Khảo sát một số hoạt tính sinh học của sản phẩm chiết từ lá vối (clelstocalyx operculatus)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA - oOo - ĐINH THỊ CAO KHANH KHẢO SÁT MỘT SỐ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA SẢN PHẨM CHIẾT TỪ LÁ VỐI (Clelstocalyx operculatus) Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã ngành: 604280 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH, 12/2015 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA -ĐHQG -HCM Cán hướng dẫn khoa học : TS Huỳnh Ngọc Oanh Cán chấm nhận xét 1: PGS.TS Nguyễn Tiến Thắng Cán chấm nhận xét : PGS.TS Lê Thị Thủy Tiên Luận văn thạc sĩ bảo vệ Trường Đại học Bách Khoa, ĐHQG Tp HCM ngày 08 tháng 01 năm 2016 Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị Hội đồng chấm bảo vệ luận văn thạc sĩ) TS Nguyễn Hữu Phúc TS Nguyễn Đình Lệ Tâm PGS.TS Nguyễn Tiến Thắng PGS.TS Lê Thị Thủy Tiên TS Phan Ngọc Hòa Xác nhận Chủ tịch Hội đồng đánh giá LV Trưởng Khoa quản lý chuyên ngành sau luận văn sửa chữa (nếu cố) CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG TRƯỞNG KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM CỘNG HÒA Xà HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc TRƯỜNG ĐH BÁCH KHOA KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC Bộ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC Số: /BKĐT NHIỆM VỤ LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP HỌ VÀ TÊN: ĐINH THỊ CAO KHANH MSSV:11310610 Ngày tháng năm sinh: 12/08/1986 Nơi sinh: Tp.HCM NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Mã ngành: 60 42 80 Đề tài luận văn: KHẢO SÁT MỘT SỐ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA SẢN PHẦM CHIẾT TỪ LÁ VỐI (Cleistocalyx operculatus) Nhiệm vụ (yêu cầu nội dung số liệu ban đầu): - Khảo sát sơ nguyên liệu vối - Khảo sát số hoạt tính sinh học sản phẩm chiết từ vối buớc đầu ứng dụng Ngày giao nhiệm vụ luận văn: 06 / 07/ 2015 Ngày hoàn thành nhiệm vụ: 04/12/2015 Họ tên nguời huớng dẫn: Phần huớng dẫn: TS HT HUỲNH NGỌC OANH Toàn Nội dung yêu cầu LVTN đuợc thông qua Bộ môn Ngày tháng năm 201 CHỦ NHIỆM BỘ MƠN NGƯỜI HƯỚNG DẪN CHÍNH PSG.TS NGUYỄN THÚY HƯƠNG TS HUỲNH NGỌC OANH PHẦN DÀNH CHO KHOA, BỘ MÔN: Người duyệt (chấm sơ bộ): Đơn vị: Ngày bảo vệ: Điểm tổng kết: Nơi lưu trữ luận văn: LỜI CẢM ƠN Được đồng ý giáo viên hướng dẫn TS Huỳnh Ngọc Oanh, khoa Kỹ thuật Hóa học, Trường Đại học Bách Khoa Thành phố Hồ Chí Minh, tơi thực đề tài "KHẢO SÁT MỘT SỐ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA SẢN PHẨM CHIẾT TỪ LÁ VỐI (Cleistocalyx operculatus) Để có điều kiện thực đề tài hồn thành chương trình cao học trường Đại học Bách Khoa Tp.HCM, nhận dạy tận tình với kinh nghiệm quý báu từ quý Thầy Cô Bộ môn Công nghệ Sinh học Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến: • Ban Giám Hiệu q Thầy Cơ Trường Đại học Bách Khoa TP.HCM tạo cho mơi trường học tập tích cực thoải mái * Quý Thầy Cô Bộ môn Công nghệ Sinh học truyền dạy cho kiến thức chuyên môn quý báu hành trang sống công việc sau * Đặc biệt, xin chân thành cảm ơn giáo viên hướng dẫn TS Huỳnh Ngọc Oanh, người tận tình hướng dẫn, bảo giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài • Chân thành cảm ơn Quý Thầy Cô, anh chị cán Trung Tâm Sâm môn Vi Sinh, Khoa Dược Trường Đại Học Y Dược TPHCM hỗ trợ suốt thời gian làm luận văn » Bền cạnh