NGHIÊN CỨU SỰ KHÁC BIỆT TRÌNH TỰ NUCLEOTIDE CỦA CÁC VÙNG GENE CHỈ THỊ Ở CÁC MẪU SEN TRỒNG TẠI HUẾ VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT CHIẾT TÁCH TỪ HẠT SEN

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐẶNG THANH LONG NGHIÊN CỨU SỰ KHÁC BIỆT TRÌNH TỰ NUCLEOTIDE CỦA CÁC VÙNG GENE CHỈ THỊ Ở CÁC MẪU SEN TRỒNG TẠI HUẾ VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ HỢP[.]

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐẶNG THANH LONG NGHIÊN CỨU SỰ KHÁC BIỆT TRÌNH TỰ NUCLEOTIDE CỦA CÁC VÙNG GENE CHỈ THỊ Ở CÁC MẪU SEN TRỒNG TẠI HUẾ VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT CHIẾT TÁCH TỪ HẠT SEN LUẬN ÁN TIẾN SĨ KỸ THUẬT ĐÀ NẴNG - 2023 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐẶNG THANH LONG NGHIÊN CỨU SỰ KHÁC BIỆT TRÌNH TỰ NUCLEOTIDE CỦA CÁC VÙNG GENE CHỈ THỊ Ở CÁC MẪU SEN TRỒNG TẠI HUẾ VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT CHIẾT TÁCH TỪ HẠT SEN Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 94 20 201 LUẬN ÁN TIẾN SĨ KỸ THUẬT NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC PGS.TS HOÀNG THỊ KIM HỒNG TS LÊ LÝ THÙY TRÂM ĐÀ NẴNG - 2023 i LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tôi, kết nghiên cứu trình bày luận án trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận án cám ơn, thơng tin trích dẫn luận án rõ nguồn gốc Đà Nẵng, ngày 15 tháng 06 năm 2023 Tác giả luận án Đặng Thanh Long ii LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành luận án, nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận án, cho phép tơi bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Hồng Thị Kim Hồng, TS Lê Lý Thùy Trâm tận tình hướng dẫn, dành nhiều cơng sức, thời gian tạo điều kiện cho suốt q trình học tập thực đề tài Tơi xin gửi lời cám ơn chân thành đến Sở khoa học Công nghệ tỉnh Thừa Thiên Huế Quỹ Đổi sáng tạo Vingroup (VINIF), Viện Nghiên cứu Dữ liệu lớn (VINBIGDATA) hỗ trợ kinh phí cho tơi để thực đề tài luận án Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám hiệu, Ban Quản lý đào tạo, Khoa hóa, Bộ mơn Cơng nghệ sinh học trường Đại học Bách Khoa, Đại học Đà Nẵng, Viện Công nghệ sinh học, Đại học Huế tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, thực đề tài hoàn thành luận án Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận án Đà Nẵng, ngày 15 tháng 06 năm 2023 Nghiên cứu sinh Đặng Thanh Long iii MỤC LỤC Số trang LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG ix DANH MỤC HÌNH xi DANH MỤC SƠ ĐỒ VÀ BIỂU ĐỒ xii MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu đề tài 2.1 Mục tiêu chung 2.2 Mục tiêu cụ thể 3 Phạm vi nghiên cứu 4 Những đóng góp đề tài Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 5.1 Ý nghĩa khoa học 5.2 Ý nghĩa thực tiển CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu sen 1.1.1 Nguồn gốc phân loại 1.1.2 Đặc điểm chung sen 1.1.3 Đặc điểm hệ gene sen 1.2 Nghiên cứu ứng dụng thị DNA thực vật giới Việt Nam 14 1.2.1 Nghiên cứu giới 14 1.2.2 Nghiên cứu Việt Nam 23 1.3 Nghiên cứu đa dạng di truyền sen giới Việt Nam 25 1.3.1 Nghiên cứu giới 25 1.3.2 Nghiên cứu Việt Nam 32 iv 1.4 Nghiên cứu hợp chất hoạt tính sinh học từ sen 34 1.4.1 Nghiên cứu phân lập xác định hợp chất từ sen 34 1.4.2 Nghiên cứu hoạt tính dịch chiết cao chiết từ sen 38 1.4.3 Nghiên cứu hoạt tính sinh học hợp chất tinh khiết từ sen 43 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .50 2.1 Vật liệu nghiên cứu 50 2.1.1 Nguyên liệu sen 50 2.1.2 Nguồn vật liệu sử dụng thí nghiệm sinh học phân tử 54 2.2 Phương pháp nghiên cứu 55 2.2.1 Phương pháp thu mẫu 55 2.2.2 Phương pháp sinh học phân tử 56 2.2.3 Phương pháp phân lập hợp chất thử nghiệm hoạt tính sinh học 60 2.2.4 Phương pháp xử lý số liệu 67 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 68 3.1 Kết khuếch đại PCR phân tích trình tự nucleotide số vùng gene thị 68 3.2 Kết phân tích đặc tính di truyền số mẫu sen trồng Huế dựa 10 vùng gene thị 70 3.2.1 Kết phân tích đặc tính phân tử 10 vùng gene thị thu từ số mẫu sen trồng Huế 70 3.2.2 Kết phân tích đặc tính di truyền 10 vùng gene thị thu từ số mẫu sen trồng Huế 71 3.3 Kết phân tích đặc tính di truyền nhóm sen trắng nhóm sen hồng dựa tổ hợp vùng gene thị lục lạp 86 3.4 Phân tích trình tiến hóa số mẫu sen trồng Huế dựa 10 vùng gene thị 88 3.4.1 Chỉ thị vùng gene nhân 88 3.4.2 Chỉ thị vùng