Đang tải... (xem toàn văn)
31 CHƯƠNG 3 THỰC NGHIỆM 3 1 Chiết và phân lập hợp chất từ cao chiết 3 1 1 Xử lý nguyên liệu 3 1 1 1 Xử lý nguyên liệu Hình 3 1 Sơ đồ xử lý đài hoa bụp giấm Đài hoa bụp giấm được thu hoạch tại thành phố Cần Thơ, Việt Nam vào cuối tháng 52018 Được xác minh bởi trường Đại Học Cần Thơ Mẫu được lưu lại phòng mẫu của Viện Khoa Học Vật Liệu Ứng Dụng 3 1 1 2 Điều chế Chiết cao tổng Đài hoa sau khi hái được làm sạch để loại bỏ cát và bụi bẩn, các bộ phận hư hại cũng được loại bỏ, phơi khô ở nhiệt độ p.
CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 3.1 Chiết phân lập hợp chất từ cao chiết 3.1.1 Xử lý nguyên liệu 3.1.1.1 Xử lý nguyên liệu Đài hoa bụp giấm Phân loại Phơi khơ Xay nhuyễn Bợt hoa bụp giấm Hình 3.1 Sơ đồ xử lý đài hoa bụp giấm Đài hoa bụp giấm thu hoạch thành phố Cần Thơ, Việt Nam vào cuối tháng 5/2018 Được xác minh trường Đại Học Cần Thơ Mẫu lưu lại phòng mẫu Viện Khoa Học Vật Liệu Ứng Dụng 3.1.1.2 Điều chế Chiết cao tổng: Đài hoa sau hái làm để loại bỏ cát bụi bẩn, bộ phận hư hại loại bỏ, phơi khơ nhiệt đợ phịng xây nhỏ thành bợt Bột đài hoa bụp giấm chiết với methanol phương pháp chiết lỏng rắn nhiệt đợ phịng Dịch chiết methanol loại dung môi máy cô quay chân không thu cao tổng methanol 800g Dung môi thu hồi giữ chai đậy kín nấp nhiệt đợ phịng (30oC) 31 Đài hoa bụp giấm methanol Chiết Dịch chiết Lọc Bay dung môi Cao tổng methanol Hình 3.2 Sơ đồ chiết cao tổng từ đài hoa bụp giấm Chiết cao phân đoạn: Cao tổng methanol (800g) nhồi vào cột sắc ký với silica gel pha thường, rửa giải lần: rửa giải lần đầu dung môi ethyl acetate thu lượng cao 263g, rửa giải lần với dung môi methanol thu 201g, rửa giải lần dung môi methanol : nước thu 179g Nghiên cứu tiến hành cao methanol Cao ethyl acetate Cao tổng methanol Cao methanol Cao 8methanol:2nước Hình 3.3 Sơ đồ chiết phân đoạn cao tổng từ đài hoa bụp giấm 32 3.1.2 Khảo sát cao methanol - Khảo sát độ phân cực chất có cao methanol sắc kí bản mỏng - Q trình kiểm tra: Trích mợt cao hủ bi nhỏ Dùng methanol hịa tan mẫu Tiến hành sắc kí bản mỏng Giải li hổn hợp 20Ea:1ME:1H2O Kết quả: 20EA: 1Me: 1H2O 8EA: 1Me: 1H2O Hình 3.4 Khảo sát hệ dung môi TLC Dựa vào kết quả sắc ký bản mỏng ta thấy chất cao methanol có đợ phân cực khác nên phân lập sắc kí cợt ta chọn hệ dung mơi giải ly có đợ phân cực tăng dần Bắt đầu hệ EA: Me: H20 (8:1:1) 33 3.1.3 Quá trình phân lập cao methanol Tiến hành sắc kí cợt với cao methanol, triển khai với hệ dung môi 8EA: 1Me:1H2O, 5EA: 1Me:1H2O, 2EA:1Me:1H2O cuối rửa cột dung môi 8Me:2H20 nhầm thu hết chất lại cao Các phân đoạn có vết giống TLC gom chung lại