đó, tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Thầy Cô, anh chị môn, anh chị cao học bạn làm việc phịng thí nghiệm nhiệt tình giúp đỡ tơi thời gian thực đề tài Xin chân thành cảm ơn! ĐINH THỊ CAO KHANH KHAO SẮT MỢr SỎ HOẠT TÍNH SINH HỌC CÙA SẦN PHẨM CHĨÉT TỪLẮ VỎĨ ĐĨNH THỊ CAO KHANH TÓM TẮT LUẬN VĂN Đề tài "KHẢO SÁT MỘT SỐ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA SẢN PHẨM CHIẾT TỪ LÁ VỐI (Cleistocalyx operculatus) ”đã thu số kết sau: Sơ thành phần vối có nhiều tinh dầu, flavonoid, terpenoid, tanin, hợp chất polyuronic Phân tích thành phần cao chiết Methanol phương pháp GC/MS cho thấy thành phần cao Ocimene, phytol Caryophyllene, cao chiết Henxane-Acetone cho thấy thành phần Ocimene Caryophyllene Điều kiện tối ưu để trích ly vối xử lý enzyme Viscozyme L theo hàm lượng hợp chất Polyphenol cho thông số thích hợp sau: tỉ lệ nguyên liệu/nước V2, nồng độ enzyme 12 pl/g nguyên liệu thờj gian trtch lỵ 120 phím nhiệt độ 50°C Dịch chiết vối phân tích hàm lượng EGCG (mg/ml) với kết có dùng enzyme 99.39 khơng có enzyme 74.51 Cao chiết có xử lý enzyme cao chiết khơng có enzyme thu hàm lượng chất khô tương ứng 5.7% 3.16% Cao chiết từ dịch chiết xử lý enzyme thể khả kháng khuẩn hiệu cao cao chiết từ dịch chiết vối không xử lý enzyme; khả kháng oxy hóa cho hiệu so với cao chiết không xử lý enzyme tương ứng IC50 31.64 ± 1.74 92.89 ± 9.37 (pg/ml) phản ứng trung hòa gốc DPPH Tinh dầu vối thu nhận chưng cất cho hàm lượng tinh dầu vối tươi tinh dầu vối có xử lý enzyme đạt 0.18% 0.23%, cho thấy việc sử dụng enzyme làm tăng hàm lượng tinh dầu 27.7%; xác định thành phần có hàm lượng cao tinh dầu Ocimene Caryophyllene Khả kháng oxy hóa IC50 (mg/ml) tinh dầu vối tươi tinh dầu vối có xử lý enzyme cho kết 3.35+0.11 4.56+0.16 Bước đầu ứng dụng thực nghiệm sản xuất nước uống vối, nước uống phối chế thử cảm quan xác định hàm lượng syrup 12%, tỷ lệ pha loãng dịch chiết/nước 1/5 yêu thích nhiều chọn để sản xuất thử nghiệm nước uống vối i KHAO SẮT MỢr SỎ HOẠT TÍNH SINH HỌC CÙA SẦN PHẨM CHĨÉT TỪLẮ VỎĨ ĐĨNH THỊ CAO KHANH ABSTRACT Preliminary components of Cleistocalyx operculatus leaves contain essential oils, flavonoids, terpenoids, tannins, polyuronic compounds Analysis of methanol extracts of c operculatus leaves by GC/MS determined main ingredients are Ocimene, phytol and Caryophyllene, main ingredients in hexane-acetone extracts are Ocimene and Caryophyllene Optimal conditions obtained polyphenol in water extracts treated by enzyme Viscozyme L: ratio of material I water is Vi, enzyme concentration 12pl /g, extraction conditions: 120 minutes at a temperature 50°C Water extracts were analyzed levels of EGCG (mg/g dry content) with enzyme extracts were 99.39 and non-enzyme extracts were 74.51 Enzyme-treated extracts get weight 5.7% g/g material; nonenzyme extracts get weight 3.16% g/g material Enzyme-treated extracts shown antibacterial more than non-enzyme extracts from fresh leaves; antioxidant activity corresponding IC50 values are 31.64 ± 1.74 and 92.89 ± 9.37 (pg/ml) by DPPH reation Essential oils from c operculatus fresh leaves and enzyme-treated leaves were collected by distillation, reached respectively 0.18% w/w and 0.23% w/w; showing that using enzyme has increased oil content up to 27.7%; identified the components which have a high content were Ocimene and Caryophyllene