gene lục lạp 90 3.5 Kết khảo sát dung môi chiết cao tổng số từ hạt Sen Trắng Trẹt Lõm 95 v 3.6 Kết định tính định lượng alkaloid flavonoid số cao chiết thu từ hạt Sen Trắng Trẹt Lõm 96 3.7 Kết phân lập hợp chất tinh khiết phân đoạn n-B thu từ hạt Sen Trắng Trẹt Lõm 98 3.8 Kết thử nghiệm hoạt tính sinh học 103 3.8.1 Hoạt tính kháng oxy hóa 103 3.8.2 Hoạt tính gây độc số dịng tế bào ung thư 106 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 114 4.1 Kết luận 114 4.2 Kiến nghị 115 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ 116 TÀI LIỆU THAM KHẢO 117 PHỤ LỤC 139 vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ACN : Acetonitril AFLP : Amplified Fragment Length Polymorphism (Đa hình độ dài nhân chọn lọc) AS-PCR : Allele specific polymerase chain reaction (Nhân allen đặc biệt) ASO : Allele specific oligo (Các oligo allen đặc biệt) AP-PCR : Arbitrarily primed PCR (Tạo phản ứng PCR với mồi tùy tiện) ACN : Acetonitril BLAST : Basic Local Alignment Search Tool (Cơng cụ tìm kiếm đối chiếu bản) CBOL : Consortium for the Barcode of Life (Hiệp hội Mã vạch sống) CCC : Counter-current chromatography (Sắc ký ngược dòng hay đối lưu) COI : Cytochrome c oxidase subunit I DNA : Deoxyribonucleic acid DPPH : 2,2-diphenyl-1picrylhydrazyl EtOAc : Ethyl acetat EtOH : Ethanol ESI-MS : Electron Spray Ionisation - Mass Spectrometry (Khối phổ - ion hóa phun mù electron) GC : Gas Chromatography (Sắc ký khí) HPLC : High Performance Liquid Chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) HPLC-MS : High Performance Liquid Chromatography– Mass Spectrometry (Sắc ký lỏng - khối phổ) HSV-1 : Virus herpes simplex virus-1 IC50 : Half maximal inhibitory concentration (Nồng độ gây ức chế 50% hoạt tính sinh học hóa sinh) vii LPS : Lipopolysaccharides ITS : Internal transcribed spacers mRNA : Messenger RNA (RNA thông tin) mg : miligam mL : Mililit n-Bu : n-Buthanol NCBI : GenBank database (Ngân hàng gene Mỹ) NGS-Next : Next-generation sequencing (Giải trình tự hệ thứ hai) OD : Optical Density (Mật độ quang học) PCR : Polymerase Chain Reaction (Phản ứng chuỗi polymerase) RFLP : Restriction fragment length polymorphism (Đa hình độ dài đoạn cắt hạn chế) RAPD : Randomly Amplified Polymorphic DNA (DNA đa hình nhân ngẫu nhiên) rRNA : Ribosome rRNA RE : Restriction enzyme (Enzyme cắt hạn chế) SSR : Simple Sequence Repeats (Các chuỗi lặp lại đơn giản) SCAR : Sequence Characterised Amplification Regions (Vùng nhân chuỗi mô tả) SCoT SSCP Start Codon Targeted (Vị trí codon mã hố) : Single stranded conformation polymorphism (Đa hình cấu tạo sợi đơn) STS : Sequence tagged site (Vị trí chuỗi đánh dấu) STMS : Sequence tagged microsatellite site (Vị trí trình tự tiểu vệ tinh đánh dấu) TLC : Thin Layer Chromatography (Sắc ký mỏng) tRNA : Transfer RNAs (RNA vận chuyển) UHPLC : Ultra-High Performance Liquid Chromatography (Sắc ký lỏng siêu hiệu năng) viii UV-VIS : Ultraviolet - Visible (Tử ngoại - khả kiến) UV : Ultraviolet (Tử ngoại) VNTR : Variable number tandem repeat (Số lượng thay đổi chuỗi lặp lại liền kề) µg : microgram μL : microlit 125 70 Ibanez C., Simo C., Garcia-Canas V., Cifuentes A., and Castro-Puyana M (2013), “Metabolomics, peptidomics and proteomics applications of capillary electrophoresis-mass spectrometry in Foodomics: a review”, Analytica Chimica Acta, 802, pp 1-13 71 Indrayan A., Sharma S., Durgapal D Kumar N Kumar M (2005), “Determination of nutritive value and analysis of mineral el-ements for some medicinally valued plants from Uttaranchal”, Curr Sci., 89, pp 1252-1255 72 Islam M.R., Zhang Y., Li Z.Z., Liu H., Chen J.M., & Yang X.Y (2020), “Genetic diversity, population structure, and historical gene flow of Nelumbo lutea in USA using microsatellite markers”, Aquatic Botany, 160, pp 103162 73 Jiang X.L., Wang E.J., Wang L., Zhang G.L (2018), “Flavonoid glycosides and alkaloids from the embryos of Nelumbo nucifera seeds and their antioxidant activity”, Fitoterapia, 125, pp 184-190 74 Johanningsmeier S.D., Harris G.K., Klevorn C.M (2016), “Metabolomic technologies for improving the quality of food: practice and promise”, Annual Review of Food Science and Technology, 7, pp 413-438 75 Jorge T.F., Rodrigues J.A., Caldana C., Schmidt R., Van Dongen J.T., Thomas-Oates J., António C (2016), “Mass spectrometry-based plantmetabolomics: metabolite