Bước đầu khảo sát vi sinh vật có khả năng sinh tổng hợp lipase ngoại bào

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TRƯƠNG MINH MẪN BƯỚC ĐẦU KHẢO SÁT VI SINH VẬT CÓ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP LIPASE NGOẠI BÀO LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – 2009 ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TRƯƠNG MINH MẪN BƯỚC ĐẦU KHẢO SÁT VI SINH VẬT CÓ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP LIPASE NGOẠI BÀO Chuyên ngành: Vi sinh vật học Mã số: 60 42 40 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS. TS. BÙI VĂN LỆ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – 2009 LỜI CẢM ƠN Thành quả ngày hôm nay đạt được không chỉ nhờ những nỗ lực của bản thân mà còn nhờ rất nhiều sự giúp đỡ từ phía thầy cô, gia đình, bạn bè và đồng nghiệp, những người đã động viên, hỗ trợ tôi trong suốt thời gian vừa qua. Trước tiên, em kính gửi lời cảm ơn chân thành đến Thầy Bùi Văn Lệ, người đã tận tình hướng dẫn, gợi mở và giúp đỡ em hoàn thành luận văn này. Tôi kính gửi lời cảm ơn đến Chò Phạm Vân An – trưởng PTN Vi sinh – GMO, cùng toàn thể anh chò em đang công tác tại PTN Vi sinh – GMO, đã tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện luận văn. Bên cạnh đó, xin cảm ơn em Minh Tuấn cùng tập thể anh chò em đang công tác tại Bộ môn Công nghệ Sinh học Thực vật và Chuyển hóa Sinh học – Trường Đại học Khoa học Tự nhiên. Đặc biệt, tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Anh Kiều Phương Nam, một người anh, một người Thầy, đã cho tôi những đóng góp, nhận xét kòp thời và thiết thực. Những kiến thức nền tảng trong suốt những năm học vừa qua là cơ sở vững chắc giúp tôi thực hiện luận văn này. Những kiến thức ấy có được là nhờ sự tận tụy chỉ dẫn của các thầy cô khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên. Luôn đồng hành, quan tâm và ủng hộ tôi trong công việc cũng như trong cuộc sống, em là người vợ, người bạn, là chỗ dựa tinh thần vững chắc. Tôi muốn nói lời cảm ơn đến Em. Với tất cả tấm lòng, con xin ghi nhớ công ơn của Ba Mẹ - các bậc sinh thành dưỡng dục và những người thân trong gia đình luôn ủng hộ, động viên, nâng đỡ và dành cho con tình thương sâu sắc nhất. Xin chân thành cảm ơn! Tp HCM, 09/09/2009 Trương Minh Mẫn MỤC LỤC Trang Danh mục chữ viết tắt i Danh mục các hình ii Danh mục các bảng iv Danh mục các đồ thị vi Mở đầu 1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 2 1.1. ĐẠI CƯƠNG VỀ LIPASE 2 1.1.1. Giới thiệu 2 1.1.2. Cấu trúc lipase 3 1.1.3. Cơ chế phản ứng và tính đặc hiệu của lipase 4 1.1.4. Phân loại, đặc tính và một số tính chất của lipase 7 1.1.5. Các nguồn thu nhận enzyme lipase 10 1.1.6. Các yếu tố ảnh hưởng đến sự sinh tổng hợp lipase 11 1.1.7. Các yếu tố ảnh hưởng tới hoạt tính lipase 12 1.1.8. Phương pháp xác