Antioxidant activity IC50 (mg/ml) of essential oil from fresh leaves and from enzyme-treated leaves are respectively 3.35 ± 0.11 and 4.56 ± 0.16 Initial experiments to produce beverages from Cleistocalyx operculatus leaves, a beverage recipe was made and tested sensory to determine that the final syrup content 12% and dilution ratio between exttacts/water = 1/5 are the most favorable kind and chosen to run the trial test ii LỜI CAM ĐOAN Tôi tên Đinh Thị Cao Khanh, học viên cao học chuyên ngành Công Nghệ Sinh Học, khóa 2011, Khoa Kỹ Thuật Hóa Học, Trường Đại Học Bách Khoa TPHCM Tôi xin cam đoan: Công trình nghiên cứu tơi thực hiện, hướng dẫn khoa học TS Huỳnh Ngọc Oanh Tơi xin chịu hồn tồn trách nhiệm kết nghiên cứu luận văn tốt nghiệp minh Học viên Đinh Thị Cao Khanh KHAO SẮT MỢr SỎ HOẠT TÍNH SINH HỌC CÙA SẦN PHẨM CHĨÉT TỪLẮ VỎĨ ĐĨNH THỊ CAO KHANH MỤC LỤC Danh mục hình vi Danh mục bảng vii CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU CHƯƠNG : TỔNG QUAN 2.1 Tổng quan vối 2.1.1 Giới thiệu 2.1.2 Phân loại khoa học 2.1.3 Mô tả thực vật 2.1.4 Phân bổ sinh thái 2.1.5 Công dụng vối 2.2 Thành phần hóa học vối 2.3 Tác dụng sinh học 2.4 Enzyme Viscozyme L: 11 2.5 Những cơng trình nghiên cứu vối 10 CHƯƠNG : VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 13 3.1 Nguyên liệu, hóa chất thiết bị 13 3.1.1 Nguyên liệu: 13 3.1.2 Hóa chất 13 3.1.3 Thiết bị, dụng cụ 13 3.2 Nội dung phương pháp nghiên cứu 14 3.2.1 Nội dung nghiên cứu: 14 3.2.2 Phương pháp nghiên cứu 14 3.2.2.1 Phương pháp sơ thành phần hóa thực vật 14 3.2.2.2 Phương pháp chiết dung môi 15 3.2.2.3 Phương pháp phân tích bang GC/MS 15 3.2.2.4 Khảo sát điều kiện sử dụng enzyme thu dịch chiết giàu polyphenol 16 3.2.2.5 Phương pháp khảo sát so hoạt tính sinh học 18 a) Khảo sát khả khảng oxy hóa: 18 b) Phương pháp xác định khả khảng khuấn dịch chiết 21 3.2.2.6 Phương pháp phân tích hàm lượng EGCG, cafein bang HPLC 21 3.2.2.7 Thu cao chiết vối 22 iii KHAO SẮT MỢr SỎ HOẠT TÍNH SINH HỌC CÙA SẦN PHẨM CHĨÉT TỪLẮ VỎĨ ĐĨNH THỊ CAO KHANH 3.2.2.8 Phương pháp chưng cẩt tinh dầu 23 3.2.2.9 Thử nghiệm sản xuất nước uống vối 24 a) Quy trình thực nghiệm sản xuất đồ uống đóng chai từ dịch chiết vối enzyme: 24 b) Thuyết minh quy trình: 25 c) Đánh giá cảm quan sản phẩm: 25 CHƯƠNG : KẾT QUẢ 26 4.1 Khảo sát thành phần nguyên liệu 27 4.1.1 Phân tích thành phần thực vật sơ 27 4.1.2 Thành phần hàm lượng chẩt cao chiết 29 4.2 Khảo sát dịch chiết vối 30 4.2.1 Kháo sát điều kiện thu dịch chiết giàu polyphenol 30 4.2.1.1 Khảo sát ảnh hưởng lượng enzyme đến q trình trích ly polyphenol 30 4.2.1.2 Khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ nước/ngun liệu đến q trình trích ly polyphenol 31 4.2.1.3 Khảo sát ảnh hưởng thời gian trích ly đến trình trích ly polyphenol 32 4.2.1.4 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ trích ly đến q trình trích ly polyphenol 33 4.2.2 Phân tích hàm lượng EGCG cafein dịch chiết 36 4.2.3 Khả khảng oxy hóa dịch chiết 36 4.3 Khảo sát cao chiết 38 4.3.1 Thu cao chiết 38 4.3.2 Khảo sát khả khảng khuấn cao chiết .38 4.3.3 Khảo sát khả khảng oxy hóa cao chiết 39 4.4 Bước đầu thử nghiệm thu tinh dầu vối 40 4.4.1 Hàm lượng thành phần tinh dầu voi 40 4.4.2 Khả khảng oxy hóa tinh dầu 42 4.4.3 Khả khảng khuấn tinh dầu 43 4.5 4.5.1 Bước đầu ứng dụng làm nước uống đóng chai: 45 Phổi chế 45 iv