thành phân đoạn Bảng 3.1 Sắc kí cợt cao methanol (201g) Phân đoạn Tên mã hóa I Nhiều vết Khơng khảo sát II Rõ vết Khảo sát III Rõ vết Khảo sát IV Nhiều vết Không khảo sát V Nhiều vết Không khảo sát VI Rõ vết Khảo sát VII Nhiều vết Không khảo sát Kết SKBM Hình 3.5 TLC phân đoạn II, III, VI 34 Ghi Thu phân đoạn kí hiệu I, II (1,5g), III (1g), IV, V, VI (2g), VII Phân đoạn II,III,VI gom tiếp tục phân lập Toàn bợ q trình theo dõi SKBM với thuốc thử hình dung dịch H2S04 10%/ EtOH Khảo sát phân đoạn II,III,VI: Thực sắc ký cột silica gel với hệ dung môi rửa giải với hệ dung môi 7EA: 1Me:1H2O, 6EA: 1Me:1H2O, cuối rửa cột dung môi methanol 100% nhầm thu hết chất lại cao Dựa vào kết quả TLC gom đoạn lại thành phân đoạn Kết quả tóm tắt bảng sau: Bảng 3.2 Khảo sát phân đoạn II, III, VI (4,5g) Phân đoạn Tên mã hóa II, III, VI (1) Rõ vết Khảo sát II, III, VI (2) Nhiều vết Không khảo sát II, III, VI (3) Rõ vết Khảo sát II, III, VI (4) Rõ vết Khảo sát Kết SKBM Ghi Hình 3.6 TLC phân đoạn II, III, VI (14 – 17) 35 Phân đoạn II,III,VI(1) 0,635g phân đoạn II,III,VI(4) 0,525g chọn để tiếp tục phân lập chất Khảo sát phân đoạn II,III,VI(4) 0,525g: Phân lập II,III,VI(4) 0,525g tiến hành CC với sillicagel với hệ dung môi CHCl3:EA:MeOH:H2O với tỉ lệ độ phân cực tăng dần 6:12:4:1 6:12:8:1 cuối rửa cột dung môi methanol 100% nhầm thu hồi chất lại cao Dựa vào bảng khảo sát TLC gom đoạn lại thành phân đoạn Kết quả tóm tắt bảng sau: Bảng 3.3 Khảo sát phân đoạn II, III, VI(4) (0,525g) Phân đoạn Tên mã hóa II, III, VI (4,1) Nhiều vết Không khảo sát II, III, VI (4,2) Nhiều vết Không khảo sát II, III, VI (4,3) Nhiều vết Không khảo sát II, III, VI (4,4) Rõ vết Khảo sát II, III, VI (4,5) Nhiều vết Không khảo sát Kết SKBM Ghi Hình 3.7 TLC phân đoạn II, III, VI (4,4) hệ dung môi 9Ea:1Me 9Ea:0,5Me 36 Phân đoạn phân đoạn II,III,VI(4,4) 0,326g chọn để tiếp tục phân lập chất Khảo sát phân đoạn II,III,VI(4,4) 0,326g: Phân lập II,III,VI(4,4) 0,326g tiến hành CC với sillicagel với hệ dung môi EA:MeOH với tỉ lệ độ phân cực tăng dần 9:0,5 9:1 cuối rửa cột dung môi methanol 100% nhầm thu hồi chất lại cao Dựa vào bảng khảo sát TLC gom đoạn lại thành phân đoạn Kết quả tóm tắt bảng sau: Bảng 3.4 Khảo sát phân đoạn II, III, VI(4,4) (0,326g) Phân đoạn Tên mã hóa II, III, VI (4,4,1) Nhiều vết Không khảo sát II, III, VI (4,4,2) Rõ vết Khảo sát II, III, VI (4,4,3) Nhiều vết Khơng khảo sát Kết SKBM Ghi Hình 3.8 TLC phân đoạn II, III, VI(4,4,2) 37 Phân đoạn phân đoạn II,III,VI(4,4,2) 0,125g chọn để tiếp tục phân lập chất Khảo sát phân đoạn II,III,VI(4,4,2) 0,125g: Phân lập II,III,VI(4,4,2) 0,125g tiến hành