responses to abiotic stress”, Mass Spectrometry Reviews, 35(5), pp 620-649 76 Jow G.M., Wu Y.C., Guh J.H., Teng C.M (2004), “Armepavine oxalate induces cell death on CCRF-CEM leukemia cell line through an apoptotic pathway”, Life Sciences, 75, pp 549-557 77 Jung H.A., Karki S., Kim J.H., Choi J.S (2015), “BACE1 and cholinesterase inhibitory activities of Nelumbo nucifera embryos”, Archives of Pharmacal Research, 38, pp 1178-1187 78 Kakavas K.V (2021), “Sensitivity and applications of the PCR Single‑Strand Conformation Polymorphism method”, Molecular Biology Reports, 48, pp 3629-3635 126 79 Ken T (2010), “The Auburn university lotus project Cultivation of lotus (Nelumbo nucifera-Nelumbo lutea) Advances in soil fertility management”, International Waterlily Water Gardening Society's Water Garden Journal, 24(4), pp 7-8 80 Khan S., Khan H., Ali F., Ali N., Khan F.U., Khan S.U (2016), “Antioxidant, cholinesterase inhibition activities and essential oil analysis of Nelumbo nucifera seeds”, Natural Product Research, 30(11), pp.1335-1338 81 Kim E.S., Weon J.B., Yun B.R., Lee J., Eom M.R., Hee O.K., Ma C.J (2014), “Cognitive enhancing and neuroprotective effect of the embryo of the Nelumbo nucifera Seed”, Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2014, pp 1-9 82 Kim H.M., Oh S.H., Bhandari G.S., Kim C.S., Park C.W (2014), “DNA barcoding of Orchidaceae in Korea”, Molecular Ecology Resources, 14, pp 499-507 83 Kim J.H., Kang M., Cho C., Chung H.S., Kang C.W., Parvez S., Bae H (2006), “Effects of Nelumbinis Semen on contractile dysfunction in ischemic and reperfused rat heart”, Archives of Pharmacal Research, 29(9), pp 777-785 84 Kredy H.M., Huang D.H., Xie B.J., He H., Yang E.N., Tian B.Q., Xiao D (2010), “Flavonols of lotus (Nelumbo nucifera Gaertn.) seed epicarp and their antioxidant potential”, European Food Research and Technology, 231(3), pp 387-394 85 Kress W.J., Erickson D.L (2007), “A two-locus global DNA barcode for land plants: The coding rbcL gene complements the noncoding trnH–psbA spacer region”, PLoS ONE, 2, pp e508 86 Kress W.J., Wurdack K.J., Zimmer E.A., Weigt L.A., Janzen D.H (2005), “Use of DNA barcodes to identify flowering plants”, Proceedings of the National Academy of Sciences USA, 102(23), pp 8369-8374 87 Kumar S., Stecher G., Li M., Knyaz C., Tamura K (2018), “MEGA X: Molecular evolutionary genetics analysis across computing platforms”, Molecular Biology and Evolution, 35, pp 1547-1549 127 88 Kumar S.V., Kumar S.P, Rupesh D., Nitin K (2011), “Immunomodulatory effects of some traditional medicinal plants”, Journal of Chemical and Pharmaceutical Research, 3(1), pp 675-684 89 Lang E.G., Mueller S.J., Hoernstein S.N., Porankiewicz-Asplund J., VervlietScheebaum M., Reski R (2011), “Simultaneous isolation of pure intact chloroplasts mitochondria from moss as the basis for sub-cellular proteomicộng sự”, Plant Cell Reports, 30, pp 205-215 90 Lee J.S., Shukla S., Kim J.A., Kim M (2015), “Anti-angiogenic effect of Nelumbo nucifera leaf extracts in human umbilical vein endothelial cells with antioxidant potential”, PLoS ONE, 10, pp e0118552 91 Lee W., Nam I., Kim D., Kim K., and Lee Y (2022), “Allele-specific polymerase chain reaction for the discrimination of elite Korean cattle associated with high beef quality and quantity”, Archives Animal Breeding, 65, pp 47-53 92 Lepiniec L., Debeaujon I., Routaboul J.M., Baudry A., Pourcel L., Nesi N., Caboche M (2006), “Genetics and biochemistry of seed flavonoids”, Annual Review of Plant Biology, 57, pp 405-430 93 Li Y., Zhu F.L., Zheng X.W., Hu M.L., Dong C., Diao Y., Wang Y.W., Xie K Q., & Hu Z.L (2020), “Comparative population genomics reveals genetic divergence and selection in lotus Nelumbo Nucifera”, BMC Genomics, 21(1), pp 1-13 94 Li Z., Chen Y., An T., Liu P., Zhu J., Yang H., W Zhang., Dong T., Jiang J., Zhang Y., Jiang M., Yang Z (2019), “Nuciferine inhibits the progression of glioblastoma by suppressing the SOX2-AKT/STAT3-Slug signaling pathway”, Journal of Experimental and Clinical Cancer Research, 38(1), pp 139 95 Li Z., Liu X.Q., Gituru R.W., Juntawong N., Zhou M., Chen L (2010), “Genetic diversity classification of Nelumbo germplasm of different origins by RAPD ISSR analysis”, Scientia Horticulturae, 125(4), pp 724-732 96 Lin J.Y., Wu A.R., Liu C.J., Lai