Nghiên cứu hóa học và hoạt tính sinh học của một số hợp chất từ nấm biển phân lập tại miền Trung Việt Nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - PHAN THỊ HỒI TRINH NGHIÊN CỨU HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ VI NẤM BIỂN PHÂN LẬP TẠI MIỀN TRUNG VIỆT NAM LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Hà Nội – 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - PHAN THỊ HOÀI TRINH NGHIÊN CỨU HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ VI NẤM BIỂN PHÂN LẬP TẠI MIỀN TRUNG VIỆT NAM Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 9.42.02.01 LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS Phí Quyết Tiến PGS.TS Trần Thị Thanh Vân Hà Nội – 2019 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan: Đây công trình nghiên cứu tơi số kết cộng tác với số cộng khác Các số liệu kết trình bày luận án trung thực, phần công bố tạp chí khoa học chuyên ngành đồng ý sử dụng số liệu đồng tác giả Phần lại chưa cơng bố cơng trình khác Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Nghiên cứu sinh Phan Thị Hoài Trinh ii LỜI CẢM ƠN Lời xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc trân trọng đến PGS.TS Phí Quyết Tiến, Viện Cơng nghệ sinh học PGS.TS Trần Thị Thanh Vân, Viện Nghiên cứu Ứng dụng công nghệ Nha Trang – người Thầy ln tận tình giúp đỡ, hướng dẫn khoa học định hướng nghiên cứu suốt trình tơi thực hồn thành luận án Tơi xin trân trọng cảm ơn cố PGS.TS Bùi Minh Lý, người truyền niềm đam mê nghiên cứu khoa học, quan tâm tạo động lực cho từ ngày đầu thực luận án Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Thầy, Cô Viện Công nghệ sinh học giảng dạy, cung cấp kiến thức để tơi hồn thành học phần chuyên đề chương trình đào tạo Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Lãnh đạo Học viện Khoa học Công nghệ tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành nội dung chương trình đào tạo Tơi xin chân thành cảm ơn ThS Bùi Thị Hải Hà, chuyên viên phụ trách đào tạo Viện Công nghệ sinh học Chuyên viên Nguyễn Thị Minh Tâm Học viện Khoa học Cơng nghệ tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi hồn thành hồ sơ q trình học tập Tôi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Viện NC&UDCN Nha Trang đồng nghiệp ủng hộ tạo điều kiện thuận lợi để tơi tập trung nghiên cứu hồn thành luận án Tôi xin chân thành cảm ơn Hợp phần nhánh số thuộc Dự án điều tra Dự án hợp tác nghiên cứu khoa học Viện NC&UDCN Nha Trang Viện KH&CN Hải dương Hàn Quốc hỗ trợ kinh phí thực đề tài Cuối cùng, tơi xin cảm ơn gia đình, người thân bạn bè quan tâm, hỗ trợ động viên suốt thời gian qua để tơi hồn thành tốt nhiệm vụ học tập công tác chuyên môn Tôi xin trân trọng cảm ơn! Nghiên cứu sinh Phan Thị Hoài Trinh iii MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt .vii Danh mục bảng x Danh mục hình .xi MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chung hoạt tính sinh học từ vi nấm biển 1.1.1 Các hợp chất chuyển hóa thứ cấp có hoạt tính sinh học từ vi nấm biển 1.1.1.1 Chất kháng sinh 1.1.1.2 Chất gây độc tế bào ung thư 1.1.1.3 Chất chống oxy hóa 10 