Nghiên cứu phân lập các thành phần trong đài hoa bụp giấm ( hibiscus sabdariffa l )

i TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC PHẨM  BÁO CÁO NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP CÁC THÀNH PHẦN TRONG ĐÀI HOA BỤP GIẤM (Hibiscus sabdariffa L ) Mã số 184 TP16 GVHD[.]

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CƠNG NGHIỆP THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC-THỰC PHẨM  BÁO CÁO NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP CÁC THÀNH PHẦN TRONG ĐÀI HOA BỤP GIẤM (Hibiscus sabdariffa L.) Mã số: 184.TP16 GVHD: TS NGUYỄN NGỌC TUẤN PGS.TS LÊ TIẾN DŨNG Chủ Nhiệm : TRẦN PHÚC ĐẠT PHẠM DANH NHÂN LÊ HỮU THÀNH TRẦN LÊ DUY TP HỒ CHÍ MINH, THÁNG NĂM 2019 i LỜI CẢM ƠN Những năm tháng sinh viên thắm thoát trơi qua nhanh gió, ngày chúng em cậu sinh viên năm với nhiều bỡ ngỡ với môi trường mà phút giây đặt tay xuống viết gõ những dòng khiến cảm xúc chúng em nhiều thái cực đan xen lẫn với xúc động bồi hồi đan xen nuối tiếc phải xa thời gian làm sinh viên tất chúng em cảm thấy hạnh phúc làm sinh viên đại gia đình VIỆN CƠNG NGHỆ SINH HỌC – THỰC PHẨM Thành mà chúng em có ngày hơm ngồi nỗ lực thân chúng em cịn có cơng ơn dạy dỗ to lớn thầy VIỆN CƠNG NGHỆ SINH HỌC – THỰC PHẨM trường đại học Công nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, chúng em xin chân thành gửi lời cảm ơn đến với thầy Nguyễn Ngọc Tuấn, thầy Lê Tiến Dũng, Quách Đồng Hưng ( VIỆN KHOA HỌC VẬT LIỆU ỨNG DỤNG), người dành nhiều thời gian quý báu để hướng dẫn, bảo giúp đỡ chúng em suốt thời gian dài vừa qua để chúng em hồn thành tốt đề tài Cùng với đó, chúng em xin cảm ơn thầy Lê Tiến Dũng anh VIỆN KHOA HỌC VẬT LIỆU ỨNG DỤNG hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi suốt thời gian em làm thực nghiệm sở Cuối cùng,chúng xin gửi lời cảm ơn chân thành đến với ba mẹ người thân gia đình chia sẻ, động viên giúp đỡ chúng vật chất lẫn tinh thần để chúng có thành ngày hơm nay.Trong q trình thực luận văn, chúng em cố gắng để hoàn thành thật tốt nhiều hạn chế mặt kiến thức thời gian nên khơng tránh khỏi sai sót Vì vây, chúng em mong nhận đươc góp ý phê bình thầy bạn Xin chân thành cảm ơn! ii TÓM TẮT Đề tài tiến hành khảo sát cao Methanol đài hoa bụp giấm (HibiscusSabdariffa L.) Đài hoa thu hoạch Cần Thơ, sau làm đem sấy xay nhuyễn thành bột mịn Bột đài hoa bụp giấm ngâm methanol sau đem lọc bỏ bả dịch chiết thu cao Methanol Từ cao Methanol chạy cột sắc ký với dung mơi giải hấp có tính phân cực tăng dần Hexan, Chloroforme,Ethyl Acetate,Acetone,Methanol thu cao tương ứng Dựa vào kỹ thuật sắc kí cột kỹ thuật sắc ký mỏng, phân lập cao Methanol thu cao phân đoạn khác Từ cao phân đoạn sắc ký cột nhiều lần với nhiều hệ dung mơi khác thu được cao phan đoạn tương ứng cuối thu hợp chất Các hợp chất thu đem đo phổ Viện Bằng phương pháp phổ phân tích đại 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, HSQC, HMBC so sánh với tài liệu tham khảo xác định cấu trúc hợp chất Hydroxymethyl fufural (HS6), Quercitrin (HS2) iii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN ii TÓM TẮT iii MỤC LỤC iv DANH SÁCH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH SÁCH HÌNH vii DANH SÁCH BẢNG .ix ĐẶT VẤN ĐỀ x CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN .1 1.1.1 Khái quát chung 