Y.S (2006), “Suppressive effects of lotus plumule (Nelumbo nucifera Geartn.) supplementation on LPS induced 128 systemic inflammation in a BALB/c mouse model”, Journal of Food and Drug Analysis, 14(3), pp 273-278 97 Lin T.Y., Hung C.Y., Chiu K.M, Lee M.Y., Lu C.W., Wang S.J (2022), “Neferine, an Alkaloid from Lotus Seed Embryos, Exerts Antiseizure and Neuroprotective Effects in a Kainic Acid-Induced Seizure Model in Rats”, International Journal of Molecular Sciences, 23, pp 4130 98 Ling Z.Q., Xie B.J., Yang E.L (2005), “Isolation, characterization, and determination of antioxidative activity of oligomeric procyanidins from the seedpod of Nelumbo nucifera Gaertn”, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 53(7), pp 2441-2445 99 Liu C.M., Kao C.L., Wu H.M., Li W.J., Huang C.T., Li H.T., Chen C.Y (2014), “Antioxidant and anticancer aporphine alkaloids from the leaves of Nelumbo nucifera Gaertn cv Rosa-plena”, Molecules, 19(11), pp 1782917838 100 Liu C.P., Kuo Y.C., Shen C.C., Wu M.H., Liao J.F., Lin Y.L., Chen C.F., Tsai W.J (2007), “(S)-Armepavine inhibits human peripheral blood mononuclear cell activation by regulating Itk and PLCγ activation in a PI-3K-dependent manner”, Journal of Leukocyte Biology, 81, pp 1276-1286 101 Liu C.P., Tsai W.J., Lin Y.L., Liao J.F., Chen C.F., Kuo Y.C (2004), “The extracts from Nelumbo nucifera suppress cell cycle progression, cytokine genes expression, and cell proliferation in human peripheral blood mononuclear cells”, Life Science, 75, pp 699-716 102 Liu C.P., Tsai W.J., Shen C.C., Lin Y.L., Liao J.F., Chen C.F., ChiKuo Y (2006), “Inhibition of (S)-armepavine from Nelumbo nucifera on autoimmune disease of MRL/MpJ-lpr/lpr mice”, European Journal of Operational Research, 531(1-3), pp 270-279 103 Liu S., Liang Y.Z., Luo J., Cao D-S., Li X.Z., Lei P and Yuan D.L (2008), “Optimization of liensinine, isoliensinine and neferine extraction from the embryo of the seed of Nelumbo nucifera Gaertn.”, Separation Science and Technology, 43, pp 3637-3651 129 104 Liu W., Yi D.D., Guo J.L., Xiang Z.X., Deng L.F., He L (2015), “Nuciferine, extracted from Nelumbo nucifera Gaertn., inhibits tumor-promoting effect of nicotine involving Wnt/𝛽- catenin signaling in non-small cell lung cancer”, Journal of Ethnopharmacology, 165, pp 83-93 105 Liu Y., Yan H F., Cao T., Ge X J (2010), “Evaluation of 10 plant barcodes in bryophyte (mosses)” Journal of Systematics and Evolution, 48, pp 36-46 106 Long D.T., Thuy N.T.T., Co N.Q., Phat P.N., Long N.T (2023), “Genetic diversity of some peanut cultivars based on SSR and rapd molecular markers in Vietnam”, Research Journal of Biotechnology, 18 (3), pp 97-106 107 Lu T.Y., The Human Genome Structural Variation Consortium., Chaisson M.J.P (2021), “Profiling variable-number tandem repeat variation across populations using repeat-pangenome graphs”, Nature Communications, 12, pp 4250 108 Marxen K., Heinrich K., Lippemeier S., Hintze R., Ruser A., Hansen U.P (2007), “Determination of DPPH radical oxidation caused by methanolic extracts of some microalgal species by linear regression analysis of spectrophotometric measurements”, Sensors, 7, pp 2080-2095 109 Menéndez-Perdomo I.M., & Facchini P.J (2020), “Isolation and characterization of two O-methyltransferases involved in benzylisoquinoline alkaloid biosynthesis in sacred lotus (Nelumbo nucifera)”, Journal of Biological Chemistry, 295(6), pp 1598-1612 110 Ming R., Vanburen R., Liu Y.L., Yang M., Han Y.P., Li L.T., et al (2013), “Genome of the long-living sacred lotus (Nelumbo nucifera Gaertn.)”, Genome Biology, 14, pp R41 111 Moe K.T., Kwon S.W, Park Y.J (2012), “Trends in genomics and molecular marker systems for the development of some underutilized crops”, Genes and Genomics, 34, pp 451-466 130 112 Mohamed S.M., Hassan E.M., Ibrahim N.A (2010), “Cytotoxic and antiviral activities of aporphine alkaloids of Magnolia grandiflora L.”, Natural Product Research, 24, pp 1395-1402 113 Monks A., Scudiero D., Skehan P., Shoemaker R., Paull K., Vistica D., Hose Langley C., Cronise J., P., Vaigro-Wolff A., Gray-Goodrich M (1991), “Feasibility of a high-flux anticancer drug screen using a diverse panel of cultured human tumor cell lines”, Journal of the National Cancer Institute, 83(11), pp 757-766 114 Mukherjee D., Khatua T.N., Venkatesh