KHAO SẮT MỢr SỎ HOẠT TÍNH SINH HỌC CÙA SẦN PHẨM CHĨÉT TỪLẮ VỎĨ ĐĨNH THỊ CAO KHANH 4.5.2 Đánh giá cảm quan 45 4.5.3 Kiểm tra tiêu chuẩn vi sinh nước uống vối 47 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 49 5.1 Kết luận: 49 5.2 Kiến nghị 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 PHỤ LỤC V KHẢO SÁT MỘT SỐ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA SẢN PHÂM CHIÉT TỪLÁ VỚ ĐINH THI CAO KHANH phẩm, thực phẩm chức Chưng cất thu tinh dầu tiếp tục tối ưu hóa điều kiện thu nhận theo nồng độ enzyme, tỷ lệ nguyên liệu/nước, thời gian chưng cất Từ mơ hình thực nghiệm sản xuất nước uống vối đưa vào sản xuất thực tế quy mơ lớn Đa dạng hóa sản phẩm từ vối ứng dụng phối chế với nguyên liệu khác nha đam, mật ong, linh chi Phân tích thêm thành phần tạo nên mùi hương đặc trưng vối KHẢO SÁT MỘT SỐ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA SẢN PHÂM CHIÉT TỪLÁ VỚ ĐINH THI CAO KHANH TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Bộ Y Tế, 2009 Dược điển Việt Nam IV, PL-182, PL-183, PL-239, Pl-12 GS.TS ĐỗTất Lợi, 1999 Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, 423 Võ Văn Chi, Vũ Văn Chuyên cộng sự, 1971 Cây cỏ thường thấy việt nam 11, NXB KH KT Hà Nội, 449-467 Lê Thị Anh Đào, Nguyễn Xuân Đông, Hồng Văn Lựu, 1997 Nghiên cứu thành phần hóa học vối việt nam, Tạp chí khoa học, 3: 47 - 51 Hoàng Văn Lựu, 1991 Nghiên cứu thành phần hóa học số thuộc họ sim (Myrtaceae) cỏ roi ngựa (Verbenaceae), Luận án tiến sĩ, Thư viện quốc gia, 01.04.02, Tiêu chuẩn quốc gia, 2013 Hàm lượng catechin hong chè xanh - Phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao Đào Thị Thanh Hiền, Phạm Thanh Kỳ, 2003 Nghiên cứu số tác dụng sinh học vối (Cleistocalyx operculatus (Roxb.) Men et Peny), Tạp chi Dược học, 3: 22- 23 Trong Tuan Dao, Bui Thanh Tung, Phi Hung Nguyen, Phuong Thien Thuong, Sung- Sik Yoo, EunHee Kim, Sang-Kyum Kim, and Won-Keun Oh,2010 C-Methylated flavonoids from Cleistocalyx operculatus and theữ inhibitory effects on novel influenza A (H1N1) neuraminidase, Journal of Natural Products, 73, (10), 1636-1642 Byung Sun Min, To Dao Cuong, Joo-Sang Lee, beom-Soo Shin, Mi Hee Woo, Tran Manh Hung, 2010 Cholinesterase inhibitors from Cleistocalyx operculatus buds, Arch Pharm Res Vol 33, No 10, 1665-1670 10 Noura s Dosoky, Suraj K pokharel, William N Setzer, 2015 Leaf essential oil composition, antimicrobial and cytotoxic activities of Cleistocalyx operculatus from He- tauda, Nepal, American Journal of Essential oils and natural products, 2(5), 34-37 11 Woo, A Y.; Waye, M M.; Kwan, H s.; Chan, M c.; Chau, c F.; Cheng, c H 2002 Inhibition of ATPases by Cleistocalyx operculatus A possible mechanism for the cardiotonic actions of the herb Vase Pharmacol., 38, 163 12 Lu, Y H.; Du, c B.; Wu, z B.; Ye, c L.; Liu, J w.; Wei, D z Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 2003 Protective effects of Cleistocalyx operculatus on lipid peroxidation and trauma of neuronal cells 28, 964 13 Byung Sun Min, To Dao Cuong, Joo-Sang Lee, beom-Soo Shin, Mi Hee Woo, Tran Manh Hung, 2010 Flavonois from Cleistocalyx operculatus Buds and their cytotoxic activity, Bull Korean Chem Soc., Vol 31, No., pp 2392-2393, 14 Min, B s.; Thu, c V.; Dat, N T.; Dang, N H.; Jang, H s.; Hung, T M,2008 Antiox- idative flavonoids from Cleistocalyx operculatus buds Chem