NGHIÊN cửu xác ĐỊNH hàm LƯỢNG một só KIM LOẠI và VITAMIN bl, b6 BÀNG PHƯƠNG PHÁP háp THỤ NGUYÊN tử và sắc ký LỎNG HIỆU NĂNG CAO TRONG nấm LINH CHI NUÔI TRÒNG ở THỪA THIÊN HUÉ

Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH PHẠM THỊ THỊ THANH THANH THÚY THÚY PHẠM NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG MỘT SÓ KIM LOẠI VÀ VITAMIN Bl,ĐỊNH B6 BẰNG PHÁPSÓ HẤP THỤ NGHIÊN CỬU XÁC HÀMPHƯƠNG LƯỢNG MỘT KIM LOẠI NGUYÊN TƯ VÀBl, SẮC LỎNG HIỆU NÃNG VÀ VITAMIN B6KÝ BÀNG PHƯƠNG PHÁPCAO HÁP TRONG THỤ NÁM LINH CHI NUÔI Ở THỪA THIÊN NGUYÊN TỬ VÀ SẮC KÝ TRÒNG LỎNG HIỆU NĂNG CAOHUÉ TRONG NẤM LINH CHI NUÔI TRÒNG Ở THỪA THIÊN HUÉ CHUYÊN NGÀNH: HÓA PHÂN TÍCH MÃ SÓ: 60.44.29 LUẶN VĂN THẠC sĩ HÓA HỌC LUẬN VĂN THẠC sĩ HÓA HỌC Người hưởng dẫn khoa học: PGS TS: Nguyễn Khắc Nghĩa VINH-2013 VINH-2013 AAS Atomic Absorption Spectrometry Phép đo LỜI quangCẢM phổ hấp ƠN thụ DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ'VIÉT TẮT F-AAS Flamc -Atomic Absorption Phcp đo quang phổ hấp thụ Luận vãn dược thực Sở Y tế Thừa Thiên Huế - Trung tâm kiêm GF - AAS định thuốc, mỹ phâm, thực phâm; phòng Graphit-Atomic Absorption Phép đo quang phổthíhấpnghiệm thụ chuyên đề Hóa phân tích, Khoa Hóa trường Đại học Vinh HPLC Tôi xin bày tỏ lòng on chân thành Sắcbiết ký lỏng hiệu caovà sâu sắc đến PGS TS High performance liquid Nguyên Khăc Nghĩa giao đề tài, tận tình hướng dân, tạo điều kiện suốt trình làm luận vãn Tôi chân thành cảm on giúp đỡ tận tình thầy, cô: PGS TS Ngô Anh dã giúp đỡ định danh mẫu vật PGS TS Trân Đình Thăng giúp đỡ việc tìm kiếm tài liệu PGS TS Nguyễn Hoa Du TS Đinh Thị Trường Giang đọc góp nhiều ỷ kiến quý báu cho luận vãn Nhân dịp này, xin cảm on đến Ban chủ nhiệm khoa Sau Đại học, ban chủ nhiệm khoa Hỏa thầy cô giảo cản phòng thí nghiệm khoa Hóa học giúp đỡ tạo điều kiện cho suốt trình làm luận văn Phạm Thị Thanh Thúy MỤC LỤC Contents MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỎNG QUAN 1.1 IỚI THIỆU VÈ NẮM LINH CHI G 1.1.1 G iới thiệu nấm Linh chi 1.1.2 Ph ân loại: Nấm Linh chi có vị trí phân loại rộng rãi 1.1.3 C hu trình sống nấm Linh chi 1.1.4 nấm Những yếu tố ảnh hưởng đến trình sinh trưởng phát triển Linh chi 1.1.5 Thành phần hóa học 1.1.6 Tá c dụng trị liệu nấm Linh chi .6 1.2 GIỚI THIÊU CÁC KIM LOẠI: Cu, Pb, Co, Cd, Ca, Zn VÀ VAI TRÒ SINH HỌC CỦA CÁC KIM LOẠI 1.2.1 Gi ới thiệu kim loại Cu, Pb, Co, Cd, Ca, Zn 1.2.1.1 N guyên tố đồng (Cu) 1.2.1.2 N 1.2.2.6 Vai trò sinh học Zn .12 1.3 PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ MẪU XÁC ĐỊNH KIM LOẠI 13 1.3.1 Phương pháp xử lý mẫu ướt (bằng axit đặc oxi hóa mạnh) 13 1.3.2 Phương pháp xử lý mẫu khô (vô hóa khô) 14 1.3.3 Phương pháp xử lý mẫu khô ướt kết hợp 14 1.4 C PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH KIM LOẠI CÁ 15 1.4.1 Ph ương pháp phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) 15 1.4.1.1 Cơ sở lý thuyết phương pháp .15 1.4.1.2 Tra ng bị phép đo 17 1.4.1.3 Cá c yếu tố