1.1.1.4 Chất bảo vệ tế bào thần kinh 11 1.1.1.5 Một số chất có hoạt tính sinh học khác 12 1.1.2 Đa dạng sinh học vi nấm biển 12 1.1.3 Một số đặc tính sinh học vi nấm biển 14 1.1.4 Nghiên cứu sàng lọc vi nấm biển sinh tổng hợp hoạt chất sinh học 16 1.2 Môi trường lên men ảnh hưởng điều kiện lên men đến khả sinh tổng hợp chất kháng sinh vi nấm biển 17 1.2.1 Đặc điểm trình lên men sinh chất kháng sinh 17 1.2.2 Môi trường lên men vi nấm sinh kháng sinh 19 1.2.2.1 Lên men rắn 19 1.2.2.2 Lên men chìm 20 1.2.3 Ảnh hưởng điều kiện lên men đến khả sinh tổng hợp chất kháng sinh vi nấm biển 22 1.2.3.1 Ảnh hưởng thời gian lên men 22 1.2.3.2 Ảnh hưởng nồng độ muối 24 iv 1.2.3.3 Ảnh hưởng pH 26 1.2.3.4 Ảnh hưởng nhiệt độ 27 1.2.3.5 Ảnh hưởng nguồn carbon nitơ 28 1.3 Nghiên cứu phân lập xác định cấu trúc hóa học chất chuyển hóa thứ cấp từ vi nấm biển 29 1.3.1 Phân lập chất chuyển hóa thứ cấp từ vi nấm biển 29 1.3.2 Xác định cấu trúc hóa học chất chuyển hóa thứ cấp từ vi nấm biển 31 1.4 Xu hướng nghiên cứu hoạt chất sinh học từ vi nấm biển giới Việt Nam 32 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 37 2.1 Vật liệu môi trường nghiên cứu 37 2.2 Phương pháp nghiên cứu 39 2.2.1 Phân lập vi nấm biển 39 2.2.2 Đánh giá hoạt tính kháng VSV kiểm định chủng vi nấm biển 39 2.2.3 Phân tích cặn chiết chủng vi nấm có hoạt tính kháng sinh cao 39 2.2.4 Xác định đặc điểm hình thái phân loại vi nấm biển 40 2.2.5 Xác định điều kiện lên men rắn thích hợp cho sinh tổng hợp chất kháng sinh vi nấm biển 42 2.2.6 Phân tách hợp chất chuyển hóa thứ cấp từ vi nấm biển 42 2.2.6.1 Phân tách hợp chất từ chủng vi nấm A flocculosus 01NT.1.1.5 43 2.2.6.2 Phân tách hợp chất từ chủng vi nấm Aspergillus sp 01NT.1.12.3 43 2.2.6.3 Phân tách hợp chất từ chủng vi nấm P chrysogenum 045-357-2 44 2.2.7 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất chuyển hóa thứ cấp từ vi nấm biển 44 2.2.8 Xác định hoạt tính sinh học hợp chất chuyển hóa thứ cấp từ vi nấm biển 45 2.2.8.1 Xác định hoạt tính kháng VSV kiểm định 45 2.2.8.2 Xác định hoạt tính gây độc tế bào 45 2.2.8.3 Xác định hoạt tính chống oxy hóa 46 2.2.8.4 Xác định hoạt tính bảo vệ tế bào thần kinh 47 2.2.9 Xử lý số liệu nghiên cứu 47 2.2.10 Sơ đồ nghiên cứu tổng quát luận án 48 v CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 49 3.1 Phân lập sàng lọc hoạt tính kháng VSV kiểm định vi nấm biển 49 3.1.1 Số lượng chủng vi nấm biển thu nhận theo địa điểm nguồn phân lập 49 3.1.2 Đặc điểm hình thái vi nấm biển 50 3.1.3 Hoạt tính kháng VSV kiểm định vi nấm biển 58 3.2 Phân tích cặn chiết thơ xác định đặc điểm phân loại 08 chủng vi nấm biển tuyển chọn 62 3.2.1 Phân tích cặn chiết thô 08 chủng vi nấm biển tuyển chọn 62 3.2.2 Xác định đặc điểm hình thái phân loại 08 chủng vi nấm biển tuyển chọn 64 3.3 Xác định điều kiện lên men rắn thích hợp cho sinh tổng hợp chất kháng sinh 03 chủng vi nấm biển tuyển chọn 71 3.3.1 Khảo sát thời gian lên men 71 3.3.2 Khảo sát nồng độ muối biển 73 3.3.3 Khảo sát pH ban đầu 76 3.4 Tách chiết, tinh xác định cấu trúc hợp chất chuyển hóa thứ cấp từ chủng vi nấm biển tuyển chọn 78 3.4.1 