Pharm Bull., 56, 1725 15 Min B s., Na M K., Oh s R., Ahn K s., Jeong G s., Li G., Lee s K., Joung H., Lee H K., 2004, 2004 New Furofuran and Butyrolactone Lignans with Antioxidant Activity from the Stem Bark of Styrax japonica Journal of Natural Products, 67, 1980— 1984 16 Jean BRƯNETON, 1995 Pharmacognosy, Phytochemisửy, Medicinal Plants - Technique & KHẢO SÁT MỘT SỐ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA SẢN PHÂM CHIÉT TỪLÁ VỚ ĐINH THI CAO KHANH Documentation - Lavoisier 17 Robak J, Gryglewski RJ., 1996 Bioactivity of flavonoids, Pol J Pharmacol., 48 (6), p 555-564 18 Mink PJ, Scrafford CG, Barraj LM, et al,2007.Flavonoid intake and cardiovascular disease mortality: a prospective study in postmenopausal women The American Journal of Clinical Nutrition, 85, 895-909 19 Hooper L, Kroon PA, Rimm EB, et al, , 2008 Flavonoids, flavonoid-rich foods, and cardiovascular risk: a meta-analysis of randomized controlled trials The American Journal of Clinical Nutrition, 88, 38-50 20 Williamson G & Manach c, 2005 Bioavailability and bioefficacy of polyphenols in humans II Review of 93 intervention studies The American Journal of Clinical Nutrition, 81, 243S-255S 21 Manach c, Williamson G, Morand c, et al, , 2005 Bioavailability and bioefficacy of polyphenols in humans Review of 97 bioavailability studies The American Journal of Clinical Nutrition, 81, 230S242S 22 Kuhnau J„ 1976 The flavonoids: a class of semi-essential food components: theữ role in human nutrition World Rev Nutr Diet, 24, 117-191 23 Claudine manach, Augustin Scalbert, Christine Mrand, Christian Remasy, Liliana jimenez, 2004 Polyphenols: food resources and bioactivity, America society for clinical nutrition, vol 79, No 5, 727-747 24 Takeo T; Oosawa K, 1976 Photometric analysis and statistical evaluation of black tea infusion, Bull National Res Inst Tea (Japan), vol 12, pp 125-181 25 Zhang, F.X., Liu, M.F., Lu, R.R, 1990 Studies on the chemical constituents from the bud of Cleistocalyx operculatus Journal Acta Botanica Sinica Vol 32 No pp 469- 472 26 Nomura, M., Yamakawa, K., Hữata, Y., Niwa, M.1993 Antidermatophyticconstituent from the bark of Cleistocalyx operculatus Shoyakugaku Zasshi, 47, 408—410 27 Mahesh, B., Satish s , 2008 Antimicrobial activity of some important medicinal plant against plant and human pathogens World Journal of Agricultural Sciences., 4[S]: 839- 843 28 Albuquerque W.F., A Macrae, o.v Sousa, G.H.F Viefra, R.H.S.F Vieira, 2007 Multiple drug resistant Staphylococcus aureus strains isolated from a fish market and from fish handlers Brazilian Journal of Microbiology., Vol 38, pp 131-4 29 G Takeoka, Jr c Perrino, R Buttery, 1996 Volatile constituents of used frying oils, Journal of Agricultural and Food Chemistry 44, 654-660 30 Yumnam Romila Devi, Pranab Behati Mazumber, 2013 In vitro Antioxidant activity of ethanol and aqueous extracts of Eugenia operculata Roxb, Journal of Pharmacy and Biological Sciences, Volume 8, 95-100 31 Novozymes Viscozyme, Novozymes Viscozyme® L for Vegetable and Fruit Processing 32 H.B Sowbhagya, Kaul T Pumima, Suma p Florence, A.G Appu Rao, p Srinivas, , 2009 Evaluation of enzyme-assisted extraction on quality of garlic volatile oil, Food Chemistry, Vol 113, 1234-1238 33 Park, M.K, Kim, C.H, 2010 Exfraction of Polyphenols from Apple Peel Using