2.3.2.1. Làm thuần vi khuẩn [3], [8]
Các khuẩn lạc sinh tổng hợp lipase được nuơi cấy trong 10 mL mơi trường TSB và được ủở nhiệt độ 35 0C trong 24 giờ cho vi khuẩn. Sau đĩ pha lỗng 1: (108 – 1010), lấy 100 µL dịch pha lỗng trang trên đĩa thạch TSA để chọn ra các khuẩn lạc thuần khiết khơng pha tạp. Tiếp tục làm cho tới khi trên đĩa thạch chỉ xuất hiện duy nhất một loại khuẩn lạc. Thu được chủng thuần.
2.3.2.2. Làm thuần nấm men [9], [10]
Dùng que cấy, thao tác vơ trùng chấm nhẹ vào khuẩn lạc riêng rẽ cĩ đặc
điểm giống khuẩn lạc nấm men (khuẩn lạc to, thường trắng đục, khơ hay trơn, gồ
cao,…), hịa tan vào trong 0,5 mL dung dịch nước muối sinh lý tiệt trùng sau đĩ ria trên đĩa petri cĩ chứa mơi trường YM agar để tạo thành các khuẩn lạc đơn, tiếp tục bước làm thuần cho đến khi khuẩn lạc đồng nhất. Thu được chủng thuần.
2.3.2.3. Làm thuần nấm mốc [3], [69], [73], [79], [94]
− Dùng que cấy mĩc thao tác vơ trùng chấm nhẹ lên khuẩn lạc nấm mốc, nhúng vào nước muối sinh lý đã hấp khử trùng, khuấy nhẹ cho bào tử khuếch tán đều vào trong nước.
− Pha lỗng thành nhiều nồng độ thích hợp từống dịch chứa giống trên sao cho cĩ thể thu được khuẩn lạc rời khi trang trên đĩa petri.
− Ủđĩa trong (24 – 36) giờ cho khuẩn lạc nấm mốc xuất hiện rời nhau.
− Dùng que cấy mĩc thao tác vơ trùng chấm lên bề mặt khuẩn lạc đơn.
− Gõ nhẹ vào nắp đĩa petri mơi trường MEA mới.
− Lặp lại thao tác nhiều lần cho đến khi thu được khuẩn lạc đồng nhất. Thu được chủng thuần.
2.3.2.4. Bảo quản các chủng vi sinh vật thu được
Kiểm tra lại khả năng sinh lipase ngoại bào của các chủng vi sinh vật thu nhận bằng cách cấy lên mơi trường phân lập ban đầu và chỉ giữ lại các chủng vi sinh vật cĩ tạo vịng tan xung quanh khuẩn lạc.
− Các chủng vi khuẩn và nấm men thuần được bảo quản trong glycerol theo tỷ lệ
30% dịch nuơi : 70% glycerol ở - 20 0C.
− Các chủng nấm mốc thuần được giữ giống trên mơi trường MEA hoặc Czapek-DOX agar thạch nghiêng ở 4 0C.