Tách chiết, tinh xác định cấu trúc hợp chất từ chủng vi nấm A flocculosus 01NT.1.1.5 78 3.4.2 Tách chiết, tinh xác định cấu trúc hợp chất từ chủng vi nấm Aspergillus sp 01NT.1.12.3 89 3.4.3 Tách chiết, tinh xác định cấu trúc hợp chất từ chủng vi nấm P chrysogenum 045-357-2 94 3.5 Xác định hoạt tính sinh học 14 hợp chất chuyển hóa thứ cấp từ 03 chủng vi nấm biển tuyển chọn 97 3.5.1 Xác định hoạt tính kháng VSV kiểm định 97 3.5.2 Xác định hoạt tính gây độc tế bào 100 3.5.3 Xác định hoạt tính chống oxy hóa 100 3.5.4 Xác định hoạt tính bảo vệ tế bào thần kinh 102 CHƯƠNG THẢO LUẬN KẾT QUẢ 103 4.1 Hình thái hoạt tính kháng VSV kiểm định vi nấm biển miền Trung Việt Nam 103 vi 4.2 Đặc tính chủng vi nấm biển có tiềm sinh tổng hợp hoạt chất sinh học 105 4.3 Điều kiện lên men rắn thích hợp cho sinh tổng hợp chất kháng sinh vi nấm biển 107 4.4 Các hợp chất chuyển hóa thứ cấp từ 03 chủng vi nấm biển tuyển chọn 110 4.5 Hoạt tính sinh học 14 hợp chất thu nhận từ 03 chủng vi nấm biển tuyển chọn 115 4.5.1 Hoạt tính kháng VSV kiểm định 115 4.5.2 Hoạt tính gây độc tế bào, chống oxy hóa bảo vệ tế bào thần kinh 116 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 119 DANH MỤC CƠNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ 121 TÀI LIỆU THAM KHẢO 123 DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC 150 vii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt ACHN A-549 Tiếng Anh Tiếng Việt Renal carcinoma cells Adenocarcinomic human alveolar Tế bào ung thư biểu mô thận Tế bào ung thư phổi ADN ATCC basal epithelial cells Acid Deoxyribonucleic American Type Culture Collection Axit deoxyribonucleic Bảo tàng giống chuẩn Hoa Kỳ BGCs Biosynthetic gene clusters Nhóm gen sinh tổng hợp BGC-823 Gastric adenocarcinoma cell line Tế bào ung thư dày CFU CC Colony Forming Units Chromatography column Đơn vị hình thành khuẩn lạc Sắc ký cột thường CLSI COSY The Clinical & Laboratory Standards Institute Correlation spectroscopy Viện Tiêu chuẩn Lâm sàng Xét ngiệm Phổ tương tác hai chiều đồng hạt nhân DPPH DU-145 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl Prostatic carcinoma cell line Tế bào ung thư tuyến tiền liệt ESI-MS Electron spray ionzation mass spectroscopy 13 C-Nuclear magnetic resonance spectroscopy Phổ khối lượng phun mù điện tử Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon 13 H1N1 H3N2 HeLa HCT-15 HCT-116 Influenza A virus subtype H1N1 Influenza A virus subtype H3N2 HeLa cell line Human colon cancer cell line Human colon cancer cell line Virus cúm A H1N1 Virus cúm A H3N2 Tế bào ung thư cổ tử cung Tế bào ung thư đại tràng Tế bào ung thư đại tràng HL-60 HMBC Human leukemic cell line Heteronuclear multiple bond correlation H- Nuclear magnetic resonance spectroscopy High performance liquid chromatography Heteronuclear single quantum coherence Tế bào ung thư bạch cầu Phổ tương tác đa liên kết hai chiều dị nhân Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton Sắc ký lỏng cao áp 13 C -NMR H-NMR HPLC HSQC Phổ tương tác hai chiều dị hạt nhân viii Chữ viết tắt HT-29 Tiếng Anh Tiếng Việt Colorectal adenocarcinoma