2.2.3.1. Thang chuẩn sử dụng
Lambda DNA/EcoR I+Hind III Marker EZ Load 100 bp molecular ruler
Hình 2.1: Thang chuẩn sử dụng
2.2.3.2. Mơi trường phân lập vi sinh vật sinh lipase ngoại bào [55]
Dầu olive ... 20,0 mL (Dầu olive nhũ hĩa... 80,0 mL) (NH4)2SO4...5,0 g MgSO4.7H2O...0,1 g Agar...20,0 g Nước cất ... 1 000,0 mL
Mơi trường được chỉnh về pH phù hợp và hấp tiệt trùng ở 121 0C/ 15 phút.
2.2.3.3. Mơi trường cảm ứng sinh tổng hợp lipase [7], [51]
(Dầu olive nhũ hĩa... 40,0 mL) KH2PO4...0,2 g NH4NO3...1,0 g MgSO4.7H2O...0,2 g Yeast extract...1,0 g Nước cất ... 1 000,0 mL
Mơi trường được chỉnh về pH phù hợp và hấp tiệt trùng ở 121 0C/ 15 phút.
Dầu olive nhũ hĩa
Polyvinyl alcohol (2%) hoặc Gum arabic (7%)... 75,0 mL Dầu olive... 25,0 mL
Cho hỗn hợp trên vào máy xay sinh tố, cho máy vận hành trong 3 phút, tắt máy và giữ lạnh trong 3 phút ở 4 0C (tiến hành 4 lần) sẽ nhận được thể nhũ tương. Thể nhũ tương sử dụng được khi khơng bị phân thành 2 pha khi giữ lạnh trong 1 giờ
và được bảo quản ở 4 0C.
Polyvinyl alcohol (2%)
Polyvinyl alcohol ...20,0 g Nước cất ((70 – 80) 0C)... 800,0 mL
Khuấy gia nhiệt khoảng (70 – 80) 0C cho tan hồn tồn, sau đĩ dung dịch
được làm lạnh và lọc qua vải cotton, bổ sung nước cất tiệt trùng cho đủ 1 000, 0 mL.
Gum arabic (7%)
Gum arabic...70,0 g Nước cất ((70 – 80) 0C)... 800,0 mL
Khuấy gia nhiệt khoảng (70 – 80) 0C cho tan hồn tồn, sau đĩ dung dịch
được làm lạnh và lọc qua vải cotton, bổ sung nước cất tiệt trùng cho đủ 1 000, 0 mL.
2.2.3.4. Mơi trường nhân sinh khối vi khuẩn
Mơi trường trypticase (tryptic) soy broth (TSB):
Peptone...3,0 g D(+) glucose...2,5 g NaCl ...5,0 g K2HPO4...2,5 g Nước cất ... 1 000 mL pH : 7,3 ± 0,2
Hịa tan hồn tồn các thành phần vào trong nước (đun sơi nếu cần thiết), chỉnh pH phù hợp. Phân phối 10 mL mơi trường vào các ống nghiệm 16x150 mm và hấp tiệt trùng ở 121 0C trong 15 phút.
Mơi trường Trypticase (tryptic) soy agar (TSA):
Trypticase ...15,0 g Peptone...5,0 g NaCl ...5,0 g Agar...15,0 g Nước cất ... 1 000,0 mL pH : (7,3 ± 0,2)
Hịa tan hồn tồn các thành phần vào trong nước (đun sơi nếu cần thiết), chỉnh pH phù hợp. Phân phối vào chai 500 mL và hấp tiệt trùng ở 121 0C trong 15 phút.
Đối với mơi trường thương mại: cân mơi trường (theo hướng dẫn của nhà sản xuất) vào trong chai thủy tinh sau đĩ hịa tan hồn tồn mơi trường trong nước (đun sơi nếu cần).
2.2.3.5. Mơi trường quan sát hình thái, nhân sinh khối nấm men (mơi
trường YM broth và agar) [9], [10].
Yeast extract...3,0 g Malt extract ...3,0 g Pepton ...5,0 g Glucose ...10,0 g Agar (mơi trường rắn)...20,0 g
Nước cất ... 1 000 mL
Hịa tan hồn tồn các thành phần vào trong nước (đun sơi nếu cần thiết), chỉnh về pH 6,0 và hấp tiệt trùng ở 121 0C trong 15 phút.
2.2.3.6. Mơi trường làm thuần và định danh nấm mốc [3], [30], [73], [78], [94]
Malt extract agar (MEA)
Malt extract ...30,0 g Agar...20,0 g Nước cất ... 900,0 mL pH: (5,5 ± 0,2) ở 250C
Đun tan hồn tồn thành phần mơi trường, đựng trong chai cĩ màu tối, hấp tiệt trùng ở 1210C / 15 phút và đổ vào đĩa petri, làm khơ mặt thạch đĩa ở nhiệt độ
phịng trước khi sử dụng. Czapek-DOX agar Sucrose... 30,0 g NaNO3 ... 3,0 g MgSO4 ... 0,5 g KCl ... 0,5 g Fe2(SO4)3 ... 0,01 g K2HPO4 ... 1,0 g Agar...13,0 g Nước cất ... 1 000,0 mL pH : (7,3 ± 0,2) ở 250C
Hồ tan các thành phần trong nước cất. Hấp tiệt trùng ở 1210C / 15 phút.
Đối với mơi trường thương mại: cân mơi trường (theo hướng dẫn của nhà sản xuất) vào trong chai thủy tinh sau đĩ hịa tan hồn tồn mơi trường trong nước (đun sơi nếu cần).
2.2.3.7. Dung dịch đệm Sorensen 50 mM. pH 5,5 [6] [7]
Dung dịch KH2PO4 ...1/15M
Sử dụng máy đo pH để theo dõi độ pH của dung dịch khi hịa dung dịch KH2PO4 1/15M vào một lượng thể tích nhất định dung dịch Na2HPO4 1/15M cho tới khi đạt giá trị pH 5,5 thì ngưng.
2.2.3.8. Dung dịch đệm đa năng Britton và Robinson 50 mM (pH 3 – 12) [6]
[7] Dung dịch gốc CH3COOH ... 2,3 Ml H3PO4 ... 2,3 Ml H3BO3...2,5 g Nước cất ... 1000 mL Dung dịch NaOH 0,2M NaOH ...8 g Nước cất ... 1000 mL
Hịa dung dịch NaOH 0,2M vào một thể tích nhất định của dung dịch gốc cho tới khi đạt giá trị pH mong muốn (sử dụng máy đo pH).
2.2.3.9. Thuốc thử Bradford [7]
Coomassie brilliant blue ...0,02 g Ethanol tuyệt đối ...47 g H3PO4 85%...85 g Nước cất ... 1 000 mL
2.2.3.10.Dung dịch albumin 0,1 mg/mL
Cân chính xác 10 mg albumin pha trong 1 mL nước cất tiệt trùng, lắc đều và giữ ở nhiệt độ lạnh. Khi dùng pha lỗng 100 lần, được dung dịch albumin cĩ nồng
độ 0,1 mg/mL.
2.2.3.11.Các hĩa chất khác
NaOH N/20 MnCl2 11 mM Phenolphtalein 1%
HCl N/20 FeCl2 11 mM Dầu nành (Tường An)
NaCl 11 mM EDTA 11 mM Dầu hỗn hợp (Tường An)
KCl 11 mM Tween 20 Dầu olive (TARREGA)
MgCl2 11 mM Tween 80