Chủng khảo sát được nuơi trong mơi trường với các điều kiện đã tối ưu như
trong các thí nghiệm trên. Chế phẩm enzyme được bảo quản trong điều kiện lạnh, khi cần sử dụng hịa với ddH2O sao cho hàm lượng protein đo được theo phương pháp Bradford nằm trong khoảng (0,1 – 0,2) mg/mL.
2.3.12.1.Ảnh hưởng của pH đến hoạt tính của lipase
Khảo sát ảnh hưởng của pH đến hoạt tính của enzyme lipase bằng phương pháp định lượng acid béo tự do sinh ra trong điều kiện pH khác nhau (3,0 – 12,0), sử dụng đệm đa năng với nồng độ 50 mM. Ngồi sự thay đổi pH thì các thơng số
cịn lại được giữ nguyên.
2.3.12.2.Khảo sát tính bền của lipase theo pH
Để khảo sát tính bền của lipase, 1 mL enzyme lipase được trộn với 1 mL dung dịch đệm với ph (3,0 – 12,0) và ủ ở 4 0C trong 24 giờ. Sau đĩ, hoạt tính của enzyme được xác định theo phương pháp định lượng acid béo tự do sinh ra tại pH tối ưu cho enzyme hoạt động.
2.3.12.3.Ảnh hưởng của nhiệt độđến hoạt tính lipase
Nhiệt độ ảnh hưởng đến hoạt tính enzyme lipase được tiến hành bằng việc thiết lập phản ứng enzyme dưới các điều kiện nhiệt độ khác nhau trong khoảng (20 – 75) 0C tại pH tối ưu và thời gian phản ứng là 30 phút.
2.3.12.4.Khảo sát tính bền của lipase theo nhiệt độ
Tính bền của enzyme dưới ảnh hưởng của nhiệt độđược khảo sát khi ủ dịch enzyme ở các điều kiện nhiệt độ khác nhau (4 – 40) 0C trong khoảng thời gian 1
giờ. Sau đĩ, hoạt tính của enzyme được kiểm tra bằng phương pháp định lượng lượng acid béo tự do được giải phĩng ở pH và nhiệt độ tối ưu.
2.3.12.5.Ảnh hưởng của các loại cơ chất đến hoạt tính của lipase
Khảo sát hoạt tính enzyme lipase dưới ảnh hưởng của các loại cơ chất khác nhau: dầu olive, dầu đậu nành, dầu mè, dầu hỗn hợp. Ngoại trừ sự thay đổi các loại cơ chất, các thơng số cịn lại trong phản ứng được giữ nguyên.
2.3.12.6.Ảnh hưởng của EDTA và cation đến hoạt tính của lipase
Khảo sát hoạt tính enzyme lipase dưới sự hiện diện của các muối kim loại ở
nồng độ 11 mM để nồng độ cuối cùng trong phản ứng là 1 mM. Các loại muối kim loại được sử dụng là CaCl2, CuSO4, FeSO4, NaCl, KCl, MgCl2.6H2O, MnCl2.4H2O và EDTA.
Enzyme lipase được ủ với dung dịch muối kim loại hoặc EDTA theo tỷ lệ 1 : 1 (v/v) trong 1 giờở 4 0C rồi xác định hoạt tính lipase.
2.3.12.7.Ảnh hưởng của chất tẩy đến hoạt tính của lipase
Ảnh hưởng của các loại chất tẩy (CTAB, Triton X-100, Sodium Dodecyl Sulphate (SDS), Tween 20, Tween 80) đến hoạt tính lipase được khảo sát bằng phương pháp định lượng lượng acid béo tự do được giải phĩng. 1 mL dịch enzyme
ủ với 1 mL chất tẩy ở nồng độ 10% trong 1 giờở nhiệt độ phịng. Các thơng số khác của phản ứng enzyme khơng thay đổi.
CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN