20%: 55%: 25%; Tốc độ dịng: 0,75 mL/phút; Thể tích tiêm: 10 µL; Detector UV: bước sóng 240 nm; Nhiệt độ phân tích: nhiệt độ phịng Qua thực nghiệm với điều kiện sắc kí trên, chất tách hoàn toàn, pic cân đối gọn, thời gian lưu chất hợp lí đảm bảo thời gian phân tích 2.2.2 Đánh giá phương pháp định lượng - Chuẩn bị hỗn hợp dung dịch chuẩn: Pha hỗn hợp dung dịch chuẩn gốc chứa đồng thời hoạt chất amoxicilin, oxytetracyclin, ofloxacin: Cân xác 0,0367 g amoxicilin; 0,0323 g chất chuẩn oxytetracyclin 0,0418 g ofloxacin riêng rẽ Hòa tan oxytetracyclin ofloxacin dung dịch HCl 0,01 M; hòa tan amoxicilin dung dịch H3 PO4 pH ≈ 3,5; trộn hỗn hợp rót vào bình định mức 50 mL, định mức tới vạch nước cất hai lần - Khảo sát tính thích hợp hệ thống sắc kí: Để đánh giá phép định lượng HPLC xây dựng, trước hết ta phải tiến hành khảo sát tính thích hợp hệ thống sắc kí Việc khảo sát tính thích hợp hệ thống sắc kí tiến hành qua việc tiêm lặp lại lần dung dịch hỗn hợp chuẩn chuẩn bị phần 2.1 Kết tính tốn cho thấy đại lượng đặc trưng như: số đĩa lí thuyết (N), hệ số bất đối (AF) độ phân giải (RS ) ba pic nằm giới hạn cho phép Vậy khả tách ba chất hệ thống sắc kí có tính thích hợp tốt u cầu độ lệch chuẩn tương đối nói chung thấp 2% chấp nhận Từ kết cho thấy, RSD% thời gian lưu, diện tích pic, độ phân giải pic nhỏ 2%, chứng tỏ 27 Trần Thị Hồng Vân, Đào Nguyễn Thu Hà, Trần Minh Đức Nguyễn Quang Tuyển hệ thống sắc kí có độ đảm bảo tính thích hợp ba thành phần phân tích 2.2.3 Khảo sát độ tuyến tính phương pháp xây dựng đường chuẩn - Khảo sát khoảng nồng độ tuyến tính Chúng tơi khảo sát phụ thuộc tuyến tính nồng độ chất cần định lượng với diện tích pic chất chuẩn amoxicilin, oxytetracyclin ofloxacin Kết khảo sát cho thấy nồng độ amoxcicilin biến thiên khoảng 0,0188 → 1,2040 mg/mL, oxytetracyclin biến thiên khoảng 0,0215 → 1,3760 mg/mL ofloxacin biến thiên khoảng 0,020 → 1,280 mg/mL, có tương quan tuyến tính nồng độ chất với diện tích pic tương ứng thể qua phương trình hồi quy với hệ số tương quan gần Trên sở đó, chúng tơi chọn nồng độ định lượng kháng sinh mẫu nằm khoảng tuyến tính khảo sát - Xây dựng đường chuẩn Đường chuẩn chất kháng sinh (amoxicilin, oxytetracyclin ofloxacin) biểu diển Hình 5, phần mềm Microsoft Excel Hình Đường chuẩn amoxicilin Hình Đường chuẩn oxytetracyclin Hình Đường chuẩn ofloxacin Để kiểm tra độ xác đường chuẩn xây dựng, pha dung dịch chuẩn kháng sinh hai nồng độ khác Bơm dung dịch vào thiết bị HPLC cho máy chạy thời gian lưu xuất pic sắc kí, ghi kết diện tích pic; lặp lại lần Dùng đường chuẩn xây dựng thay diện tích pic vào phương trình đường 28 Nghiên cứu xác định hàm lượng số thuốc kháng sinh thực phẩm chuẩn xác định nồng độ Cx So sánh Cx tìm theo đường chuẩn với giá trị thực pha với độ thống kê cho trước để kiểm tra độ xác đường chuẩn thu Độ xác đường chuẩn đánh giá qua giá trị độ lệch chuẩn S độ lệch chuẩn tương đối RSD (%), Kết thu cho thấy RSD (%) thấp 2% chứng tỏ đường chuẩn có độ xác cao lần phân tích 2.2.4 Khảo sát độ lặp lại độ phương pháp Chúng tiến hành khảo sát mức nồng độ, mức nồng độ tiến hành đo lần để khảo sát độ lặp lại diện tích pic, sau đánh