ảnh hưởng đến phép đo AAS 18 1.4.1.4 Ph ương pháp định lượng phép đo AAS 19 1.4.1.5 Ưu nhược điểm phương pháp 20 1.4.2 Mộ t số phương pháp xác định kim loại vét khác .21 1.4.2.1 Ph ương pháp điện hóa 21 1.4.2.2 Ph ương pháp quang phổ khác 22 1.5 GIỚI THIỆU VITAMIN BI, B6 23 1.6.1.5 Cá ch đánh giá pic 34 1.6.1.6 Cá ch tính kết 34 1.6.2 Ph ương pháp phổ đạo hàm .35 CHƯƠNG 2: KỸ THUẬT THỤC NGHIỆM 37 2.1 L ÁY MẪU 37 2.2 PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ MẢƯ XÁC ĐỊNH KIM LOẠI VÀ VITAMIN 38 2.2.1 Tra ng thiết bị, hóa chất, xử lý mẫu nấm xác định kim loại .38 2.2.1.1 .Tra ng thiết bị hóa chất 38 2.2.1.2 Xử lý mẫu nấm 39 2.2.1.3 Ph ương pháp định lượng 39 2.2.2 Tra ng thiết bị, hóa chất, xử lý mẫu nấm xác định vitamin Bl, B6 39 2.2.2.1 .Tra ng thiết bị hóa chất 39 2.2.2.2 .Điề u kiện tiến hành chuẩn bị hóa chất chuẩn 40 2.2.2.3 Xử lý mẫu xác định vitamin .41 2.2.2.4 .Ph ương pháp định lượng 41 3.3.1 Ảnh hưởng nồng độ axit loại axit 46 3.3.2 .Ảnh hưởng cation anion mẫu 47 3.4 KHẢO SÁT HIỆU SUÁT THƯ HÒI CỦA PHÉP ĐO AAS 47 3.5 PHƯƠNG PHÁP ĐƯỜNG CHUẨN CỦA PHÉP ĐO AAS 48 3.5.1 Kh ảo sát xác định khoảng tuyến tính 48 3.5.2 Xây dựng phương trình đường chuấn, xác định giới hạn phát (LOD) 3.6 3.7 giới hạn định lượng (LOQ) Cu, Pb, Co, Cd, Ca Zn .52 LựA CHỌN VÀ ĐÁNH GIÁ QƯY TRÌNH xử LÝ MẪƯ 57 TỎNG KÉT CÁC ĐIÈƯ KIỆN ĐO PHÒ F-AAS CỦA Ca, Zn VÀ GFAAS CỦA Cu, Pb, Cd, Co * 58 3.8 TH ựC NGHIỆM ĐO PHÒ VÀ KẾT QƯẢ TÍNH TOÁN 59 3.8.1 Ph ương pháp xử lý kết phân tích theo phương pháp đường chuẩn 59 3.8.2 Kết xác định hàm lượng Cu, Pb, Co, Cd, Ca, Zn mẫu nấm 59 3.9 KI ẺM TRA QƯÁ TRÌNH xử LÝ MẪU 64 B Kêt thực nghiệm thảo luận xác định vitamin Bl, B6 băng phương pháp IIPLC .71 3.10 CÁ C ĐIÈƯ KIỆN ĐO HPLC 71 3.10.1 Lựa chọn cột tách MỞ ĐẦU Đé có thé khẳng định tác dụng định chống định đơn thuốc trị bệnh, thực phẩm chức bồi bố sức khỏe người bệnh có nấm Linh chi thành phần chính, cần phải xác định cấu tạo thành phần hóa học nấm Trong sách, tạp chí, từ điển y học lưu hành mạng internet thông tin đề cập đến cấu tạo thành phần nấm Linh chi hạn ché Qua khảo sát sơ bộ, biết có hàng chục kim loại thành phần hóa học nhiều loại vitamin có nấm Linh chi Đế góp thêm thông tin nấm Linh chi, luận văn nghiên cứu xác định thành phần số kim loại số vitamin nhóm B nấm Linh chi nuôi trồng Thừa Thiên Huế Ket phân phân tích so sánh với số liệu phân tích nấm Linh chi Hàn Quốc bán thị trường thành phố Huế Để xác định hàm lượng vết số kim loại vitamin thực vật phương pháp hấp thụ nguyên tử sắc ký lỏng hiệu cao phương pháp tỏ có nhiều ưu việt Xuất phát từ tình hình thực tế góp phần vào công tác đảm bảo chất ♦> Nghiên cứu xác định kim loại phương pháp phồ hấp thụ nguyên tử (AAS) Khảo sát điều kiện để đo phố AAS Cu, Pb, Co, Cd, Ca, Zn Nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến phép đo xác định kim loại Khảo sát khoảng tuyến tính xây dựng đường chuẩn cho phép đo phả Xác định giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng, đánh giá sai số độ lặp phép đo Xác định hàm lượng vết kim loại Cu, Pb, Co, Cd, Ca, Zn nấm CHƯƠNG TỎNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU VÈ NẤM LINH CHI 1.1.1 Giới thiệu nấm Linh chi Linh chi có nhiều tên gọi khác Bất Lão Thảo, Vạn Niên Thảo, Trần Tiên Thảo, Chi Linh, Nấm Lim Mỗi tên gọi Linh chi gắn liền với giá trị dược liệu Tên gọi Linh chi bắt nguồn từ Trung Quốc, hay tiếng Nhật Reishi Mannentake, tên gọi Latinh: Ganodcrma lucidum [7] Linh chi (Ganoderma) loại gỗ mọc hoang thiên nhiên, có hàng trăm loài khác họ nấm gỗ (Ganodemataceae) Có nhóm lớn cổ Linh chi Linh chi + Cổ Linh chi: loài nấm gỗ không cuống (hoặc cuống ngắn) có nhiều tầng Mũ nấm hình quạt, màu từ nâu xám đến đen sẫm, mặt xù xì thô ráp Nấm cứng (như gỗ lim nên gọi nấm lim) Tên khoa học: Ganoderma applanatum (Pers) Past [20] Kim Phương trình Cu Pb Phương trình hồi quy đầy đủ đường5354 LOD LOQ ACu = (0,04778 ± 1,1382.10-3) (:[...]... phân tử UV-VIS, sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC), phố phát xạ nguyên tử, phố hấp thụ nguyên tử ngọn lửa (F-AAS) và không ngọn lửa (GF-AAS) đây là các phương pháp đế xác định các kim loại ở hàm lượng vết, có độ chọn lọc, độ nhạy và độ chính xác cao, cho kết quả tốt Nhưng trong điều kiện luận văn này chúng tôi chỉ đi sâu nghiên cứu xác định 6 kim loại trên bằng phương pháp hấp thụ nguyên tử AAS 1.4.1 Phương. .. pháp đế nghiên cứu xác định hàm lượng hỗn hợp vitamin như: Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao, xác định hỗn họp vitamin bằng phương pháp phố đạo hàm bậc [31], phương pháp trắc quang Tuy nhiên, để chọn phương pháp vừa đảm bảo độ chính xác, tính kinh tế và tính khả thi phù hợp với nhiều phòng thí nghiệm, thì trong luận văn này chúng tôi xin chọn phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao vì nó có nhiều ưu... những phương pháp phân tích: Phương pháp hóa học: Nhóm các phương pháp này dùng để xác định hàm lượng lớn (đa dạng) của các chất, thông thường lớn hơn 0,05%, tức là nồng độ miligam Các thiết bị và dụng cụ của phương pháp này đơn giản, không đắt tiền Gồm các phương pháp: phương pháp phân tích khối lượng, phương pháp phân tích thế tích, phương pháp oxi hóa-khử, phương pháp complexon 112,221 Phương pháp. .. Đe xác định nồng độ (hàm lượng) của một nguyên tố trong mẫu phân tích theo phép đo phổ hấp thụ nguyên tử, người ta thưÒTLg thực hiện theo các phương pháp sau đây: 20 và gia thêm vào đó những lượng nhất định của nguyên tố cần xác định theo từng bậc nồng độ (theo cấp số cộng) c Phương pháp đồ thị không đôi Nguyên tắc: Muốn xác định một nguyên tố nào đó, trước hét người ta dựng một đường chuấn như phương. .. phân giải cao, nhanh chóng, dễ dàng kết nối với khối phổ 1.6.1 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) [11] Khái niệm về sắc ký lỏng hiệu năng cao: Là một phương pháp tách hóa lý dựa vào ái lực khác nhau của các chất khác nhau với hai pha luôn tiếp xúc và