Khảo sát một số hợp chất tự nhiên, hoạt tính chống oxy hóa, hoạt tính kháng khuẩn từ thịt quả mãng cầu xiêm

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM ™{–{– KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: KHẢO SÁT MỘT SỐ HỢP CHẤT TỰ NHIÊN, HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HĨA, HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN TỪ THỊT QUẢ MÃNG CẦU XIÊM Giáo viên hướng dẫn : TS TRẦN ĐỨC MẠNH Th.S LÊ THỊ TUYẾT ANH Sinh viên thực : NGUYỄN THỊ THANH THÂN MSV : 3140618006 Lớp : 18CHDC Đà Nẵng, ngày 01 tháng 04 năm 2022 GVHD: TS Trần Đức Mạnh; Th.S Lê Thị Tuyết Anh Khoá luận tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN "Q trình thực Khố luận tốt nghiệp giai đoạn quan trọng quãng đời sinh viên Khoá luận tốt nghiệp tiền đề nhằm trang bị cho kỹ nghiên cứu, kiến thức quý báu trước lập nghiệp Trước hết, xin chân thành cảm ơn quý Thầy, Cô khoa Hố học Đặc biệt q Thầy Cơ mơn Hố Dược tận tình dạy trang bị cho kiến thức cần thiết suốt thời gian ngồi ghế giảng đường, làm tảng cho tơi hồn thành khố luận Tôi xin trân trọng cảm ơn thầy Trần Đức Mạnh, Lê Thị Tuyết Anh tận tình giúp đỡ, định hướng cách tư cách làm việc khoa học Đó góp ý quý báu khơng q trình thực khố luận mà cịn hành trang tiếp bước cho tơi trình học tập lập nghiệp sau Và cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè, tập thể lớp 18CHDC, người ln sẵn sàng sẻ chia giúp đỡ học tập sống Mong rằng, mãi gắn bó với Xin chúc điều tốt đẹp đồng hành người.” SVTH: Nguyễn Thị Thanh Thân GVHD: TS Trần Đức Mạnh; Th.S Lê Thị Tuyết Anh Khoá luận tốt nghiệp MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU VÀ TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Tình hình nghiên cứu nước…………………………………… 1.2 Giới thiệu mãng cầu xiêm .2 1.3 Đặc điểm hình thái 1.4 Thu hoạch 1.5 Giá trị tình hình sử dụng mãng cầu xiêm .5 1.6 Một số lớp chất tự nhiên thịt MCX có hoạt tính sinh học .8 1.7 Gốc tự hoạt tính chống oxy hóa 12 1.8 Một số phương pháp chiết xuất .15 1.8.1 Kỹ thuật chiết lỏng – lỏng: 15 1.8.2 Kỹ thuật chiết rắn – lỏng: .15 1.8.3 Các phương pháp chiết khác: 15 1.9 Một số thuốc từ MCX [29] .16 1.10 Một số sản phẩm từ MCX có thị trường [30, 31] 17 1.11 Ứng dụng thịt MCX chế biến thực phẩm: 17 1.12 Độc chất chống định sử dụng MCX .18 CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .20 2.1 Thiết bị - Dụng cụ - Hóa chất 20 2.1.1 Thiết bị, dụng cụ .20 2.1.2 Hoá chất 20 2.2 Nguồn nguyên liệu .20 2.3 Sơ đồ quy trình thực nghiệm 21 2.4 Phương pháp định tính số thành phần hợp chất tự nhiên có thịt MCX 22 2.5 Xác định pH hàm lượng chất khô (TSS) thịt MCX 23 2.6 Xác định hàm lượng acid tổng thịt MCX .23 2.7 Xác định tổng hàm lượng hợp chất có tính khử có thịt MCX 23 2.8 Xác định hàm lượng phenol tổng 23 SVTH: Nguyễn Thị Thanh Thân GVHD: TS Trần Đức Mạnh; Khoá luận tốt nghiệp Th.S Lê Thị Tuyết Anh 2.9 Xác định hàm lượng vitamin C phương pháp sắc ký lỏng cao áp (HPLC) 24 2.10 Xác định lực kháng oxy hố tổng theo mơ hình phospho molybdenum 24 2.11 Khảo sát hiệu loại bỏ gốc tự DPPH 25 2.11.1 Xác định hoạt độ chất chống oxy hóa tổng số phản ứng DPPH với chất chuẩn Vitamin C 25 2.11.2 Khả trung hòa gốc tự (SA) 25 2.12 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn phương pháp khuyếch tán qua giếng thạch 26 CHƯƠNG 3: THẢO LUẬN VÀ KẾT QUẢ 28 3.1 Kết định tính số hợp chất tự nhiên .28 3.2 Kết qủa xác định tổng nồng độ hợp chất khử có thịt