cell Tế bào ung thư đại trực tràng IR line Infrared spectroscopy Phổ hấp phụ hồng ngoại ITS Internal transcribed spacer Vùng phiên mã nội K-562 LF Human leukemic cell line Liquid fermentation Tế bào ung thư bạch cầu Lên men lỏng M-CSF Macrophage colony stimulating Nhân tố kích thích đại thực factor bào MCF-7 Human breast carcinoma cell line MDA-MB- Human breast carcinoma cell line Tế bào ung thư vú Tế bào ung thư biểu mô tuyến 231 MHB MIC MRSA MS Mueller Hinton Broth Minimum inhibitory concentration Methicillin-resistant Staphylococcus aureus Mass spectroscopy vú Môi trường canh Mueller Hinton Nồng độ ức chế tối thiểu Staphylococcus aureus kháng methicillin Phổ khối NCI-H23 NCI-H460 Human lung cancer cell line Human lung cancer cell line Tế bào ung thư biểu mô phổi Tế bào ung thư phổi Neuro2a NOESY Neural cell line Nuclear overhauser effect spectroscopy Nuclear magnetic resonance Gastric adenocarcinoma cell line One-Strain-Many-Compounds Prostatic carcinoma cell line Tế bào thần kinh Phổ NOESY Leukemia cell line Ribosomal DNA Refractive Index detector Rotating frame nuclear overhauser effect spectroscopy Reactive oxygen species Tế bào ung thư bạch cầu ADN ribosom Đầu dò khúc xạ Phổ ROESY NMR NUGC-3 OSMAC PC-3 RAW264.7 rDNA RI detector ROESY ROS RYE SmF Rice yeast extract medium Submerged fermentation Cộng hưởng từ hạt nhân Tế bào ung thư biểu mô dày Một chủng – Nhiều hợp chất Tế bào ung thư tuyến tiền liệt Gốc oxy tự Môi trường gạo dịch chiết nấm men Lên men chìm 65 Phổ HSQC hợp chất aspilactonol F (10) Phổ HMBC hợp chất aspilactonol F (10) 66 Phổ HR-ESI-MS hợp chất aspilactonol F (10) 3.726 3.711 3.624 3.485 3.430 3.407 3.341 3.329 2.780 2.163 2.152 2.137 2.127 2.112 2.101 2.075 2.018 1.996 1.988 1.657 1.631 1.546 1.537 1.531 1.520 1.512 1.506 1.480 1.475 1.462 1.453 1.411 1.401 1.386 1.377 1.360 1.351 1.338 1.254 1.246 1.241 1.234 1.229 1.220 1.158 1.097 1.038 0.987 0.920 0.894 -0.001 4.630 4.622 4.614 4.450 4.430 4.418 4.395 4.250 4.230 7.048 6.968 6.959 7.260 7.466 Các phổ hợp chất 6β,9α,14-trihydroxycinnamolide (11) Current Data Parameters NAME AF-8h-24 EXPNO PROCNO F2 - Acquisition Parameters Date_ 20180417 Time 13.00 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG zg30 TD 32768 SOLVENT CDCl3 NS DS SWH 7500.000 Hz FIDRES 0.228882 Hz AQ 2.1845834 sec RG 196.84 DW 66.667 usec DE 6.50 usec TE 303.2 K D1 1.00000000 sec TD0 ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 500.1331508 MHz NUC1 1H P1 11.00 usec PLW1 15.84899998 W F2 - Processing parameters SI 65536 SF 500.1300223 MHz WDW GM SSB LB -1.50 Hz GB 0.15 PC 4.00 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 4.57 2.95 3.5 1.24 4.0 2.05 4.5 1.11 5.0 1.08 0.30 1.00 1.00 5.5 0.96 6.0 1.05 6.5 1.03 0.93 7.0 0.97 7.5 1.00 8.0 Phổ 1H-NMR hợp chất 6β,9α,14-trihydroxycinnamolide (11) 0.0 ppm 20.84 18.36 17.63 26.76 32.58 41.99 38.97 38.31 47.05 58.46 63.49 68.37 77.52 77.18 77.00 76.82 74.99 130.13 139.11 169.62 67 Current Data Parameters NAME AF-8h-24 EXPNO 11 PROCNO F2 - Acquisition Parameters Date_ 20170630 Time 11.47 INSTRUM spect PROBHD mm PATXO 