P., Saha B.P (2010), “Immunomodulatory potential of rhizome and seed extracts of Nelumbo nucifera Gaertn.”, Journal of Ethnopharmacology, 128(2), pp 490-494 115 Mukherjee P.K., Mukherjee D., Maji A.K., Rai S., Heinrich M (2009), “The sacred lotus (Nelumbo nucifera)-phytochemical and therapeutic profile”, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 61, pp 407-422 116 Mutreja A., Agarwal M., Kushwaha S., Chauhan A (2008), “Effect of Nelumbo nucifera seeds on the reproductive organs of female rats”, Iranian Journal of Reproductive Medicine, 6(1), pp 7-11 117 Newmaster S.G., Fazekas A.J, Ragupathy S (2006), “DNA barcoding in land plants: evaluation of rbcL in a multigene tiered approach”, Canadian Journal of Botany, 84, pp 335-41 118 Nguyen Q (2001), “Agronomic physiological studies on Lotus for export to Asia (Project DAN - 125A) In: Shaping the future, Access to Asian foods, Department of Natural Resources & Environment and Rural Industries Research and Development Corporation”, Australia, 119 Nguyen Q.V., David H (2004), Lotus in the new crop, Industries Hbook, pp 78-84 120 Ojeda D.I., Santos-Guerra A., Oliva-Tejera F., Jaen-Molina R., CaujapéCastells J., Marrero-Rodríguez A., Cronk Q (2014), “DNA barcodes successfully identified macaronesian Lotus (Leguminosae) species within 131 early diverged lineages of Cape Verde and mainland Africa”, AoB PLANTS, 6, pp 1-12 121 Olsson S., Giovannelli G., Roig A., Spanu I., Vendramin G.G., Fady B (2022), “Chloroplast DNA barcoding genes matK and psbA-trnH are not suitable for species identification and phylogenetic analyses in closely related pines”, iForest, 15, pp 141-147 122 Ono Y., Hattori E., Fukaya Y., Imai S and Ohizumi Y (2006), “Anti-obesity effect of Nelumbo nucifera leaves extract in mice and rats”, Journal of Ethnopharmacology, 106, pp 238-244 123 Pan L., Xia Q., Quan Z., Liu H., Ke W., Ding Y (2010), “Development of novel EST-SSRs from sacred lotus (Nelumbo nucifera Gaertn.) their utilization for the genetic diversity analysis of N nucifera”, Journal of Heredity, 101(1), pp 71-82 124 Pang X., Liu C., Shi L., Liu R., Liang D., Li H., Chemy S.S., Chen S (2012), “Utility of the trnH-psbA intergenic spacer region and its combinations as plant DNA barcodes: a meta - analysis”, PLoS ONE, 7(11), pp e48833 125 Paudel K.R and Panth N (2015), “Phytochemical profile and biological activity of Nelumbo nucifera”, Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2015, pp 1-16 126 Peluso I., Miglio C., Morabito G., Ioannone F., and Serafini M (2015), “Flavonoids and immune function in human: a systematic review”, Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 55, pp 383-395 127 Peng L.S., Jiang X.Y., Li Z.X., Yi T.G.,Huang B., Li H.L., et al (2015), “A simple U-HPLC-MS/MS method for the determination of liensinine and isoliensinine in rat plasma”, Journal of Chromatography B, 991, pp 29-33 128 Pillon Y., Johansen J., Sakishima T., Chamala S., Barbazuk W.B., Roalson E.H., Price D.K., Stacy E.A (2013), “Potential use of low-copy nuclear genes in DNA barcoding: a comparison with plastid genes in two Hawaiian plant radiations”, BMC Evolutionary Biology, 13, pp 35 132 129 Poornima P., Weng C.F., Padma V.V (2014), “Neferine, an alkaloid from lotus seed embryo, inhibits human lung cancer cell growth by MAPK activation and cell cycle arrest”, BioFactors, 40(1), pp 121-131 130 Qi H., Yu F., Deng J., Yang P (2022), “Studies on Lotus genomics and the contribution to Its breeding”, International Journal of Molecular Sciences, 23, pp 7270 131 Qian (2002), J.Q “Cardiovascular pharmacological effects of bisbenzylisoquinoline alkaloid derivatives”, Acta Pharmacologica Sinica, 23(12), pp 1086-1092 132 Qiao L., Liu S., Li J., Li S., Yu Z., Liu C., Li X., Liu J., Ren Y., Zhang P., Zhang X., Yang Z and Chang Z (2021), “Development of Sequence-Tagged Site Marker Set for Identification of J, JS, and St Sub-genomes of Thinopyrum intermedium in Wheat Background”, Frontiers in Plant Science, 12, pp 685216 133 Qichao W., Xingyan Z (2005), “Lotus flower cultivars in China”, China forestry publishing house Beijing, China 134 Rai S., Wahile A., Mukherjee K., Saha B.P., Mukherjee P.K (2006), “Antioxidant activity of Nelumbo nucifera (sacred lotus) seeds,” Journal of Ethnopharmacology, 104(3), pp 322-327 