MCX 29 3.3 Xác định pH hàm lượng chất khô (TSS) thịt MCX 30 3.4 Xác định hàm lượng acid tổng có thịt MCX .30 3.5 Một số tiêu hoá lý thịt MCX 39 3.6 Xác định hàm lượng vitamin C phương pháp sắc ký lỏng cao áp (HPLC) 31 3.7 Kết xác định hàm lượng phenol tổng 32 3.8 Xác định lực kháng oxy hố tổng theo mơ hình phospho molybdenum .34 3.9 Khảo sát hiệu loại bỏ gốc tự DPPH 36 3.9.1 Tổng hàm lượng hợp chất có khả loại bỏ gốc tự DPPH 1g thịt MCX qui tương đương khối lượng vitamin C 36 3.9.2 Hoạt độ chất chống oxy hóa tổng số mẫu thử (C) biểu thị milimol đương lượng Vitamin C 100 g (µmol TC/100 g) 36 3.10 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn phương pháp khuyếch tán qua giếng thạch 39 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 SVTH: Nguyễn Thị Thanh Thân GVHD: TS Trần Đức Mạnh; Th.S Lê Thị Tuyết Anh Khoá luận tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần dinh dưỡng 100g thịt MCX chín Bảng 1.2 Các hợp chất hóa học chiết xuất từ MCX Bảng 1.3 Thành phần số lớp chất hóa học từ thịt MCX 10 Bảng 3.1 Kết định tính số hợp chất tự nhiên có thịt MCX 28 Bảng 3.2 Thể tích dung dịch Na2S2O3 tiêu tốn chuẩn độ lượng dư iot 30 Bảng 3.3 Thể tích dung dịch NaOH chuẩn độ theo V dịch chiết 30 Bảng 3.4 Một số tiêu hố lý thịt MCX chín .40 Bảng 3.4 Độ hấp thụ hàm lượng Vitamin C phương pháp HPLC .31 Bảng 3.5 Thể độ hấp thụ acid gallic MCX chín chưa chín .32 Bảng 3.6 Hàm lượng chất kháng oxy hoá quy tương đương acid gallic dịch chiết thịt MCX .35 Bảng 3.7 Nồng độ ascobic tương ứng với độ hấp thụ acid ascobic phần trăm khả trung hoà gốc tự 37 Bảng 3.8 Nồng độ dịch chiết tướng ứng với độ hấp thụ dịch chiết phần trăm khả trung hoà gốc tự 38 Bảng 3.9 Đường kính vịng vơ khuẩn (cm) loại mẫu đối chứng âm, đối chứng dương mẫu dịch chiết MCX chín .39 SVTH: Nguyễn Thị Thanh Thân GVHD: TS Trần Đức Mạnh; Th.S Lê Thị Tuyết Anh Khố luận tốt nghiệp DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Hình dáng cây, hoa, MCX Hình 1.2 Cấu trúc số hợp chất có MCX 11 Hình 1.3 Một số sản phẩm MCX có thị trường 17 Hình 2.1 Thịt MCX 21 Hình 2.2 Thịt MCX xay nhuyễn 21 Hình 2.3 Sơ đồ quy trình thực nghiệm .21 Hình 2.4 Sơ đồ bố trí hộp petri mơi trường L.B 27 Hình 3.1 Kết định tính số hợp chất hữu có thịt MCX 28 SVTH: Nguyễn Thị Thanh Thân GVHD: TS Trần Đức Mạnh; Th.S Lê Thị Tuyết Anh Khoá luận tốt nghiệp DANH MỤC ĐỒ THỊ Đồ thị 3.1 Đồ thị tuyến tính nồng độ diện tích peak 31 Đồ thị 3.2 Đồ thị tuyến tính nồng độ acid galic độ hấp thụ MCX chín33 Đồ thị 3.3 Đồ thị tuyến tính nồng độ acid galic độ hấp thụ MCX chưa chín .33 Đồ thị 3.4 Đồ thị cột biểu diễn hàm lượng phenol tổng mẫu nguyên liệu khác .34 Đồ thị 3.5 Đồ thị tuyến tính nồng độ acid galic độ hấp thụ MCX chín 35 Đồ thị 3.6 Đồ thị cột biểu diễn hàm lượng hợp chất kháng oxy hóa tổng mẫu nguyên liệu khác 36 Đồ thị 3.7 Đồ thị tuyến tính nồng độ ascobic (mol/l) phần trăm khả trung hòa gốc tự DPPH 37 Đồ thị 3.8 Đồ thị tuyến tính nồng độ dịch chiết (mol/l) phần trăm khả trung hòa gốc tự DPPH 38 SVTH: Nguyễn Thị Thanh Thân GVHD: TS Trần Đức Mạnh; Th.S Lê Thị Tuyết Anh Khoá luận tốt nghiệp ĐẶT VẤN ĐỀ Các gốc tự phân tử chứa oxy với số lượng electron không đồng đều, khiến chúng dễ dàng phản ứng với phân tử khác gây phản ứng hóa học chuỗi lớn thể Chất chống oxy hóa phân tử tặng electron cho gốc tự mà khơng bị tính ổn định Nếu hoạt động bình thường, gốc tự giúp chống lại tác nhân gây bệnh Stress oxy hóa xảy gốc