Cellulase and Pectinase and Estimation of Antioxidant Activity, Food and Agriculture Organization of the KHẢO SÁT MỘT SỐ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA SẢN PHÂM CHIÉT TỪLÁ VỚ 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 ĐINH THI CAO KHANH United Nations, Vol 38 Xian Guan, Huiyuan Yao, 2008.Optimization of Viscozyme L-assisted extraction of oat bran protein using response surface methodology, Food chemitry, Vol 106, 345- 351 Anthony Y.H Woo, Mary M.Y Waye, H.s Kwanc, Melanie C.Y Chan, C.F Chau, Christopher H.K Cheng, 2002 Inhibition of ATPases by Cleistocalyx operculatus: A possible mechanism for the cardiotonic actions of the herb, Vascular Pharmacology, Vol 38, Pages 163-168 Nguyen Thi Dung, Jung Min Kim, Sun Chui Kang,, 2008,Chemical composition, antimicrobial and antioxidant activities of the essential oil and the ethanol extract of Cleistocalyx operculatus (Roxb.) Merr and Perry buds, Food and Chemical Toxicology, Vol 46, Pages 3632-3639 Andrew Scott, Chairman ISO TC/34 sc Tea,, 2010 ISO Standards for Tea Intergovernmental Group- on Tea 10th Session New Dehli, 12-14 Rojeena Shrestha, Jiwan Pravan Lama, Kshitij Shrestha,, 2010 Total Polyphenols Content and Antioxidant Activity of Different Tea Commercially Produced in Nepal, Journal of Food Science and Technology Nepal, Vol 6, 73-77 Truong Tuyet Mai, Le Thi Hop, Nguyen Thi Lam,, 2008 Effect of an aqueous extract of Cleistocalyx Operculatus flower bud on anti-diabetic in STZ diabetic-mice nd its influence on target gene expression in mouse tissues, New Food Industry, Vol 50, No 3, page Y.s Kim, S.J Park, E.J Lee, 2008.Antibacterial Compounds from Rose Bengal- Sensitized Photooxidation of 0-Caryophyllene, Journal of Food Science, Vol 73, Issue 7, p C540-C545 André Pichette, Pierre-Luc Larouche, Maxime Lebrun and Jean Legault, 2006 Composition and antibacterial activity of Abies balsamea essential oil, Phytotherapy Research, Vol 20, Issue 5, p 371-373 T Gurgel Vale, E Couto Furtado, J.G Santos Jr., G.S.B Viana, 2002 Cenfral effects of citral, myrcene and limonene, constituents of essential oil chemotypes from Lippia alba (Mill.) N.E Brown, Phytomedicine, Vol 9, Issue 8, p 709-714 Daniel G Raederstorff, Manfred F Schlachter, Volker Elste, Peter Weber, 2003 “Effect of EGCG on lipid absorption and plasma lipid levels in rats”, The Journal of Nutritional Biochemistry, Vol 14, Issue 6, p 326-332, Shankar s, Ganapathy s, Hingorani SR, Srivastava RK, 2008 “EGCG inhibits growth, invasion, angiogenesis and metastasis of pancreatic cancer”, Frontiers in Bioscience Journal and Virtual Library, Vol 13, p 440-452 L Joji Reddy, Beena Jose, Reshma Devi Jalli, Spandana Gopu, 2012 “Evaluation of antibacterial and DPPH radical scavenging activities of the leaf essential oil and leaf extracts of Uvaria narum (Dunal) Wall”, International Journal of Research in Pure and Applied Microbiology, ISSN 2277 3843 Sharif M Al-Reza, Atiqur Rahman, M.A Sattarb, M Oliur Rahman, Hasan M Fida, 2010 “Essential oil composition and antioxidant activities of Curcuma aromatica Salisb” Food and Chemical Toxicology, Volume 48, Issue 6, 2010, Pages 1757-1760 Truong Tuyet MAI, Nghiem Nguyet THU, Pham Gia TIEN, Nguyen Van CHƯYEN, 2007 “Alpha-Glucosidase Inhibitory and Antioxidant Activities of Vietnamese Edible Plants and Their KHẢO SÁT MỘT SỐ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA SẢN PHÂM CHIÉT TỪLÁ VỚ ĐINH THI CAO KHANH Relationships with Polyphenol Contents” Journal of Nutritional Science and Vitaminology, Vol 53, No p 267-276 KHẢO SÁT MỘT SỐ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA SẢN PHÂM CHIÉT TỪLÁ VỚ ĐINH THI CAO KHANH PHỤ LỤC Phụ lục 1: Phuong pháp vài hình ảnh phân tích SO’ thành phần hóa thực vật Lierberman - Buchard Fehling Phản ứng polyphenol (tannin, flavonoid) Cyanidin Hình 1: Phản ứng hóa học sơ thành phần hóa thực vật vối KHAO SAT MỘT SOHOẠT TÍNH SINH HỌC CÚA SAN PHẦM CHIÉT TỪLA vứ ĐINH THI CAO KHANH Dị ch chiết Nhỏ lên Bố chơi Bố chơi Bố chơi Bố chơi Bố chơi Phản ứng tờ giấy mỏng chén sứ Có mùi thơm, thêm chén sứ đến cắn chén sứ đến cắn Làm phản đến cắn hòa cắn nước chén sứ đến cắn Cho tác Borntrager ứng Lierberman Buchard acid Phản ứng với thuốc thử dụ ng với kiềm, soi uv Có tủ a Tăng cường độ phát quang soi UV ay ther i Có vết mờ o Xi *=“ vài giọt cồn, bốc hết cồn ị Cắn có mùi thơm s ■a r-i JZ u Thuốc thử AcidsulfuLớp phân cách Carr - Price ric đậ m đặc màu có màu đỏ nâuMàu xanh , ■ , tím vịng màu “ lục-xanh chuyê n sang , _ lục hay tím dương đận đỏl khuếch tán lên ị ị Dung dị ch kiềm có màu đỏ Bố chơi đến cắn Hòa tan cồn Làm phản ứng cyanidin ị Có màu đỏ KHAO SAT MỘT SOHOẠT TÍNH SINH HỌC CÚA SAN PHẦM CHIÉT TỪLA vứ ĐINH THI CAO KHANH Phân tích nhóm hợp chất trực tiếp từ dị ch chiết cồn Dị ch chiết LZ: Bố chơi đến cắn hòa nước ac id Phản ứng với Bố chơi chén sứ đến cắn Cho tác dụ ng với kiềm soi ĩ Bố chơi chén sứ đến cắn Phản ứng với TT Ray mond 1■ * Tăng Có tủ a cường độ phát quang Tím với TT Ray mond Marthoud đỏ với J ly- Làm phản ứng cyanidin Đun cách thủy 10 phút với HC110% Thêm vài giọtHCl 10% KOH 10% Phản ứng vớid ung dị chFeCla dung dị ch gela tin muối ị l l ị Có màu đỏ Có màu đỏ Bố chơi Thui đến cắn thử: Hòa tan ling nước, lắc mạnh l Thêm mộ tít tinh thê Na2CO3 Xanh rêu - xah Có tủ a Có bọtbền Đỏ với dd đen với FeCl3 15 phút đỏ gạch acid, xanh với kiềm Tủa bơng với Có bọt khí bay lên KHAO SAT MỘT SOHOẠT TÍNH SINH HỌC CÚA SAN PHẦM CHIÉT TỪLA vứ ĐINH THI CAO KHANH Phân tích nhóm hợp chất trực tiếp từ dị ch chiết nước Dị ch chiết Bố c đến cắn hòa nước ac- Ị i Bố chơi chén sứ đến cắn Phản Pha lỗng thể tích cồn 95% T Làm phản ứng cyanidin Đun cách thùy 10 phútvới HC110% Thêm vài giọtHCl 10% KOH10% hay aceton id Phản ứng với thuốc ị Cótủa ứng với TT Raymond Mar- p Tím với Có tủ a bơng trăng TTRaymondMarthoud đỏ với i I1 T Phản ứng vớid ung dị chFeCla dung dị chgela- Bố chơi Thuốc đến cắn thử FehHòa tan ling nước, lắc mạnh Thêm mơtít tính thê Na2CO3 tín muối l Xanh rêu - ị ị KHAO SAT MỘT SOHOẠT TÍNH SINH HỌC CÚA SAN PHẦM CHIÉT TỪLA vứ ĐINH THỊ CAO KHANH Phân tích nhóm hợp chất thuỷ phân từ nước - - Dj ch chiết HC1/cách thủy 30 phút, chiết I Di ch chiết I II1 Bố chơi chén sứ đến cắn Phản ứng với TT Raymond - MarTím với TT Raymond Marthoud đỏ với T E ■ơ -o iB O Q ! Làmphản ứng cyanidin Có màu đỏ Bố chơi chén sứ đến cắn Làm phản ứng Lierber- Lớp phân cách có màu đỏ nâu-tím vòng màu t ■5 s ■ o ta U ■_c Phản ứng Borntrager Có màu đỏ I I S a KH Ao SÁT MỘT sO HOẠT TÍNH SINH HỌC CÚA SAN PHẰM CHIÉT TỪLÁ vứ ĐINHTHI CAO KHANH Dj ch chiết HCl/cách thủy 30 phút, chiết ether Phân tích nhóm hợp chấtthuỷ phân cồn I Dị ch chiết I r Bố chơicắn trênCho