135 Rozas J (2009), “DNA Sequence polymorphism analysis using DnaSP”, Bioinformatics for DNA Sequence Analysis, 537, pp 337-350 136 Rozas J., Ferrer-Mata A., Sánchez-DelBarrio J.C., Guirao-Rico S., Librado P., Ramos-Onsins S.E., Sánchez-Gracia A (2017), “DNAsp 6: DNA sequence polymorphism analysis of large Datasets”, Molecular Biology and Evolution, 34, pp 3299-3302 137 Ruvanthika P.N., Manikandan S., Lalitha S (2017), “A comparative study on phytochemical screening of aerial parts of Nelumbo nucifera Gaertn by gas chromatographic mass spectrometry”, International Journal of Pharmaceutical Sciences and Sesearch, 8(5), 2017, pp 2320-5148 133 138 Sass C., Little D.P., Stevenson D.W, Specht C.D (2007), “DNA barcoding in the Cucadales: testing the potential of proposed barcoding markers for species indentification of cycades”, PLoS ONE, 2, pp e1154 139 Savolainen V., Chase M.W (2003), “A decade of progress in plant molecular phylogenetics”, Trends Genet, 19, pp 717-724 140 Schindel D.E., Miller S.E (2005), “DNA barcoding a useful tool for taxonomists”, Nature, 435, pp 177 141 Seberg O., Petersen G (2009), “How many loci does it take to DNA barcode a crocus”, PLoS ONE, 4, pp e4598 142 Shahnaz A., Khan H., Shah A., Khan N.M., Shah A., Rahman S.U (2016), “GC-MS analysis of fixed oil from Nelumbo nucifera Gaertn seeds: evaluation of antimicrobial, antileishmanial and urease inhibitory activities”, Journal Chemical Society of Pakistan, 38(6), pp 1168-1172 143 Shamsa F., Monsef H., Ghamooshi R., Verdianrizi M (2008), “Strectrophotometric determination of total alkaloids in some Iranian medicinal plants”, Thai Journal of Pharmaceutical Sciences, 32, pp 17-20 144 Shaw J., Lickey E.B., Schilling E.E., Small R.L (2007), “Comparison of whole chloroplast genome sequences to choose noncoding regions for phylogenetic studies in angiosperms The tortoise and the hare III”, American Journal of Botany, 94(3), pp 275-288 145 Shi S., Zhang H (2012), “Reversal of multidrug resistance by neferine in human gastric carcinoma cell line SGC7901/VCR and its mechanism”, Journal of Cancer Research and Practice, 27(4), pp 334-345 146 Shi T., Rahmani R.S Gugger P.F., Wang M., Li H., Zhang Y., Li Z., Wang Q., Van de Peer Y., Marchal K., et al (2020), “Distinct expression and methylation patterns for genes with different fates following a single wholegenome duplication in flowering plants”, Molecular Biology and Evolution, 37, pp 2394-2413 147 Shinozaki K., Ohme M., Tanaka M., Wakasugi T., Hayashida N., Matsubayashi T., Zaita N., et al (1986), “The complete nucleotide sequence 134 of the tobacco chloroplast genome: its gene organization and expression”, The EMBO Journal, 5, pp 2043-2049 148 Sip G., Sheetal S (2014), “Nelumbo nucifera the phytochemical profile traditional uses”, Pharma Science Monitor, 5(3), pp 1-12 149 Sohn D.H., Kim Y.C., Oh S.H., Park E.J., Li X., Lee B.H (2003), “Hepatoprotective and free radical scavenging effects of Nelumbo nucifera,” Phytomedicine, 10(2-3), pp 165-169 150 Stroreck C (1987), “Average number of nucleotide difference in a sample from a single subpopulation: a test for population subdivision”, Genetics, 117, pp 149-153 151 Sundari., Khadijah., Jayali A.M., Sukamto N.H (2019), “The application of barcode DNA rbcL gene for identification of medicinal plants: red jabon and gofasa”, Journal of Physics: Conference Series, 1146, pp 012030 152 Taberlet P., Gielly L., Pautou G and Bouvet J (1991), “Universal primers for amplification of three non-coding regions of the chloroplast DNA”, Plant Molecular Biology, 17, pp 1105-1109 153 Tajima F (1989), “Statistical method for testing the neutral mutation hypothesis by DNA polymorphism”, Genetics, 123, pp 585-595 154 Tan Y.F., Wang R.Q, Wang W.T., Wu Y., Ma N., Lu W.Y., Zhang Y And Zhang X.P (2021), “Study on the pharmacokinetics, tissue distribution and excretion of laurolitsine from Litsea glutinosa in Sprague-Dawley rats”, Pharmaceutical Biology, 59(1), pp 884-892 155 Thompson J.D., Gibson T.J., Plewniak F., Jeanmougin F., and Higgins D.G (1997), “The CLUSTAL X windows interface: flexible strategies for multiple sequence alignment aided by quality analysis tools”, Nucleic Acids Research, 24, pp 4876-4882 156 Tomitaro M (1979), Makino’s new illustrated flora of Japan, The Hokuryukan Co