tự chất chống oxy hóa bị cân bằng, có nhiều gốc tự mức mà chất chống oxy hóa giữ cân bằng, gốc tự bắt đầu gây hại cho mô mỡ, DNA protein thể dẫn đến nhiều bệnh, xơ vữa động mạch, bệnh thối hóa thần kinh (như Parkinson bệnh Alzheimer), ung thư, lão hóa Chính nguy hại vậy, gốc tự xem “sát thủ giấu mặt” gây q trình lão hóa phần lớn bệnh tật Phương pháp ngăn ngừa stress oxy hóa hạn chế yếu tố gây hại cho thể từ bên ngoài, tăng cường chế độ dinh dưỡng giàu chất chống oxi hóa có khả loại bỏ gốc tự do, bổ sung tinh chất thiên nhiên có khả trung hịa gốc tự do, đồng thời hạn chế nhiều dầu mỡ, thực phẩm đóng hộp, bia rượu Trong năm gần đây, có nhiều nghiên cứu tiến hành nhằm tìm hợp chất có khả kháng oxi hóa từ thiên nhiên để ứng dụng tạo sản phẩm thực phẩm, mỹ phẩm, dược phẩm để phục vụ cho người Trong số MCX nhà nghiên cứu giới quan tâm đánh giá cao, nghiên cứu trích xuất từ lá, hạt, quả, vỏ chất hoạt tính sinh học có khả kháng khuẩn, hạ huyết áp, giảm đau, viêm khớp, điều trị ngăn ngừa ung thư Ở Việt Nam, MCX loại trái thơm ngon, quen thuộc ứng dụng làm dược liệu số công thức thuốc cổ truyền Các phương thuốc cổ truyền chủ yếu dựa vào tác dụng hợp chất có hoạt tính sinh học alkaloids, flavonoid, tannin hợp chất phenolic có phận lá, quả, hạt, rễ MCX Tuy nhiên, việc nghiên cứu hoạt chất MCX Việt Nam chưa quan tâm khai thác hiệu Vì vậy, đề tài đánh giá hoạt tính chống oxi hóa, khả loại bỏ gốc tự khả kháng khuẩn thịt MCX nhằm tìm kiếm thêm nguồn ngun liệu thiên nhiên, an tồn để phục vụ cho sức khỏe người SVTH: Nguyễn Thị Thanh Thân Trang GVHD: TS Trần Đức Mạnh; Th.S Lê Thị Tuyết Anh Khoá luận tốt nghiệp CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU VÀ TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Tình hình nghiên cứu MCX ngồi nước Trên giới có nghiên cứu trích xuất từ lá, hạt, quả, vỏ chất hoạt tính sinh học có khả kháng khuẩn, hạ huyết áp, giảm đau, viêm khớp, cải thiện hệ tiêu hóa, điều trị ngăn ngừa ung thư Các hoạt tính sinh học cụ thể hợp chất nhóm acetogenin khác nhau, alkaloids, flavonoid, sterol Hamid et al cộng thử nghiệm chiết xuất ethanol graviola cho hoạt động chống viêm cấp tính mãn tính chuột Hơn 212 hợp chất hóa học báo cáo chiết xuất từ MCX Các tác giả cho biết rằng, dịch chiết ethanol có tác dụng làm giảm tượng phù nề giảm viêm khớp chuột xylene [1, 2] MCX có nguồn dinh dưỡng cao, chứa nhiều vitamin C, khống, xơ có nhiều đặc tính sinh học quý giá (Trần Việt Hưng, 2011) Hiện nay, thị trường xuất sản phẩm trà làm từ MCX tươi công ty TNHH Cẩm Thiều (2017); nước cốt MCX công ty TNHH Thuận Thiên Thành; có nhiều sở bán MCX có hướng dẫn sử dụng theo kinh nghiệm dân gian Bên cạnh đó, cơng nghệ sản xuất bột trái MCX với kỹ thuật sấy lạnh nghiên cứu Nguyễn Đức Vượng cộng (3/2019), [4] Nhìn chung, việc nghiên cứu tận dụng nguồn nguyên liệu để chế biến thành sản phẩm có giá trị kinh tế cao chưa quan tâm khai thác hiệu 1.2 Giới thiệu mãng cầu xiêm Mãng cầu xiêm, tên khoa học Annona muricata L., thuộc họ Annonaceae, có khoảng 150 lồi, có nguồn gốc từ vùng nhiệt đới, cận nhiệt đới Tây Ấn, Nam Châu Mỹ, Châu Phi, đảo Thái Bình Dương, Đơng Nam Á Ở Việt Nam, MCX chủ yếu trồng Nam Bộ, Nam Trung Bộ [5, 6] Quả MCX loại trái sử dụng phổ biến Châu Mỹ nhiệt đới, Úc, Châu Phi Malaysia để chế biến thành nhiều sản phẩm khác hỗn hợp nước trái cây, mật hoa, siro, mứt, thạch kem [7, 8] Trong thịt có khoảng 114 SVTH: Nguyễn Thị Thanh Thân Trang