chén sứ đến tác dụng với Bố chơi chén sứ đến cắn Phản ứng kiềm, soi uv 365 với TT Raymond - Marthoud Ị xanhthydrol Tăng cường độ phát quang ị Tím với TT Raymond - Marthoud đỏ với xanhthydrol s ■đ ■p s Ẽ c Ũ 13 © Làm phản ứng cyanidin Bố chơi chén sứ đến cắn Làm phản ứng Lierberman - Buchard ị Phản ứng Borntrager I i Có màu đỏ Lớp phân cách có màu đỏ nâutím vịng màu lục hay tímkhuế ch tán Có màu đỏ ú 3£ O Ĩ*1 cp — 3E M 'S s ũ ■r* I KHAO SẮT MỢr SỎ HOẠT TÍNH SINH HỌC CÙA SẦN PHẨM CHĨẼT TỪLẮ VỎĨ ĐĨNH THỊ CAO KHANH Phụ lục 2: Kết xứ lý số liệu tối ưu hóa thu dịch chiết Bảng 1: Kết xứ lý số liệu tối ưu hóa thu dịch chiết Mau 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 Lô ỉ Nhiệt Thời Enzyme gian đô (°C) (pl) (phút) 50 50 50 50 50 50 30 35 40 45 50 55 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 120 120 120 120 120 120 120 120 120 120 120 120 120 120 120 120 120 30 60 90 120 150 60 80 100 120 140 160 120 120 120 120 120 120 120 120 120 120 120 120 120 120 120 120 Hàm lượng H2O OD Hàm lượng polyphenol (ml) 540nm ẩm %w/w nguyên liệu % w/w 20 0.031 66.54 0.36 20 0.055 66.54 0.64 20 0.072 66.54 0.84 20 0.082 66.54 0.96 20 0.084 66.54 0.98 20 0.085 66.54 0.99 20 0.056 66.54 0.65 20 0.057 66.54 0.67 20 0.070 66.54 0.82 20 0.073 66.54 0.85 20 0.078 66.54 0.91 20 0.071 66.54 0.83 20 0.083 66.54 0.97 30 0.078 66.54 0.91 40 0.063 66.54 0.74 50 0.053 66.54 0.62 60 0.029 66.54 0.34 20 0.018 66.54 0.21 20 0.049 66.54 0.57 20 0.073 66.54 0.85 0.087 66.54 20 1.02 0.091 66.54 20 106 KHAO SẮT MỢr SỎ HOẠT TÍNH SINH HỌC CÙA SẦN PHẨM CHĨẼT TỪLẮ VỎĨ ĐĨNH THỊ CAO KHANH Phụ lục 3: Phương pháp xác định kháng khuẩn Vi khuẩn thử nghiêm Escherichia coli ATCC 25922 Streptococcus faecalis ATCC 29212 Staphylococcus aureus nhạy cảm với methicilin (MSSA) ATCC 29213 Staphylococcus aureus đề kháng methicilin (MRSA) ATCC 43300 Chuẩn bị dịch vi khuẩn: + Cấy ria tạo khuẩn lạc môi trường thạch TSA, chọn 2-3 khuẩn lạc đưa vào ống nghiệm chứa 5ml môi trường TSB khử trùng, nuôi cấy tĩnh 37°c 18 - 24h + Mật độ vi khuẩn sau nuôi cấy môi trường TSB xác định theo phương pháp đo mật độ quang (OD) bước sóng Ố25nm - Tiến hành + Dùng pipet man hút lOOpl vi khuẩn loại (mật độ tế bào 106 CFU/ml), sau chang ửên mặt thạch MHA khô ổn định, chờ khô bề mặt Đĩa giấy ốmm vơ trùng thấm bão hịa mẫu thử, dung dịch mẫu thử chờ khô đặt lên mặt thạch chang vi khuẩn, đè nhẹ để đĩa giấy cố định mặt thạch Đĩa giấy thấm dung dịch đối chứng, đĩa xung quanh thấm mẫu thử Sau đem ni 37°c 18 - 24h Đọc kết ghi nhận đường kính vịng vơ khuẩn Đường kính vịng vơ khuẩn (D-d) xác định đường kính vịng kháng ngồi trừ đường kính đĩa giấy Xác định MIC (Minimum Inhibitory Concentration) theo phương pháp hịa tan mơi trường lỏng TSB - Pha dung dịch đối chứng pha mẫu thử thành dãy nồng độ cần thử - Dùng pipet man hút mẫu thử pha loãng theo dãy nồng độ thử dung dịch đối chứng vào ống nghiệm chuẩn bị sẵn môi trường Lắc cho mẫu vào môi trường Đổ đĩa petri chờ nguội khô mặt, chang vi khuẩn thử nghiệm lên bề mặt đĩa Đĩa mọc vi khuẩn nồng độ mẫu thử khơng có khả kháng khuẩn MIC xác định nồng độ trước ức chế vi khuẩn thử nghiệm Phụ lục 4: Kết cảm quan KHAO SẮT MỢr SỎ HOẠT TÍNH SINH HỌC CÙA SẦN PHẨM CHĨẼT TỪLẮ VỎĨ ĐĨNH THỊ CAO KHANH miÈl1 ĐÁNH GIà CẮM QUAN TỄU sáh phấn: 'Jit IJC Ilk Tổi ữti;ií Tĩụl^h: XuiiiKil: ThW Ngâtỵtivì: Qbrt v( vub lí>ti