Ltd., Tokyo, Japan 135 157 Tsumura Y., Kawahara T., Wickneswari R., Yoshimura K (1996), “Molecular phylogeny of dipterocarpaceae in Southeast Asia using RFLP of PCRamplified chloroplast genes”, Theoretical and Applied Genetics, 93, pp 22-29 158 Vijayan K., Tsou C.H (2010), “DNA barcoding in plants: taxonomy in a new perspective”, Current Science, 99, pp 1530-1540 159 Visioli F., De La Lastra C.A., Andres-Lacueva C., Aviram M., Calhau C., Cassano A., et al (2011), “Polyphenols and human health: a prospectus”, Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 51, pp 524-546 160 Vulfson E.N., Halling P.J., Holland H.L (2001), Enzymes in nonaqueous solvents: methods and protocols, Humana Press, Canada 161 Vuong V.Q., Sathira H., Paul D.R., Michael B., Phoebe A.P., Chistopher J.S (2013), “Effect of extraction conditions on total phenolic compounds and antioxidant activities of Carica papaya leaf aqueous extracts”, Journal of Herbal Medicine, 3(3), pp 104-111 162 Wang J.L Nong Y., Xia G.J., Yao W.X., Jiang M.X (1993), “Effects of liensinine on slow action potentials in myocardium and slow inward current in canine cardiac Purkinje fibers”, Acta Pharmaceutica Sinica, 28(11), pp 812-816 163 Wang J.L., Nong Y., Jing M.X (1992), “Effects of liensinine on haemodynamics in rats and the physiologic properties of isolated rabbit atria”, Acta Pharmaceutica Sinica, 27(12), pp 881-885 164 Wang W., Wu Y., Yan Y., Ermakova M., Kerstetter R (2010), “DNA barcoding of the Lemnaceae, a family of aquatic monocots”, BMC Plant Biology, 10, pp 205 165 Wang Y., Fan G., Liu Y., Sun F., Shi C., Liu X., Peng J., Chen W., Huang X., Cheng S., et al (2013), “The sacred lotus genome provides insights into the evolution of flowering plants”, Plant Journal, 76, pp 557-567 166 Warner-Orozco O., Ken T., and Fischman B (2009), “Is Lotus an ornamental Plant or a Vegetable? Yes!, Water Gardeners International online Journal, (2) 136 167 Weir B.S (1996), Genetic Data Analysis II: Methods for discrete population genetic data, Sinauer Associates, Inc., Sunderland 168 Weng T.C., Shen C.C., Chiu Y.T., Lin Y.L., Kuo C.D., Huang Y.T (2009), “Inhibitory effects of armepavine against hepatic fibrosis in rats”, Journal of Biomedical Science, 16(1), pp 78 169 White T.J., Bruns T., Lee S., Taylor J., et al (1990), “Amplification and direct sequencing of fungal ribosomal RNA genes for phylogenetics In PCR protocols a guide to methods and applications”, Academic Press, San Diego, pp 315-322 170 Wolfe K.H (1991), “Protein-coding genes in chloroplast DNA: compilation of nucleotide sequences, data base entries and rates of molecular evolution In cell culture and somatic cell genetics of plants (ed Vasil, K.)”, Academic Press, San Diego, 7BI, pp 467-482 171 Wu C.H., Yang M.Y., Lee Y.J., Wang C.J (2017), “Nelumbo nucifera leaf polyphenol extract inhibits breast cancer cells metastasis in vitro and in vivo through PKCα targeting”, Journal of Functional Foods, 37, pp 480-490 172 Wu H., Guo J., Chen S., Liu X., Zhou Y., Zhang X., Xu X (2013), “Recent developments in qualitative and quantitative analysis of phytochemical constituents and their metabolites using liquid chromatography-mass spectrometry”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 72, pp 267-291 173 Wu Z., Gui S., Quan Z., Pan L., Wang S., Ke W., Liang D and Ding Y (2014), “A precise chloroplast genome of Nelumbo nucifera (Nelumbonaceae) evaluated with Sanger, Illumina MiSeq, PacBio RS II sequencing platforms: insight into the plastid evolution of basal eudicots”, BMC Plant Biology, 14, pp.289 174 Wua S., Suna C., Cao X., Zhou H., Zhang H., Pan Y (2004), “Preparative counter-current chromatography isolation of liensinine and its analogues from embryo of the seed of Nelumbo nucifera Gaertn using upright coil planet centrifuge with four multilayer coils connected in series”, Journal of Chromatography A, 1041(1-2), pp 153-162 137 175 Xiao J.H., Zhang J.H., Chen H.L., Feng X.L., Wang J.L (2005), “Inhibitory effect of isoliensinine on bleomycin induced pulmonary fibrosis in mice”, Planta Medica, 71(13), pp 225-230 176 Xu X., Sun C.R., Dai X.J., Hu R.L., Pan Y.J and Yang Z.F (2011), “LC/MS guided isolation of alkaloids from Lotus leaves by pH-zone-refining countercurrent chromatography”, Molecules, 16, pp 2551-2560 177 Yan