1.1.2 Đặt điểm Mô tả .1 1.1.3 Phân bố 1.2 Một số thuốc chữa bệnh nhân gian bụp giấm 1.3 Một số nghiên cứu quốc tế bụp giấm .3 1.3.1 Một số nghiên cứu quốc tế thành phần hóa học bụp giấm 1.3.2 Các nghiên cứu hoạt tính sinh học 1.4 Phương pháp nghiên cứu 1.5 Nội dung nghiên cứu 1.6 Phương pháp nghiên cứu 1.6.1 Phương pháp cô lập tinh chết hợp chất 1.6.2 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất: 10 CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM .12 2.1 Hóa chất Thiết bị thí nghiệm 12 2.1.1 Hóa chất .12 2.1.2 Thiết bị 12 iv 2.2 Xử lí nguyên liệu 12 2.3 khảo sát cao cao Methanol 14 2.4 Quá trình phân lập cao Methanol .16 2.5 Phương pháp xác địn cấu trúc hợp chất: 25 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 28 3.1 Giới thiệu chung 28 3.2 Khảo sát cấu trúc hợp chất phân lập 28 3.2.1 Hợp chất HS6 (5-hydroxymethyl-2-furaldehyde) 28 3.2.2 Hợp chất HS2 ( quercitrin) 35 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 45 4.1 Kết luận 45 4.2 Kiến nghị 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 v DANH SÁCH MỤC CHỮ VIẾT TẮT STT Viết tắt Tiếng Anh He n-hexane CHCl3 Chloroform EA Ethyl acetate Me Methanol SKBM Sắc ký bảng mỏng SKC Sắc ký cột NMR 13 C-NMR H-NMR 10 DEPT 11 HMBC 12 HSQC Tiếng Việt Nuclear Magnetic Resonance Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Carbon (13) Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon Resonance (13) Hydro (1) Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton Resonance (1) Distortionless Enhancement by Polarization Transfer Phổ DEPT Heteronuclear Multiple Bond Phổ tương tác dị hạt nhân qua nhiều Coherence liên kết Heteronuclear Single Phổ tương tác dị hạt nhân qua Quantum Correlation liên kết vi DANH SÁCH HÌNH Hình 1: Một số hình ảnh bụp giấm Hình 1.: Sơ đồ xử lí đài hoa bụp giấm .12 Hình 2: sơ đồ chiết cao tổng từ đài hoa bụp giấm .13 Hình 3: sơ đồ chiết phân đoạn cao tổng đài hoa bụp giấm 14 Bảng 1: Sắc kí cột cao Methanol (20g) 16 Bảng 2: Khảo sát phân đoạn II,III,VI (4,5g) 17 Bảng 3: khảo sát phân đoạn II,III,IV(4) (0,525g) .18 Bảng 4: Khảo sát II,III,IV 4,4 0,326g 19 Bảng 5.: khảo sát cao II,III,IV(4,4,2) (0,125g) 20 Hình 9: SKBM HS6 20 Hình 10: Chất sau phân lập .21 Bảng 6: khảo sát cao II,III,IV(1) .21 Hình 11: SKBM phân đoạn II,III,VI (1,2) 22 Bảng 7: Khảo sát cao II,III,IV(1,2) 22 Hình 12: SKBM phân đoạn II,III,VI (1,2,5) 23 Bảng 8: Khảo sát cao Phân đoạn II,III,IV(1,2,5) (0,280g) 23 Hình 13: SKBM phân đoạn II,III,VI (1,2,5,2) 24 Bảng 9: Khảo sát cao Phân đoạn II,III,IV(1,2,5,2) (0,280g) .24 Hình 14: SKBM phân đoạn II,III,VI (1,2,5,2,2) 25 Hình 1: Tương quan HMBC hợp chất HS6 .29 Hình : Cấu trúc hóa học hợp chất HS6 29 Bảng 1: Dữ liệu phổ NMR HS6 với 5- (hydroxymethyl)- 2- furaldehyde 30 vii Hình 3: Phổ 13H NMR HS6 (1) 31 Hình 4: Phổ 13H NMR HS6 (2) 31 Hình 5: Phổ 13C NMR HS6 (1) 32 Hình 6: Phổ 13C NMR HS6 (2) 32 Hình 7: Phổ HSQC HS6 (1) 33 Hình : Phổ HSQC HS6 (2) .33 Hình 9: Phổ HMBC HS6 (1) .34 Hình 10: Phổ HMBC HS6 (2) .34 Hình 11: Cấu trúc hóa học hợp chất HS2 35 Bảng 2: Bảng so sánh số liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR HS2 quercitrin 37 Hình 12: Phổ 1H NMR HS2 (1) 38 Hình 13: Phổ 1H NMR HS2 (2) 38 Hình 14 Phổ 1H NMR HS2 (3) 39 Hình 15: Phổ 13C NMR HS2 (1) 39 Hình 16: Phổ 13C