CC với sillicagel với hệ dung môi He:EA với tỉ lệ độ phân cực tăng dần 20:1,10:1, 8:1, 5:1 cuối rửa cột dung môi methanol 100% nhầm thu hồi chất lại cao Dựa vào bảng khảo sát TLC gom đoạn lại thành phân đoạn Kết quả tóm tắt bảng sau: Bảng 3.5 Khảo sát phân đoạn II, III, VI(4,4,2) (0,125g) Phân đoạn Tên mã hóa Kết SKBM Ghi II, III, VI (4,4,2,1) Nhiều vết Không khảo sát II, III, VI (4,4,2,2) Nhiều vết Không khảo sát II, III, VI (4,4,2,3) Nhiều vết Không khảo sát II, III, VI (4,4,2,4) Một vết Chất II, III, VI (4,4,2,5) Một vết Chất II, III, VI (4,4,2,6) Nhiều vết Khơng khảo sát Hình 3.9 TLC HS6 38 Hình 3.10 Chất sau phân lập Phân đoạn II,III,VI(1) 0,635g chọn để tiếp tục phân lập chất Khảo sát phân đoạn II,III,VI(1) 0,635g: Phân lập II,III,VI(1) 0,635g tiến hành CC với sillicagel với hệ dung môi CHCl3:EA:MeOH:H2O với tỉ lệ độ phân cực tăng dần 6:12:4:1 6:12:8:1, 6:12:10:1 cuối rửa cột dung môi methanol 100% nhầm thu hồi chất lại cao Dựa vào bảng khảo sát TLC gom đoạn lại thành phân đoạn Kết quả tóm tắt bảng sau: Bảng 3.6 Khảo sát phân đoạn II, III, VI(1) (0,635g) Phân đoạn Tên mã hóa II, III, VI (1,1) Nhiều vết Không khảo sát II, III, VI (1,2) Rõ vết Khảo sát II, III, VI (1,3) Nhiều vết Không khảo sát II, III, VI (1,4) Nhiều vết Không khảo sát II, III, VI (1,5) Nhiều vết Không khảo sát Kết SKBM 39 Ghi Hình 3.11 TLC phân đoạn II, III, VI(1,2) Phân đoạn II,III,VI(1,2) 0,436g chọn để tiếp tục phân lập chất Khảo sát phân đoạn II,III,VI(1,2) 0,436g: Phân lập II,III,VI(1,2) 0,436g tiến đƣợc tiến hành CC với sillicagel với hệ dung môi He:EA với tỉ lệ độ phân cực tăng dần 30:1, 20:1, 15:1, 10:1 cuối rửa cột dung môi methanol 100% nhầm thu hồi chất lại cao Dựa vào bảng khảo sát TLC gom đoạn lại thành phân đoạn Kết quả tóm tắt bảng sau: Bảng 3.7 Khảo sát phân đoạn II, III, VI(1,2) (0,436g) Phân đoạn Tên mã hóa II, III, VI (1,2,1) Nhiều vết Không khảo sát II, III, VI (1,2,2) Nhiều vết Không khảo sát II, III, VI (1,2,3) Nhiều vết Không khảo sát II, III, VI (1,2,4) Nhiều vết Không khảo sát II, III, VI (1,2,5) Rõ vết Khảo sát II, III, VI (1,2,6) Nhiều vết Không khảo sát II, III, VI (1,2,7) Nhiều vết Không khảo sát Kết SKBM 40 Ghi Cao phân đoạn II, III, VI (4) CHCl3:EA:MeOH:H2O = 6:12:4:1 Cao phân đoạn II, III, VI (4.1) Cao phân đoạn II, III, VI (4.3) Cao phân đoạn II, III, VI (4.2) CHCl3:EA:MeOH:H2O = 6:12:8:1 EA:MeOH = 9:1 Cao phân đoạn II, III, VI (4.4.1) He:Ace = 20:1 Cao phân đoạn II, III, VI (4.4.2.1) He:Ace = 10:1 Cao phân đoạn II, III, VI (4.4.2.2) Cao phân đoạn II, III, VI (4.5) Cao phân đoạn II, III, VI (4.4) EA:MeOH = 9:0,5 Cao phân đoạn II, III, VI (4.4.2) Cao phân đoạn II, III, VI (4.4.3) He:Ace = 8:1 Cao phân đoạn II, III, VI (4.4.2.3) He:Ace = 5:1 Cao phân đoạn II, III, VI (4.4.2.4) Cao phân đoạn II, III, VI (4.4.2.5) HS6 HS6 Hình 3.16 Phân lập hợp chất từ cao bụp giấm tổng methanol 44 Cao phân đoạn II, III, VI (4.4.2.6) Hình 3.17 Phân lập hợp chất từ cao bụp giấm tổng methanol 45 3.2 Quy trình dự kiến Nguyên liệu Nước Trích ly Lọc Bã Cơ đặc Maltodextrin Phối trợn Đơng lạnh Sấy thăng hoa Nghiền, rây Bao gói Trà hịa tan Hình 3.18 Quy trình nghiên cứu dự kiến 46 Đường 3.2.1 Trích ly Mục đích: thu nhận chất tan có ngun liệu, cơng đoạn quan trọng ảnh hưởng đến chất lượng sản lượng sản phẩm 3.2.2 Lọc Mục đích: loại bỏ bã, giúp dịch chiết hơn, tăng giá trị cảm quan sản phẩm 3.2.3 Cơ đặc Mục đích: Khai thác: tăng nồng đợ chất khơ có dịch chiết Chuẩn bị: giảm một lượng nước lớn dịch chiết tạo điều kiện thuận lợi cho q trình sấy, đồng thời góp phần giảm chi phí lượng cả thời gian sấy Bảo quản: ức chế phát triển vi sinh vật 3.2.4 Phối trộn Mục đích: chuẩn bị cho trình sấy, tăng giá trị cảm quan sản phẩm 3.2.5 Đơng lạnh Mục đích: chuẩn bị cho q trình sấy 3.2.6 Sấy thăng hoa Mục đích: kết hợp áp suất thấp nhiệt độ thấp để làm chuyển nước từ dạng rắn sang dạng mà không cần thơng qua dạng lỏng 3.2.7 Nghiền, rây Mục đích: tạo hạt trà hịa tan đồng kích thước, tăng giá trị cảm quan cho sản phẩm 3.2.8 Bao gói Mục đích: bảo quản tránh tiếp xúc khơng khí, ánh sáng làm ảnh hưởng đến chất lượng sản phẩm 47 3.3 Khảo sát tiêu nguyên liệu Mục đích: xác định tính chất bản nguồn nguyên liệu Cách tiến hành: nguyên liệu đài hoa bụp giấm tươi khảo sát độ ẩm, hàm lượng chất khơ, hàm lượng tro tồn phần, đường khử, đạm theo phương pháp trình bày bảng 3.10: Bảng 3.10 Phương pháp khảo sát tiêu bản nguyên liệu Phương pháp Chỉ tiêu khảo sát Độ ẩm Sấy đến khối lượng không đổi Hàm lượng chất khô Sấy đến khối lượng không đổi Hàm lượng tro tồn phần Nung nhiệt đợ 550 – 600oC Xác định hàm lượng đạm Phương pháp Lowry Xác định hàm lượng đường khử Phương pháp Hagedorn Jensen 3.4 Khảo sát ảnh hưởng q trình trích ly đến chất lượng sản phẩm - Mục đích: xác định tỷ lệ bụp giấm - nước, nhiệt đợ, thời gian trích ly phù hợp 3.4.1 Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu : nước đến hiệu suất trích ly Bố trí thí nghiệm: - Thơng số cố định: nhiệt độ (80oC), thời gian (20 phút), khối lượng mẫu (1 g) - Thông số khảo sát: tiến hành khảo sát tỷ lệ bụp giấm - nước bảng 3.11: Bảng 3.11 Bảng mã hóa thí nghiệm khảo sát tỷ lệ bụp giấm – nước Tỷ lệ bụp giấm : nước (w/v) Mã hóa 1:15 A1 1:20 A2 1:25 A3 1:30 A4 1:40 A5 48 Tiến hành thí nghiệm: - Thí nghiệm bố trí hồn tồn ngẫu nhiên với yếu tố, nghiệm thức nghiệm thức lặp lại lần - Đài hoa bụp giấm tươi phơi khô nghiền nhỏ, cân g nguyên liệu cho vào nghiệm thức - Nguyên liệu sau cân trộn với nước theo tỷ lệ khảo sát (bảng 3.11) - Tiến hành gia nhiệt đến 80oC, 20 phút để thu dịch chiết - Lọc thu dịch sau trích ly Tiến hành đánh giá: dựa vào hiệu suất trích ly để chọn thơng số phù hợp 3.4.2 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến hiệu suất trích ly Bố trí thí nghiệm: - Thông số cố định: tỷ lệ bụp giấm - nước (thơng số phù hợp thí nghiệm 3.4.1), thời gian (20 phút), khối lượng mẫu (1 g) - Thông số khảo sát: tiến hành khảo sát nghiệm thức nhiệt độ bảng 3.12: Bảng 3.12 Bảng mã hóa thí nghiệm khảo sát nhiệt đợ trích ly Nhiệt độ (oC) Mã hóa 30 B1 60 B2 70 B3 80 B4 85 B5 90 B6 Tiến hành thí nghiệm: - Thí nghiệm bố trí hồn tồn ngẫu nhiên với yếu tố, nghiệm thức nghiệm thức lặp lại lần - Đài hoa bụp giấm tươi phơi khô nghiền nhỏ, cân g nguyên liệu cho vào nghiệm thức 49 - Nguyên liệu sau cân trộn với nước theo tỷ lệ bụp giấm : nước thu thí nghiệm 3.4.1 - Tiến hành trích ly nhiệt độ khảo sát (bảng 3.12) 20 phút - Lọc thu dịch sau trích ly Tiến hành đánh giá: dựa vào hiệu suất trích ly để chọn thơng số phù hợp 3.4.3 Khảo sát ảnh hưởng thời gian đến hiệu suất trích ly Bố trí thí nghiệm: - Thông số cố định: tỷ lệ bụp giấm : nước (thơng số tối ưu thí nghiệm 3.4.1), nhiệt đợ (thơng số phù hợp thí nghiệm 3.4.2), khối lượng mẫu (1 g) - Thông số khảo sát: tiến hành khảo sát khoảng thời gian bảng 3.13: Bảng 3.13 Bảng mã hóa thí nghiệm khảo sát thời gian trích ly Thời gian (phút) Mã hóa 10 C1 15 C2 20 C3 25 C4 30 C5 35 C6 Tiến hành thí nghiệm: - Thí nghiệm bố trí theo kiểu hồn tồn ngẫu nhiên với yếu tố, nghiệm thức nghiệm thức lặp lại lần - Đài hoa bụp giấm tươi phơi khô nghiền nhỏ, cân 1g nguyên liệu cho vào nghiệm thức - Nguyên liệu sau cân trộn với nước theo tỷ lệ bụp giấm : nước thu thí nghiệm 3.4.1 - Tiến hành trích ly nhiệt đợ thu từ thí nghiệm 3.4.2 khoảng thời gian khảo sát (bảng 3.13) 50 - Lọc thu dịch sau trích ly Tiến hành đánh giá: dựa vào hiệu suất trích ly để chọn thông số phù hợp 3.5 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ dịch sau cô đặc đến chất lượng sản phẩm Mục đích: xác định nồng đợ dịch chiết sau đặc phù hợp Bố trí thí nghiệm: - Thông số cố định: Tỷ lệ bụp giấm – nước, nhiệt đợ, thời gian trích ly (thơng số phù hợp thí nghiệm 3.4) Tỷ lệ đường (20 %), maltodextrin (25 %) Thời gian đông lạnh (24 giờ), nhiệt độ đông lạnh (0oC) Áp suất sấy (85,4 Pa), nhiệt độ sấy (-38oC) - Thông số khảo sát: nồng độ dịch chiết