M.Z, Chang Q., Zhong Y., Xiao B.X., Feng L., Cao F.R., Pan R.L., Zhang Z.S., Liao Y.H., Liu X.M (2015), “Lotus leaf alkaloid extract displays sedative–hypnotic and anxiolytic effects through GABAA receptor”, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 63, pp 9277-85 178 Yang L.Q., and Stockigt J (2010), “Trends for diverse production strategies of plant medicinal alkaloids”, Natural Product Reports, 27, pp 1469-1479 179 Yang M.Y., Chang Y.C., Chan K.C., Lee Y.J., Wang C.J (2011), “Flavonoidenriched extracts from Nelumbo nucifera leaves inhibits proliferation of breast cancer in vitro and in vivo”, European Journal of Integrative Medicine, 3(3), pp 153-163 180 Yasui Y., Ohnishi O (1998), “Interspecific relationships in Fagopyrum (Polygonaceae) revealed by the nucleotide sequences of the rbcL and accD genes and their intergenic region”, American Journal of Botany, 85, pp 1134-1142 181 Yen C.C., Tung C.W., Chang C.W., Tsai C.C., Hsu M.C and Wu Y.T (2020), “Potential risk of higenamine misuse in sports: Evaluation of Lotus plumule extract products and a Human study”, Nutrients, 12 182 Zaidi A., & Srivastava K (2019), “Nutritional and therapeutic importance of Nelumbo nucifera (Sacred lotus)”, Era's Journal of Medical Research, 6(2), pp 98-102 183 Zhang W., Tian D., Huang X., Xu Y., Mo H., Liu Y., Meng J., Zhang D (2014), “Characterization of flower-bud transcriptome and development of genic SSR markers in Asian Lotus (Nelumbo nucifera Gaertn.)”, PLoS ONE, 9(11), pp e112223 138 184 Zhang X., Wang X., Wu T., Li B., Liu T., Wang R., Liu Q., Liu Z., Gong Y., Shao C (2015), “Isoliensinine induces apoptosis in triple-negative human breast cancer cells through ROS generation and p38 MAPK/JNK activation”, Scientific Reports, 29(5), pp 1-13 185 Zhang Z.L., Xu B., Sun Z., Gong Y., Shao C (2012), “Neferine, an alkaloid ingredient in lotus seed embryo, inhibits proliferation of human osteosarcoma cells by promoting p38 MAPKmediated p21 stabilization”, European Journal of Pharmacology, 677(1-3), pp 47-54 186 Zhao X., Feng X., Peng D., Liu W., Sun P., Li G., Gu L., Song J.L (2016), “Anticancer activities of alkaloids extracted from the Ba lotus seed in human nasopharyngeal carcinoma CNE-1 cells”, Experimental and Therapeutic Medicine, 12(5), pp 3113-3120 187 Zhao X., Feng X., Wang C., Peng D., Zhu K., Song J.L (2017), “Anticancer activity of Nelumbo nucifera stamen extract in human colon cancer HCT-116 cells in vitro”, Oncology Letters, 13(3), pp 1470-1478 188 Zhao X., Shen J., Chang K.J., Kim S.H (2014), “Comparative analysis of antioxidant activity and functional components of the ethanol extract of lotus (Nelumbo nucifera) from various growing regions”, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 62, pp 6227-6235 189 Zheng P., Sun H., Liu J., Lin J., Zhang X., Qin Y., Zhang W., Xu X., Deng X., Yang D., et al (2022), “Comparative analyses of American and Asian lotus genomes reveal insights into petal color, carpel thermogenesis and domestication”, Plant Journal, 110, pp 1498-1515 190 Zheng X., Wang T., Cheng T., Zhao L., Zheng X., Zhu,F., Dong C., Xu J., Xie K., Hu Z., et al (2022), “Genomic variation reveals demographic history and biological adaptation of the ancient relictual, lotus (Nelumbo Adans)”, Horticulture Research, 9, pp uhac029 191 Zheng X.F., You Y.N., Diao Y., Zheng X.W., Xie K.Q., Zhou M.Q., Hu Z.L., Wang Y.W (2015), “Development characterization of genic-SSR markers 139 from different Asia lotus (Nelumbo nucifera) types by RNA-seq”, Genetics and Molecular Research, 14(3), pp 11171-11184 192 Zhu J.H., Zhang H.G., Qi S.D., Chen X.G., Hu Z.D (2011), “Micellar electrokinetic chromatography using a cationic surfactant for rapid separation and determination of bisbenzylisoquinoline alkaloids from embryo of the seed of Nelumbo nucifera Gaertn.”, Chromatographia, 73, pp 535-540 193 Zhu M., Liu T., Guo M (2016), “Current advances in the metabolomics study on Lotus seeds”, Frontiers in Plant Science, 7, pp 891 194 Zou S., Ge Y., Chen X., Li J., Yang X., Wang H., Gao X and Chang Y.X (2019), “Simultaneous determination of five alkaloids by HPLC-MS/MS combined with Micro-SPE in rat plasma and Its application to pharmacokinetics after oral administration of Lotus leaf extract”, Frontiers in Pharmacology, 10, pp.1252 PHỤ LỤC