định hoạt tính lipase 13 1.1.9. Ứng dụng của lipase 13 1.2. ĐỊNH DANH VI SINH VẬT THEO PHƯƠNG PHÁP TRUYỀN THỐNG 21 1.2.1. Định danh vi khuẩn 21 1.2.2. Định danh nấm men 22 1.2.3. Định danh nấm mốc 23 1.3. ĐỊNH DANH VI SINH VẬT DỰA VÀO VẬT LIỆU DI TRUYỀN 25 1.3.1. Thước đo tiến hóa 25 1.3.2. Định danh vi khuẩn 27 1.3.3. Định danh nấm men và nấm mốc 29 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 30 2.1. THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 30 2.2. VẬT LIỆU 30 2.2.1. Thu nhận mẫu 30 2.2.2. Thiết bị và dụng cụ 31 2.2.3. Môi trường và hóa chất 32 2.3. PHƯƠNG PHÁP 37 2.3.1. Phân lập các chủng vi sinh vật sinh lipase ngoại bào 37 2.3.2. Làm thuần và bảo quản các chủng vi sinh vật thu được 37 2.3.3. Phương pháp nuôi sinh tổng hợp lipase 38 2.3.4. Phương pháp thu nhận enzyme lipase 39 2.3.5. Phương pháp xác định hoạt tính lipase 39 2.3.6. Xác định hàm lượng protein theo phương pháp Bradford 40 2.3.7. Xác định hoạt tính riêng của enzyme lipase 42 2.3.8. Khảo sát các đặc điểm phân loại 42 2.3.9. So sánh tính tương đồng: 49 2.3.10. Phân tích vật liệu di truyền 49 2.3.11. Khảo sát một số yếu tố của môi trường cảm ứng sinh lipase 54 2.3.12. Khảo sát hoạt tính của enzyme lipase 55 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 57 3.1. KẾT QUẢ PHÂN LẬP CÁC CHỦNG SINH LIPASE NGOẠI BÀO 57 3.2. HOẠT TÍNH LIPASE NGOẠI BÀO CÁC CHỦNG THU ĐƯỢC 59 3.3. ĐỊNH DANH VI KHUẨN 64 3.3.1. Các đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa của các chủng vi khuẩn 64 3.3.2. Phân tích trình tự rDNA 16S 71 3.4. ĐỊNH DANH NẤM MEN 79 3.4.1. Các đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa của chủng nấm men W_Q9_Y1 79 3.4.2. Phân tích đoạn trình tự D1/D2 của rRNA tiểu đơn vị lớn (LSU-rRNA; 25/26/28S) 82 3.5. ĐỊNH DANH NẤM MỐC 86 3.5.1. Các đặc điểm hình thái của chủng nấm mốc S_Q3_M2 86 3.5.2. Phân tích đoạn trình tự D1/D2 của rRNA tiểu đơn vị lớn (LSU-rRNA; 25/26/28S) 89 3.6. KHẢO SÁT YẾU TỐ MÔI TRƯỜNG CẢM ỨNG 93 3.6.1. Nguồn cơ chất cảm ứng 93 3.6.2. Nồng độ cơ chất 95 3.6.3. pH của môi trường cảm ứng 96 3.6.4. Thời gian nuôi cấy 98 3.6.5. Nhiệt độ nuôi cấy 100 3.7. KHẢO SÁT HOẠT TÍNH CỦA ENXYME LIPASE 101 3.7.1. Đường chuẩn albumin dùng trong phương pháp Bradford 101 3.7.2. Ảnh hưởng của pH đến hoạt tính lipase 103 3.7.3. Khảo sát tính bền của lipase theo pH 104 3.7.4. Ảnh hưởng của nhiệt độ đến hoạt tính lipase 106 3.7.5. Khảo sát tính bền của lipase theo nhiệt độ 108 3.7.6. Ảnh hưởng của cơ chất đến hoạt tính lipase 110 3.7.7. Ảnh hưởng của EDTA và cation đến hoạt tính lipase 112 3.7.8. Ảnh hưởng của chất tẩy đến hoạt tính lipase 114 3.7.9. Khảo sát hoạt tính lipase của 2 chủng ở các điều kiện hoạt động tối ưu116 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 118 4.1. KẾT LUẬN 118 4.2. ĐỀ NGHỊ 