giá độ phân tán số liệu dựa vào giá trị độ lệch chuẩn S độ lệch chuẩn tương đối RSD (%) Kết khảo sát cho thấy, độ lệch chuẩn tương đối RSD% thấp sai số với mức nồng độ kháng sinh tương đối nhỏ Như vậy, với chương trình sắc kí chọn, phương pháp định lượng ba kháng sinh có độ lặp lại cao Độ phương pháp xác định phương pháp thêm chuẩn (thêm khoảng 20%) Thêm vào mẫu thử lượng chất chuẩn cho tổng nồng độ chúng nằm khoảng tuyến tính khảo sát Tiến hành chạy sắc kí dung dịch chuẩn, dung dịch thử dung dịch thêm chuẩn, dựa vào diện tích pic dung dịch tính tỉ lệ thu hồi lượng chất chuẩn thêm vào theo công thức: C H(%) = (1) C đó: C nồng độ tìm lại trung bình, C0 nồng độ chuẩn thêm vào Đối với kháng sinh, tiến hành lặp lại thực nghiệm lần mức nồng độ thấp, trung bình cao (Bảng 1) Bảng Kết xác định độ kháng sinh thiết bị HPLC Nồng độ tìm Nồng độ chuẩn Độ lệch chuẩn Chất kháng Hệ số thu lại trung thêm vào tương đối RSD sinh hồi H (%) bình (mg/mL) (%) (mg/mL) 0,037625 0,037326 1,132 99,21 Amoxicilin 0,1505 0,151374 1,020 100,58 0,602 0,605758 0,830 100,62 0,043 0,0428 1,793% 99,57 Oxytetracyclin 0,172 0,1719 0,887 99,93 0,688 0,6853 0,433 99,61 0,04 0,0404 1,025 101,00 Ofloxacin 0,16 0,15995 0,731 99,97 0,64 0,6399 0,283 99,99 Kết cho thấy, tỉ lệ thu hồi trung bình kháng sinh cao: amoxicilin 99,21% - 100,62%, oxytetracyclin 99,57% - 99,93% ofloxacin 99,97% - 101,00% Mặt khác giá trị độ lệch chuẩn tương đối sai số tương đối thấp, nhỏ 2% Như phương pháp khảo sát đạt yêu cầu độ 29 Trần Thị Hồng Vân, Đào Nguyễn Thu Hà, Trần Minh Đức Nguyễn Quang Tuyển 2.2.5 Xác định hàm lượng chất kháng sinh thực phẩm * Đối tượng nghiên cứu Các mẫu thực phẩm nghiên cứu mẫu thịt gà thịt lợn bán chợ thành phố Hà Nội Mẫu xử lí làm sạch, tiếp lọc qua màng lọc 0,45 µm Mẫu sau xử lí tiến hành chạy thiết bị HPLC theo điều kiện phân tích chọn Xác định ghi lại giá trị diện tích pic sắc kí đồ tính nồng độ ba loại kháng sinh mẫu từ phương trình đường chuẩn; từ tính hàm lượng ba loại kháng sinh mẫu thịt ban đầu theo công thức: 1000 (2) C = Cm × m đó: C hàm lượng kháng sinh mẫu thịt gà thịt lợn ban đầu (mg/kg); Cm nồng độ kháng sinh dung dịch mẫu sau xử lí (mg/mL); m khối lượng mẫu phân tích * Xác định hàm lượng kháng sinh mẫu thịt gà thịt lợn Mẫu 1: Mẫu thịt gà mua ngày 12/10/2011 chợ Nghĩa Tân (xuất xứ: trại chăn ni gà Sơn Tây) Kết phân tích cho thấy Mẫu có amoxicilin với hàm lượng xác định theo phương pháp đường chuẩn 4,155 mg/kg, so với tiêu chuẩn cho phép TCVN (0,2 mg/kg [1]) cao gấp khoảng 20 lần Hơn nữa, sắc kí đồ Mẫu cho thấy mẫu có nhiều tạp chất gây nhiễu kết phân tích Vì thế, chúng tơi tiến hành phân tích mẫu theo phương pháp thêm chuẩn để loại trừ ảnh hưởng nền, cho kết phân tích xác Để tiến hành phân tích theo phương pháp thêm chuẩn chúng tơi chuẩn bị dãy dung dịch chuẩn amoxicilin có nồng độ khác Lần lượt thêm vào dung dịch chuẩn nói 50 µl dung dịch Mẫu Sau tiến hành chạy sắc kí dung dịch thu Từ kết thu biểu diễn phụ thuộc diện tích pic vào nồng độ amoxicilin thêm chuẩn phần mềm Microsoft Excel, thu đường thêm chuẩn Từ phương trình đường thêm chuẩn có dạng y = ax + b chúng tơi tính nồng độ b