NMR HS2 (2) 40 Hình 17: Phổ 13C DEPT HS2 (1) 40 Hình 18: Phổ 13C DEPT HS2 (2) 41 Hình 19: Phổ HSQC HS2 (1) 41 Hình 20: Phổ HSQC HS2 (2) 42 Hình 21: Phổ HSQC HS2 (3) 42 Hình 22: Phổ HMBC HS2 (1) .43 Hình 23: Phổ HMBC HS2 (2) .43 Hình 24: Phổ HMBC HS2 (3) .44 Hình 25: Phổ HMBC HS2 (4) .44 viii DANH SÁCH BẢNG Bảng 1: Sắc kí cột cao Methanol 20g 16 Bảng 2: Khảo sát phân đoạn II,III,VI 4,5g 17 Bảng 3: khảo sát phân đoạn II,III,IV(4) 0,525g 18 Bảng 4: Khảo sát II,III,IV 4,4 0,326g 19 Bảng 5.: khảo sát cao II,III,IV(4,4,2) 0,125g 20 Bảng 6: khảo sát cao II,III,IV(1) 21 Bảng 7: Khảo sát cao II,III,IV(1,2) 22 Bảng 8: Khảo sát cao Phân đoạn II,III,IV(1,2,5) 0,280g 23 Bảng 9: Khảo sát cao Phân đoạn II,III,IV(1,2,5,2) 0,280g 24 Bảng 1: Dữ liệu phổ NMR HS6 với 5- (hydroxymethyl)- 2- furaldehyde 30 Bảng 2: Bảng so sánh số liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR HS2 quercitrin 37 ix ĐẶT VẤN ĐỀ Theo Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), khoảng ba phần tư dân số giới phụ thuộc vào phương pháp chữa bệnh truyền thống (chủ yếu loại thảo mộc) để chăm sóc sức khoẻ cho người dân Từ thời xa xưa thảo mộc loại người bạn lâu đời người Nó khơng cung cấp thức ăn nơi trú ẩn mà phục vụ cho việc chữa bệnh Thuốc thảo dược , gọi y học cổ truyền, ln tồn nhiều hình thức khác văn hoá văn minh Ayurvedic (Ấn Độ), Ai Cập, Tây phương, Trung Quốc, Kampo (Nhật Bản) Greco-Arab hay Unani- Tibb (Nam Á) Việt Nam quốc gia nằm vùng nhiệt đới, có nhiều điều kiện cho sinh vật phát triển nước có tới 28.000 lồi động thực vật Ngày với phát triển vượt bậc gắn liền với cơng nghiệp hóa đại hóa đất nước sản phẩm tự nhiên ngày ưa chuộng lành tính, dễ hấp thụ vào thể người có vai trị quan trong hệ sinh thái Vì đưa vào ứng dụng cách hiệu nhiều lĩnh vực công nghiệp, dược phẩm, hương liệu, mỹ phẩm, thực phẩm.Tuy nhiên điều quan trọng điều tra nguồn rõ nguyên liệu, phải nghiên cứu nắm bắt hợp chất có hoạt tính sinh học chìa khóa để biến đổi, phát triển sản phẩm cần thiết cho nhu cầu người Đài hoa bụp giấm loại dược liệu có lợi cho sức khỏe Tính theo hàm lượng chất khô đài hoa bụp giấm chứa khoảng 1,5% anthocyanin, axit hữu khoảng 15-30%, vitamin A, B1, B2, C, E, F nhiều loại khoáng chất sắt, đồng, canxi, magie, kẽm…Đài hoa bụp giấm chứa loại chất chống oxy hóa Flavonoid lên tới 12% Chất oxy hóa chậm hay ngăn cản cách hữu hiệu q trình oxy hóa gốc tự do, nguyên nhân khiến tế bào họat động khác thường Trong y học dân gian bụp giấm (Hibiscus sabdariffa L.) sử dụng chữa số bệnh chống lại chứng cao huyết áp, làm giảm cholesterol máu, chống oxi hóa – viêm sưng… Các nghiên cứu quốc tế cho thấy Hibiscus sabdariffa L x ... pelargonidin (Pg) (1 8 %), cyanidin (Cy) (3 0 %), delphinidin (Dp )( 2 2 %), 20% l? ??i petunidin (Pt), malvidin (Mv) peonidin (Pn) Trong delphinidin cyanidin hai loại anthocyanidin có hàm l? ?ợng cao hoa bụp. .. việc nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học cần thiết Chính vậy, tơi định chọn đề tài ? ?Nghiên cứu phân l? ??p thành phần đài hoa bụp giấm (Hibiscus sabdariffa L. )? ??  Giới hạn phạm vi nghiên. .. Methanol đài hoa bụp giấm (HibiscusSabdariffa L. ) Đài hoa thu hoạch Cần Thơ, sau l? ?m đem sấy xay nhuyễn thành bột mịn Bột đài hoa bụp giấm ngâm methanol sau đem l? ??c bỏ bả dịch chiết thu cao Methanol