119 TÀI LIỆU THAM KHẢO 121 Tài liệu tiếng Việt 121 Tài liệu tiếng Anh 122 Tài liệu từ internet 132 Danh mục các bảng iv DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1: Các ứng dụng trong công nghiệp của các lipase từ vi sinh vật 14 Bảng 2.1: Địa điểm, số lượng mẫu và thời gian lấy mẫu 31 Bảng 2.2: Các cặp mồi dùng trong khuếch đại và giải trình tự rDNA 16S 50 Bảng 2.3: Thành phần thực hiện phản ứng PCR khuếch đại trình tự rDNA 16S 51 Bảng 2.4: Chương trình nhiệt phản ứng PCR khuếch đại trình tự rDNA 16S 51 Bảng 2.5: Cặp mồi dùng trong khuế ch đại và giải trình tự đoạn D1/D2 52 Bảng 2.6: Thành phần thực hiện phản ứng PCR khuếch đại trình tự D1/D2 52 Bảng 2.7: Chương trình nhiệt phản ứng PCR khuếch đại trình tự D1/D2. 53 Bảng 3.1: Các chủng vi sinh vật sinh lipase ngoại bào thu nhận được 57 Bảng 3.2: Hoạt tính lipase ngoại bào các chủng vi sinh vật phân lập được 60 Bảng 3.3: Một số đặc điểm hình thái, sinh lý của chủng S_CT_B2, W_TN_B1 và W_TB_B2 64 Bảng 3.4: Sự gia tăng mật độ tế bào theo thời gian của chủng S_CT_B2, kết quả là giá trị trung bình cộng của ba lần lặp lại. 66 Bảng 3.5: Sự gia tăng mật độ tế bào theo thời gian của chủng W_TN_B1, kết quả là giá trị trung bình cộng của ba lần lặp lại. 67 Bảng 3.6: Sự gia tăng mật độ tế bào theo thời gian của chủng W_TB_B2, kết quả là giá trị trung bình cộng củ a ba lần lặp lại 68 Bảng 3.7: Đặc điểm sinh hóa của 3 chủng S_CT_B2, W_TN_B1 và W_TB_B2 69 Bảng 3.8: Độ tinh sạch và nồng độ DNA bộ gen vi khuẩn thu được 71 Bảng 3.9: Đặc điểm hình thái của chủng nấm men 80 Bảng 3.10: Các đặc điểm sinh lý, sinh hóa của chủng W_Q9_Y1 81 Bảng 3.11: Ảnh hưởng của nguồn cơ chất cảm ứng đến sự sinh tổng hợp lipase của 2 chủ ng S_CT_B2 và W_Q9_Y1 94 Bảng 3.12: Ảnh hưởng của nồng độ cơ chất đến sự sinh tổng hợp lipase của 2 chủng S_CT_B2 và W_Q9_Y1 95 Danh mục các bảng v Bảng 3.13: Ảnh hưởng của pH môi trường đến sự sinh tổng hợp lipase của 2 chủng S_CT_B2 và W_Q9_Y1 97 Bảng 3.14: Ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy đến sự sinh tổng hợp lipase của 2 chủng S_CT_B2 và W_Q9_Y1 98 Bảng 3.15: Ảnh hưởng của nhiệt độ nuôi cấy đến sự sinh tổng hợp lipase của 2 chủng S_CT_B2 và W_Q9_Y1 100 Bảng 3.16: Tương quan giữa giá trị ΔOD 595 và nồng độ albumin 102 Bảng 3.17: Ảnh hưởng của pH đến hoạt tính lipase của 2 chủng S_CT_B2 và W_Q9_Y1 103 Bảng 3.18: Ảnh hưởng của pH đến độ bền lipase của chủng S_CT_B2 105 Bảng 3.19: Ảnh hưởng của pH đến độ bền lipase của chủng W_Q9_Y1 105 Bảng 3.20: Ảnh hưởng của nhiệt độ đến hoạt tính lipase của 2 chủng S_CT_B2 và W_Q9_Y1 107 Bảng 3.21: Ảnh hưởng của nhiệt độ đến tính bền lipase của chủng S_CT_B2 108 Bảng 3.22: Ảnh hưởng của nhiệt độ đến tính bền lipase của chủng W_Q9_Y1 109 Bảng 3.23: Ảnh hưởng các loại dầu lên hoạt tính lipase của chủng S_CT_B2 