amoxicilin mẫu (x = ) 0,02948 mg/mL- tương ứng với hàm lượng amoxcicilin a mẫu thịt gà ban đầu 2,948 mg/kg (theo công thức (2)) Mẫu 2: Mẫu thịt gà mua ngày 19/10/2011 chợ Cống Vị (xuất xứ: trại chăn nuôi gà Sơn Tây) Kết xác định hàm lượng chất kháng sinh Mẫu theo phương pháp đường chuẩn cho thấy Mẫu có loại kháng sinh amoxicilin oxytetracyclin Hàm lượng amoxicilin mẫu 8,431 mg/kg, so với tiêu chuẩn TCVN cho phép (0,2 mg/kg) cao gấp 40 lần; hàm lượng oxytetracyclin 5,200 mg/kg, so với tiêu chuẩn TCVN cho phép (0,2 mg/kg) cao gấp khoảng 25 lần Sắc kí đồ Mẫu cho thấy mẫu có nhiều tạp chất gây nhiễu kết phân tích Vì thế, chúng tơi tiến hành phân tích mẫu theo phương pháp thêm chuẩn để loại trừ ảnh hưởng nền, cho kết phân tích xác Bằng phương pháp thêm chuẩn xác định nồng độ amoxicilin 30 Nghiên cứu xác định hàm lượng số thuốc kháng sinh thực phẩm Mẫu 0,07958 mg/mL - tương ứng với hàm lượng amoxicilin mẫu thịt gà ban đầu 7,958 mg/kg nồng độ oxytetracyclin 0,04799 mg/mL - tương ứng với hàm lượng oxytetracyclin mẫu thịt gà ban đầu 4,799 mg/kg Mẫu 3: Mẫu thịt gà mua ngày 22/11/2011 chợ Nghĩa Tân (xuất xứ: trại chăn nuôi gà Cầu Diễn) Kết phân tích theo phương pháp đường chuẩn cho thấy Mẫu có kháng sinh oxytetracyclin với hàm lượng 6,880 mg/kg, so với tiêu chuẩn cho phép TCVN (0,2 mg/kg) cao gấp khoảng 35 lần Sắc kí đồ Mẫu cho thấy mẫu có nhiều tạp chất gây nhiễu kết phân tích Vì thế, chúng tơi tiến hành phân tích mẫu theo phương pháp thêm chuẩn để có kết phân tích xác Bằng phương pháp thêm chuẩn xác định nồng độ oxytetracyclin Mẫu 0,04947 mg/mL - tương ứng với hàm lượng oxytetracyclin mẫu thịt gà ban đầu 4,947 mg/kg Mẫu 4: Mẫu thịt lợn mua ngày 19/10/2011 chợ Nghĩa Tân (xuất xứ: trại chăn ni Ứng Hịa) Kết phân tích theo phương pháp đường chuẩn cho thấy Mẫu có kháng sinh amoxicilin với hàm lượng 2,195 mg/kg, so với tiêu chuẩn cho phép TCVN (0,2 mg/kg) cao gấp khoảng 10 lần Sắc kí đồ Mẫu cho thấy mẫu có nhiều tạp chất gây nhiễu kết phân tích Vì thế, chúng tơi tiến hành phân tích mẫu theo phương pháp thêm chuẩn để loại trừ ảnh hưởng Nồng độ amoxicilin xác định phương pháp thêm chuẩn 0,01963 mg/mL tương ứng với hàm lượng amoxcicilin mẫu thịt lợn ban đầu 1,963 mg/kg So sánh kết phân tích theo phương pháp, chúng tơi nhận thấy phương pháp thêm chuẩn cho kết xác so với phương pháp đường chuẩn loại bỏ yếu tố ảnh hưởng mẫu Trong số trường hợp, sai lệch phương pháp đường chuẩn so với phương pháp thêm chuẩn không đáng kể, nằm giới hạn cho phép (< 15%) chấp nhận kết xác định theo phương pháp đường chuẩn Kết luận Tiến hành thực nghiệm thiết bị sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) để xây dựng phương pháp định lượng đồng thời kháng sinh amoxicilin, oxytetracyclin, ofloxacin mẫu thực phẩm, thu kết sau: - Có thể xác định đồng thời kháng sinh amoxicilin, oxytetracyclin, ofloxacin mẫu thực phẩm phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) đạt độ xác cho phép - Kết khảo sát độ tuyến tính cho thấy có tương quan tuyến tính chặt chẽ nồng độ diện tích pic hoạt chất, cho phép áp dụng quy trình phân tích để xác định hàm lượng kháng sinh mẫu thực phẩm với tỉ lệ hàm