sau cô đặc trình bày bảng 3.14: Bảng 3.14 Bảng mã hóa thí nghiệm khảo sát nồng đợ dịch sau đặc Nồng độ (%) Mã hóa D1 D2 10 D3 15 D4 Tiến hành thí nghiệm: - Thí nghiệm bố trí hồn tồn ngẫu nhiên với yếu tố nghiệm thức - Cân nguyên liệu trích ly theo thơng số phù hợp thí nghiệm 3.4 - Sau lọc, đặc chân không đến nghiệm thức nồng độ cần khảo sát (bảng 3.14), nghiệm thức gồm: 100 g dịch cô đặc, 20% đường, 25% maltodextrin - Sau phối trộn, đông lạnh 24 giờ, nhiệt độ 0oC - Tiến hành sấy thăng hoa áp suất 85,4 Pa, nhiệt độ -38oC - Sau nghiền, rây đóng gói để thu sản phẩm 51 Phương pháp đánh giá: đánh giá cảm quan theo thang điểm bậc (bảng 3.15), lặp lại 15 lần Kết quả xử lý thống kê phần mềm Statgraphic plus 3.0 để lựa chọn thông số phù hợp Bảng 3.15 Thang cho điểm cảm quan màu sắc nước trà thí nghiệm khảo sát nồng độ dịch chiết sau cô đặc Điểm Màu sắc Màu lạ Màu đỏ hồng đậm/quá nhạt Màu đỏ hồng đậm/hơi nhạt Màu đỏ hồng Màu đỏ hồng tương đối Màu đỏ hồng đặc trưng bụp giấm 3.6 Khảo sát ảnh hưởng trình phối trộn đến chất lượng sản phẩm - Mục đích: xác định tỷ lệ đường, maltodextrin phối trộn phù hợp 3.6.1 Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ đường phối trộn đến chất lượng sản phẩm Bố trí thí nghiệm: - Thơng số cố định: Tỷ lệ bụp giấm – nước, nhiệt độ, thời gian trích ly (thơng số phù hợp thí nghiệm 3.4) Nồng đợ dịch chiết sau đặc (thơng số phù hợp thí nghiệm 3.5) Tỷ lệ maltodextrin (25 %) Đông lạnh: thời gian (24 giờ), nhiệt độ (0oC) Sấy thăng hoa: áp suất (85,4 Pa), nhiệt độ (-38oC) - Thông số khảo sát: tỷ lệ đường phối trợn trình bày bảng 3.16: 52 Bảng 3.16 Bảng mã hóa thí nghiệm khảo sát tỷ lệ đường phối trộn Tỷ lệ đường (%) Mã hóa 35 E1 40 E2 50 E3 60 E4 Tiến hành thí nghiệm: - Thí nghiệm bố trí hồn tồn ngẫu nhiên với yếu tố, nghiệm thức - Cân nguyên liệu trích ly theo thơng số phù hợp thí nghiệm 3.4 - Tiến hành lọc cô đặc theo thông số phù hợp thí nghiệm 3.5 - Mỗi nghiệm thức gồm: 100g dịch cô đặc, đường (bảng 3.16), maltodextrin (25 %) - Sau phối trộn, đông lạnh 24 giờ, nhiệt độ 0oC - Tiến hành sấy thăng hoa áp suất 85,4 Pa, nhiệt độ -38oC - Sau nghiền, rây để thu bợt trà hịa tan Phương pháp đánh giá: đánh giá cảm quan theo thang điểm bậc (bảng 3.17), lặp lại 15 lần Kết quả xử lý thống kê phần mềm Statgraphic plus 3.0 để lựa chọn thông số phù hợp Bảng 3.17 Thang cho điểm cảm quan vị thí nghiệm khảo sát tỷ lệ đường phối trộn Điểm Vị Vị lạ, hư hỏng Vị ngọt/quá chua Vị ngọt/hơi chua Vị chua/chua Vị chua, tương đối Vị chua, hài hòa 53 3.6.2 Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ maltodextrin phối trộn tới chất lượng sản