1.2.3.1. Yêu cầu chung [3], [11], [69], [73], [78]
– Các chủng cần định danh phải được nuơi cấy trên các mơi trường, nhiệt độ, thời gian nuơi cấy theo đúng quy định của các khố phân loại đối với từng chi nấm mốc.
1.2.3.2. Quy trình định danh [3], [11], [69], [73], [78]
Quan sát đặc điểm khuẩn lạc trên thạch
– Hình dạng
– Kích thước (đường kính, bề dày)
– Dạng mặt (nhung mượt, mịn, len xốp, dạng hạt, lồi lõm, cĩ khía hay khơng…)
– Màu sắc khuẩn lạc mặt trên và mặt dưới
– Dạng mép khuẩn lạc (mỏng, dày, phẳng, nhăn nheo…) – Giọt tiết nếu cĩ (nhiều, ít, màu sắc)
– Mùi khuẩn lạc (cĩ, khơng mùi)
– Sắc tố hồ tan (màu của mơi trường xung quanh khuẩn lạc) nếu cĩ.
– Các cấu trúc khác: bĩ sợi, bĩ giá (synnematous or sporodochial conidiomata) các cấu trúc mang bào tử trần (fruit body - conidiomata)
như đĩa giá (acervuli) hoặc túi giá (pycnidia), đệm nấm (stroma), hạch nấm (sclerotia) vv..
Quan sát các đặc điểm vi học
– Sợi nấm (hyphae) cĩ vách ngăn, khơng cĩ vách ngăn, cĩ mấu.
– Bào tử trần (conidia): kiểu phát sinh bào tử trần (ở nấm bất tồn), hình dạng, kích thước, màu sắc, bề mặt (nhẵn, cĩ gai, gồ ghề) cách sắp xếp
đơn độc chuỗi gốc non (basipetal) chuỗi gốc già (acropetal) khối cầu vv…
– Bộ máy mang bào tử (spore apparatus): nang bào tử và nang bào tử nhỏ
(nếu cĩ) (sporangia & sporangiola) hình dáng, kích thước, màu sắc, bề
mặt của nang, cuống nang, khơng hoặc cĩ nhánh (nhánh mọc vịng, mọc cách, hợp trục vv…); bào tử nang (hình dạng, kích thước, bề mặt, …) ở
nấm tiếp hợp.
– Bộ máy mang bào tử trần (conidiogenous apparatus): giá bào tử trần (conidiophore) - kích thước, đường kính, chiều dài, bề mặt (nhẵn, cĩ gai, cĩ nốt sần, vv…) màu sắc, cĩ vách ngang hoặc khơng, cĩ hoặc khơng cĩ cấu trúc đặc biệt như tế bào chân (foot cell) sợi cứng (setae) tăng trưởng
ở gốc hoặc ở ngọn cĩ hoặc khơng cĩ dạng hình thái đặc biệt như bĩ giá,
đệm giá. Các nhánh (của bào tử trần) số lượng nhánh, kích thước bề mặt, màu sắc, cách sắp xếp (đối xứng, khơng đối xứng sát nhau hoặc tẽ rộng, vị trí dọc giá bào tử trần hoặc tập trung ở ngọn giá) vv…
– Tế bào sinh bào tử trần (conidiogenous cell) : Kiểu tế bào sinh bào tử trần (thể bình, dạng cĩ khuyên ở đỉnh, dạng sinh bào tử trần đồng thời, như
dạng bình (phialo type); dạng phân đốt (annello type)). Dạng sinh bào tử
trần khơng đồng thời (aleurio- type), bào tử đính kiểu nẩy chồi (blasto - type), dạng sinh bào tử trần qua lỗđể lại sẹo (poro - type) vv.. hình dạng, kích thước, màu sắc, cách sắp xếp (đơn độc hoặc thành cụm, thành vịng), vị trí (trên sợi nấm, dọc theo giá bào tử trần, các nhánh hoặc ở đính giá) vv…
– Thể quả túi (ascocarp) như cleistothecium, cần khảo sát vị trí, số lượng, hình dạng, kích thước, màu sắc, bề mặt của thể quả, quan sát túi bào tử
(ascus) bào tử túi (ascospore) về hình dạng, kích thước bề mặt.
1.2.3.3. Tiến hành định loại [3], [30], [38], [69], [71], [73], [78], [94]
Căn cứ vào kết quả quan sát đầy đủ, chính xác các đặc điểm của khuẩn lạc và các đặc điểm vi học tiến hành xác định tên lồi chủng nấm mốc như sau:
– Dùng khố phân loại của các nhĩm phân loại bậc cao (ngành, ngành phụ, lớp, bộ, họ, chi) để xác định lần lượt xem những nấm mốc thuộc chi nấm mốc nào. Tiếp theo dùng khố phân loại của chi đĩ để xác định đến lồi (thứ) bằng cách so sánh tất cả các đặc điểm đã quan sát được của chủng nấm mốc đĩ với các đặc điểm tương ứng của lồi nào đĩ trong khố phân loại. Nếu các đặc điểm so sánh phù hợp với đặc điểm của lồi mơ tả trong khố, ta xác định được tên lồi của chủng nấm mốc cần định danh.
– Nếu cĩ chủng nấm mốc mẫu của lồi (hoặc thứ) vừa xác định thì tiến hành so sánh các đặc điểm hình thái khuẩn lạc, đặc điểm vi học của chủng mẫu với các đặc điểm tương ứng của chủng cần định danh. Nếu các đặc điểm của 2 chủng phù hợp với nhau thì cĩ thể khẳng định chắc chắn lồi (hoặc thứ) của chủng nấm mốc cần định danh.