110 Bảng 3.24: Ảnh hưởng các loại dầu lên hoạt tính lipase của chủng W_Q9_Y1 110 Bảng 3.25: Ảnh hưởng của EDTA và cation đến hoạt tính lipase của chủng S_CT_B2 112 Bảng 3.26: Ảnh hưởng của EDTA và cation đến hoạt tính lipase của ch ủng W_Q9_Y1 113 Bảng 3.27: Ảnh hưởng của chất tẩy đến hoạt tính lipase của chủng S_CT_B2 114 Bảng 3.28: Ảnh hưởng của chất tẩy đến hoạt tính lipase của chủng W_Q9_Y1 115 Danh mục các đồ thị vi DANH MỤC CÁC ĐỒ THỊ Trang Đồ thị 3.1: Đường cong tăng trưởng của chủng S_CT_B2 66 Đồ thị 3.2: Đường cong tăng trưởng của chủng W_TN_B1 67 Đồ thị 3.3: Đường cong tăng trưởng của chủng W_TB_B2 68 Đồ thị 3.4: Ảnh hưởng của nguồn cơ chất đến sự sinh tổng hợp lipase của 2 chủng S_CT_B2 và W_Q9_Y1 94 Đồ thị 3.5: Ảnh hưởng của nồng độ cơ chất đến sự sinh tổng hợ p lipase của 2 chủng S_CT_B2 và W_Q9_Y1 96 Đồ thị 3.6: Ảnh hưởng của pH môi trường đến sự sinh tổng hợp lipase của 2 chủng S_CT_B2 và W_Q9_Y1 97 Đồ thị 3.7: Ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy đến sự sinh tổng hợp lipase của 2 chủng S_CT_B2 và W_Q9_Y1 99 Đồ thị 3.8: Ảnh hưởng của nhiệt độ nuôi cấy đến sự sinh tổng hợp lipase của 2 chủng S_CT_B2 và W_Q9_Y1 101 Đồ thị 3.9: Đường chuẩn albumin 102 Đồ th ị 3.10: Ảnh hưởng của pH đến hoạt tính lipase của 2 chủng S_CT_B2 và W_Q9_Y1 104 Đồ thị 3.11: Ảnh hưởng của pH đến độ bền lipase của chủng S_CT_B2 và W_Q9_Y1 106 Đồ thị 3.12: Ảnh hưởng của nhiệt độ đến hoạt tính lipase của 2 chủng S_CT_B2 và W_Q9_Y1 107 Đồ thị 3.13: Ảnh hưởng của nhiệt độ đến tính bền lipase của 2 chủng S_CT_B2 và W_Q9_Y1 109 Đồ thị 3.14: Ảnh hưởng các loại dầu lên ho ạt tính lipase của 2 chủng S_CT_B2 và W_Q9_Y1 111 Đồ thị 3.15: Ảnh hưởng của EDTA và cation đến hoạt tính lipase của 2 chủng S_CT_B2 và W_Q9_Y1 113 Đồ thị 3.16: Ảnh hưởng của chất tẩy đến hoạt tính lipase của 2 chủng S_CT_B2 và W_Q9_Y1 115 Mở đầu 1 MỞ ĐẦU Lipase (triacylglycerol acylhydrolase – EC 3.1.1.3) là enzyme xúc tác thủy phân triacylglycerol thành các diacylglycerol, monoacylglycerol và các chất béo. Lipase được ứng dụng rộng rãi trong công nghiệp thực phẩm, hóa chất tẩy rửa, xử lý chất thải và nhiều ngành quan trọng khác [12], [36], [41], [81]. Trong những năm gần đây, lipase giữ một vị trí quan trong trên thị trường enzyme thương mại do khả năng xúc tác các phản ứng ở bề mặt phân cách giữa pha nước và pha khác (dầu, chất béo,…). Lipase chiếm 5% thị phần trên thị trường thương mại enzyme sau protease và carbohydrase. Chúng được tạo ra rộng rãi ở thực vật, động vật và vi sinh vật. Tuy nhiên, cũng giống như đa số các loại enzyme khác, lipase được sản xuất chủ yếu bởi vi sinh vật [12], [36], [41], [81]. Các ngành công nghiệp cần rất nhiều enzyme để phục vụ cho sản xuất. Tuy nhiên, hiện nay ở Việt Nam các chế phẩm enzyme này chủ yếu vẫn là nhập khẩu, trong đó