31P PULPROG zgpg TD 32768 SOLVENT CDCl3 NS 121 DS SWH 42613.637 Hz FIDRES 1.300465 Hz AQ 0.3845279 sec RG 203 DW 11.733 usec DE 6.50 usec TE 303.5 K D1 15.00000000 sec D11 0.03000000 sec TD0 4096 ======== CHANNEL f1 ======== NUC1 13C P1 9.10 usec PL1 dB PL1W 106.75517273 W SFO1 176.0353807 MHz ======== CHANNEL f2 ======== CPDPRG2 waltz16 NUC2 1H PCPD2 71.90 usec PL2 dB PL12 13.05 dB PL13 17.00 dB PL2W 23.41078186 W PL12W 1.15988755 W PL13W 0.46710649 W SFO2 700.0028000 MHz F2 - Processing parameters SI 65536 SF 176.0151423 MHz WDW EM SSB LB 5.00 Hz GB PC 1.20 200 195 190 185 180 175 170 165 160 155 150 145 140 135 130 125 120 115 110 105 100 95 90 85 80 75 70 65 60 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 ppm 17.63 20.85 26.77 32.59 42.00 47.05 58.47 63.50 68.37 77.22 75.01 139.12 Phổ 13C-NMR hợp chất 6β,9α,14-trihydroxycinnamolide (11) Current Data Parameters NAME AF-8h-24 EXPNO 75 PROCNO F2 - Acquisition Parameters Date_ 20170630 Time 12.18 INSTRUM spect PROBHD mm PATXO 31P PULPROG dept135 TD 32768 SOLVENT CDCl3 NS 64 DS 32 SWH 42613.637 Hz FIDRES 1.300465 Hz AQ 0.3845279 sec RG 203 DW 11.733 usec DE 6.50 usec TE 302.8 K CNST2 145.0000000 D1 2.00000000 sec D2 0.00344828 sec D12 0.00002000 sec TD0 4096 ======== CHANNEL f1 ======== NUC1 13C P1 9.10 usec P2 18.20 usec PL1 dB PL1W 106.75517273 W SFO1 176.0353807 MHz ======== CHANNEL f2 ======== CPDPRG2 waltz16 NUC2 1H P3 16.00 usec P4 32.00 usec PCPD2 71.90 usec PL2 dB PL12 13.05 dB PL2W 23.41078186 W PL12W 1.15988755 W SFO2 700.0028000 MHz F2 - Processing parameters SI 65536 SF 176.0151414 MHz WDW EM SSB LB 5.00 Hz GB PC 1.30 190 185 180 175 170 165 160 155 150 145 140 135 130 125 120 115 110 105 100 95 90 85 80 75 70 65 60 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 Phổ DEPT hợp chất 6β,9α,14-trihydroxycinnamolide (11) -5 -10 -15 -20 ppm 68 ppm 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 9.0 8.5 8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 -0.5 ppm Phổ HSQC hợp chất 6β,9α,14-trihydroxycinnamolide (11) Current Data Parameters NAME AF-8h-24 EXPNO 24 PROCNO ppm 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 F2 - Acquisition Parameters Date_ 20180417 Time 20.08 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG hmbclpndqf TD 2048 SOLVENT CDCl3 NS 128 DS 16 SWH 5241.090 Hz FIDRES 2.559126 Hz AQ 0.1954292 sec RG 196.84 DW 95.400 usec DE 6.50 usec TE 303.2 K CNST2 145.0000000 CNST13 8.0000000 D0 0.00000300 sec D1 2.00000000 sec D2 0.00344828 sec D6 0.06250000 sec IN0 0.00002090 sec ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 500.1321619 MHz NUC1 1H P1 11.00 usec P2 22.00 usec PLW1 15.84899998 W ======== CHANNEL f2 ======== SFO2 125.7697360 MHz NUC2 13C P3 12.50 usec PLW2 79.43299866 W F1 - Acquisition parameters TD 186 SFO1 125.7697 MHz FIDRES 128.620667 Hz SW 190.216 ppm FnMODE QF F2 - Processing parameters SI 2048 SF 500.1300223 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB PC 4.00 F1 - Processing parameters SI 512 MC2 QF SF 125.7577912 MHz WDW GM SSB LB Hz GB 85 90 9.0 8.5 8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 -0.5 ppm Phổ HMBC hợp chất 6β,9α,14-trihydroxycinnamolide (11) 69 Phổ HR-ESI-MS hợp chất 6β,9α,14-trihydroxycinnamolide (11) 2.146 2.024 2.003 1.989 1.870 1.864 1.859 1.849 1.844 1.839 1.829 1.824 1.819 1.810 1.804 1.799 1.713 1.687 1.669 1.626 1.610 1.607 1.590 1.586 1.581 1.577 1.571 1.567 1.561 1.557 1.518 1.485 1.479 1.466 1.461 1.448 1.442 1.424 1.323 1.315 1.309 1.295 1.289 1.275 1.271 1.267 1.239 1.230 1.192 1.184 1.178 1.168 1.158 1.096 1.005 3.611 3.602 3.591 3.581 3.437 3.397 3.338 3.317 3.304 3.300 3.297 3.295 3.198 3.892 4.353 4.252 4.250 4.247 4.204 4.177 4.161 4.097 4.528 4.981 4.978 4.956 4.953 4.875 4.850 4.833 4.810 4.741 Các phổ hợp chất 6β,7α,14-trihydroxyconfertifolin (12) Current Data Parameters NAME AF-33h-4 EXPNO PROCNO F2 - Acquisition Parameters Date_ 20170922 Time 13.06 INSTRUM spect PROBHD mm PABBI 1H/ PULPROG zg TD 32768 SOLVENT MeOD NS DS SWH 7102.273 Hz FIDRES 0.216744 Hz AQ 2.3069172 sec RG 57 DW 70.400 usec DE 6.50 usec TE 303.0 K D1 2.00000000 sec TD0 ======== CHANNEL f1 ======== NUC1 1H P1 8.00 usec PL1 dB PL1W 23.41078186 W SFO1 700.0030370 MHz F2 - Processing parameters SI 32768 SF 699.9999876 MHz WDW GM SSB LB -1.00 Hz GB 0.18 PC 4.00 3.10 1.0 1.08 1.5 3.13 1.03 2.0 2.09 2.5 1.05 1.03 3.0 1.04 3.5 0.40 0.54 4.0 1.07 1.05 1.06 0.81 4.5 1.06 5.0 1.05 5.5 Phổ 1H-NMR hợp chất 6β,7α,14-trihydroxyconfertifolin (12) 0.5 ppm 200 195 190 185 180 175 170 165 160 155 150 145 140 135 130 125 71.66 70.19 68.01 65.63 50.62 49.51 49.34 49.32 49.30 49.28 49.26 49.24 49.23 49.21 49.17 49.15 49.13 49.11 49.09 49.07 49.06 49.04 49.02 49.00 48.98 48.96 48.94 48.92 48.90 48.89 48.87 48.83 48.81 48.79 48.77 48.75 48.73 48.72 48.66 48.60 48.49 39.83 39.67 38.24 28.59 22.36 19.50 123.40 176.27 176.02 70 120 115 110 105 100 95 90 85 80 75 70 65 60 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 ppm 200 195 190 185 180 175 170 165 160 155 150 145 140 135 130 125 120 115 110 105 100 95 90 85 80 75 70 65 60 55 50 45 40 35 30 25 19.50 22.36 28.59 39.83 39.67 50.62 49.45 49.28 49.11 71.66 70.19 68.01 65.63 Phổ 13C-NMR hợp chất 6β,7α,14-trihydroxyconfertifolin (12) 20 15 10 -5 -10 Phổ DEPT hợp chất 6β,7α,14-trihydroxyconfertifolin (12) -15 -20 -25 ppm 71 Current Data Parameters NAME AF-33h-4 EXPNO 22 PROCNO ppm 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 F2 - Acquisition Parameters Date_ 20170922 Time 15.58 INSTRUM spect PROBHD mm PABBI 1H/ PULPROG hsqcph TD 1024 SOLVENT MeOD NS 16 DS 16 SWH 7102.273 Hz FIDRES 6.935813 Hz AQ 0.0721396 sec RG 203 DW 70.400 usec DE 6.50 usec TE 303.3 K CNST2 145.0000000 D0 0.00000300 sec D1 2.00000000 sec D4 0.00172414 sec D11 0.03000000 sec IN0 0.00003155 sec L31 ======== CHANNEL f1 ======== NUC1 1H P1 8.00 usec P2 16.00 usec PL1 dB PL1W 23.41078186 W SFO1 700.0030370 MHz ======== CHANNEL f2 ======== CPDPRG2 bi_p5m4sp_4sp.2 NUC2 13C P3 22.00 usec P4 44.00 usec P63 1500.00 usec PL2 -1.00 dB PL12 9.05 dB PL2W 134.39680481 W PL12W 13.28583717 W SFO2 176.0230570 MHz SP14 4.00 dB SP31 10.00 dB SPNAM14 Crp32,1.5,20.2 SPNAM31 Crp32,1.5,20.2 SPOAL14 