lượng khác - Áp dụng phương pháp HPLC phân tích số mẫu thực phẩm phát mẫu thịt gà, thịt lợn bán thị trường có chứa chất kháng sinh amoxicilin oxytetracyclin cao tiêu chuẩn cho phép nhiều lần 31 Trần Thị Hồng Vân, Đào Nguyễn Thu Hà, Trần Minh Đức Nguyễn Quang Tuyển TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Robyn L Goforth and Carol R Goforth, 2003 Appropriate Regulation of Atibiotics in Livestock Feed www.aasv.org/news/story/htm [2] Ghislain Follet, 2000 Antibiotic resistance in the EU – Science, Politics and Policy AgbioForum, Vol 3, No 3&3, pp 148-155 [3] Roe M T and Pillai S.D 2003 Monitoring and Identifying Antibiotic Resistance Mechanisms in Bacteria Poultry Science, 82, pp 622-626 [4] http://vietbao.vn/Suc-khoe/WHO-Can-han-che-dung-thuoc-khang-sinh-trong chan-nuoi/10829820/248/ [5] http://tailieu.vn/tag/tailieu/khangsinhtrongchannuoi.html [6] Bộ Y tế, 2008 Quy định giới hạn tối đa ô nhiễm sinh học hóa học thực phẩm Nxb Hà Nội [7] Zendenlovska Dragica et al, 2003 High-performance liquid chromatographic method for determination of Cefixime and Cefotaxime in human plasma Bulletin of the Chemists and Technologists of Macedonia, 22, pp 39 - 45 [8] Pehourcq F., Jarry C., 1998 Determination of third Generation cephalosporins by highperformance liquid chromatography in connection with pharmacokinetic studies Journal of Chromatography A, 812, pp 159 - 178 [9] J.A, 1987 Liquid-chromatographic determination of five orally active cephalosporins-cefixime, cefaclor, cefadroxil, cephalexin and cephradine in human serum Clinical Chemistry, 33, pp 1788 - 1790 ABSTRACT The quantitative determination of the presence of three antibiotics in chicken and pork using High Performance Liquid Chromatography (HPLC) In this study, a simultaneous quantitative determination of three antibiotics (amoxicillin, oxytetracycline and ofloxacin) was made using the High Performance Liquid Chromatography (HPLC) technique The results show that an HPLC analysis can be used to determine the content of amoxicillin, oxytetracycline and ofloxacin present in food simultaneously and with high precision and accuracy Under optimal conditions, the process was applied to determine, simultaneously, the content of amoxicillin, oxytetracycline and ofloxacin present in chicken and pork meat that was being sold in the marketplace The results showed that the content of both amoxicillin and oxytetracycline found in the some samples of chicken and pork meat were much higher than allowed by law 32 ... tích định lượng số thuốc kháng sinh (amoxicilin, oxytetracyclin, ofloxacin) thường sử dụng thức ăn chăn ni phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) [7-9] ứng dụng để xác định hàm lượng thuốc kháng. .. sóng chọn để nghiên cứu định lượng hỗn hợp kháng sinh 240 nm 26 Nghiên cứu xác định hàm lượng số thuốc kháng sinh thực phẩm Hình Phổ hấp thụ UV ofloxacin tR = 1,736 phút Hình Sắc kí đồ hỗn hợp... theo phương pháp thêm chuẩn để loại trừ ảnh hưởng nền, cho kết phân tích xác Bằng phương pháp thêm chuẩn xác định nồng độ amoxicilin 30 Nghiên cứu xác định hàm lượng số thuốc kháng sinh thực phẩm