phẩm Bố trí thí nghiệm: - Thơng số cố định: Tỷ lệ bụp giấm – nước, nhiệt độ, thời gian trích ly (thơng số phù hợp thí nghiệm 3.4) Nồng đợ dịch chiết sau đặc (thơng số phù hợp thí nghiệm 3.5) Tỷ lệ đường (thông số phù hợp thí nghiệm 3.6.1) Đơng lạnh: thời gian (24 giờ), nhiệt độ (0oC) Sấy thăng hoa: áp suất (85,4 Pa), nhiệt độ (-38oC) - Thông số khảo sát: tỷ lệ maltodextrin phối trợn trình bày bảng 3.18: Bảng 3.18 Bảng mã hóa thí nghiệm khảo sát tỷ lệ maltodextrin phối trợn Tỷ lệ maltodextrin (%) Mã hóa 15 F1 20 F2 25 F3 30 F4 Tiến hành thí nghiệm: - Thí nghiệm bố trí hồn tồn ngẫu nhiên gồm yếu tố nghiệm thức - Cân ngun liệu trích ly theo thơng số phù hợp thí nghiệm 3.4 - Tiến hành lọc cô đặc theo thông số phù hợp thí nghiệm 3.5 - Mỗi nghiệm thức gồm: 100 g dịch cô đặc, đường (thông số phù hợp thí nghiệm 3.6.1), maltodextrin (bảng 3.18), - Sau phối trộn, đông lạnh 24 giờ, nhiệt độ 0oC - Tiến hành sấy thăng hoa áp suất 85,4 Pa, nhiệt độ -38oC - Sau nghiền, rây để thu bợt trà hịa tan 54 Phương pháp đánh giá: đánh giá cảm quan theo thang điểm bậc (bảng 3.19), lặp lại 15 lần Kết quả xử lý thống kê phần mềm Statgraphic plus 3.0 để lựa chọn thông số phù hợp Bảng 3.19 Thang cho điểm cảm quan màu sắc khảo sát tỷ lệ maltodextrin phối trộn Điểm Màu sắc Màu lạ Màu đỏ hồng đậm/quá nhạt Màu đỏ hồng đậm/hơi nhạt Màu đỏ hồng Màu đỏ hồng tương đối Màu đỏ hồng đặc trưng bụp giấm 3.7 Đánh giá chất lượng sản phẩm toàn diện Sau khảo sát tất cả yếu tố ảnh hưởng đến chất lượng sản phẩm Tiến hành làm mẫu hoàn thiện kiểm tra tiêu hóa lý, vi sinh, cảm quan - Chỉ tiêu hóa lý: đợ ẩm, đợ hịa tan, hàm lượng tro,… - Vi sinh: tổng số vi sinh vật hiếu khí, E.coli,… - Cảm quan: tiến hành đánh giá cảm quan toàn diện sản phẩm theo phương pháp cho điểm TCVN 3215-79, hội đồng đánh giá gồm 15 người Các tiêu màu, mùi, vị, độ xây dựng bảng cảm quan (phụ lục 1) 3.8 Khảo sát khả kháng oxy hóa dịch chiết từ đài hoa bụp giấm Mục đích: khảo sát khả kháng oxy hóa bụp giấm Chuẩn bị: - DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl): lấy 7,88 mg DPPH pha ethanol tạo thành 100 ml dung dịch có nồng đợ 0,2 mM Bảo quản 4oC, điều kiện khơng có ánh sáng 55 - Mẫu thử: đài hoa bụp giấm khơ trích ly cồn 96o theo tỷ lệ 1:10 nhiệt độ phịng, thời gian 48 Sau trích ly, lọc thu dịch trích, quay máy quay chân không áp suất thấp, nhiệt độ 50oC để thu cao chiết Hòa tan cao chiết ethanol thành nồng độ: 1/4; 1/8; 1/16; 1/32 mg/ml - Mẫu thử: đài hoa bụp giấm khơ trích ly nước theo tỷ lệ, nhiệt độ, thời gian phù hợp thu từ thí nghiệm 3.4 Sau trích ly, lọc thu dịch trích, quay máy quay chân không áp suất