0.500 SPOAL31 0.500 SPOFFS14 Hz SPOFFS31 Hz F1 - Acquisition parameters TD 256 SFO1 176.0231 MHz FIDRES 61.883106 Hz SW 90.000 ppm FnMODE TPPI F2 - Processing parameters SI 2048 SF 699.9999841 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB PC 4.00 F1 - Processing parameters SI 512 MC2 TPPI SF 176.0148687 MHz WDW SSB LB Hz GB 85 90 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 -0.5 ppm Phổ HSQC hợp chất 6β,7α,14-trihydroxyconfertifolin (12) Current Data Parameters NAME AF-33h-4 EXPNO 24 PROCNO ppm 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 F2 - Acquisition Parameters Date_ 20170922 Time 22.33 INSTRUM spect PROBHD mm PABBI 1H/ PULPROG hmbclpndqf TD 4096 SOLVENT MeOD NS 80 DS 16 SWH 7102.273 Hz FIDRES 1.733953 Hz AQ 0.2884084 sec RG 203 DW 70.400 usec DE 6.50 usec TE 303.0 K CNST2 145.0000000 CNST13 8.0000000 D0 0.00000300 sec D1 2.00000000 sec D2 0.00344828 sec D6 0.06250000 sec IN0 0.00001420 sec ======== CHANNEL f1 ======== NUC1 1H P1 8.00 usec P2 16.00 usec PL1 dB PL1W 23.41078186 W SFO1 700.0030370 MHz ======== CHANNEL f2 ======== NUC2 13C P3 22.00 usec PL2 -1.00 dB PL2W 134.39680481 W SFO2 176.0327410 MHz F1 - Acquisition parameters TD 299 SFO1 176.0327 MHz FIDRES 117.747650 Hz SW 200.000 ppm FnMODE QF F2 - Processing parameters SI 2048 SF 699.9999876 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB PC 4.00 F1 - Processing parameters SI 512 MC2 QF SF 176.0148393 MHz WDW GM SSB LB Hz GB 90 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 ppm Phổ HMBC hợp chất 6β,7α,14-trihydroxyconfertifolin (12) 72 Phổ HR-ESI-MS hợp chất 6β,7α,14-trihydroxyconfertifolin (12) Các phổ hợp chất andrastin A (13) Phổ 1H-NMR hợp chất andrastin A (13) 73 Phổ 13C-NMR hợp chất andrastin A (13) Phổ COSY hợp chất andrastin A (13) 74 Phổ HSQC hợp chất andrastin A (13) Phổ HMBC hợp chất andrastin A (13) 75 Phổ MS hợp chất andrastin A (13) Các phổ hợp chất citreohybridonol (14) Phổ 1H-NMR hợp chất citreohybridonol (14) 76 Phổ 13C-NMR hợp chất citreohybridonol (14) Phổ COSY hợp chất citreohybridonol (14) 77 Phổ HSQC hợp chất citreohybridonol (14) Phổ HMBC hợp chất citreohybridonol (14) 78 VN-045-357-2-50%-3_20150824 #38-56 RT: 0.49-0.64 F: {0,3} - c APCI corona sid=50.00 det=1600.00 Full ms AV: NL: 1.15E7 499.23 100 95 90 85 80 75 70 Relative Abundance 65 60 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 300 350 400 450 500 m/z 550 600 Phổ MS hợp chất citreohybridonol (14) 650 700 79 Phụ lục 5: Các phiếu trả kết phân loài 08 chủng vi nấm tuyển chọn ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - PHAN THỊ HỒI TRINH NGHIÊN CỨU HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ VI NẤM... có hoạt tính sinh học nhằm phát nguồn dược liệu đóng góp phần vào việc bảo vệ sức khỏe cộng đồng, thực đề tài: Nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học số hợp chất từ vi nấm biển phân lập miền Trung. .. Trung Việt Nam Mục tiêu nội dung nghiên cứu đề tài: Mục tiêu nghiên cứu: Thu nhận hợp chất chuyển hóa thứ cấp từ vi nấm biển phân lập vùng biển miền Trung xác định số hoạt tính sinh học (kháng sinh,