enzyme lipase là loại enzyme rất đắt tiền như ng được ứng dụng trong nhiều lĩnh vực khác nhau. Vì vậy, việc nghiên cứu khả năng sinh tổng hợp, thu nhận và tinh sạch lipase có hoạt tính cao từ vi sinh vật là rất cần thiết, nhằm phục vụ cho tiềm năng sản xuất lipase trong nước với giá thành rẻ, chất lượng và hoạt tính tương đương với các chế phẩm nhập khẩu. Trước tình hình thực tiễn trên, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: Bước đầu khảo sát vi sinh vật có khả năng sinh tổng hợp lipase ngoại bào nhằm các mục tiêu sau: ¾ Xây dựng bộ sưu tập chủng vi sinh vật có khả năng sinh tổng hợp lipase ngoại bào. ¾ Khảo sát đặc tính của một số vi sinh vật, điều kiện cảm ứng sinh tổng hợp lipase của một số vi sinh vật và khảo sát đặc tính, điều kiện hoạt động của lipase làm cơ sở để chọn lựa chủng vi sinh vật cho từng mục đích sản xuất lipase khác nhau. [...]... tăng sự sinh tổng hợp lipase ở vi sinh vật, tuy nhiên có một vài tác giả đã cho sinh tổng hợp lipase với năng suất cao nhưng không có dầu mỡ Triglyceride là chất quan trọng cho sự sinh tổng hợp lipase do nó vừa đóng vai trò là chất cảm ứng cũng như là chất ức chế sự sinh tổng hợp enzyme lipase Trong số các triglyceride, dầu olive được nhận thấy là một chất cảm ứng tốt cho sự sinh tổng hợp lipase của... ảnh hưởng rất mạnh lên năng suất sinh tổng hợp lipase của các chủng vi sinh vật Cordenons và cộng sự (1996) đã khảo sát nhiều nguồn nitơ khác nhau để sinh tổng hợp lipase ngoại bào từ Aci calcoacetius Amino acid và trypton cho năng suất tổng hợp lipase cao gấp (2 – 12 Tổng quan 3) lần so với ammoni, cao nấm men và protease pepton Tuy nhiên, năng suất lipase và độ bền có thể được cải thiện khi bổ sung... biệt giúp phân biệt lipase với các enzyme esterase khác là khả năng hoạt động tại bề mặt phân cách giữa pha nước với các pha không hòa tan chứa cơ chất Bên cạnh hoạt tính thủy phân lipid, enzyme lipase còn có hoạt tính thủy phân và tổng hợp ester [7], [20], [51], [80] Lipase được tổng hợp bởi nhiều vi sinh vật và các sinh vật nhân chuẩn Vi sinh vật sinh tổng hợp lipase bao gồm vi khuẩn, nấm men, nấm... nghiệm sinh hóa của hàng trăm loài vi sinh vật tại nhiều phòng thí nghiệm khác nhau trên thế giới được tổng hợp thành những bảng sinh hoá định danh vi sinh vật Bảng sinh hóa bao gồm các đặc điểm sinh hóa đặc trưng nhất để phân biệt các loài vi sinh vật Mỗi đặc điểm sinh hóa được biểu thị bằng một trị số là tỉ lệ phần trăm thử nghiệm sinh hóa cho kết quả dương tính theo thống kê ở một loài vi sinh vật. .. trọng cho sự sinh trưởng, phát triển và sinh tổng hợp lipase của vi sinh vật Nếu như nhiệt độ dưới mức tối ưu thì vi sinh vật phát triển chậm và lượng lipase tạo ra bị hạn chế Ngược lại, nếu nhiệt độ quá cao, có thể làm chết tế bào hoặc ảnh hưởng tới hoạt tính lipase, kết