thấp, nhiệt độ 50oC để thu cao chiết Hòa tan cao chiết ethanol thành nồng độ: 1/4; 1/8; 1/16; 1/32 mg/ml - Đối với chứng âm thay dung dịch mẫu thử ethanol - Chứng dương (vitamin C) pha thành nồng độ: 1/4, 1/8, 1/16, 1/32 mg/ml Cách tiến hành: - Lấy ml mẫu thử chuẩn bị cho vào ống nghiệm, sau thêm ml dung dịch DPPH vào ống nghiệm, lắc - Chứng âm gồm ml ethanol ml DPPH - Để yên mẫu bóng tối 30 phút, tiến hành đo đợ hấp thu bước sóng 517 nm - Tiến hành tương tự chứng dương vitamin C lặp lại lần Kết quả giá trị trung bình lần lặp lại Tính kết quả: % Ức chế gốc tự = 100 x (ODc – ODm)/ ODc Trong đó: ODc: đợ hấp thụ quang học chứng âm ODm: độ hấp thụ quang học mẫu thử 56 Cách đánh giá: Vẽ đồ thị tương quan nồng độ mẫu thử % ức chế gốc tự DPPH Tính IC50 mẫu thử chứng dương vitamin C So sánh giá trị IC50 mẫu thử chứng dương để đưa kết luận Giá trị IC50 thấp chứng tỏ hoạt tính kháng oxy hóa mạnh 3.9 Khảo sát khả ức chế α-glucosidase dịch chiết từ đài hoa bụp giấm Hóa chất: - -glucosidase: 0,3 UI/ml - DMSO: Dimethyl sulfoxide - p-Nitrophenyl--D-glucopyranoside: 200 M - Cao chiết: 40, 200, 400, 600 800 g/ml - Chứng âm: gồm tất cả thành phần trừ cao chiết, thay DMSO - Chứng dương (acarbose): 40, 200, 400, 600 800 g/ml Cách tiến hành: - Cao chiết pha DMSO thành nồng độ: 40 g/ml, 200 g/ml, 400 g/ml, 600 g/ml, 800 g/ml Sau ủ 30oC phút dung dịch A - Dung dịch A (1 mL) thêm vào ml α-glucosidase 0,3 UI/ml Hỗn hợp đem lắc nhiệt độ phòng 20 phút - Tiếp theo thêm vào ml p-nitrophenyl--D-glucopyranoside 200 M Tiếp tục lắc nhiệt đợ phịng 20 phút - Sau cùng, thêm vào 3.0 ml NaOH 50 mM đo độ hấp thụ bước sóng 410 nm - Thí nghiệm lặp lại lần - Khả ức chế α-glucosidase tính sau: 57 Tính kết quả: % Ức chế = Acontrol Asample Acontrol x100 Trong đó: Acontrol: đợ hấp thụ chứng âm Asample: độ hấp thụ mẫu thử Xây dựng đồ thị tương quan % ức chế α-glucosidase nồng độ chất ức chế để xác định IC50 So sánh IC50 mẫu thử chứng dương acarbose để đánh giá khả ức chế α-glucosidase 58 ... SKBM 39 Ghi Hình 3. 11 TLC phân đoạn II, III, VI(1,2) Phân đoạn II,III,VI(1,2) 0, 436 g chọn để tiếp tục phân lập chất Khảo sát phân đoạn II,III,VI(1,2) 0, 436 g: Phân lập II,III,VI(1,2) 0, 436 g tiến... Cao phân đoạn I (1-10) Cao 8Me:2H2O Cao Me Cao phân đoạn II,III,VI (2) Cao phân đoạn II,III,VI (3) Cao phân đoạn II,III,VI (4) Hình 3. 15 Phân lập hợp chất từ cao bụp giấm tổng methanol 43 Cao phân. .. dung môi 9Ea:1Me 9Ea:0,5Me 36 Phân đoạn phân đoạn II,III,VI(4,4) 0 ,32 6g chọn để tiếp tục phân lập chất Khảo sát phân đoạn II,III,VI(4,4) 0 ,32 6g: Phân lập II,III,VI(4,4) 0 ,32 6g tiến hành CC với sillicagel