không đồng thời tan vào nhau, một pha động và một pha tĩnh - Pha động là chất lỏng chảy qua cột với một tốc độ nhất định - Pha tĩnh chứa trong. .. nguyên tử đó trong mẫu 1.4.2 Một số phương pháp xác định kim loại vết khác 1.4.2.1 Ph ương ph áp điện h óa a Phương pháp cực pho [8,14] Nguyên tắc: Người ta thay đổi liên tục và tuyến tính điện áp đặt vào 2 cực đé khử các ion kim loại, do mỗi kim loại có thế khử khác nhau Thông qua chi u cao của đường cong Von -Ampe có thế định lượng được ion kim loại trong dung dịch ghi cực pho Vì dòng giới hạn Igh ở các... Phương pháp phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) [13,17] Phương pháp phân tích dựa trên cơ sở đo phố hấp thụ nguyên tử của một nguyên tố được gọi là phép đo phố hấp thụ nguyên tử (phcp đo AAS) 16 1 Chọn các điều kiện và một loại trang bị phù hợp để chuyến mẫu phân tích từ trạng thái ban đầu (rắn hay dung dịch) thành trạng thái hơi của các nguyên tử tự do Đó chính là quá trình hoá hơi và nguyên tử hoá mẫu 2 Chi u... ra trong quá trình lão hóa cơ thể hay do nhiễm xạ Chúng làm phục hồi các tổ chức bị tốn thương và không gây hiệu ứng phụ Cao Linh chi đỏ Viên Linh chi 1.2 Trà Linh chi hộp GIỚI THIỆU CÁC KIM LOẠI: Cu, Pb, Co, Cd, Ca, Zn VÀ VAI TRÒ SINH HỌC CỦA CÁC KIM LOẠI 1.2.1 Giói thiệu về kim loại Cu, Pb, Co, Cd, Ca, Zn [16] 1.2.1.1 Nguyên tố đồng (Cu) [16] Đồng là nguyên tố hóa học có kí hiệu Cu và số hiệu nguyên. .. nguyên tử (AES) và huỳnh quang nguyên tử (AFS) [13] Trong hai pháp này chúng tôi chỉ đề cập đến phương pháp AES (Atomic Emission Spectroscopy) vì phương pháp AFS (Atomic Fluoresccnce Spectroscopy) chỉ có một số ít kim loại có khả năng phát huỳnh quang Nguyên tắc: Ở điều kiện bình thường, nguyên tử không thu hay phát xạ năng lượng, nhưng nếu bị kích thích thì các electron sẽ nhận năng lượng chuyển lên... điều kiện xác định tỉ lệ thuận với nồng độ ion trong dung dịch ghi cực phố theo phương trình: I=K.C 22 Nhằm loại trừ ảnh hưởng trên đồng thời tăng độ nhạy, hiện nay đã có các phương pháp cực phổ hiện đại: cực phổ xung vi phân, cực phồ sóng vuông chúng cho phép xác định lượng vết của nhiều nguyên tố b Phương pháp }Ton-Ampe hòa tan về bản chất, phương pháp Von-Ampc hòa tan cũng giống như phương pháp cực ... 28 1.6 MỘT SÓ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HỎN HỢP VITAMIN Bl, B6 [21,23,31] Hiện có nhiều phương pháp đế nghiên cứu xác định hàm lượng hỗn hợp vitamin như: Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao, xác định hỗn... loại mẫu khác đế xác định kim loại, v.v 1.4 CÁC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH KIM LOẠI Để xác định Cu, Pb, Co, Cd, Ca, Zn, có phương pháp phân tích: Phương pháp hóa học: Nhóm phương pháp dùng để xác định. .. kim loại phương pháp hấp thụ nguyên tử AAS 1.4.1 Phương pháp phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) [13,17] Phương pháp phân tích dựa sở đo phố hấp thụ nguyên tử nguyên tố gọi phép đo phố hấp thụ nguyên tử