quả là giảm năng suất tạo thành sản phẩm [5], [7], [37], [81] pH: pH của môi trường là yếu tố quan trọng cho sự tổng hợp lipase Nếu... số các vi sinh vật Tuy nhiên, khi bổ sung lipid ở dạng tự nhiên vào môi trường nuôi sẽ làm giảm sự sinh trưởng và tổng hợp lipase của vi sinh vật Trong khi đó dạng nhũ tương hóa của dầu bởi gum arabic hoặc polyvinyl alcohol (PVA) lại kích thích quá trình sinh trưởng và tổng hợp lipase của vi sinh vật [5], [7], [37], [81] Nguồn Nitơ: Cũng giống như nguồn carbon, nguồn nitơ ảnh hưởng rất mạnh lên năng. .. có hoạt tính cao nhất đối với laurat, hai enzyme này tương đồng với nhau ở nhiều mặt Dịch lipolytic thương mại của C viscosum chứa hai dạng khác nhau [5], [81] 1.1.5 Các nguồn thu nhận enzyme lipase Lipase được thu nhận từ nhiều nguồn khác nhau (Phụ lục I, II): lipase từ thực vật, lipase từ động vật và lipase từ vi sinh vật, đặc biệt là từ vi khuẩn và nấm, đã có một vài lipase thu nhận từ vi sinh vật. .. với Pseudomonas aeruginosa hoạt tính lipase tạo ra cao nhất ở pH môi trường là 9,0 thì pH tối ưu cho sự phát triển của Pseudomonas aeruginosa lại hơi acid (4,0 – 7,0) Do đó, trong quá trình nuôi cấy vi sinh vật sinh tổng hợp lipase cần điều chỉnh pH cho thích hợp ở từng giai đoạn [5], [7], [81] Ion kim loại: quá trình sinh tổng hợp lipase của một số chủng vi sinh vật có thể được tăng cường hoặc bị ức... lây truyền virus từ động vật sang người nên hiện nay xu hướng sử dụng lipase từ vi sinh vật đang được ưa chuộng do đặc tính đa dạng, dễ tách chiết và nguyên liệu vô hạn [5], [81] 1.1.5.1 Lipase từ vi khuẩn Lipase từ vi khuẩn được nghiên cứu từ khá sớm và đầy đủ (Jaeger và cộng sự (1999)) Đa số lipase của vi khuẩn là các glycoprotein, nhưng một số lipase ngoại bào là lipoprotein hay còn gọi là lipase thật... từng loại vi sinh vật [7], [81] 1.1.7 1.1.7.1 Các yếu tố ảnh hưởng tới hoạt tính lipase pH Dựa trên ảnh hưởng của pH đến hoạt tính của lipase ta chia lipase làm hai loại: lipase kiềm và lipase acid Một số lipase acid có pH tối ưu tại 4,0 như lipase từ hạt thầu dầu có pH tối ưu (4,0 – 4,2) Lipase kiềm thu nhận từ Pseudomonas nitroreducens có pH tối ưu là 11 [5], [7], [81] 1.1.7.2 Nhiệt độ Lipase chiết . tài: Bước đầu khảo sát vi sinh vật có khả năng sinh tổng hợp lipase ngoại bào nhằm các mục tiêu sau: ¾ Xây dựng bộ sưu tập chủng vi sinh vật có khả năng sinh tổng hợp lipase ngoại bào. ¾ Khảo. MINH MẪN BƯỚC ĐẦU KHẢO SÁT VI SINH VẬT CÓ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP LIPASE NGOẠI BÀO Chuyên ngành: Vi sinh vật học Mã số: 60 42 40 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG. lipase còn có hoạt tính thủy phân và tổng hợp ester [7], [20], [51], [80]. Lipase được tổng hợp bởi nhiều vi sinh vật và các sinh vật nhân chuẩn. Vi sinh vật sinh tổng hợp lipase bao gồm vi